摘要:目的 比较不同剂量髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG_(35-55))免疫诱导C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为正常组和三组不同剂量MOG_(35-55)诱导的EAE模型组,共4组.模型组分别以每只200、100、50μg的MOG_(35-55)与完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)混合的乳化抗原皮下注射免疫诱导EAE模型,正常组以生理盐水替代.观察不同剂量MOG_(35-55)对C57BL/6小鼠体重、发病率以及神经功能评分等影响,同时取小鼠脑和脊髓,利用光镜和透射电镜观察小鼠病理组织学改变.结果 三组不同剂量MOG_(35-55)均能诱导EAE模型,发病率为100%,呈慢性单相病程,病理学观察发现小鼠脑和脊髓有炎性细胞浸润、脱髓鞘及轴突损伤等改变.但小剂量组在体重减轻、临床症状评分及病理学改变等方面均较中、大剂量组明显.结论 用MOG_(35-55)50μg剂量免疫诱导的C57BL/6小鼠EAE模型稳定,可在今后的研究中应用.

摘要:目的 研究N-甲基亚硝基脲诱导大鼠原位膀胱癌模型的构建过程以及计算机断层扫描对大鼠原位膀胱癌的诊断价值.方法 50只SD大鼠随机分为两组,对照组A组15只,实验组B组35只.B组大鼠经尿道膀胱内灌注MNU每两周一次,每次2 mg,共4次.A组大鼠用生理盐水以同样的方法灌注.于第14周末对两组大鼠进行膀胱CT扫描诊断,并且处死后取膀胱组织行病理学观察.结果 B组28只大鼠CT扫描膀胱均见明显异常,表现为局部肿块突起或膀胱壁不规则增厚、密度不均,病理诊断均为膀胱癌.A组13只大鼠经CT扫描未发现膀胱肿瘤,病理检查未见肿瘤组织.结论 MNU可以诱导大鼠原位膀胱癌模型的建立.CT扫描可作为大鼠原位膀胱癌诊断的可靠方法,并能为肿瘤的化疗或放疗等后续实验提供更好的大鼠模型.

摘要:目的 通过小鼠骨髓细胞剔除Smad3基因,观察小鼠病理变化以及免疫T细胞状态.方法 将Smad3基因剔除Smad3~(-/-))的小鼠骨髓细胞和野生型(Smad3~(+/+))小鼠骨髓细胞分别移植给~(60)Co射线照射GFP小鼠.观察骨髓移植后GFP小鼠体征变化,第6周处死小鼠,取肠道固定,HE染色观察其病理变化,流式细胞技术检测淋巴结中T细胞变化.结果 移植Smad3~(-/-)骨髓细胞的GFP小鼠逐渐消瘦,大肠出现炎症;淋巴结中活化型的CD4~+ CD62L~(lo)T细胞增多.结论 骨髓细胞TGF-β信号受阻,可导致小鼠患炎症疾病,引起免疫T细胞活化.

摘要:目的 采用不同方法诱导sD清洁级雌性大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)动物模型,造模完成后检测大鼠血清相关激素并观察卵巢局部形态学改变,并探讨其意义.方法 分别采用来曲唑、硫酸普拉睾酮钠、硫酸普拉睾酮钠联合HCG诱导大鼠PCO模型,RIA法测定血清LH、FSH、E_2、P、T、PRL、INS水平,HE染色后光镜下观察卵巢局部形态.结果 A组(对照组)和B组(来曲唑组)比较,B组较A组血清FSH浓度升高,血清P浓度降低,差异有统计学意义(P<0.05);B组血清T浓度较A组明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.01).D组(硫酸普拉睾酮钠组)与C组(对照组)比较,两组间血清性激素及INS差异无显著性(P>0.05).E组(硫酸普拉睾酮钠联合HCG组)与C组比较,E组血清T浓度、LH/FSH比值较C组升高,差异有统计学意义(P<0.05).E组与D组比较,血清P、T浓度升高,差异有统计学意义(P<0.05).A、C两组卵巢局部形态基本正常,可见发育成熟的卵泡及优势卵泡,B、D、E三组未见优势卵泡,均可见卵巢多囊样改变.结论 使用来曲唑或硫酸普拉睾酮钠联合HCG诱导大鼠PCOS模型,无论在影响血清性激素还是卵巢局部形态学改变方面与临床表现很接近,符合动物PCOS造模要求.

