摘要:目的应用活体荧光技术,研究血管损伤后初期病变形成的动态变化。方法112只雄性LDLR-/-小鼠随机分成14组,每组8只。将绿色荧光蛋白表达而低密度脂蛋白受体敲除(GFP⁺/ LDLR-/-)小鼠的骨髓移植到LDLR-/-小鼠中,行血管损伤手术。从术后第1天至14天,麻醉小鼠,在荧光显微镜下直接观察股动脉血管病变变化的动态状况。结果术后第1天即见血管内大量荧光细胞随血液高速循环,术后第3天出现血液中的荧光细胞呈点状粘附于血管内壁,术后第6天,在血管内壁荧光细胞粘附的部位,外膜组织开始明显增生,增生的外膜组织中可见荧光细胞,此时血管内壁的病变呈不规则的片状分布。术后第9天,血管外纤维组织显著增生,并见大量的荧光细胞,同时可见外膜组织中有血液流动的新生营养血管。至病变第14天,受损血管的病变程度在以前的基础上继续增加,病变部位血管内膜上粘附聚集大量的荧光细胞,形成内衬而附着于血管内膜。结论血管损伤后的初期病变存在着由血管内到外的发展趋势。病变的形成与循环血中骨髓来源的干细胞在内膜部位粘附和聚集具有紧密的联系,血管内膜的病变对血管外纤维组织的增生具有明显的影响。

摘要:目的对黑线仓鼠及其白化突变系酪氨酸酶基因进行比较研究,揭示黑线仓鼠白化突变系白化性状产生的分子机理。方法根据小鼠与大鼠的酪氨酸酶基因保守区设计3对引物,利用RT-PCR方法 , 从黑线仓鼠及其白化系皮肤总 RNA中扩增得到酪氨酸酶的cDNA基因,并对其二者进行克隆测序。结果成功获得了黑线仓鼠及其白化突变系的酪氨酸酶基因,对二者的序列比较分析结果表明,二者的编码区没有差异。 结论黑线仓鼠白化突变系白化性状产生的原因与已知小鼠的白化性状产生原因不同,并不是由酪氨酸酶基因编码区突变造成的,其白化性状产生的机理有待进一步的研究。

摘要:目的分析大鼠LHβ mRNA表达的促性腺激素释放激素(GnRH)受体后信号转导机制。方法将体外培养的大鼠腺垂体促性腺激素(GTH)细胞用cAMP的兴奋剂FSK或抑制剂SQ22536处理后,再用高频GnRH脉冲刺激,然后用实时荧光定量PCR法测定细胞LHβ mRNA的Ct值,并与空白组比较。结果LHβ mRNA的Ct值随着GTH细胞cAMP含量的增高而显著降低,随着cAMP含量的降低而显著增高。结论cAMP是高频GnRH脉冲刺激所引起的LHβ mRNA表达的受体后的信号转导途径。

摘要:目的采用活体成像技术比较四种剂量荧光素酶标记肿瘤细胞在小鼠体内生长及肺转移情况,为光学标记肿瘤模型的药物筛选或机制研究提供参考资料。方法以荧光素酶作为报告基因导入小鼠乳腺癌细胞4T1中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞克隆并扩大培养。标记细胞稀释成1×10⁷ 细胞/mL, 2×10⁷细胞/mL, 5×10⁷细胞/mL和1×10⁸细胞/mL四种剂量,取0.1 mL接种于BALB/c小鼠右侧第二对乳腺脂肪垫内,制作小鼠原位乳腺癌模型,比较肿瘤细胞在小鼠体内生长及肺转移情况。结果获得稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆,在致瘤性方面和亲代细胞无明显差别,四种剂量细胞接种BALB/c小鼠后,均有肿瘤生长,接种第28天时,四种剂量接种的原位移植瘤大小没有明显差别,但接种两个高剂量肿瘤细胞的小鼠组各有2只小鼠死亡；接种后31 d,发现四种剂量接种的原位移植瘤均发生不同程度的转移,随着观察天数的增加,转移程度逐渐严重,接种后42 d,小鼠陆续发生死亡。结论根据转移和死亡情况,确定接种1×10⁶个细胞/只不仅肺转移明显,而且存活时间一般超过45 d,比高剂量接种存活时间长,为最佳肺转移剂量。

