摘要:目的 观察血管紧张素II(Ang Ⅱ)拮抗剂对5/6 (ablation /infarction,A/I) 肾切除诱导慢性肾衰竭(CRF)大鼠肾功能、肾血流量及肾内氧耗的影响.方法 制备5/6( A/I)肾切除诱导慢性肾衰大鼠模型,设正常组(A组,n =14只),模型组(B组,n =14只),Ang Ⅱ拮抗剂治疗组(氯沙坦钾联合福辛普利钠)(C组,n =14只).给予相应干预,疗程60 d.分别测量尾动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP),检测大鼠尾静脉血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血红蛋白(Hb),计算内生肌酐清除率(Ccr).干预60 d后,检测肾血流量(RBF)、腹主动脉和肾静脉血气(AABG and RVBG),左肾静脉压(RVpO₂),计算残余肾内氧耗 ( QO₂ /T_Na)及观察残肾组织病理变化.结果 (1)造模后与A组比较,B、C两组的Scr、BUN和尾动脉SBP、DBP显著增加(P<0.01),Ccr、Hb显著降低(P<0.01),提示造模成功.(2)干预后与B组比较,C组的Scr、尾动脉SBP、DBP、QO₂ /T_Na明显下降(P<0.01),BUN降低(P<0.05),Hb、Ccr、RVpO₂显著升高(P<0.01),RBF升高(P<0.05).(3)残肾组织病理形态学变化显示,C组的肾组织病理变化明显减轻,优于B组.结论 Ang Ⅱ拮抗剂可以增加慢性肾衰大鼠肾血流量,降低肾内氧耗,改善肾功能及减轻肾组织病理变化,其肾脏保护作用机制可能与其调节细胞能量代谢,改善肾内氧耗有关.

摘要:目的 探索Sertoli细胞对去除小鼠精原细胞后睾丸的动态反应.方法 采用15、30和44 mg/kg的白消安腹腔注射法建立不同程度去除精原细胞的动物模型,处理后5 d和28 d时对睾丸进行组织学检测,评价精子发生状态,并运用实时定量荧光PCR技术检测这两个时期睾丸GDNF、PLZF、Nanog和GFRα1基因mRNA的表达量.结果 在白消安处理后第5天,GDNF出现显著升高,且呈剂量依赖趋势,而PLZF与GFRɑ1并无显著变化,睾丸组织学观察亦无明显变化.在白消安处理后28 d时,GDNF、PLZF、Nanog、GFRɑ1基因mRNA 相对表达量均出现大幅度的升高,睾丸组织学切片观察显示随着给药剂量的增加,精子发生受到的损伤愈加严重.结论 Sertoli细胞早在白消安处理后第5天就对精原细胞的变化发生了反应,Sertoli细胞分泌GDNF的能力发生代偿性增加,进而刺激精原干细胞自我更新速度加快,体现在Nanog和PLZF水平提高,从而实现精子发生的重建.

摘要:目的 利用TALE-TFs,在小鼠成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子,为检测β-酪蛋白基因启动子—目的基因表达框的表达结果,提供一种检测途径.方法 将构建的TALE-TFs和β-酪蛋白基因启动子—Red报告基因质粒电转染进入小鼠成纤维细胞,通过荧光显微镜直接观察报告基因表达情况.结果与结论 利用TALE人工转录因子,在小鼠成纤维细胞中能够激活β-酪蛋白基因启动子表达框,为替代乳腺上皮细胞表达验证系统提供了新的途径.