摘要:目的 比较腹部和颈部小鼠心脏移植模型的优缺点,探讨二次器官移植或双心脏移植研究的可行性和实用性动物模型.方法 参照One法和Chen法并加以改进,建立了同系或者同种小鼠腹部和颈部异位心脏移植模型,同时对两种手术方式的成功率、手术时间、移植心脏存活时间和病理组织学进行了比较.结果 腹部和颈部异位心脏移植手术成功率分别为86.7%和83.3%,两种手术方式在总手术时间、移植心脏存活时间和病理组织形态学检查上均无明显差异(P>0.05).结论 在熟练掌握显微外科技术的基础上,两种异位心脏移植模型都能顺利建立,两者既可分开选用,又可结合运用,以适应不同实验需求.

摘要:目的 从RNA水平探讨cyclinA1在野生型小鼠皮肤中的表达及意义.方法 选取30只大于6个月的野生型小鼠,用原位杂交方法定位检测cyclinA1 mRNA在头颈部皮肤中的表达,同时以不加探针皮肤标本作为阴性对照,另取雄性小鼠睾丸组织作为阳性对照.结果 分别有25只野生型小鼠在皮脂腺部位及12只在表皮全层有cyclinA1 mRNA表达.其中,皮脂腺部位强阳性及阳性表达分别占50.0%和33.3%,阳性率为83.3%;表皮全层强阳性及阳性表达分别占13.3%和26.7%,阳性率为40.0%.皮脂腺阳性率显著高于表皮(P<0.05).结论 CyclinA1 mRNA在野生型小鼠头颈部皮肤的皮脂腺部位及表皮全层的表达均有较高的阳性率,尤其皮脂腺表达的阳性率更高.

摘要:目的 探讨不同剂量大豆异黄酮(SI)对前列腺增生大鼠组织形态学和超微结构的影响.方法 应用丙酸睾酮诱导雄性SD大鼠前列腺增生,随机分为五组:正常对照组、模型组和3个大豆异黄酮剂量组,分别灌胃SI 60、120、240 mg/(kg·d),28 d后,光镜观察前列腺组织形态,同时结合图像分析系统检测前列腺腺体、间质的形态计量学改变,透射电镜观察前列腺细胞超微结构的变化.结果 各剂量大豆异黄酮均可降低前列腺增生大鼠前列腺湿重、指数及体积,降低上皮细胞高度、腺体面积、腺体相对总体积、单位体积内腺体平均直径、平均体积、平均表面积和间质相对总体积,提高腺体数目、腺体数密度、腺体表面积/腺体体积和腺体平均曲率.结论 大豆异黄酮具有抑制大鼠前列腺增生的作用.

摘要:目的 研究神经生长因子在小鼠不同周龄睾丸组织中的定量和定位表达.方法 分别剖取不同周龄雄性小鼠的睾丸组织,部分提取总RNA,real-time PCR相对定量分析神经生长因子mRNA的表达量;另外部分组织固定、包埋,进行SABC法免疫组化分析,以观察神经生长因子蛋白在各周睾丸组织中的定位.结果 Real-timePCR定量分析表明:小鼠生后1周龄睾丸组织有神经生长因子mRNA的表达,生后3周龄表达量达峰值,5周之后随鼠龄的增加呈下降趋势,成年小鼠睾丸组织的神经生长因子mRNA表达维持在一定水平.免疫组化定位分析显示:睾丸组织的神经生长因子蛋白表达于小鼠出生后的各个时期内,1周龄睾丸组织免疫阳性反应主要位于支持细胞,精原细胞也有着色;3周龄睾丸组织的间质细胞、各级生精细胞、支持细胞、管周肌样细胞表达均呈现阳性;5周后的睾丸组织内神经生长因子呈低水平表达,主要表达于间质细胞和生精细胞内.结论 神经生长因子mRNA的表达量随着小鼠睾丸的生长发育期存在着一定的规律性变化;神经生长因子蛋白的表达在小鼠睾丸生长发育的不同时期其主要表达部位不同.

