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2014, 22(2):1-5. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.000
摘要:目的 研究骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMMSCs)对小胶质细胞介导的炎症反应的抑制作用。方法 实验分为四组:组一:小胶质细胞(BV2)生长于DMEM(High Glucose)培养液中;组二:BV2细胞生长于加入脂多糖(LPS)的上述培养液中;组三:BV2细胞、BMMSCs共培养于加入LPS的上述培养液中;组四:骨髓间充质干细胞(BMMSCs)生长于加入LPS的上述培养液中。观察BV2细胞的生长状态、电镜超微结构变化及其分泌的炎症因子TNF-α表达量的变化。结果 光镜下BV2细胞密度依次为:组一>组三>组二,组四中BMMSCs生长状态良好;电镜下可见组二BV2细胞内出现大量肿胀及空泡化的线粒体、内质网等细胞器,少见生长活跃多核仁细胞,同时可见大量崩解细胞,组三细胞状态明显好于组二;BV2细胞分泌的炎症因子TNF-α表达量依次为组二 >组三 >组一 >组四。结论 BM-MSCs抑制小胶质细胞介导的炎症反应,进而发挥神经保护作用。
祝洪磊 , 石元 , 曾勇庆 , 陈伟 , 徐正刚 , 张哲 , 杨云 , 张天阳
2014, 22(2):6-12. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.002
摘要:目的 研究磷酸酪氨酸互作结构域1(PID1)基因与肌内脂肪含量的关系,探究睾丸注射法在转基因动物制备中的可行性。方法 将携带猪PID1基因的重组质粒pIRES2-acGFP-PID1与转染试剂共孵育后,对新西兰兔进行了睾丸打点注射试验。对繁殖的F1代个体进行了活体荧光检测、PCR和western blotting检测,以及抽样屠宰进行肌内脂肪含量等检测;将F1代阳性个体互交,繁殖了F2代兔,对其进行了阳性率检测以及肌内脂肪含量检测。结果 外源PID1基因和荧光蛋白基因在后代中均成功表达,其中,F1代阳性率为35.88%,F2代阳性率为34.33%;转基因阳性兔与阴性和空白对照兔相比,PID1蛋白表达水平有所增加,肌内脂肪含量有显著提高(P<0.05)。结论 PID1基因与肌内脂肪沉积密切相关,同时,进一步证明了睾丸注射法可以用于制备转基因动物,且外源基因可以稳定遗传。
2014, 22(2):13-16. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.003
摘要:目的 观察不同时间点阿霉素肾病小鼠肾脏病理的转变过程。方法 48只雄性BALB/c小鼠,随机分成对照组和模型组,模型组经尾静脉一次性注射阿霉素10.5mg/kg,对照组给予等量的生理盐水。动态观察实验12周内小鼠24 h尿蛋白、血清生化指标、肾脏病理改变。结果 模型小鼠蛋白尿于实验第2周出现,持续至第12周,第8周出现高峰(均P<0.05);低蛋白血症、高脂血症分别于实验第4、8周出现,血肌酐于实验第12周明显高于正常组(均 P<0.05)。模型小鼠肾脏病理改变第4周表现为微小病变型;第8周病变较第4周加重,硬化不明显;第12周出现肾小球局灶节段性硬化、肾小球硬化指数(GSI)为(2.81±0.84)%,明显高于同一观测时间点对照组GSI(0.33±0.21)%(P<0.01)。结论 一次性尾静脉注射10.5mg/kg阿霉素,能成功复制阿霉素肾病小鼠模型,该模型在早期表现为微小病变型肾病,晚期转变为局灶性节段性肾小球硬化。
张彩勤 , 张海 , 赵勇 , 毛峰峰 , 白冰 , 师长宏
2014, 22(2):17-19,56. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.004
摘要:目的 评估近红外荧光染料IR-783在犬自发性肿瘤中的特异性成像。方法 将IR-783染料(5 μmol/kg)腹腔注射荷瘤裸鼠,通过活体成像仪检测IR-783的代谢周期,在此基础上,将IR-783染料(1.5 μmol/kg)通过后肢静脉注射入自发肿瘤犬体内,5 d后手术切除肿瘤组织,分别进行荧光成像、组织切片HE染色、冰冻切片荧光观察。结果 IR-783染料注射荷瘤裸鼠后可以在肿瘤部位检测到特异性荧光,连续观察8 d,仍有较强的荧光。IR-783注射自发肿瘤犬5 d后,可在肿瘤组织中检测到特异性荧光。结论 近红外荧光染料IR-783能够被肿瘤组织特异性吸收,可用于犬自发性肿瘤的特异性诊断,具有重要的临床应用前景。
2014, 22(2):20-25. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.005
