摘要:目的 建立接近于人的猪同种异体左肺原位移植动物模型。方法 环江香猪12只作为供体, 巴马香猪12只作为受体, 左侧第4肋间开胸, 完成左肺原位移植。术后1、2、4、6、12 h开胸测左、右肺动脉的压力, 同时取左、右肺静脉血进行血气分析, 取左、右肺组织, 观察含水量及病理学改变。结果 动物术后均存活, 随着术后时间延长, 供肺静脉血氧合指数(PaO₂/FiO₂)下降和肺动脉压(PAP)上升, 与受体正常肺比较, 差异有显著性(P<0.05)。随着时间的推移, 移植肺组织出现水肿、炎性细胞浸润、红细胞渗出, 肺泡壁增厚明显, 部分肺泡腔完全闭塞, 部分肺组织实变等变化, 与受体肺组织比较, 含水量增加显著(P<0.05)。结论 为研究肺移植缺血再灌注损伤及免疫排斥反应研究机制提供了理想的动物模型。

摘要:目的 通过显微外科技术建立小鼠原位肺移植模型, 为肺移植研究提供动物模型。方法 采用C57BL/6小鼠作为供、受体, 行同基因小鼠原位左肺移植, 使用Cuff套管法进行气管及血管吻合。术后7、14、21、28 d取移植肺及原肺, 行HE染色, 评价肺移植后效果。结果 学习曲线后, 共30例小鼠移植, 手术成功率89%, 小鼠成活率100%。供体手术时间:(35.2±9.81)min, 受体手术时间:(24.6±7.42) min, 冷缺血时间是:(46.6±8.92)min, 热缺血时间是:(17.2±3.08)min。同基因移植物大体及病理无明显改变, 病理显示与原肺无差别。结论 本技术能够方便快捷建立小鼠肺移植模型, 成功率高, 可重复性强, 符合原位肺移植临床生理, 是研究肺移植发病机制和治疗的良好动物模型。

摘要:目的 构建大鼠腹腔内工作型心脏移植模型, 总结影响模型成功率的因素。方法 Brown Norway到Lewis大鼠心脏移植90例, 其中预实验50例, 正式实验40例。采用肺动脉和左房吻合、主动脉和受体腹主动脉吻合的方法建立工作型心脏移植, 统计手术存活率和死亡原因, 分析确保成功率的关键因素。结果 术者通过练习, 手术成功率稳定77.5%, 供心冷缺血时间为(34±5)min, 整个手术时间为(71±11)min。HE染色显示移植后发生了免疫反应, 移植模型可靠。结论 决定手术成功率的影响因素众多, 其中主要因素有:合格的实验动物、供体心脏的保护、快速有效的血管缝合和术后动物护理。

摘要:目的 建立可用于搏动型心室辅助装置动物实验的大动物模型。方法 选取实验动物小尾寒羊3只, 麻醉后建立动静脉通路, 左侧开胸建立体外循环, 心脏诱颤, 心尖部打孔缝合心尖插管, 降主动脉缝合主动脉插管, 连接DPVAD, 启动驱动器, 观察血泵运转情况和实验动物情况。结果 血泵运转良好, 血泵随驱动器正压负压驱动血液单向流动。同时动物左心室负荷减轻, 动脉血压升高。结论 建立搏动型心室辅助装置的大动物模型对于进行国产化心室辅助装置的研发具有重要意义。

摘要:目的 用主动脉瓣关闭不全法致新西兰兔心衰模型。方法 运用导管术造成新西兰兔主动脉瓣膜关闭不全, 制作超容量负荷型心衰模型。观察动物的毛色、精神状态、活动情况、饲料消耗指数、体重增加指数、呼吸频率等指标对该模型进行评价;检测血清SOD活力和MDA含量, 判断模型组动物机体抗氧化能力;利用酶联免疫法检测血清中cAMP、cGMP的变化情况;利用基因芯片技术分析该模型基因表达差异。结果 模型动物SBP、DBP和LVSP著性下降, LV+dp/dt和LV±dp/dt明显下降, LVDP显著上升。模型组与正常组比较, 毛发枯槁, 活动减少, 进食减少, 反应迟钝, 精神萎靡, 抓起时反抗减轻。模型组呼吸频率加快;模型组血清SOD活性低于正常组, MDA含量高于正常组;模型组血清cAMP明显低于正常组, cGMP明显高于正常组;利用基因芯片共检测出665个差异基因, 其中与心功能较密切相关的基因主要与离子通道、肌收缩、信号转导等功能有关。结论 采用主动脉瓣关闭不全法建立兔心衰模型方法可靠。主动脉关闭不全, 使心脏前负荷增加, 造成左心室舒张末期容积增加, 导致左心室扩大肥厚及心力衰竭。心肌组织基因芯片检测结果显示, 该模型基因表达出现了一定的变化。