摘要:目的 探讨caspase-9抑制剂对低胎牛血清培养诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡影响的研究.方法 取3月龄SD大鼠椎间盘软骨终板,序贯消化法获取细胞原代培养,以1% FBS培养48 h为诱导凋亡条件.实验分为1% FBS凋亡组、caspase-9抑制剂组(Z-LEHD-FMK)及DMSO对照组,分别处理细胞48 h,后经流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot检测procaspase-9,active caspase-9及active caspase-3的表达.结果 流式细胞仪检测显示,caspases-9抑制剂组细胞凋亡率(26.3±2.56)%与1% FBS组(40.8±0.84)%及DMSO组(40.2±1.56)%相比凋亡率较低,有显著统计学差异(P<0.05);Western blot检测caspases-9抑制剂组active caspase-9及active caspase-3较1%FBS凋亡组及DMSO对照组表达均明显减少,有显著统计学意义 (P<0.05).结论 Caspase-9抑制剂能明显抑制低胎牛血清培养诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡,有望成为治疗椎间盘退变的新型药物.

摘要:目的 通过比较脂多糖(LPS)和石墨粉颗粒分别诱导小鼠急性肺损伤的病理形态学差异,探讨不同来源细颗粒物成分导致急性肺损伤的可能机制.方法 将140只SPF级18～20 g雄性KM小鼠随机分为7组,除正常对照组外其他组经气管内分别滴注LPS溶液及石墨粉混悬液制备急性肺损伤小鼠.记录各组动物死亡率,光镜和透射电镜下观察各组小鼠不同时间点肺组织病理变化.Western Blot检测肺组织中NE的蛋白表达,实时定量PCR法检测肺组织中MCP-1的mRNA表达.结果 与正常对照组相比,G (石墨粉)组和L (LPS)组均有不同程度病理学改变,G组小鼠肺部有大量巨噬细胞渗出,L组小鼠肺部渗出物以中性粒细胞为主;肺组织中NE蛋白表达均高于正常对照组(P<0.05),且L组与G组之间差异有显著性(P<0.05);肺组织中MCP-1mRNA表达均高于正常对照组(P<0.01),且L组与G组之间也有显著差异(P<0.01).结论 不同来源颗粒物引起肺部的病理损伤不同,可能引起炎症反应的机制也存在差异,即成分复杂的细颗粒物导致急性肺损伤的机制可能存在混合性.

摘要:目的 克隆广西巴马小型猪PGC-1α基因编码区(CDS)序列,利用RT-PCR和QRT-PCR方法分析PGC-1α mRNA组织表达情况.方法 本实验以广西巴马小型猪背最长肌cDNA为模版,PCR扩增PGC-1α基因CDS序列,将其连接至pEASY-T5载体,转染细菌、验证和序列测定;通过RT-PCR半定量和QRT-PCR实时荧光定量检测PGC-1α基因在小型猪多个组织中的表达情况.结果 克隆获得广西巴马小型猪PGC-1α基因CDS序列,全长2391 bp,编码796个氨基酸,与参考序列的同源性为99.9%,两处碱基发生同义突变,分别是C-A1105和G-A1524;PGC-1α基因在广西巴马小型猪心脏和肾脏中的表达丰度最高,其次是肝脏、皮下脂肪和背最长肌,而在胰腺中未检测到其表达.结论 成功克隆了广西巴马小型猪PGC-1α基因编码区序列并进行了多种组织表达分析,为后续研究PGC-1α在小型猪2型糖尿病发生过程中作用途径打下基础.

摘要:目的 通过尾静脉注射,建立一种符合临床特征的肺腺癌转移瘤动物模型,为下一步的肺腺癌转移机制的研究提供可靠的实验造模方法.方法 取对数生长期的A549细胞,11只SPF级、4～6周龄BALB/c裸鼠,分别以1×10⁶个细胞/只注射入裸鼠尾静脉.接种后每天观察小鼠状态.分别于接种肿瘤细胞后第4、5、6、7周随机处死2只,余3只小鼠处于濒死状态时处死.解剖小鼠,观察肺部有无转移、转移结节的数目及全身其他器官的转移情况,并做病理取材,HE染色观察.结果 注射过程中小鼠均存活.未处死的3只分别于第11、13、14周出现恶液质.第4周肺部未见转移结节;第5周出现镜下肺部转移结节;第6周肉眼可见肺部转移结节;第7周转移结节数增多;第11周出现纵隔淋巴结转移.第11、13、14周出现肺部结构大量破坏,弥漫性的肿瘤细胞浸润,出现淋巴结浸润,病理证实为腺癌.结论 通过尾静脉注射A549细胞可以成功建立人肺腺癌转移瘤模型.