摘要:目的 探索大小承气汤为基础的多因素大鼠脾虚模型和脾虚肝癌模型的制作方法和成模差别。方法 采用苦寒泻下、寒湿环境、劳累、隔天禁食的方法制作脾虚大鼠模型,其中苦寒泻下因素采用大承气汤和小承气汤分别干预;Walker256大鼠肝癌细胞经裸鼠皮下增殖后移植入大鼠肝脏,制作肝癌模型。大鼠随机分为正常组、空白肝癌组、大承气汤组、小承气汤组,每组15只3周龄Wistar雄性大鼠,脾虚因素干预30 d后恢复7d制作肝癌模型并观察35 d。实验过程中观察动物脾虚程度、体重变化、成瘤情况、生存时间等。结果 大、小承气汤组动物在脾虚造模过程中相对于对照组(P<0.01),体重增长受到明显抑制,脾虚造模前20 d大承气汤组动物体重均高于小承气汤组(P<0.05),之后二者无差别(P>0.05)。大、小承气汤组动物平均脾虚积分高于空白肝癌组,小承气汤组最高(P<0.01)。肝癌模型总成瘤率91.1%,空白肝癌组为80%,大、小承气汤组均为93.3%。小承气汤组大鼠平均生存天数小于肝癌组和大承气汤组(P<0.01和0.05)。生存分析提示脾虚积分高的肝癌模型和小承气汤组肝癌模型的生存能力明显下降(P<0.05)。结论 小承气汤在多因素制作脾虚模型过程中致脾虚作用比大承气汤强,脾虚明显是肝癌模型预后不良的重要因素。
2014, 22(2):26-31. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.006
摘要:目的 观察GPR30受体激动剂G1对高糖诱导的EA.hy926内皮细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的影响。方法 选用EA.hy926内皮细胞为研究对象,分为3组:正常对照组(Con,17.51mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,33.3mmol/L葡萄糖)、高糖+G1组(HG+G1,HG+1umol/L G1),利用流式细胞术检测3组细胞凋亡率,Western blot法检测ERS相关分子Bip、IRE1、PERK及凋亡分子Bax、Bcl-2的表达变化,RT-PCR法检测Bip和CHOP的mRNA表达变化。结果 HG组与Con组比较,细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Bip、IRE1、PERK及凋亡分子Bax表达上调(P<0.01,P<0.05或P<0.001),Bcl-2的表达下调(P<0.01),Bip mRNA、CHOP mRNA 表达上调(P<0.001及P<0.01);HG+G1组与HG组比较,细胞凋亡率明显降低(P<0.05),Bip、IRE1、PERK及凋亡分子Bax表达下调(P<0.05或P<0.01),Bcl-2的表达上调(P<0.05),Bip mRNA、CHOP mRNA 表达下调(P<0.001及P<0.01)。结论 GPR30受体激动剂G1可抑制EA.hy926内皮细胞内质网应激。
樊惠 , 冯慧利 , 党惠子 , 陈晓培 , 任映 , 杨金铎 , 王蓬文
2014, 22(2):32-35. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.007
摘要:目的 通过Morris水迷宫检测学习记忆和记忆保持能力,判断鸟嘌呤核苷、姜黄素对4月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠认知功能的影响。方法 将3月龄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组0.92 mg/(kg·d)、鸟嘌呤核苷组20 mg/(kg·d)、姜黄素组200 mg/(kg·d)、姜黄素200 mg/(kg·d)和鸟嘌呤核苷组20 mg/(kg·d),每组12只;并以同月龄野生型C57/BL6J小鼠作对照。每天给药1次,连续给药1个月。应用Morris水迷宫进行行为学检测。结果 鸟嘌呤核苷、姜黄素对空间探索、定位航行障碍有改善作用,尤其以姜黄素组明显。结论 鸟嘌呤核苷、姜黄素能改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的早期出现的认知障碍。
陈丽萍 , 张静 , 马顺利 , 李振飞 , 张金丽 , 董梅 , 单明月 , 郭力
2014, 22(2):36-39. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.008