摘要:目的为准确检测艾滋病猴模型特异性细胞免疫,优化、确定胞内细胞因子染色(ICS)影响因素和条件。方法使用三种多克隆激活剂分别刺激SIV感染猴外周血单个核细胞(PBMC),确定最佳阳性刺激物和刺激时间；然后使用五种浓度SIVmac239混合肽库分别刺激SIV感染猴PBMC,体外培养,不同时间点进行细胞染色和流式检测,确定肽库的最适刺激浓度和最佳刺激时间。最后,初步应用该方法检测SIV感染猴细胞免疫水平。结果PMA+离子霉素组合可用作本实验的阳性刺激物；2 μg/mL肽库,37℃ 5% CO₂ 培养16 h,能更有效的刺激T细胞分泌TNF-α、IL-2、IFN-γ。结论该方法的优化对艾滋病药物的临床前评价和疫苗研发等研究具有重要意义。

摘要:目的筛选稀有鮈鲫HAN近交系遗传质量检测标记。方法采用鳞片活体移植和同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳法对稀有鮈鲫HAN近交系的遗传纯度进行检测。结果在免疫标记分析中,鳞片同体移植存活率为96.7%以上,野生群体移植存活率为7.4%,而HAN系F22鳞片异体移植的成功率为80%,显著高于野生群体。在生化标记分析中,在HAN系F22中无多态性位点,不同个体的同工酶谱呈现高度一致,在野生群体中有2个多态位点即est2和est3,多态位点的比例为15.56%。结论经过多代近亲交配,稀有鮈鲫HAN近交系生化标记基因已经纯合,鳞片异体移植存活率达到80%,表明HAN系具有较高的遗传均一性。选用鳞片的异体移植及酯酶和肌蛋白分别作为免疫和生化标记对稀有鮈鲫HAN近交系进行遗传质量检测是可行的。

摘要:目的模拟自然感染方式建立结核病小鼠模型,并对其病理变化进行综合评价。方法通过气雾攻击方式将结核分枝杆菌H37Rv接种至C57BL/6J小鼠体内。在感染后的4周、6周、8周对小鼠进行micro-CT活体动态扫描,无菌分离肺脏和脾脏,肉眼观察病变情况,活菌菌落计数,组织病理检测(HE和抗酸染色)。结果肉眼观察和micro-CT扫描发现,不同时间小鼠肺部感染情况逐渐加重,至感染后第8周时病变弥漫至整个肺部；HE染色肺组织出现弥漫性肉芽肿样实变；抗酸染色可见结核分枝杆菌。结论通过大体病变、病理、影像、菌落计数几个方面对建立的小鼠模型进行综合分析,证明利用气雾攻击法感染的结核病小鼠模型建立成功；该模型在形成病变时与结核患者的情况存在一定差异,对其完善的综合评价有助于在相关研究中对该小鼠模型的合理应用。

摘要:目的为观察线粒体钾通道在缺血再灌注(I/R)心肌损伤中的作用,探讨其和心衰的关系,制备基因敲除小鼠模型以探讨钾通道单分子作用。方法用BAC载体制备同源重组载体,对129小鼠胚胎干细胞(ES)打靶筛选后,显微注射至C57BL/6J小鼠囊胚获得嵌合小鼠。经尾基因组DNA PCR鉴定和测序,鉴别杂合子小鼠。结果在40只灰色小鼠中初步鉴定出Kcna3+/-基因型F1小鼠8只。结论在国内首先用ES同源重组基因打靶方法,成功育成Kcna3基因敲除鼠杂合子,为下一步获得纯合子鼠奠定了基础。对进一步用钾离子通道病模型研究心肌保护病理生理机制和药物筛选具重要意义。

摘要:目的研究雌二醇(E₂)、壬基酚(NP)、多氯联苯(PCBs)、镉(Cd²⁺)和锌(Zn²⁺)单独以及联合暴露对唐鱼体内SOD酶活力的影响。方法设计不同浓度的单一物质及混合物对唐鱼14 d暴露染毒,定量测定7、14 d体内SOD酶活力的变化。结果 ①低浓度E₂处理唐鱼7 d 可诱导SOD活性显著上升,时间延长、浓度升高时SOD活性无明显变化；②低浓度NP对SOD活性没有明显的影响,高浓度NP使SOD活性极显著上升；③中高浓度组PCBs处理7、14 d,低浓度组PCBs处理14 d时SOD活性被抑制,抑制程度随着时间的延长和浓度的升高有增强的趋势；④Cd²⁺、Zn²⁺各浓度组都对唐鱼体内的SOD活性产生了一定的抑制作用,并且抑制程度随着时间的延长而加深。结论E₂、NP、PCBs、Cd²⁺、Zn²⁺对唐鱼的SOD酶活力有明显影响,它们单独作用时的SOD活性与暴露浓度之间存在良好的剂量-效应关系。联合作用效应与暴露时间和(或)各物质浓度有关,大部分表现为毒性增强。