摘要:目的 应用选择性冠状动脉前降支(LAD)球囊闭塞结合微血栓微球混悬液灌注方法造成心肌缺血坏死,探索建立稳定存活的小型猪急性心肌梗死(AMI)后心力衰竭(HF)动物模型.方法 选择中国五指山小型猪18头,行冠脉造影后沿血管送球囊至LAD中段,依次扩张球囊阻断前向血流1、2、5 min,每次间隔60 s,然后扩张球囊堵闭血流120 min.再以4F导管超选LAD,行微血栓微球混悬液分次注入,间隔10 min重复注射.TIMI心肌灌注分级(TMPG)<2级和左室舒张末压(LVEDP)>15 mm Hg时停止注射,同时监测心电图及应用漂浮导管监测有创血流动力学参数.并行pigtail导管测量(LVEDP)的变化,待LVEDP稳定在15～18 mm Hg之间后结扎血管,并加压包扎.监测心肌坏死标志物(cTnl和CK-MB)变化.分别于制模前,制模后第1天、7天、14天行心脏超声检查,制模第14天复查有创血流动力学检查,并行心脏病理检查,认定和评价模型的成功率、稳定性和可重复性.结果 制模14 d后共有15头小型猪成活,心电图、心肌坏死标记物、病理检查均符合AMI病理生理过程.其中14头小型猪达到动物模型标准[肺毛细血管楔压(PCWP)>18 mmHg和心输出量(CO)下降30%以上],模型成功率为77.78%.制模后第14天PCWP明显升高(P<0.01),CO平均下降50.76%;左室射血分数(LVEF)明显降低(P<0.01).病理检查显示心肌梗死面积占左心室面积的25.4%～34.9%.结论 球囊闭塞结合微血栓微球混悬液灌注构建小型猪急性心肌梗死后心力衰竭模型具有闭胸、高成功率、稳定和重复性好等优点,较药物、冠状动脉结扎和起搏诱导的心力衰竭模型更接近临床病理生理学特点.

摘要:目的 克隆CYP2E1、CYP2D5、ECHS1三个与非酒精性脂肪肝可能相关基因的cDNA全长基因,为进一步研究非酒精性脂肪肝的发病机制提供依据.方法 利用SMART技术构建东方田鼠肝脏cDNA质粒文库,通过PCR方法筛选文库,获得目的 菌落,用pBluescript II SK通用引物M13R测序,获得基因全长序列,并进行序列分析比较.结果 筛选了CYP2E1、CYP2D5、ECHS1三个基因,并获得了它们的全长cDNA序列:CYP2E1基因cDNA全长为1685bp,有1482 bp的完整开放阅读框,编码494个氨基酸;CYP2D5基因cDNA全长为1690 bp,有1514 bp的完整开放阅读框,编码504个氨基酸;ECHS1基因cDNA全长为1013 bp,有873 bp的完整开放阅读框,编码290个氨基酸.这三个基因的核酸序列及其推测的氨基酸序列与人、大小鼠序列高度同源.结论 获得了东方田鼠CYP2E1、CYP2D5、ECHS1三个基因全长cDNA序列,并已在Genbank中登录(GQ507485、GQ507486、GQ845171),为东方田鼠非酒精性脂肪肝模型的研究奠定了基础.

摘要:目的 对西藏小型猪Cyt b-基因序列进行分析,研究其遗传背景及其与国内家猪的亲缘关系.方法 提取西藏小型猪和巴马小型猪、贵州香猪、五指山猪的全基因组DNA,设计引物扩增Cyt b基因,测序后进行碱基序列比对,建立亲缘关系树,分析西藏小型猪的遗传背景.结果 西藏小型猪等国内部分品种猪的Cyt b基因序列与欧洲猪相比有14个变异位点;但是西藏小型猪与国内品种猪相比存在两个特殊碱基位点即在420位点T-c转换的同时在883位点存在G-A转换.结论 西藏小型猪与巴马小型猪、贵州香猪、五指山猪等国内家猪有很近的亲缘关系.同时进一步证实西藏小型猪群体内存在一定的遗传分化.

摘要:目的 确定尾悬吊大鼠比目鱼肌组织中'肌肉生长抑制素'(myostatin,MSTN)基因的表达水平.方法 在测定尾悬吊14、30 d大鼠后肢比目鱼肌相对湿重的基础上,采用real-time RT-PCR方法,在基因水平对尾悬吊14、30 d大鼠比目鱼肌中MSTN mRNA水平进行检测.结果 尾悬吊14、30 d后比目鱼肌的相对湿重分别下降了11%和19%.real-time RT-PCR结果表明,大鼠尾悬吊14、30 d后,比目鱼肌中MSTN mRNA表达水平均有所提高,分别是对照大鼠的2.2倍和3.5倍.结论 尾悬吊大鼠后肢去负荷后可诱导抗重力肌-比目鱼肌组织中MSTN mRNA表达水平的上调.