摘要:目的 探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)及相关炎症反应在糖尿病大鼠肾脏损害中的作用及血管紧张素II受体拮抗剂缬沙坦对其的影响。方法 采用腹腔注射链脲佐菌素方法建立糖尿病肾病大鼠模型。将大鼠随机分为对照组(Con组)、糖尿病组(DM组)、缬沙坦组(DM+V组)。缬沙坦组每日灌胃给予缬沙坦(10 mg/kg)共6周。应用免疫组化法及Western blot方法检测ERS相关蛋白P-IRE1α、P-JNK及中性粒细胞趋化因子MCP-1的表达及定位, 实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测IRE1α、JNK及MCP-1mRNA的表达变化, 同时观察各组大鼠尿蛋白、BUN、Scr等指标的变化。结果 与Con组相比, DM组大鼠肾脏病理炎细胞浸润加重, P-IRE1α、IRE1α、P-JNK、MCP-1蛋白表达上调, IRE1α mRNA、MCP-1mRNA表达水平上调;与DM组相比, DM+V组肾脏病理炎症细胞浸润减轻, P-IRE1α、IRE1α、P-JNK、MCP-1蛋白表达下调, IRE1α mRNA、MCP-1 mRNA表达水平下调。3组间JNK mRNA及蛋白表达无明显差异。结论 糖尿病大鼠肾脏中存在内质网应激和炎症反应的激活, 缬沙坦可能部分通过抑制内质网应激中的IRE1/JNK/MCP-1通路, 减少炎症反应, 从而发挥肾脏保护作用。

摘要:

摘要:目的 通过对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠血清及结肠组织中IL-1、IL-6、TNF-α及IFN-γ表达水平的检测, 探讨它们在UC发生发展过程中的作用。方法 采用灌服大黄水煎液+肌肉注射氢化可的松并结合TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)+ 乙醇灌肠建立脾肾阳虚型UC动物模型。将60只大鼠随机分为空白组、脾肾阳虚型UC模型7、14d及21d组, 采用酶联免疫法检测各组大鼠血清及结肠组织中IL-1、IL-6、TNF-α及IFN-γ的含量。结果 与空白组比较, 脾肾阳虚型UC模型组大鼠血清及结肠组织中IL-1、IL-6、TNF-α及IFN-γ含量明显升高(P<0.05);尤以模型21d组最为明显。结论 促炎性细胞因子IL-1、IL-6、TNF-α及IFN-γ在脾肾阳虚型UC发病过程中起重要作用。

摘要:目的 通过形态学观察评价乙酸诱导建立急性直肠黏膜损伤模型的效果。方法 将含有4%乙酸溶液的棉签经SD大鼠肛门置入直肠1 min, 置入深度为3 cm, 诱导大鼠形成急性直肠黏膜损伤, 并于损伤后0.5 h和1、4、6 d分别解剖大鼠, 对直肠进行大体形态观察和组织病理学分析。结果 损伤后大鼠6 d内全部存活, 模型成功率为100%。损伤后0.5 h～1 d, 大鼠直肠黏膜大体形态由充血、水肿和溃疡到合并出血, 镜下形态见黏膜层由上皮组织坏死伴出血到黏膜组织全层坏死, 腺体由部分留存到全无, 黏膜下层由水肿到合并充血、出血, 间质内由血管扩张充血到炎细胞浸润;损伤后4 ～6 d, 直肠黏膜大体形态仍可见部分水肿和血丝, 镜下形态见黏膜上皮有部分留存, 损伤部位有炎性肉芽组织增生, 黏膜充血、出血减轻。结论 4%乙酸作用于直肠1 min能成功诱导建立大鼠急性直肠黏膜损伤模型, 该模型操作方便、成功率高、重复性好, 损伤维持时间6 d以上, 适合作为快速筛选直肠外用药物疗效的动物模型。

