摘要:

摘要:目的　建立T、B淋巴细胞联合免疫缺陷同源导入近交系 6 15 SCID小鼠。方法　利用经典遗传学的杂交 互交方法 ,将SCID小鼠携带的T、B淋巴细胞联合免疫缺陷基因 (scid基因 ) ,导入我国自己培育的 6 15近交系小鼠中。育种过程中采用白细胞计数分类及ELISA检测Ig含量方法 ,筛选每个M循环中的纯合子 ;再用蛋白质和同工酶电泳方法 ,分析纯合子位于 11个染色体上的 2 5个生化标记基因位点。结果　第 7个M循环中 ,所得纯合子与 6 15小鼠的 2 5个生化标记基因位点完全一致 ,表明M7循环的纯合子具有 6 15小鼠的全部标记基因。结论　M6、M7循环的纯合子小鼠表达scid基因 ,具有放射敏感性和T、B淋巴细胞联合缺陷的特征 ,且T细胞比例显著低于亲代SCID小鼠

摘要:目的　研究腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a对人肺腺癌细胞系的生物学特性的影响 ,探讨重组腺病毒的体内抗肿瘤作用。方法　将分别携带有hIL 2基因、hTNF a基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2、rAd hTNF a)感染人肺腺癌Anip973细胞系 ,通过细胞生长实验、克隆形成实验等观察其对肿瘤细胞的作用 ;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL 2、TNF a的分泌量 ;通过肿瘤局部注射rAd hIL 2、rAd hTNF a的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果　rAd hIL 2、rAd hTNF a经纯化后 ,滴度可达 10 1 0 PFU ml,当病毒为 30MOI时 ,对Anip973细胞的转染率达 90 %以上。体外转染的肿瘤细胞生长能力、克隆形成率等无明显变化。 2 4h细胞培养上清IL 2的分泌量为 5 0pg 2× 10 5细胞 ,TNF a的分泌量为 2 0pg 2× 10 5细胞。体内实验表明注射rAd LacZ、rAd hIL 2、rAd hTNF a的小鼠肿瘤生长缓慢 ,体积明显小于对照组 (P <0 0 5 ) ,生存期显著延长。结论　腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a转染的肿瘤细胞形态学未见明显变化。转染hIL 2、hTNF a基因的肿瘤细胞可表达IL 2及TNF a。rAd hIL 2、rAd hTNF a重组腺病毒具有抗肿瘤作用

摘要:目的　建立类似人类普通 2型糖尿病大鼠模型。方法　采用长期高脂高能量饮食结合小剂量链脲佐霉素 (STZ)腹腔注射的方法。结果　模型大鼠有高血糖 (18 78± 1 97)mmol L、高甘油三酯血症 (10 95 4± 5 5 4 )mmol L、高胆固醇血症 (2 4 4 2± 0 74 )mmol L、脂肪肝、高胰岛素血症 (0 937± 0 2 6 )mmol L、胰岛素敏感性下降及不低于正常对照组的体重。结论　这是一种类似人普通 2型糖尿病大鼠模型

摘要:目的　探索乙酰基亚硝基脲 (ENU)诱导小鼠突变的效率 ,筛查并获得能显性遗传的突变型小鼠。方法　采用 8～ 10周龄的雄性C57BL 6小鼠 33只、DBA 2小鼠 18只 ,腹腔注射ENU10 0mg kg ,每周一次共三次 ,与同品系母鼠配种 ,在后代小鼠中针对可见表型筛查突变个体。结果　处理雄鼠有 9至 13周的不育期 ;在已经筛查的12 4 1只小鼠中得到眼睛异常、多趾、少趾及腹部白斑、矮小等突变个体 6 1只 ,突变率约 5 % ;获得单基因显性遗传的突变品系 2种。结论　ENU为小鼠的强诱突变剂 ;通过诱变可以得到遗传突变小鼠 ,为建立人类疾病动物模型提供条件 ;大规模诱变实验对小鼠功能基因组的研究有重要意义