摘要:目的 寻找能调节T细胞功能的相关分子,进行与T细胞介导的自身免疫性疾病相关的研究.方法 从BALB/c小鼠骨髓中收集树突状细胞,免疫Wistar大鼠,进行细胞融合,建立杂交瘤细胞系.筛选得到很多株能调节T细胞功能的杂交瘤细胞系,对其中一株最能抑制T细胞增殖的杂交瘤细胞系进行了进一步的深入研究.结果 显示其目标分子是CD45,同时增殖实验结果显示该抗体能显著抑制T细胞增殖反应.结论 抗CD45单克隆抗体能有效抑制T细胞增殖,有望将本抗体用于T细胞介导的自身免疫性疾病的相关预防及治疗中.

摘要:目的 探索一种在无线遥测和刺激技术基础上的兔房颤模型的制作.方法 新西兰兔皮下植入自主研发的植入式遥测刺激器,植入式遥测刺激器的制作是以TI公司(德州仪器)的MSP单片机和TI公司的RF无线收发芯片CC2250为核心开发设计.优化植入系统设计以满足新西兰兔房颤模型建立的探索实验;植入子植入新西兰兔腹部皮下,采集电极留置于左上肢和右上肢腋下皮下,两个刺激电极分别缝合于左心耳和左心房上,通过无线收发采集和刺激信号;实现利用Powerlab生理记录仪连续监测体表I导联心电信号,并通过专用计算机程序刺激软件,发放间歇(刺激2 s,暂停2 s)高频(频率20 Hz)阈上(强度2 mA,脉宽1 ms)刺激,若间歇期内出现房颤,则人为干预中止刺激,若转为窦性心律,则继续刺激.结果 植入式遥测刺激器在体内可稳定工作(包括采集模拟心电信号和发放刺激)30 d,植入新西兰兔体内刺激3周后可诱导出房颤,持续时间>48 h.结论 用新西兰兔代替比格犬建立基于无线遥测和刺激基础上的房颤模型是完全可行的,同时也体现了动物福利优化和替代原则.

摘要:目的 观察黄芪多糖(APS)对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、细胞因子及顺铂(DDP)所致免疫功能低下的影响.方法 90只小鼠,设空白对照组10只,余80只依次造模为荷瘤小鼠,并随机分为8组:模型组(等体积生理盐水),顺铂阳性对照组(6 mg/kg DDP),APS低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高剂量(200 mg/kg)组,联合用药低、中、高剂量组(DDP剂量减半,APS各剂量同上),于造模次日起各组分别腹腔注射等体积的药物0.3 mL.DDP每周一次,其余药物每天1次,连续20d.于第21天取血清采用ELISA法测定细胞因子IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α的水平,并观察各组抑瘤率及免疫器官指数.结果 DDP、APS低、中、高剂量及联合用药低、中、高剂量组对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑瘤率分别为49.30%、17.21%、39.68%、42.98%、51.02%、57.21%、65.11%(与模型组比较P < 0.05或0.01;联合用药组与DDP组比较P<0.05).与空白对照组比较,APS中、高剂量组和联合用药组脾脏指数显著升高;与模型组比较,APS高剂量和联合高剂量脾脏指数差异有显著性(P<0.05);与DDP组比较,APS各剂量和联合用药组小鼠胸腺指数和脾脏指数均升高.结论 APS能提高Lewis 肺癌小鼠血清中细胞因子IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α的水平;增强DDP所致免疫功能低下小鼠的免疫功能,对免疫器官有一定的保护作用;能抑制小鼠Lewis肺癌细胞的生长,在与DDP减半量联合使用时可使DDP抑瘤作用增强,且其机制可能与增强机体的免疫功能有关,说明APS对DDP有一定的增效减毒作用.此项研究在实体瘤的治疗中有潜在的应用前景.