摘要:目的 观察安神补脑液长期灌胃给药对大鼠所产生的毒性反应及严重程度, 提供毒副反应的靶器官及其损害的可逆程度, 确定无毒反应剂量, 以评价安神补脑液长期用药的安全性, 为拟定临床试验剂量及观察指标提供参考。方法 Wistar大鼠随机分为安神补脑液低、中、高剂量组(2.5、5、10 mL/kg)和溶剂对照组(灌服同容积蒸馏水 2 mL/100 g), 每组60只, 雌雄各半, 每天给药1 次, 每周给药6 d, 连续26周。观察大鼠的外观行为、体重、摄食量, 并分别于给药第13、26周末及四周恢复期结束进行血液学及血液生化学等各项指标检测及脏器系数、病理组织学检查。结果 长期连续灌胃给予安神补脑液, 对动物一般状态、行为活动和外观体征无明显不良影响;各剂量组的摄食量、体重、血液学及血液生化学指标与对照组比较无明显差别;给药3个月、6个月对动物各脏器组织位置、重量和脏器系数无不良影响, 但部分脏器重量有所增加, 各组动物脏器系数在正常范围内;病理结果显示对照组和安神补脑液高剂量组动物未见明显与给药相关的异常病理改变和毒性改变, 恢复期停药后未见延迟性毒性, 因此, 中、低剂量组动物各脏器组织无需进行组织病理形态学检查。结论 安神补脑液长期用药对大鼠未见明确的毒性反应, 停药后亦无延迟性毒性反应, 预期拟定的临床用药量为安全剂量。

摘要:目的 构建大鼠CB1 (rCB1)基因真核表达载体, 检测rCB1基因在细胞中的表达, 研究rCB1对人宫颈癌CaSki细胞凋亡的影响。方法 从大鼠脑组织中提取总RNA, RT-PCR扩增rCB1基因, 通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与pCDNA 3.1(+)质粒, 构建pcDNA3.1(+)-rCB1。脂质体法将其转染到HEK293和CaSki细胞, Western blot及细胞免疫荧光联合激光扫描共聚焦方法检测rCB1的表达及定位, 流式细胞仪检测细胞凋亡率, Western blot与实时荧光定量PCR检测rCB1、Bcl-2、Bax、Bad表达。结果 酶切重组质粒获得5300 bp的载体片段和1500 bp的目的片段, 测序结果和rCB1基因序列(NM_012784.4)一致。转染HEK293细胞后, rCB1在HEK293细胞细胞膜和细胞质表达。转染CaSki细胞后, rCB1使细胞凋亡率增加(P<0.05);rCB1基因上调Bax、Bad的表达, 同时抑制Bcl-2的表达, 与空白组比较, 其差异具有显著性(P<0.05)。结论 成功构建了pcDNA3.1(+)-rCB1真核表达载体, rCB₁表达于细胞膜和细胞质, rCB1可以明显促进宫颈癌CaSki细胞凋亡, 其机制是上调Bax、Bad和抑制Bcl-2表达。

摘要:目的 建立十二指肠-空肠转流手术(duodenal-jejunal bypass surgery, DJB)动物模型, 观察术后GK大鼠胰岛素抵抗情况的变化, 研究DJB手术治疗2型糖尿病的机理。方法 雄性Wistar大鼠为空白对照组;雄性GK大鼠分为模型对照组和DJB手术组。分别于手术后3、6和9周每组随机抽取6只动物进行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验;钳夹实验结束后1周, 检测肝脏GcK、G6P以及PEPCK mRNA表达情况以及骨骼肌细胞膜GLUT4含量变化。结果 术后3周和6周, DJB手术组动物的葡萄糖输注率(GIR)较模型对照组差异无显著性(P>0.05), 肝脏GcK、G6P以及PEPCK mRNA表达量较模型对照组差异无显著性(P>0.05);术后9周, DJB手术组动物的葡萄糖输注率(GIR)显著高于模型对照组(P<0.05), 肝脏GcK表达量DJB手术组显著高于模型对照组(P<0.05), 而G6P以及PEPCK mRNA表达量显著低于模型对照组(P<0.05);DJB手术后3、6和9周, DJB手术组骨骼肌细胞膜GLUT4的含量较模型对照组差异无显著性(P>0.05)。结论 DJB手术改善血糖的水平是通过改善体内肝脏组织的胰岛素抵抗, 通过调节糖代谢酶的表达, 进而提高肝脏葡萄糖摄取并抑制肝脏糖异生作用。在实验周期内, DJB手术对于骨骼肌组织的胰岛素抵抗未发现有明显改善, 提示DJB手术治疗2型糖尿病的效果与时间有一定关系。