摘要:目的 探讨Olig2在cuprizone 诱导的急性脱髓鞘动物模型中的表达变化规律。方法 应用含0.2% cuprizone 饲料饲育小鼠,通过调控饲育时间,造成神经脱髓鞘及髓鞘再生,使用免疫荧光染色和实时定量PCR(qRT-PCR)的方法,观察模型髓鞘脱失后及髓鞘再生2周后Olig2、少突胶质细胞碱性髓鞘蛋白(MBP)及星形胶质细胞神经胶质酸性蛋白(GFAP)的表达变化。结果 Cuprizone 饲育6周后,动物胼胝体白质内髓鞘脱失严重,在恢复正常饲料后,髓鞘逐渐恢复正常结构。正常小鼠大脑Olig2低水平表达。髓鞘脱失后Olig2、GFAP表达增高,并可见Olig2+/GFAP+细胞,MBP表达明显降低。髓鞘再生2周后 Olig2表达降低,MBP、GFAP表达增高。结论 Olig2基因在cuprizone诱导的脱髓鞘模型中的表达变化,提示 Olig2可能参与祖细胞向有活性的星形胶质细胞的分化过程,并与胶质瘢痕的形成有关。
王逸 , 卢聪 , 宋广青 , 陈怡西 , 武宏伟 , 王琼 , 曲丽娜 , 李莹辉 , 刘新民
2014, 22(2):40-44. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.009
摘要:目的 探讨慢性束缚应激对Wistar、SD两种品系大鼠学习记忆能力的影响,为应激模型中实验动物的选择提供依据。方法 对两种品系大鼠(Wistar、SD)采用每天束缚10 h,束缚28 d建立慢性应激模型。采用物体认知新物体识别实验和Morris水迷宫空间学习、工作记忆行为学检测方法,观察束缚应激对两种品系实验动物学习记忆能力的影响。结果 束缚28 d后,物体识别实验中,Wistar、SD模型组的辨别指数(discrimination index,DI)均低于对照组,但只有SD两组间差异存在显著性(P<0.05);水迷宫空间学习阶段,SD模型组潜伏期高于对照组,第5天差异有显著性(P<0.05),而Wistar模型组与对照组间的潜伏期没有差异;水迷宫工作记忆阶段,SD大鼠模型组与正常组比较,潜伏期显著增加(P<0.05),Wistar模型大鼠的潜伏期与对照组比较没有显著差异。结论 新物体识别实验和水迷宫实验,这两种反应动物不同学习记忆能力的行为学实验结果都表明,慢性束缚应激(10 h,28 d)对SD大鼠学习记忆能力的损伤较Wistar大鼠明显。SD大鼠可能更适合作为慢性应激所致学习记忆损伤动物模型。
马嵋 , 姜涛 , 张春 , 魏琴 , 段明军 , 王雪梅 , 李志强 , 寿玺 , 陈启龙
2014, 22(2):45-47. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.010
摘要:目的 探讨新疆灰旱獭高原低氧适应性改变致右心室重构组织学改变。方法 应用免疫组化技术检测新疆灰旱獭右心室缝隙连接蛋白43(CX43)蛋白表达,同时应用HE染色和Masson染色观察心室肌结构和纤维化程度变化。结果 心肌细胞肥大,胶原纤维增多,右心室肥厚指数、体重指数明显增高。CX43蛋白表达减少和(或)分布的改变。结论 高原低氧致新疆灰旱獭右心室结构重构,可作为研究高原低氧适应性机制的理想动物模型。
唐晶晶 , 梁德 , 江晓兵 , 丁金勇 , 杨志东 , 姚珍松 , 张顺聪
2014, 22(2):48-51. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.011
摘要:目的 探讨改良半椎板切除法建立大鼠腰神经根压迫模型的优势和特点。方法 选用SD大鼠40只,随机分为实验组和对照组,实验组采用改良半椎板切除法建立大鼠腰神经根压迫模型,对照组则采用全椎板切除法,通过观察两组建模手术时间、术中出血量、伤口愈合情况、死亡率、大鼠下肢神经功能、神经根组织病理改变及TNF-α及IL-1在细胞质中灰度值表达水平评估两种方法的效果。结果 实验组在建模手术时间、术中出血量、伤口愈合状况、死亡率明显少于对照组(P<0.01),而大鼠下肢神经功能、神经根组织病理改变及TNF-α及IL-1在细胞质中灰度值表达水平无明显差异,同时,实验组所需的切口小,脊柱后方软组织破坏少。结论 采用改良半椎板切除法可保证成功建立大鼠腰神经根压迫模型,并且这一改良方法具有手术时间短,伤口愈合快,出血量少,软组织破坏少,死亡率低等优点,这一改良方法更注重动物伦理。
2014, 22(2):52-56. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.012