摘要:目的 研究肠道组织CFTR基因表达与分泌性腹泻发生的关系.方法 选取KM小鼠24只,雌雄各半,随机分为3组(每组8只):对照组经小鼠腹腔注射0.2 mL生理盐水,实验组小鼠经腹腔注射LPS[6 mg/(kg·bw)]分别作用1 h、8 h,于注射后通过小鼠精神状态、肠道组织形态学判定分泌性腹泻模型的建立,利用荧光定量PCR法检测各段肠道组织CFTR基因的表达.结果 LPS成功诱导小鼠发生了分泌性腹泻;CFTR基因在小鼠十二指肠、空肠、回肠和结肠组织中均有不同的表达丰度,以结肠最高,但各段肠道间差异不显著;与对照组相比,LPS上调了十二指肠、空肠和回肠CFTR基因的转录,下调了结肠CFTR基因的转录.结论 提示肠道组织CFTR基因转录水平的上调与LPS诱导分泌性腹泻的发生密切相关,且在各肠段发挥的作用不同,其中空肠在氯离子(Cl^-)分泌中发挥主要作用,结肠的作用最弱.

摘要:目的 观察全身垂直振动、跑台运动和金雀异黄酮对去卵巢骨质疏松大鼠子宫重量指数和组织形态学以及糖原合成激酶3β(GSK-3β)蛋白表达的影响.方法 将72只3月龄雌性SD大鼠按体重分层后随机分为假手术组(12只)和去卵巢组(60只).去卵巢10周时,将去卵巢组大鼠按体重分层后又随机分为去卵巢组、振动组、跑台组、金雀异黄酮组和雌激素组(每组8～10只),并开始进行不同干预处理.干预处理8周时,于末次处理结束36～48h内,腹主动脉取血处死各组大鼠,用电子天平称量大鼠子宫的重量,用HE染色方法观察子宫形态学的变化,用Western blot方法检测子宫GSK-3β和P-GSK-3β蛋白表达的变化.结果 与去卵巢组比较,雌激素组大鼠子宫重量指数显著增加,而振动组、跑台组、金雀异黄酮组大鼠子宫重量指数均无显著变化;与去卵巢组比较,雌激素组、跑台组和振动组大鼠子宫P-GSK-3β/GSK-3β蛋白的比值均显著增加,而金雀异黄酮组无显著变化.结论 全身垂直振动和跑台运动均能刺激去卵巢骨质疏松大鼠子宫GSK-3β蛋白的磷酸化,而金雀异黄酮无此效应.

摘要:目的 对FH/W jd大鼠酒精性肝损伤模型进行探讨.方法 FH/W jd大鼠按体重随机分为饮水组和饮酒组,两组均自由饮食.16周后取血,检测血清ALT、AST、TBIL、TG、CHO;取肝脏,匀浆后检测TG、GSH;流式细胞仪检测肝细胞凋亡率;Western blot检测肝脏组织PPARα蛋白表达;肝脏HE染色观察组织病理学改变.结果 与饮水组比较,饮酒组两种性别FH/W jd大鼠血清TBIL、TG含量显著升高,饮酒组雌性大鼠血清ALT、CHO显著降低;饮酒组两种性别大鼠肝脏TG含量显著升高,GSH含量呈现降低趋势;饮酒组两种性别大鼠肝细胞凋亡率亦呈降低趋势;饮酒组肝脏PPARα蛋白表达明显上调;饮酒组组织病理学改变以小泡性脂肪变性为主.结论 长期自主摄入酒精可以造成FH/W jd大鼠肝脏损伤.