摘要:目的　研究大鼠经“一次打击”和“二次打击”后导致全身炎性反应综合征 肺损伤 (systemicinflammato ryresponsesyndrome acutelunginjury ,SIRS ALI)的动物模型 ,并探讨其意义。方法　用梯级剂量的大肠埃希菌脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)致伤大鼠 ,复制“一次打击”模型 ;用小剂量油酸致伤大鼠后 ,再予小剂量LPS ,复制“二次打击”模型。结合动脉血气分析、外周血白细胞计数、肺湿重 干重比值 (W D)及肺组织病理观察 ,评估两种SIRS ALI动物模型。结果　在“一次打击”模型中 ,当LPS≥ 8mg kg时 ,动物出现顽固的低氧血症和明显的病理组织学改变 ,类似SIRS失控 ;小剂量油酸加LPS两次打击 ,亦可导致SIRS失控。结论　较大剂量LPS一次性致伤 ,类似临床严重感染导致单相速发型SIRS ALI的发生过程 ;而油酸加LPS两次致伤 ,可模拟创伤后继发感染导致双相迟发型SIRS ALI的发生过程

摘要:目的　提取泰泽病原体基因组DNA ,为建立该菌基因组文库奠定基础。方法　使用密度梯度离心结合酶解消化方法、酶解消化方法、本研究建立方法即过滤盐析离心法 ,从感染肝脏组织纯化泰泽病原体 ,并比较三种方法纯化泰泽病原体效果 ;采用氯化苄法、试剂盒、酚法提取泰泽病原体基因组DNA ,并比较三种方法提取基因组DNA质量 ;鉴定酚法提取泰泽病原体基因组DNA特异性。结果　使用过滤盐析离心法从感染肝脏组织纯化泰泽病原体 ,采用酚法提取其基因组DNA ,所获得的基因组DNA特异性好、纯度高、DNA片段长度大于 5 0kb ,且均一性好 ,无降解。结论　本研究首次成功提取泰泽病原体基因组DNA ,可用于多种分子生物学实验

摘要:目的　通过建立Wistar大鼠溃疡性结肠炎 (UC)模型 ,探讨外周血NK细胞活性的变化和发病机理的关系。方法　采用饮用Dextransulfatesodium (DSS)水溶液 ,复制UC动物模型 ,随机分为 4组 ,即模型组 :每天饮用生理盐水 6ml(简称M) ;锌治疗组 (Zn组 ) :每天 2次灌肠给予硫酸锌 180mg kg ;硒治疗组 (Se组 ) :每天给予硒力口服液 (含硒 6 0 μg ) 6ml;锌 +硒治疗组 :(ZS组 )每天给予上述剂量硫酸锌 硒力口服液 6ml;均给予 15d ,另设正常对照组 (C组 ) ,每天饮用生理盐水 6ml。用微量乳酸脱氢酶 (LDH)释放法测定各组外周血NK细胞活性。采用火焰原子吸收法测定结肠粘膜锌含量。采用荧光分光光度计比色法测定结肠粘膜硒含量。结果　DSS所致大鼠UC模型简单易行 ,与人类病变相类似。模型组外周血NK细胞活性较正常组降低 (P <0 0 5 ) ,经硒治疗后则有明显回升 (P<0 0 5 )。应用锌、硒治疗后结肠粘膜局部相应微量元素的含量明显提高 (P <0 0 1)。结论　经硒治疗后NK细胞活性明显升高 ,微量元素 (锌和硒 )对UC动物模型有一定的疗效

摘要:1　材料与方法雌性小鼠选用未交配的 4～ 6周龄CD - 1,雄性小鼠为 3月龄CD - 1小鼠。假孕代母鼠使用 8周龄ICR ,所有动物均由本中心提供的清洁级小鼠。合格证编号 :SCXK(苏 ) 2 0 0 2—0 0 0 9。试剂为DPBS液 ;体外受精液为HTF ;培养液为M16 (购于Sigma公司 ) ;石蜡油 :购于Sigma公司。切割透明带操作液 :自配 0 .3mol L蔗糖的PB1液不含BSA ;含 0 .3mol L蔗糖及BSA(40mg ml)的PB1液。对CD - 1雌性小鼠进行腹腔注射PMSG处理 ,4 8h后再注射hCG ,再在处理后 13、15、17h收集未受精卵。用颈椎脱臼法处死小鼠 ,剪下输卵管放在H…