摘要:目的 通过测量成年贵州小型猪肾脏各种径线值及体积,建立贵州小型猪肾脏数据。方法 采用西门子双源CT对12头成年贵州小型猪(雄性6头,雌性6头)进行薄层容积扫描,原始数据经Aquarius iNtuition 4.4软件进行MRP及VR重组,在横断位正中层面测量双肾前后径及左右径,在冠状位最大面测量双肾长径及短径,计算小型猪体积及双肾体积,双肾长径与短径比值,采用统计学软件对肾长径、长短径比值与肾脏体积,肾脏体积与小型猪体积及体重做相关性分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果 左肾前后径及左右径分别为(40.40±1.67)mm及(27.47±1.40)mm,长径及短径分别为(80.36±2.74)mm及(31.79±1.99)mm,左肾体积为(52.78±2.25)cm3,左肾长径与短径比值为(2.42~2.71):1;右肾前后径及左右径分别为(40.95±1.43)mm及(26.90±0.65)mm,长径及短径分别为(79.03±2.38)mm及(32.04±2.34)mm,右肾体积为(51.91±2.25)cm3,右肾长径与短径比值为(2.33~2.77):1。双肾长径与肾脏体积呈高度正相关(r左=0.92,P<0.05;r右=0.88,P<0.05),肾脏体积与小型猪体积呈正相关(r左=0.90,P<0.05;r右=0.81,P<0.05),与体重也呈高度正相关(r左=0.96,P<0.05;r右=0.98,P<0.05),但肾脏长短径比值与体积呈负相关(r左=-0.51,P<0.05;r右=-0.67,P<0.05)。结论 多层螺旋CT及其后处理软件可准确测量贵州小型猪活体肾脏的多项影像学数据,为人类肾脏疾病的动物模型研究提供参考。
2014, 22(2):57-61. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.013
摘要:目的和方法 稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)作为一种本土特有的小型鱼类,是我国正在标准化的化学品毒性测试生物之一。为评价稀有鮈鲫鱼类急性毒性实验中效应的稳定性和可重复性,研究优化筛选了重铬酸钾和3,4-二氯苯胺两种化学品,分别在单一实验室内及不同实验室间进行急性毒性验证实验。结果 对于来源相同、体长固定的稀有鮈鲫,无论在实验室内还是实验室间,两组化学品的96 h LC50值均在x±2s的质量控制范围之内,所有结果体现了很好的稳定性和可重复性。结论 根据研究获得的数据可建立一个有效的稳定性和可重复性衡量数据库,用来评估之后其他单个实验的可靠性;稀有鮈鲫作为一种具有潜力的生态毒性测试的生物种类,具有成为标准实验动物的潜能。
李淼 , 郁丽丽 , 张艺宝 , 强苏静 , 刘丽均 , 徐平
2014, 22(2):62-65. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.014
摘要:目的 探讨三种不同冷冻保护剂对C57BL/6J小鼠附睾冷冻的效果。方法 性成熟并交配过的6~8周龄C57BL/6J雄鼠附睾,分别用3种不同冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(PROH)、R18S3进行玻璃化冷冻、复苏和精子采集,观察比较三个实验组的复苏精子形态、存活率以及生殖能力。结果 三组冷冻复苏分离后的精子形态完整,具有镰刀头状结构;荧光染色后PROH组精子存活率为(88.17±3.43)%,明显高于DMSO组:(61.17±10.65)% 和R18S3组(16.83±6.49)%(P<0.05);经辅助体外受精后均具有受精能力。获得的胚胎移植后可得到正常子代小鼠(DMSO:PROH:R18S3=13:8:17)。结论 3种冷冻保护剂均适用于C57BL/6J小鼠附睾冷冻,但PROH冷冻效果较好。
2014, 22(2):66-69. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.015
摘要:目的 为了筛选出防治猪呼吸道疾病综合征(PRDC)有效的中药复方制剂,对七个具有止咳化痰作用的中药复方制剂进行了对比实验。方法 以小鼠为实验动物,用右美沙芬、氯化铵作阳性药,生理盐水作空白对照,采用浓氨水引咳法和气管段酚红分泌法,对七个中药复方制剂的止咳化痰作用进行了观测。结果 方7、方5可显著延长小鼠的咳嗽潜伏期(P< 0.05),减少5 min内的咳嗽次数(P< 0.05),除方4组外,其他中药组的气管酚红排泌量显著低于对照组(P <0.05),并且方7、方5和氯化铵组小鼠的酚红排泌量显著低于其他处理组(P<0.05)。结论 七个中药复方组中,方5、方7的止咳化痰作用最显著,可在进一步实验研究后,作为PRDC的治疗药物。
2014, 22(2):70-74. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.016
