摘要:目的 制作肝脏特异性高表达人胆固醇酯转移蛋白(CETP)转基因家兔并对其生物学特性分析进行分析。方法 利用显微注射方法制作CETP转基因家兔,利用Western blot、real-time PCR和CETP活性鉴定试剂盒鉴定模型家兔中人CETP转基因的表达和活性。结果 PCR检验结果显示成功获得CETP转基因家兔,转基因主要在肝脏特异性表达,其血浆CETP活性相对于非转基因家兔明显升高。结论 成功建立了高表达人CETP的转基因家兔,为研究CETP功能和其参与心血管疾病的机制提供了良好模型。

摘要:目的 探讨饮用不同浓度的葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)对于建立小鼠炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)模型及其致病相关免疫因子表达的影响。方法 雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和不同浓度的DSS饮用组(3%、5%、7%)。观察小鼠的大便性状,体重和生存时间。饮用后的第6天处死各组小鼠,观察结肠大体形态并评分;取病变处进行石蜡包埋病理切片,苏木素伊红染色并进行病理组织学评分;定量PCR检测各组脾细胞免疫因子表达情况。结果 饮用3%、5%、7%浓度DSS的小鼠在第6天均有不同程度溃疡形成,成模率随着DSS浓度提升而增加,但是小鼠死亡率也相应增加。定量PCR结果表明促炎因子(TNF-α、IFN-γ和IL-17A)的表达水平与DSS浓度成正相关,而抑炎因子(IL-4和IL-10)以及调节性T细胞相关的转录因子Foxp3的表达水平与DSS浓度成负相关关系。结论 给予小鼠5%浓度的DSS溶液饮用有助于高效经济地建立小鼠IBD模型,为进一步研究IBD的发病机理、生物学特性、干预因素等打下了重要基础。

摘要:目的 研究PPARα激活后对PPARγ诱导小鼠脂肪肝的影响。方法 以4~5周龄C57BL/6J小鼠为模型,实验分为4组:正常饮食组;0.125% Wy-14,643处理组;PPARγ腺病毒(Ad/PPARγ)注射组;先给予0.125% Wy-14,643饮食再注射Ad/PPARγ组。实验结束时,收集肝脏组织称重、照相,H&E、油红O染色观察PPARα激活后对PPARγ诱导肝脏脂肪变性的影响。结果 野生型小鼠给予PPARα激动剂Wy-14,643处理8 d,与对照组相比,处理组小鼠肝脏明显增大,呈现过氧化物酶体增殖反应;野生型小鼠给予Ad/PPARγ 5 d,小鼠肝脏显著增大,出现脂肪肝;给予PPARα激动剂Wy-14,643 3 d,再给予Ad/PPARγ 5 d,小鼠肝脏增大更加显著,H&E染色、油红O染色结果显示小鼠肝脏脂肪变性明显减轻。结论 激活PPARα能够缓解PPARγ诱导的小鼠肝脏脂肪变,为脂肪肝的预防和治疗提供了新的研究思路和靶点。

摘要:目的 建立一种无创伤、可进行纵向研究的酸吸入导致肺损伤的小鼠模型。方法 麻醉后的C57BL/6小鼠利用光纤光源引导进行口腔气管插管,配合侧卧体位及施压小鼠左肺,向其右侧肺部分别导入2.5 μL/g、0.1 mol/L、pH 1.5的盐酸或对照生理盐水。手术完成后对小鼠进行供氧4 h恢复。手术后对小鼠的存活率及肺功能生理指标进行监测,确定肺损伤后小鼠病程发展各项检测指标。结果 经上述方法建立的无创伤酸吸入小鼠,染色显示液流成功导入小鼠右侧肺部,存活率(80%)显著高于气管切口插管的小鼠。肺功能检测(湿干重比、回弹性、动脉血氧饱和度)和组织学切片表明,盐酸的导入引起小鼠肺部严重病理反应和功能障碍。对小鼠肺盥洗液分析揭示酸吸入导致大量嗜中性粒细胞进入肺泡,并可在肺泡中检测到高含量免疫炎性因子TNF-α、IL-6、CXCL1和CXCL2。结论 采用可视化无创伤的口腔气管插管技术,同时灌注盐酸所建立的酸吸入肺损伤小鼠模型,为进一步研究肺部免疫炎症机理提供了平台。