摘要:目的 检测孤雌胚胎干细胞系的建系效率与小鼠品系以及培养体系的关系.方法 将小鼠MII期卵子孤雌激活发育至囊胚,然后从囊胚内细胞团分离孤雌胚胎干细胞.结果 杂交和近交系小鼠的建系效率没有显著差异,建系的培养体系中加入ERK抑制剂或者采用血清替代品KSR时,建系效率显著提高.结论 小鼠孤雌胚胎干细胞的建系效率与小鼠的遗传背景并没有直接关系,而与分离内细胞团的培养体系密切相关.

摘要:目的 初步探讨骨髓间充质干细胞诱导为神经细胞,及其移植对大鼠脊髓半横断损伤神经功能恢复和运动的影响.方法 贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),大鼠脊髓匀浆上清诱导第3代向神经细胞分化,经免疫组化鉴定分化后细胞的性质.制备大鼠半横断脊髓损伤模型,脊髓损伤局部注射BrdU标记诱导后的神经细胞.细胞移植5周后观察移植细胞在脊髓内存活分布情况.结果 倒置显微镜下可见MSCs呈纺锤形和多角形,有1～2个核仁,经脊髓匀浆上清诱导后,发出数个细长突起,并交织成网,诱导后的细胞表达Nestin,可推测诱导后的细胞为MSCs源神经细胞.5周后移植的MSCs在宿主损伤脊髓内聚集并存活,表达MAP-2、NF、GFAP与对照组比较有统计学意义(P<0.05).大鼠运动功能较移植前有所改善.结论 MSCs经脊髓匀浆上清诱导后移植治疗大鼠半横断脊髓损伤可使运动功能得到改善.

摘要:目的 建立5-脂氧化酶(5-LO)转基因小鼠进行动脉粥样硬化的发病分子机制的研究.方法 通过显微注射的方法,将5-脂氧化酶基因片段(6.8 kb)导入BDF1受精卵雄原核并移植到同期受孕的假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行PCR、Southern blot检测,对9、20、24号转基因小鼠分别提取腹腔细胞、骨髓细胞及脾、肾组织总RNA和蛋白,并采用RT-PCR、Western blot方法进行转录水平检测和蛋白表达检测.结果 共产生25只子代小鼠,经PCR和Southern检测获得7只阳性小鼠,经RT-PCR和Western blot检测结果表明,9、20、24号转基因小鼠腹腔细胞、骨髓细胞、脾、肾5-LO和5-脂氧化酶激活蛋白(FLAP)在RNA和蛋白水平表达均高于正常BDF1对照小鼠,且统计学分析腹腔细胞、骨髓细胞表达均具有显著差异(P<0.05).结论 成功建立5-LO转基因小鼠模型.

摘要:目的 结肠黏膜组织致敏法加乙酸局部刺激法建立复合大鼠溃疡性结肠炎模型.方法 30只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、用药组(各10只),用结肠黏膜组织致敏法加乙酸局部刺激法建立大鼠复合溃疡性结肠炎模型后,用药组给予SASP灌胃,模型对照组和正常对照组给予生理盐水,均灌胃2周后处死大鼠,分离其结肠组织和血清.生化法检测各组结肠中MDA、SOD、GSH-PX、NO、TNOS和iNOS值,放免法测定大鼠血清及结肠IL-4及TNF-α含量变化,酶联免疫法测定大鼠血清IFN-γ含量变化.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠结肠组织MDA、NO、TNOS及iNOS含量升高,SOD、GSH-Px水平显著降低.与模型组比较,SASP组SOD、GSH-Px计数水平显著升高,组织MDA、NO、TNOS及iNOS含量降低.模型组血清和结肠IL-4含量较对照组明显降低,而模型大鼠血清和结肠TNF-α含量明显升高,模型组大鼠血清IFN-γ含量明显升高.SASP组IL-4含量升高,TNF-α和IFN-γ含量明显降低.结论 改进的复合造模方法,可以较好的模拟人类UC病变的慢性活动性特点,适合药效观察和评价.