摘要:目的 探讨热应激对小鼠器官指数、小肠形态、胃黏膜HSP70 mRNA表达量及糖代谢相关激素的影响.方法 采用单因子实验设计, 将年龄和体重相近的18只KM小鼠随机分为对照组和热应激组,分别测定心、肝、脾、肺、肾重量,小鼠胃黏膜HSP70 mRNA表达量、血浆中胰岛素和胰高血糖素浓度以及十二指肠和空肠的绒毛高度、隐窝深度,并对肝脏、十二指肠和空肠进行病理组织学检查.结果与结论 热应激对小鼠器官指数无影响,可显著提高小鼠胃黏膜HSP70 mRNA表达量,降低血浆中胰岛素的含量,并造成小鼠肝脏、十二指肠和空肠严重损伤.

摘要:目的 研究外源绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,简称GFP)基因在BALB/c绿色荧光裸鼠主要器官组织中的表达及其差异.方法 小动物成像系统和RT-PCR方法检测GFP的组织分布以及荧光表达水平情况.结果 经活体荧光影像系统观察及PCR方法检测发现GFP可以在裸鼠多个器官组织中表达,其中在胰腺、心脏、全脑、皮肤、睾丸中表达量较高.结论 外源绿色荧光蛋白可以在模型动物体内成功表达且稳定遗传,其中在胰腺组织中高表达.

摘要:目的 探讨丙酸睾丸酮(T)对大鼠前列腺上皮细胞染色体有丝分裂方向的影响及其差异基因表达.方法 SPF级SD雄性大鼠(110～130 g)20只,随机分为2组.深麻醉下对所有大鼠进行去势手术,恢复一周后,给药组大鼠皮下注射T,每只0.5 mg,每日1次,连续30d;对照组大鼠皮下注射橄榄油0.1 mL.取前列腺.通过免疫组化、HE染色观察结果.并做基因芯片检查差异基因表达谱.结果 给药组大鼠前列腺发生形态学增生.前列腺腺腔扩张,腺上皮高度明显增高,前列腺增生.且前列腺上皮细胞染色体有丝分裂的方向与基底膜平行, 而对照组前列腺上皮细胞有丝分裂的方向与基底膜垂直.AR免疫组化染色后发现给药组的前列腺上皮中,均可见到AR标记的阳性细胞,而对照组均为阴性.基因芯片和RT-PCR结果:促进细胞增殖的基因如雄激素受体相关蛋白(RAN)、TGM4和Wnt通道的WNT2等基因均上调,而抑制细胞增殖的基因如负调控Wnt通道的DKK3和促进细胞凋亡的Fas等基因下调.结论 T注射后改变了前列腺上皮细胞有丝分裂的方向, Wnt和AR信号转导通路参与了细胞增殖和有丝分裂方向改变.

摘要:目的 比较应用不同2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色方法对大鼠心肌缺血再灌注损伤后梗死面积的检测效果.方法 将20只SD大鼠(雄性,8周龄,体重250～300 g)按随机数字表法分为两组,每组10只.A组:传统TTC染色法组;B组:改进后的TTC染色法组,分别进行大鼠心肌染色,随后计算心肌梗死面积及测定血清cTnI浓度水平.结果 A组和B组均能较好地标记梗死心肌;A组和B组心肌梗死面积百分比无统计学差异(48.69%±5.37% vs. 47.41%±3.28%,P>0.05);A组和B组血清cTnI浓度水平无统计学差异(4.51±0.88 ng/mL vs. 4.70±0.71 ng/mL,P>0.05);但B组心肌切片染色色泽对比度及心肌非梗死区与梗死区区分度均高于A组.结论 改进后的心肌TTC染色法采用在体染色,不仅操作简便,节省了实验时间和经费,而且提高了染色效果,能更准确地反映心肌缺血再灌注损伤的程度.因此改进后的心肌TTC染色法是一种经济、简便、快捷、高效的染色方法.