摘要:目的 考察不同品系的小鼠囊胚对C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率的影响,进而提高通过在C57BL/6胚胎干细胞中同源重组制作基因打靶小鼠的效率。方法 选取近交系B6(Cg)-Tyr^c-2J和BALB/c品系及封闭群ICR作为囊胚供体鼠,通过在TLX3、Ai3K和SL三个不同基因修饰ES细胞的种系嵌合实验中,平行比较三者的囊胚利用率、嵌合鼠获得效率以及种系遗传效率等三个方面,并进一步针对囊胚来源这一因素对效率的影响进行统计学分析。结果 三种ES细胞均未能通过B6(Cg)-Tyr^c-2J品系囊胚的注射获得种系遗传。而BALB/c品系与ICR品系相比,囊胚利用率明显低于ICR品系(P<0.05);嵌合鼠获得效率方面,BALB/c与ICR相当(P=0.115);而种系遗传效率方面,BALB/c品系显著高于其他品系(P<0.01)。结论 BALB/c品系在C57BL/6胚胎干细胞种系嵌合效率方面确实具有优势,然而,由于BALB/c囊胚较难获得,并且存在发育延迟和透明带脆性高等问题,而ICR品系在囊胚获得和利用方面的效率明显高于BABL/c,并且也可以支持C57BL/6胚胎干细胞的种系遗传,因此也是C57BL/6胚胎干细胞囊胚注射中较好的选择。

摘要:目的 探讨Rab13-PKA通路对大鼠血睾屏障功能的调节。方法 首先构建靶向大鼠Rab13的shRNA载体,通过大鼠睾丸内注射转染Rab13 shRNA,Western印迹检测Rab13体内沉默效果及沉默后BTB相关连接蛋白表达改变,放射自显影检测睾丸组织内PKA活性变化,睾丸组织冰冻切片免疫荧光染色及鬼笔环肽染色分别观察occludin及肌动蛋白丝在生精上皮的分布。结果 Rab13 shRNA睾丸内转染后Rab13表达量与对照shRNA转染相比下降约70%(P<0.01),而BTB相关连接蛋白表达无变化;Rab13沉默后PKA活性与对照组相比有明显升高(P<0.01);免疫荧光结果表明,Rab13沉默后occludin在VIII期生精上皮的分布显著高于对照组,而在其他期别生精上皮中则无显著变化;鬼笔环肽染色显示Rab13沉默后F-actin在BTB处的分布明显增强;此外,occludin及F-actin的分布变化可被PKA抑制剂H89所拮抗。结论 Rab13可通过影响PKA活性调节大鼠BTB紧密连接蛋白occludin及F-actin的分布,从而参与调节BTB功能。

摘要:目的 从腹泻树鼩的粪便样本中分离和鉴定病毒。方法 树鼩腹泻粪便样本分别接种Vero、LLC-MK2和KMB17细胞,经连续传代,观察记录细胞病变,并对培养上清进行透射电镜检查、病毒RNA-PAGE电泳分析、轮状病毒鉴别筛查、S1全长基因片段扩增和生物信息学分析。结果 树鼩腹泻粪便样品在KMB17、Vero 和LLC-MK2细胞上经连续3代次传代后,均能产生细胞病变。经电镜检查、病毒RNA-PAGE电泳分析和轮状病毒鉴别筛查,推测其为呼肠孤病毒。病毒基因组全长S1基因扩增、序列测定和分析结果表明,KMB17培养上清中获得的病毒与I型原型株T1L同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为85%和90%,因此该病毒定义为呼肠孤病毒I型。而LLC-MK2和Vero细胞上清中的病毒S1基因与III型原型株T3D核苷酸和氨基酸同源性分别为85%和92%,因此为呼肠孤病毒III型。结论 对今后树鼩和其他宿主呼肠孤病毒的分离鉴定有一定的指导意义。