摘要:目的 观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和C-Jun氨基端激酶(JNK)在糖代谢异常大鼠肝脏组织中表达水平的变化, 探讨糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)的病理机制。方法 将60只大鼠随机分为糖耐量受损(IGT)模型组(n=20)、2型糖尿病(T2DM)模型组(n=20)、IGT对照组(n=10)及T2DM对照组(n=10), 高脂饲料喂养复制IGT大鼠模型, 高脂饲料喂养加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)制备T2DM大鼠模型, 采用TUNEL法检测各组大鼠肝脏细胞凋亡;实时荧光PCR 技术检测肝脏组织中MIF mRNA的表达; Western blot方法检测肝脏组织中MIF、caspase-3、JNK蛋白表达及磷酸化JNK(p-JNK)的表达。结果 IGT大鼠及T2DM大鼠肝组织凋亡细胞明显增多;IGT组和T2DM组肝组织MIF基因表达较各自对照组明升高(P<0.01), MIF、caspase-3、JNK蛋白表达及JNK磷酸化水平也明显升高(P<0.05或P<0.01);与IGT组相比, T2DM组caspase-3、MIF、JNK蛋白表达水平明显降低(P<0.01), 而JNK磷酸化水平是明显升高(P<0.01)。结论 糖代谢异常合并非酒精性脂肪肝的发生可能与MIF、caspase-3、JNK表达水平的升高及JNK磷酸化水平的增强有关。

摘要:目的 通过研究丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2, SRPK2) 基因mRNA及其编码蛋白产物在小鼠睾丸组织中的表达特征, 探讨该基因在精子发生过程中的作用及意义。方法 分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹杂交(Western blotting)分析该基因mRNA及蛋白产物在小鼠多种组织中的表达;利用实时定量PCR(real-time quantitative PCR)分析SRPK2 mRNA在不同发育阶段小鼠睾丸组织中的差异表达;应用免疫组织化学染色和间接免疫荧光技术观察SRPK2蛋白在小鼠曲精小管中的细胞定位和生精细胞内的亚细胞定位。结果 半定量RT-PCR和Western blotting分析显示SRPK2 mRNA和蛋白在小鼠睾丸组织中均大量表达;实时定量PCR分析发现SRPK2 mRNA在5周及8周龄雄性小鼠睾丸组织中显著表达, 具有明显的阶段特异性表达特征。免疫组织化学染色结果表明SRPK2蛋白阳性着色主要位于曲精小管中的长形精子细胞核;间接免疫荧光分析显示SRPK2蛋白定位于长形精子细胞核表面。结论 SRPK2基因在小鼠睾丸组织中大量表达, 并且具有显著的阶段特异性表达特征和明确的细胞核定位, 极有可能在小鼠精子发生的变态成形期参与mRNA前体分子的剪接过程, 其作用机制值得进一步深入研究。

摘要:目的 探讨急性放射性肝损伤大鼠模型的建立及TGF-β1动态变化的意义。方法 选用雄性SD大鼠40只, 随机分为模型组(30只)和对照组(10只)。除对照组外, 模型组大鼠右半肝均接受单次6 MV X线25 Gy照射, 接受照射第3、5、10天, 应用HE染色、透射电镜下观察大鼠右肝病理学变化, 血清学检测TGF-β1、肝功能相关指标(ALT, AST, ALP), 数据用SPSS 17.0统计软件进行分析。结果 在照射第3、5、10天后, 电镜下可观察肝脏早期病理学改变;TGF-β1的表达随时间延长而逐渐增加, 模型组与对照组比较、不同时间段相比较, 差异均有统计学意义(P<0.05);对照组和模型组的HE染色结果之间无明显差别;肝功能相关指标(ALT, AST, ALP)不同时间点比较无明显统计学意义(P>0.05)。结论 电镜下观察肝脏病理学改变早于光镜下的变化, 可用于早期放射性肝损伤的评价; TGF-β1较肝功能更加敏感地反映出照射后肝脏的损伤状态, 可作为预测急性放射性肝损伤程度的血清细胞因子。

摘要:目的 对比Lewis肺癌细胞(LLC)及LLC原位接种后获得的第一代衍生细胞(R1-LLC)和R1-LLC原位接种后获得的第二代衍生细胞(R2-LLC)间的生物学特性, 比较该三种细胞在原位种植模型中的侵袭转移能力。方法 离体实验:采用cck8法、克隆球形成实验、Tanswell侵袭试验分别检测细胞的增殖、侵袭能力, 透射电镜观察细胞和组织的结构形态;活体实验:观察在7、14、21 d时LLC、R1-LLC、R2-LLC细胞分别原位种植模型中的成瘤与转移情况, 统计成瘤率与成瘤时间。结果 LLC、R1-LLC、R2-LLC细胞的增殖能力差异无显著性(P> 0.05), 侵袭能力R2-LLC> R1-LLC> LLC(P<0.05)。活体实验显示LLC、R1-LLC、R2-LLC成瘤率分别为66.67%、80%、93.33%(P<0.05)。结论 在离体及活体实验中, R2-LLC比R1-LLC及LLC细胞具有更强的侵袭及转移特性。