摘要:目的 利用Matrigel与Lewis制备细胞混悬液注射于小鼠左肺内,建立小鼠Lewis肺癌原位模型,评价其肿瘤生长情况、转移情况,以期建立更稳定、更接近于人肺癌生长情况的小鼠肺癌原位模型.方法 将处于对数生长期的Lewis肺癌细胞混悬于Matrigel中,接种于C57BL/6近交系小鼠左肺内.分别于第4、7、10、13、16天各处死5只小鼠,观察其局部成瘤率、肿瘤生长情况、中位生存期及肿瘤转移情况,并对各阶段小鼠行肺部,肝脏,肾脏,脾脏病理切片检查.结果 术后第7天解剖的5只小鼠中,3只小鼠肺上可见小的瘤结节形成,其余2只肺上未见肉眼成瘤,行病理HE染色检查在显微镜下可见2只小鼠肺脏有小的瘤结节形成.术后第10天以后处死的所有小鼠肺上均有肉眼成瘤,术后第13天,所有小鼠肺原位成瘤并伴有血性胸腔积液、胸腔内转移.术后第25天,有1只小鼠出现上述转移的同时还出现了心包膜转移及肾脏远处转移.5只小鼠生存期分别为17 d、20 d、22 d、22 d、25 d,小鼠中位生存期为21.2 d(17～25 d).成瘤率100%.结论 利用Matrigel法成功建立小鼠Lewis肺癌原位模型,稳定性好,成瘤率高,并具有远处转移的特性,更接近于人肺癌的发生、发展过程.

摘要:目的 近交繁殖先天性脐疝大鼠获得能稳定遗传的大鼠脐疝模型,大鼠脐疝结构观察及治疗.方法 每代大鼠全同胞交配,记录产子数及脐疝情况,分析大鼠脐疝率;取F₂代6月龄脐疝雌雄大鼠各6只,其中雌雄各2只进行解剖观察,雌雄大鼠各4只进行外科手术缝合.结果 随近交系数增大,大鼠脐疝率升高,F₁₂、F₁₃代大鼠均为脐疝;F₁代至F₁₃代雌性大鼠总体脐疝率显著高于雄性大鼠(χ²=11.1,P=0.001);雌雄大鼠脐疝结构一致,手术后3～4周痊愈无复发.结论 经连续13代全同胞交配获得了遗传性状稳定的大鼠脐疝模型.

摘要:丙型肝炎病毒(HCV)感染是导致人类慢性病毒性肝炎、肝硬化和肝癌的最主要病因之一.由于缺乏合适的HCV感染实验动物模型,使得针对HCV感染更为有效的疗法及疫苗的研发滞后.黑猩猩是HCV感染研究的最佳实验动物,但由于其来源有限、价格昂贵及临床症状等诸多问题,其应用受限,因此发展新的实验动物模型用于HCV感染相关的基础和应用研究迫在眉睫.近年来,以啮齿类等动物为替代模型取得了不少进展,应用转基因等实验技术使替代动物感染了HCV,并成功应用于多个学科领域的研究.本文分析了 HCV自然感染的实验动物、自然感染和非自然感染的替代实验动物在致病机制研究、药物评价和疫苗研发应用中的优缺点及未来研究趋势.

摘要:肝脏疾病是危害人类健康的重要疾病之一,合适的小动物模型的缺乏在很大程度上制约了肝脏疾病的相关研究.人源化小鼠作为重要动物模型之一,在肝脏疾病的研究中有巨大的应用价值.本文对早期的uPA小鼠、FAH小鼠、TK-NOG小鼠和近年来的AFC8小鼠等几种应用较为广泛且有代表性的人源化小鼠模型及其在肝脏疾病研究中的应用进行了对比分析,阐述了它们各自的模型原理和优缺点,以期对人源化小鼠应用于人类肝脏疾病的研究具有较为直观的认识.

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