摘要:目的 建立大鼠肝移植术后腹腔感染的模型.方法 构建DA大鼠到LEW大鼠的肝移植模型,采用腹腔内细菌注射的方法建立感染模型,通过对大鼠肝功、血气、血细胞计数等各项指标的检测对模型进行综合评价.结果 肝移植术后5 d注射细菌,大鼠死亡率高,不利后续研究;术后3 d注射细菌,并选定5×10~5 cfu/mL为最终注射浓度,感染后大鼠的7d存活率累计可达到37.5%左右,随之感染的加重,大鼠状态逐渐变差,直肠温度不断升高,WBC计数也随之增加,pH下降,大鼠出现代谢性酸中毒,肝功能损害进行性加重,肝实质的损害重于胆道的损伤,大约在感染5 d左右相继死亡,多器官病理分析表明,大鼠死亡原因为肝损害,不并发肺脏、肾脏损害.结论 采用的腹腔内大肠埃希菌注射建立肝移植术后腹腔细菌感染的模型是比较成功的,可用于相关领域的研究.

摘要:目的 应用缺氧动物模型比较纯氧环境(pure oxygen environment,POE,100%氧)与空气环境(room air environment,RAE,21%氧)复苏对新生大鼠缺氧性大脑皮质神经元超微结构的影响.方法 7日龄20只SD(Sprague Dawley)乳鼠建立缺氧2.5 h模型后,分为纯氧环境组(POE)和空气环境组(RAE),每组再根据复氧后时间点分为2个亚组,即24 h组和72 h组,每亚组5只.按时间点取各组乳鼠大脑半球右侧额顶皮质行电镜样品制备,透射电镜观察.结果 复氧各组均可见神经元、神经毡和细胞间隙水肿.RAE 24 h组神经元核膜结构不清,细胞器减少,线粒体肿胀、空泡化、嵴断裂;粗面内质网扩张,常呈空泡状,核糖体减少;高尔基复合体囊泡扩张;溶酶体较多.RAE 72 h组细胞器改变同前,但类似凋亡的细胞核较多,坏死细胞亦较其他组多见.POE 24 h组病变较RAE 24 h组轻.POE 72 h组细胞内线粒体及粗面内质网较丰富,病变亦比RAE 72 h组轻.结论 POE复苏较RAE复苏可更能缓解缺氧致神经元超微结构的损伤、减少细胞凋亡及减轻脑水肿.提示,纯氧环境对缺氧复苏后大脑皮质神经元有一定的保护作用,并表明本动物模型适合缺氧新生大鼠大脑皮质神经元研究.

摘要:目的 了解和掌握引入西藏高原家兔的生理生化指标,以便为实践教学、临床诊疗和科学研究提供参数.方法 采用朗道全自动生化分析仪对引入西藏高原20年的加利福尼亚兔(Californian rabbit)和中国白兔(Chinese white rabbit)的12项血清生化指标进行了测定.结果 加利福尼亚兔在品种内比较发现TP、ALB、A/G、CRE、CHOL、LDH指标表现极强的雄兔特征(P<0.01),而ALT、GLU测定值雌兔明显高于雄兔(P<0.05);中国白兔在品种内比较发现CRE、LDH指标显示差异有显著性(P<0.01),CRE指标是雄兔高于雌兔,LDH参数是雌兔高于雄兔.加利福尼亚雄兔与中国白雄兔的参数比较中发现AST、TP、ALB、GLO、A/G、GLU、CRE、LDH指标显示差异有显著性(P<0.01),而TG、BUN指标显示差异有显著性(P<0.05);加尼福利亚母兔与中国白母兔的参数比较中发现ALT、GLO、CRE、TG指标显示差异有显著性(P<0.05),AST、TP、BUN、LDH指标显示差异有显著性CP<0.01).结论 实验结果将为西藏高原的教学、临床诊疗和科学研究提供生理数据参考.

摘要:复吸是指撤药一段时间后,觅药和用药行为的恢复.它是药物成瘾的主要特征之一,也是药物成瘾治疗亟待解决的头号难题.本文介绍两种复吸动物模型--自身给药消退恢复模型、条件性位置偏爱消退复燃模型建立的方法,对模型的效标效度进行评价,探讨复吸的神经生物学机制,为药物成瘾的治疗提供研究思路.

摘要:类泛素蛋白SUMO在调节蛋白质的稳定性和功能中起着关键的作用,此外它还能够通过对转录因子及其共调节因子的修饰来调节蛋白质相互作用、蛋白亚细胞定位、蛋白质二聚化及调控基因转录等.本文通过总结SUMO系统对雌激素信号通路蛋白的修饰作用,以及其他乳腺癌相关蛋白的修饰作用,阐释其在乳腺癌发生发展中的重要功能.

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