摘要:GFP转基因鼠在医学实验中应用较广，由于这种鼠全身所有的细胞都带荧光，可取这种鼠的细胞在体外做各种处理，然后回输照射鼠，可以在照射鼠体内跟踪这些细胞的转化与分布，因此荧光鼠有着广泛的用途。我们在只有荧光雄鼠的情况下，繁殖了荧光鼠后代。由于荧光鼠全身是黑毛，为了更好的区别杂交后的子代是否是荧光鼠，我们用白色的杂交鼠与荧光雄鼠杂交，结果所生的子代全部是黑毛，经过回交，得到的荧光鼠后代，外周血中GFP阳性细胞百分比达到了95.8%，达到了做照射鼠治疗的研究要求。

摘要:目的 研究不同浓度板蓝根多糖 (Indigowoad Root Polysaccharide, IRP) 对SD系无初乳仔鼠十二指肠IgG⁺和SIgA⁺细胞表达的影响。方法40窝0 d仔鼠随机分为A~E组:(A)初乳组,(B)常乳组,(C)常乳 + 高IRP组, (D)常乳 + 中IRP组,(E)常乳 + 低IRP组。各组分别灌胃生理盐水,生理盐水,低、中、高剂量的IRP,于0、7、14、21、28 d随机取6只进行取材,运用免疫组织化学技术,通过Moticam 2306图像处理系统对各实验组仔鼠十二指肠中IgG⁺和SIgA⁺细胞及分泌物的分布和面积进行统计分析。结果IgG⁺和SIgA⁺细胞首先出现于腺体周围固有层,然后在绒毛固有层、上皮细胞之间和肌层也有分布。IgG⁺和SIgA⁺细胞数量随日龄增大而增加,且C、D、E组的IgG⁺和SIgA⁺细胞数量在7~28 d高于B组。在7~14 d、14~21 d、21~28 d发挥最佳效果的组别依次为E、D、C组。结论IRP可以促进无初乳仔鼠十二指肠黏膜IgG⁺和SIgA⁺细胞的表达。随着日龄增大,发挥最佳免疫效应的IRP浓度逐渐减小。

摘要:目的比较免疫复合物所致疼痛模型与甲醛致炎性疼痛模型的大鼠疼痛行为、局部炎症反应及巨噬细胞游走抑制因子在不同模型不同部位的表达,探讨免疫复合物所致疼痛的病理机制。方法成年SD清洁级大鼠15只,随机分为正常对照组,甲醛组及免疫复合物组,每组5只。分别在大鼠右后足底注入20 μL PBS、甲醛及免疫复合物。于30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h测定疼痛行为。并于12 h后采血、取大鼠局部皮肤及脊髓测定巨噬细胞游走抑制因子(MIF)表达。结果疼痛行为变化:在甲醛致炎后大鼠立刻出现明显的自发痛,疼痛阈值明显下降,注射足高度肿胀并于1 h达高峰后逐渐缓解。免疫复合物组的疼痛阈值低峰在4 h后,并持续至8 h后逐渐缓解,注射足肿胀不明显。皮肤及脊髓的MIF表达在甲醛组明显增加(P<0.05),在免疫复合物组中无明显改变。结论MIF参与炎症性疼痛病理过程,但无证据参与免疫复合物所致疼痛。抗原抗体复合物所致疼痛与甲醛炎性痛病理机制有一定区别。

摘要:目的测定近交系MIJ、HFJ大鼠心电图,并与Wistar大鼠比较分析,观察MIJ和HFJ大鼠心电图表现。方法大鼠麻醉后, 仰卧位固定于大鼠固定板上, 用短针电极刺入皮下2~3 mm位置,麻醉5 min后,用福田青岛FX-102B心电图机做心电图,并对心电图进行分析。 结果三种大鼠均为窦性心律,心律齐整,雄性HFJ、MIJ心率均高于同性别Wistar。HFJ和MIJ品系、性别间心率差异均无显著性。HFJ和MIJ心电轴与Wistar相同,主要在0°～90°间。三种大鼠的P波方向及QRS波群基本相同,但各波振幅和各波时限,在不同品系和性别之间存在较明显的差异。结论近交系MIJ和HFJ大鼠各有其独特的心电图表现。