摘要:目的　建立猴B病毒抗体ELISA检测方法。方法　采用方阵滴定法 ,比较不同血清稀释度、3种酶结合物、2种抗原对检测结果的影响 ,与国外同类参比实验室进行检测结果的比较 ,确定ELISA法的最佳实验条件。结果　HSV抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为 1∶2 0 0 0时 ;或B病毒抗原包被浓度 10 μg ml,抗人IgG HRP为1∶4 0 0 0时 ,阴性血清和阳性血清的A值差距最大。与国外B病毒检测专业实验室的检测结果符合率分别为98 0 2 %和 97 5 2 %。结论　建立了猴B病毒抗体的ELISA检测方法 ,提高了检测方法的准确性。

摘要:目的　建立小型猪胰腺移植动物模型 ,探索早期诊断急性排斥反应的方法。方法　 4 0只猪随机配对行胰腺移植 2 0次 ,将供胰所带的血管与受体髂血管吻合 ,所带小段十二指肠与空肠吻合 ,术中监测平均动脉压、中心静脉压及血气。术后测定受体的血淀粉酶、血糖 ,监测外周血免疫指标 ,彩色多普勒检测供胰血流及超声引导下活检、组织病理检查。结果　移植手术成功率为 90 % ,受体平均动脉压在吻合血管开放后有明显下降 ,与血流开放前差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,输血有助于手术成功 ,受体术后平均存活 (12 6± 2 3)d。外周血免疫学监测指标早于供胰的组织病理改变 ,两者的改变均早于急性排斥反应的临床表现。结论　小型猪适用于胰腺移植模型的建立 ,加强术中循环功能的管理、及时输血有利于受体成活 ;超声引导下穿刺活检供胰的组织病理学检查与监测外周血免疫指标均适于早期诊断急性排斥反应

摘要:视网膜变性模型大鼠 (royalcollegeofsurgeonrat,RCS)为遗传性视网膜色素变性的经典模型 ,最先在英国皇家外科学院种系鼠中发现 ,是第一个被发现具有人类视网膜变性主要特征的动物模型。北京大学医学部实验动物科学部饲育的RCS大鼠是 1994年 4月由美国伊利诺斯大学 (llinois)眼科病理研究所惠赠北京大学第三医院眼科的 ,至 2 0 0 1年 5月已繁育了 16代 ,现将该品系大鼠的特性概述如下 :1　遗传特性　RCS大鼠基因型为a,h ,p ,rdy,属于常染色体隐性遗传。鼠体特征为 :粉眼 ,全身多为白色 ,颈、背部有深棕色不规则花斑图案。2　生物化学特…

摘要:目的　建立犬腹部爆炸伤后海水浸泡的实验模型 ,探讨犬早期死亡原因。方法　 30只成年健康杂种犬随机分为 2组 :对照组 (n =10 )及实验组 (n =2 0 )。对照组为单纯腹部爆炸伤 ,伤后直接观察。实验组 (海水浸泡组 )为单纯腹部爆炸伤后立即置入海水中 ,在伤前及入水后 1、2、3、4h监测肛温并取血测定血浆渗透压、血钠、血钾、血氯。结果　实验组出现严重的电解质紊乱和血液高渗状态 ,表现为高渗性脱水、高钠血症、高氯血症。平均生存时间仅为 2 0 9min。对照组上述指标无明显变化 ,8h内无死亡。结论　海水浸泡后高渗性脱水、电解质紊乱和低温是实验犬致死的重要原因

摘要:目的　揭示低温处理后肉鸡血管紧张素Ⅱ、内皮素变化与早期肺动脉高压发生发展间的关系。方法　采用SMUP_2A型生物信号系统监测肉鸡肺动脉压 ,利用放射免疫法动态测定肉鸡血浆和组织中血管紧张素Ⅱ、内皮素的变化 ,比较肉鸡肺动脉压变化与血管紧张素、内皮素间的关系。结果　低温处理后肉鸡肺动脉压呈现升高 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ;血浆、右心室组织的血管紧张素Ⅱ含量显著性升高 ,肺动脉低压组、肺动脉高压组血管紧张素浓度也极显著性升高 (P <0 0 1) ;血浆内皮素含量显著高于对照组 ,与对照组相比 ,肺动脉低压组、肺动脉高压组、腹水组血浆内皮素浓度呈显著性升高 (P <0 0 5 ) ,尤其是与肺动脉高压组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。试验发现血管紧张素Ⅱ、内皮素的升高早于肺动脉高压的形成。结论　低温环境下血管紧张素、内皮素释放增加可能会造成肺血管收缩性阻力增加和右心室功能增强 ,从而导致早期肺动脉高压的形成