摘要:目的 研究人慢性粒细胞白血病细胞株KCL22在NOD-SCID小鼠体内致白血病的能力, 为慢性粒细胞白血病血液移植瘤模型鼠的建立奠定基础。方法 取对数生长期的KCL22细胞2×10⁷个, 经尾静脉注射入NOD-SCID小鼠, 对照组小鼠注射无菌PBS。观察小鼠一般情况, 瑞氏染色监测血象和骨髓象变化, PCR检测骨髓细胞BCR-ABL基因转录水平, HE染色观察肝、脾组织肿瘤细胞浸润情况。结果 实验组小鼠于注射细胞后约4周开始出现反应力下降、精神萎靡、股骨肌肿大、后肢骨节出血点等体征, 外周血白细胞从第5周逐渐增多, 计数较对照组显著升高(P<0.05), 血涂片可见幼稚粒细胞, 肝、脾、骨髓组织切片可见白血病细胞浸润, 骨髓细胞高表达BCR-ABL融合基因, 未经治疗存活约70天, 较对照组显著缩短(P<0.05)。结论 KCL22细胞可成功构建NOD-SCID小鼠慢性粒细胞白血病移植瘤模型。

摘要:目的 对比格犬、恒河猴、日本大耳白兔、树鼩四个不同种属实验动物的ECG-II进行分析比较, 归纳其ECG-II的特点, 旨在为上述动物在安评中的运用提供参考。方法 选择成年比格犬、恒河猴、日本大耳白和树鼩, 分别对其在清醒状态下的ECG-II进行描记和分析, 并对ECG-II各项指标进行测量分析。结果与结论 不同种属动物均为窦性心律, 在波型方面基本一致, 未出现特异性改变, 但不同动物在QRS波群和T波形态上具有一定差异;各指标测定结果显示, 日本大耳白兔P波、T波振幅和树鼩心率分别小于和快于其他种属动物。

摘要:慢性排异反应是导致肺移植后期移植失败的主要原因。闭塞性细支气管炎(obliterative bronchiolitis, OB) 是肺移植后慢性排异反应的最主要病理学特征改变。而动物模型在肺移植慢性排异反应研究过程中, 起到了不可或缺的作用。到目前为止, 已经有多种动物模型被建立并用来模拟人类肺移植后中、远期慢性排异反应。但这些动物移植模型都或多或少存在缺陷。近年来, 小鼠原位肺移植模型为研究OB提供了潜在可能。本文通过回顾各类肺相关移植模型的建立, 对其优缺点进行分析比较, 探讨今后肺移植慢性排异疾病模型建立的可能途径。

摘要:房颤是多原因引起的心律失常, 可导致运输到各器官组织的血量不足, 引发血栓、心衰或其他相关的复杂病情。房颤的动物模型分类根据其疾病的症状或诱发因素可分为电生理性模型、神经激素和血管生理失常模型和结构变异模型等。不断涌现的新技术如microRNA、CRISPR-Cas9体系等为构建房颤疾病动物模型提供了新的技术手段并引导其在疗法研究上的应用新方向。目前房颤治疗方法的研究已经从传统的侵入式电生理方法和抗心律失常药物的使用转向细胞和分子疗法, 并在房颤分子机理、靶向治疗和药物筛选等方面都有重要的新进展。本文综述了几类常见的房颤动物模型的构建和特性及其在细胞和分子疗法研究中的应用进展。

摘要:帕金森病(Parkinson's disease, PD)是以静止性震颤、肌强直、动作迟缓、姿势平衡障碍为主要临床特征的神经退行性疾病。动物模型实验是PD研究的重要组成方面, 针对PD动物模型运动行为的评价不仅有利于阐述PD的发病原因及发病机制, 而且有利于判定新型治疗方法的疗效。本文以偏侧6-OHDA大鼠模型为研究对象, 着重介绍非药物诱导行为学测试方法对PD大鼠运动功能障碍进行测试与评价的研究进展。

摘要:骨肉瘤(osteosarcoma, OS)发病率在儿童和青少年恶性肿瘤中居首位, 目前的临床治疗方式以外科手术联合药物化疗为主。虽然已经在很大程度上提高了骨肉瘤患者的生存率, 但当肿瘤发生转移时, 骨肉瘤患者的5年生存率不足20%。因此利用骨肉瘤动物模型对该疾病进行研究, 对进一步探索其病因及研发新的治疗药物或方式显得尤为重要。本文就近年骨肉瘤模型的应用做一简要综述。