淋巴细胞活化基因-3 敲除( Lag-3- / - )小鼠构建及初步表型分析

doi:10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2020. 01. 008

首页 > 过刊浏览>2020年第28卷第1期 >49-57. DOI:10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2020. 01. 008

淋巴细胞活化基因-3 敲除( Lag-3- / - )小鼠构建及初步表型分析
DOI:
                        10. 3969 / j.issn.1005-4847. 2020. 01. 008
                    
CSTR:
                        
                    
作者:
                        万颖寒万颖寒
1.上海实验动物研究中心,上海 201203; 2. 模式生物技术联合实验室,上海实验动物研究中心,上海 201203 / 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092
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慈磊慈磊
2. 模式生物技术联合实验室,上海实验动物研究中心,上海 201203 / 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092; 3. 上海南方模式生物科技股份有限公司,上海 201318
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王珏王珏
1.上海实验动物研究中心,上海 201203; 2. 模式生物技术联合实验室,上海实验动物研究中心,上海 201203 / 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092
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龚慧龚慧
1.上海实验动物研究中心,上海 201203; 2. 模式生物技术联合实验室,上海实验动物研究中心,上海 201203 / 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092
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万志鹏万志鹏
3. 上海南方模式生物科技股份有限公司,上海 201318; 4. 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092
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奚骏3奚骏
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何敏珠3何敏珠
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孙瑞林3孙瑞林
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费俭费俭
2. 模式生物技术联合实验室,上海实验动物研究中心,上海 201203 / 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092; 3. 上海南方模式生物科技股份有限公司,上海 201318; 4. 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092
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沈如凌沈如凌
1.上海实验动物研究中心,上海 201203; 2. 模式生物技术联合实验室,上海实验动物研究中心,上海 201203 / 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092
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作者单位:1.上海实验动物研究中心,上海 201203; 2. 模式生物技术联合实验室,上海实验动物研究中心,上海 201203 / 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092; 3. 上海南方模式生物科技股份有限公司,上海 201318; 4. 同济大学生命科学与技术学院,上海 200092
作者简介:
通讯作者:
中图分类号:
基金项目:

Construction and preliminary phenotypic analysis of Lag-3- / - mice

Author:

WAN Yinghan
WAN Yinghan
1.Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China. 2. Joint Lab for Technology of Model Organisms,Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China / School of Life Science and Technology,Tongji University, Shanghai 200092
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CI Lei
CI Lei
2.Joint Lab for Technology of Model Organisms,Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China / School of Life Science and Technology,Tongji University, Shanghai 200092. 3. Shanghai Model Organisms Center, Shanghai 201318
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WANG Jue
WANG Jue
1.Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China. 2. Joint Lab for Technology of Model Organisms,Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China / School of Life Science and Technology,Tongji University, Shanghai 200092
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GONG Hui
GONG Hui
1.Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China. 2. Joint Lab for Technology of Model Organisms,Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China / School of Life Science and Technology,Tongji University, Shanghai 200092
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WAN Zhipeng
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3.Shanghai Model Organisms Center, Shanghai 201318. 4. School of Life Science and Technology,Tongji University, Shanghai 200092
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XI Jun ^³
XI Jun
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HE Minzhu
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Shanghai Model Organisms Center, Shanghai 201318
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FEI Jian
FEI Jian
2.Joint Lab for Technology of Model Organisms,Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China / School of Life Science and Technology,Tongji University, Shanghai 200092. 3. Shanghai Model Organisms Center, Shanghai 201318. 4. School of Life Science and Technology,Tongji University, Shanghai 200092
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SHEN Ruling
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1.Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China. 2. Joint Lab for Technology of Model Organisms,Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China / School of Life Science and Technology,Tongji University, Shanghai 200092
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Affiliation:

1.Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China. 2. Joint Lab for Technology of Model Organisms,Shanghai Laboratory Animal Research Center,Shanghai 201203,China / School of Life Science and Technology,Tongji University, Shanghai 200092. 3. Shanghai Model Organisms Center, Shanghai 201318. 4. School of Life Science and Technology,Tongji University, Shanghai 200092

Fund Project:

摘要

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摘要:

目的构建淋巴细胞活化基因-3(Lag-3)基因敲除小鼠,初步分析 Lag-3 基因敲除对小鼠表型影响, 为后续 Lag-3 体内功能研究提供动物模型。方法利用 CRISPR/ Cas9 技术结合受精卵显微注射构建敲除小鼠,通过分子鉴定筛选基因敲除阳性小鼠,利用 RT-PCR 和流式检测方法进一步验证 Lag-3 基因敲除小鼠体内 Lag-3 基因敲除效果;通过建立 ConA 诱导的肝损伤模型研究 Lag-3 基因在体内的功能。结果 PCR 和产物测序结果显示, 获得了 exon 2 缺失的 Lag-3 基因敲除小鼠;该基因敲除纯合子小鼠( Lag-3- / - )经刀豆蛋白(ConA)刺激后,小鼠心脏、脾、肺、巨噬细胞和淋巴结中仅能检测到 Lag-3 mRNA 本底表达信号,小鼠巨噬细胞、脾细胞和淋巴结中仅能检测到非常低数量的 Lag-3 阳性细胞。表型分析发现,Lag-3 基因的缺失显著减少了 ConA 诱导的小鼠外周血、骨髓和脾 CD3⁺T 细胞的数量,减轻了 ConA 诱发的急性肝损伤情况。结论成功构建 Lag-3 基因敲除小鼠模型,肝损伤过程中的体内功能研究显示,Lag 缺失可以显著缓解 ConA 引发的肝损伤的发生。

关键词:Lag-3;CRISPR/ Cas9;基因敲除;刀豆蛋白

Abstract:

Objective To construct lymphocyte activation gene-3 ( Lag-3)-knockout mice and analyze the influence of Lag-3 knockout on mouse phenotypes to provide an animal model for subsequent Lag-3 in vivo function research. Methods Knockout mice were constructed via CRISPR/ Cas9 technology combined with microinjection of fertilized eggs. The Lag-3-knockout mice were screened via molecular identification and further verified via RT-PCR and flow cytometry. Lag-3 gene function in vivo was studied by establishing a ConA-induced liver injury model. Results PCR and product sequencing showed that exon 2-deleted Lag-3-knockout mice were obtained. The heart, spleen, lung and macrophages from ConA-induced homozygous mice were evaluated with only Lag-3 mRNA background expression signals detected in phagocytes and lymph nodes and only very low numbers of Lag-3-positive cells detected in mouse macrophages, spleen cells and lymph nodes. Phenotypic analysis revealed that deleting the Lag-3 gene significantly reduced the number of ConA-induced CD3⁺T cells in the peripheral blood, bone marrow and spleen as well as ConA-induced acute liver injury. Conclusions A Lag-3-knockout mouse model is successfully constructed. In vivo functional studies during liver injury show that Lag-3 deficiency significantly alleviated ConA-induced liver damage.

Key words:Lag-3; CRISPR/ Cas9; gene knockout; ConA

引用本文

万颖寒,慈磊,王珏,龚慧,万志鹏,奚骏,何敏珠,孙瑞林,费俭,沈如凌.淋巴细胞活化基因-3 敲除( Lag-3- / - )小鼠构建及初步表型分析[J].中国实验动物学报,2020,28(1):49~57.

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收稿日期:2019-07-22
最后修改日期:
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在线发布日期: 2020-04-01
出版日期:

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