摘要:目的建立一种操作简单、病变典型、稳定性好的兔在体附件扭转模型并探讨保留卵巢术后卵巢的病理变化和iNOS的改变。方法40只日本大耳白兔采用随机数字法分为附件扭转(adnexal torsion,AT)模型组(n = 32)和对照组(n = 8)。模型组兔将左侧附件按顺时针方向扭转3周,避开血管,以4/0丝线横穿扭转形成的3个螺旋圈后固定于左侧腹壁,然后再将之分成4组,每组8只,分别于扭转24、48、72、96h后解除扭转后取双侧卵巢；对照组假手术后96h后取双侧卵巢。所有切除之右侧卵巢组织行病理学研究的内对照,左侧卵巢取1/2行病理检测,另1/2行iNOS生化水平检测。结果左侧附件扭转3周固定左侧腹壁24 h后可见卵巢充血、炎细胞浸润、细胞水肿；48h见较多的炎细胞浸润,细胞结构紊乱；72 h见大量炎细胞浸润,结构损坏和局灶性坏死；96 h见弥漫性细胞坏死；卵巢组织病理评分呈现相同的时相性变化。各组iNOS生化检测水平(左侧vs.右侧),AT组 ［24 h (3.542±0.987) vs. (1.521±0.214)U/mgprot,P<0.01；48 h (4.986±1.321) vs. (1.832±0.321) U/mgprot,P<0.01；72 h (7.991±1.832) vs. (1.124±0.357)U/mgprot,P<0.01；96 h (6.991±1.227) vs. (1.732±0.572)U/mgprot,P<0.01］。且AT组卵巢均有iNOS不同程度表达,72 h组表达达高峰,96 h下降。 结论成功地制备兔附件扭转模型,方法简单、病变典型、重复性好,可模拟女性附件扭转的病理生理过程,对进一步研究附件扭转具有重要意义。初步认为附件扭转72h后卵巢发生不可逆改变,是临床处理附件扭转并保留卵巢的时间临界点。 

摘要:目的探讨肝受体类似物-1(liver receptor homolog-1, Lrh-1; NR5A2)基因序列差异与小鼠排卵数性状间关系。方法根据GenBank中NM_001159769序列设计了5对引物扩增Lrh-1基因CDS区,用单链构象多态性 (Single-strand conformation polymorphism,SSCP)分析小鼠Lrh-1基因序列差异,分析Lrh-1基因与小鼠排卵数间关系。结果①在5对引物中只有引物P2和P5扩增产物存在多态性,引物P2扩增产物存在两种基因型AA和AB型,其中AB型发生(C674A)突变,这种突变导致编码的140位氨基酸由谷氨酰胺变为赖氨酸。②引物P5 扩增产物存在三种多态类型SSCP-1、SSCP-2和SSCP-3,SSCP-1和SSCP-3型核酸序列比SSCP-2型少25个碱基,SSCP-3型除缺失区段外,其他区域碱基序列与SSCP-2型有5处碱基突变,而与SSCP-1型核酸序列有34处碱基差异,经BLAST分析,SSCP-2型与NM_001159769序列相似,SSCP-1型与NM_001159769序列相差较多,而与NG_012313.1序列相似,通过氨基酸序列比对分析,SSCP-3型1652处的A→G的突变导致氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸,1678位G→C的突变使原密码子TAC(酪氨酸Y)变为TAG(终止子)。③引物P2 AA型(27.27±8.52)与AB型小鼠的平均排卵数(25.92±11.73)间差异无显著性(P>0.05)；引物P5 SSCP-2型平均排卵数(35.00±14.58)显著高于SSCP-3型平均排卵数(19.50±7.94)(P<0.05),SSCP-1型(26.2±8.18)与SSCP-2型、SSCP-3型平均排卵数间差异无显著性(P>0.05)。结论明确了Lrh-1基因序列差异与小鼠排卵数性状间关系,为深入研究Lrh-1基因对动物生殖调控机理提供依据。

摘要:目的获得中国地鼠线粒体基因组序列,为线粒体疾病模型提供分子数据。 方法参照近缘物种的线粒体基因组序列,设计27对特异引物,采用TD-PCR及测序技术获得了中国地鼠的线粒体全基因组序列,分析了其基因组特点和各基因的定位。还结合GenBank中已发表的其他5种啮齿类动物的线粒体基因组序列,探讨啮齿类动物不同科间的系统进化关系。 结果中国地鼠线粒体基因组全长为16 283 bp,碱基组成为33.53 % A、30.50% T、12.98 %G、22.80% C,包括13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因、22个tRNA基因和1个非编码基因控制区。中国地鼠和金黄地鼠亲缘关系最近。结论中国地鼠线粒体基因组各基因长度、位置与典型的啮齿类动物相似,其编码蛋白质区域和rRNA基因与其他啮齿类动物具有很高的同源性,显示线粒体基因组在进化上十分保守。5种动物的分子系统进化树与传统分类地位一致。