摘要:目的 探讨建立肠道多重耐药细菌感染动物模型的方法,为实验研究和治疗因耐药菌引起的感染提供良好的模型。方法 24只6周龄SPF级雄性BALB/c小鼠分成4组:正常对照组、MDR-PA组、MDR-PA+抗生素组和MDR-PA+禁食组,6只/组。分别给予生理盐水灌胃、PA悬液灌胃、自由饮用含头孢曲松钠水后PA悬液灌胃和禁食后PA悬液灌胃。实验结束后对结肠组织进行病理学观察和炎症评分;检测炎症因子TNF-α和INF-γ浓度。结果 结肠组织病理表现出不同程度的炎症变化;炎症因子TNF-α和INF-γ浓度较对照组均明显增加,有显著统计学意义。结论 三种方法均可成功建立肠道多重耐药铜绿假单孢菌感染的动物模型,可根据不同实验目的选择不同的建立模型方法。
2014, 22(2):75-79. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.017
摘要:目的 了解Wistar大鼠的各种自发性肿瘤病变及其发生率。方法 致癌实验中的对照组,采用4周龄SPF级Wistar大鼠,雌、雄性大鼠各60只,实验前观察1周,常规饲料喂饲104周后处死,进行组织病理学检查。结果 报告了Wistar大鼠的各种自发性肿瘤病变及其发生率。雄性大鼠中发生肿瘤的动物占49.12%,发生良性肿瘤的动物占38.60%、发生恶性肿瘤的动物占17.54%;良性肿瘤主要有垂体腺瘤(19.30%)、睾丸间质细胞瘤(5.26%)和皮下纤维瘤(5.26%);恶性肿瘤主要有鳞状细胞癌(7.02%)和淋巴造血系统肿瘤(3.51%)。雌性大鼠中发生肿瘤的动物占60.34%;发生良性肿瘤的动物占50.00%、发生恶性肿瘤的动物占15.52%;良性肿瘤主要有乳腺纤维腺瘤(25.86%)和垂体腺瘤(24.14%);恶性肿瘤主要有腺癌(5.17%)和乳腺癌(3.45%)。结论 本文报告的Wistar大鼠自发肿瘤及其发生率进一步丰富了现有SPF级Wistar大鼠自发性肿瘤的数据资料,可为有关技术人员提供一定的参考和借鉴。
2014, 22(2):80-85. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.018
摘要:目的 了解上海地区实验小鼠自然感染小鼠诺瓦克病毒(murine norovirus,MNV)的状况,并分离毒株。方法 抽取委托检测单位送检的SPF小鼠319只,分别采集盲肠内容物及血液样本,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增小鼠盲肠内容物样本中MNV的特异性基因片段来检测MNV的感染情况,同时采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)与核酸检测方法进行对比。将RT-PCR扩增结果为阳性的盲肠内容物样本稀释并经0.22 μm滤膜过滤,接种到小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞,盲传后采用RT-PCR方法鉴定。结果 RT-PCR检测的319份小鼠盲肠内容物样本中,阳性样本95份,阳性率为29.78%。对180份经RT-PCR检测的小鼠血清进行ELISA检测,阳性样本70份,阳性率为38.89%。RAW 264.7细胞盲传5代后在72 h内出现细胞病变,经RT-PCR鉴定,显示187 bp的目的条带。结论 通过核酸检测方法和血清学方法证实上海地区实验小鼠存在MNV自然感染,且感染率较高,应加强实验小鼠的饲养管理。
2014, 22(2):90-94. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.0020
摘要:嗜肺巴斯德杆菌(Pasteurella pneumotropica)是一种条件致病菌,人兽共患。主要危害啮齿类动物,特别是免疫缺陷或抑制的动物,可引起炎症和脓肿等症状。该菌是实验动物中感染率最高的病原菌之一,多呈隐性感染,给动物实验带来了极大的干扰。本文针对嗜肺巴斯德杆菌的流行病学、检测和鉴定、分子分型和防治等方面进行综述。
庞义全 , 冯悦 , 孙晓梅 , 刘丽 , 代解杰 , 夏雪山
2014, 22(2):95-102. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2014.02.0020
摘要:病毒性肝炎是由肝炎病毒引起的肝脏疾病。在我国,病毒性肝炎高度流行,其中又以乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)和丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)危害较大。动物模型是研究疾病感染与发病机制,进行药物与疫苗研究的必要工具。目前病毒性肝炎实验动物模型的研究已取得长足的发展,主要集中于病毒在动物体内的感染特性及发病规律方面。本文仅就病毒性肝炎动物模型,尤其乙型、丙型肝炎树鼩动物模型的研究及建模策略进行综述。