摘要:目的　建立猪内源性反转录病毒感染HEK2 93细胞的模型 ,验证PERV在体外对人源细胞的感染性 ,并进一步研究PERV的生物学特性。方法　将G4 18抗性的HEK2 93细胞与猪源PK 15细胞共培养 ,6周后 ,用含有6 0 0 μg mlG4 18的选择性培养基对共培养细胞进行加压筛选 ,用以除去共培养体系中的PK 15细胞 ;然后应用PCR及RT PCR的方法对所制备的感染细胞模型进行系统鉴定。结果　经 6周共培养及 3周加压筛选后 ,细胞的形态、生长速度及折光性均未见明显变化 ;PCR及RT PCR鉴定表明 ,筛选后的共培养体系中已没有PK 15细胞的存在 ;PERV特异性检测方法检测显示 ,该细胞模型的DNA中已有PERV的整合且有PERV特异性mRNA的表达。结论　本实验成功建立了PERV感染HEK2 93细胞的模型 ,证实了PERV在体外对人源细胞具有感染性 ;为PERV生物学特性的研究奠定了基础

摘要:目的　旨在探讨中药M对兔内皮细胞增殖的影响 ,试图阐明单味中草药品种M的活性成分促进血管生成的生物学机制。方法　建立兔胸主动脉内皮细胞体外培养模型 ,制备不同浓度的兔中药血清加入 96孔内皮细胞培养板 ,以MTT比色法测定内皮细胞增殖情况。结果　生脉素能够促进内皮细胞的增殖 (P <0 0 5 )。结论　中药M可能通过促进内皮细胞的增殖和分裂而达到其促进血管生成的作用

摘要:目的　为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法。方法　用 6条随机引物对 6个品系近交系小鼠基因组DNA进行PCR扩增。结果　 6条随机引物中p2、p3、p5和p6四引物扩增的条带差异较为明显。结论　RAPD方法是一种有效的近交系小鼠遗传检测手段

摘要:目的　检测 5 7份恒河猴血清及对应的猴血中抗SV4 0抗体、SV4 0DNA的携带情况 ,找出抗体滴度与DNA携带的相关关系。方法　用间接免疫荧光法检测猴血中SV4 0中和抗体 ,聚合酶链反应 (PCR)法检测SV4 0st抗原DNA的携带情况。结果　 5 7份猴血清中 ,SV4 0抗体阳性率为 93% (5 3 5 7) ,抗体滴度最高为 1∶12 80 ,最低为 1∶10 ,GMT为 15 9.5 6 ,PCR检测猴血淋巴细胞SV4 0DNA阳性率为 2 4 .5 6 % (14 5 7) ,当抗体为 1 80以下时 ,病毒整合于血细胞 ,1∶80以上时 ,对st抗原基因的整合有抑制作用。结论　恒河猴SV4 0DNA的携带情况与抗体阳性和滴度呈反相关

摘要:目的　比较速眠新与盐酸氯胺酮和速眠新复合麻醉对猕猴的麻醉效果。方法　成年健康猕猴 10只 ,动物分成单纯麻醉组 (速眠新组 ,5只 )和复合麻醉组 (速眠新和盐酸氯胺酮组 ,5只 ) ,均采用肌内注射麻醉。结果　速眠新麻醉维持时间仅 0～ 1h ,麻醉效果低于复合麻醉效果。速眠新有较好的镇静、镇痛和肌肉松弛作用 ,复合麻醉使速眠新效果更佳 ,麻醉时间更长、更稳定 (1～ 2h) ,复苏期较快。结论　速眠新和盐酸氯胺酮复合麻醉适合动物实验时间较长的手术 ,是一种较理想的实验动物麻醉方法