摘要:目的分析物种差异对NAFLD模型复制的影响,探讨不同鼠种NAFLD形成及其机制。方法长爪沙鼠、SD大鼠、ICR小鼠各20只,按种属随机分为对照组及模型组,对照组给予普通饲料,模型组给予高脂饲料。16周后,观察肝脏HE及Mallory三色染色病理变化,计算肝指数,检测血清血脂(CHO、TG、LDL-c、HDL-c)、肝功能(GOP、GPT)及肝组织中抗氧化酶(SOD、GSH-PX、CAT)活性及羟脯氨酸(Hyp)、丙二醛(MDA)、游离脂肪酸(FFA)水平。结果与对照组比较,各模型组:沙鼠Hyp、CHO、TG、LDL-c、HDL-c、肝指数、GOP、GPT、MDA、FFA均升高,SOD、GSH-PX、CAT活性降低(P<0.05,P<0.01), 肝脏出现纤维化；大鼠CHO、肝指数、GOP、GPT、FFA、SOD活性升高,MDA含量、GSH-PX、CAT活性降低(P<0.05,P<0.01), 有局灶性脂肪肝炎；小鼠CHO、LDL-c、HDL-c、肝指数、CAT活性升高,MDA含量降低(P<0.05,P<0.01), 肝脏病理正常。结论三种动物在脂质代谢、肝功能、氧化应激等方面有显著的差异,并形成了不同的NAFLD模型:沙鼠形成伴高TG、CHO血症的肝纤维化模型、大鼠形成伴高CHO血症的局灶性脂肪肝炎模型、小鼠形成高胆固醇血症模型但肝脏未发生明显的病理改变。

摘要:目的克隆小鼠的Uncv基因并在真核细胞表达。方法采用RT-PCR方法扩增小鼠皮肤组织中Uncv基因编码区,以真核表达质粒pcDNA 3.1-Flag为载体,构建Uncv真核表达质粒,将重组载体转染Hela细胞并用Western blot法检测基因表达。结果构建Uncv基因真核表达载体pcDNA 3.1-Flag/Uncv,重组质粒在Hela细胞中有效表达约95×10³的融合蛋白。结论成功构建真核表达载体pcDNA 3.1-Flag/Uncv,并且在真核细胞中有效表达,为研究Uncv基因生物学功能奠定基础。

摘要:目的纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测。方法采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG, 用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab₂)；用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG(Ab₂)；采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(rabbit anti-hamster IgG-HRP)；用直接ELISA 和 Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定；应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA)。结果金黄地鼠血清IgG纯度达95%；兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab₂)免疫双扩散效价为1:64；兔抗金黄地鼠IgG-HRP经直接ELISA 和 Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000；酶免(IEA)效价为1∶2000。 结论高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件。

摘要:目的使用免疫组织化学的方法观察百草枯(paraquat,PQ)致小鼠肺间质纤维化过程中Smad3蛋白的表达。方法58只雄性C57BL/6J小鼠随机分组。实验组48只,通过腹腔注射10 mg/kg PQ建立小鼠肺间质纤维化模型,对照组10只,腹腔注射等量生理盐水。小鼠在实验组染毒后第2、5、7、14天和对照组第7天时分别被安乐死,留取肺组织标本。标本进一步进行HE染色和Smad3蛋白的免疫组化研究。结果光镜观察小鼠染毒后第2~5天肺组织出现水肿、出血、炎症细胞浸润等改变,第7天有少量胶原沉积及斑片状的纤维化表现,第14天表现更加明显。免疫组化观察染毒小鼠肺组织Smad3蛋白表达,第2~7天肺中巨噬细胞和部分II型肺泡上皮细胞的细胞核中见到阳性表达。Smad3阳性表达和巨噬细胞数量呈正相关。第14天,在成纤维细胞灶增生的成纤维细胞核中,也可见到Smad3弱阳性表达。结论在PQ致肺间质纤维化过程中,Smad3蛋白异常表达并对肺纤维化的发生发展具有重要的作用。