摘要:目的 探讨建立操作简便可行、成功率高、具有良好模拟性的新生大鼠高胆红素血症动物型,为开展高胆红素血症致核黄疸及相关神经损伤机制研究提供实验基础模型。方法 随机选取7日龄SD大鼠,分别采用25、50、75 mg/kg三个梯度腹腔内注射盐酸苯肼,建立溶血致高胆红素血症动物模型,同时设立对照组,分别在实验处理48h后,测定血、脑组织胆红素、同时进行脑组织NSE分析对模型进行评价。结果 三组实验组分别与对照组相比,血、脑组织胆红素、脑组织NSE均大于对照组,差异具有显著性(P<0.05),而血红蛋白含量小于对照组,差异具有显著性(P<0.05);50 mg和75 mg剂量组血、脑组织胆红素、脑组织神经元特异性烯醇化酶(NSE)均大于25 mg剂量组,而血红蛋白含量小于25 mg剂量组,差异具有显著性(P<0.05);50 mg和75 mg剂量组间相比各项指标差异无显著性(P>0.05)。结论 腹腔注射盐酸苯肼能够制作出符合临床特征的高胆红素动物模型,50 mg/kg为最佳浓度,是建立新生儿高胆红素血症动物模型的理想方法。

摘要:目的 探讨SD大鼠自发性乳腺肿瘤中线粒体凋亡通路相关因子的表达情况及作用机制。方法 将130只(♀:♂=1:1)Sprague-Dawley(SD)大鼠于SPF屏障环境中饲养,收集大鼠自发性乳腺肿瘤组织,通过病理学检查对肿瘤进行定性并分类,分为3组:正常乳腺组织(I组),良性乳腺肿瘤组织(II组)和恶性乳腺肿瘤组织(III组)。分别使用RT-PCR法和免疫组织化学法检测各样品中AIF、Cyt C、APAF-1、caspase-3、XIAP的mRNA和蛋白的表达。结果 130只大鼠中有14只检出自发性乳腺肿瘤,肿瘤发生率为10.77%;其中7只发生乳腺纤维腺瘤,7只发生乳腺癌,良、恶性肿瘤发生率均为5.38%。免疫组化结果如下,与I组相比,II组中AIF、APAF-1、caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01),Cyt C、XIAP蛋白表达显著增强(P<0.01),Ⅲ组中AIF、Cyt C、APAF-1、caspase-3蛋白表达均显著减弱(P<0.01),仅XIAP蛋白表达显著增强(P<0.01);与II组相比,III组中AIF、 Cyt C、caspase-3蛋白表达显著减弱(P<0.01),APAF-1、XIAP蛋白表达显著增强(P<0.01)。RT-PCR结果中,除APAF-1的mRNA与蛋白表达显著相关(P<0.05),其余因子与免疫组化的结果极显著相关(P<0.01)。结论 乳腺肿瘤是SD大鼠常见的肿瘤,线粒体凋亡通路相关因子AIF、Cyt C、APAF-1、caspase-3、XIAP在乳腺肿瘤中的异常表达与肿瘤的发生发展密切相关。

摘要:目的 建立一种大鼠肠黏膜持续损伤模型。方法 采用两次腹腔注射氨甲喋呤(methotrexate、MTX)建立大鼠肠黏膜持续损伤模型。实验期间记录进食量、体重变化,HE染色进行病理学分析,分析血浆中的D-乳酸(D-lactate)、二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)及小肠组织中的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、丙二醛 (malonaldehyde、MDA)水平。结果 造模后,大鼠体重减轻、摄食量减少,第4天大鼠小肠组织损伤评分(Chiu评分)均明显升高(P<0.05),D-乳酸含量、DAO与MPO活力、MDA含量均显著升高 (P<0.05)。第5天大鼠开始恢复,在第6天时空白组基本恢复正常。第二次注射后,大鼠症状与第一次相似,损伤后再次恢复,第12天基本恢复正常。结论 20 mg/kg MTX诱发的大鼠肠黏膜损伤是一个急性损伤过程,整个病程大约为4~5d,适用于药物治疗评价;两次间歇式10 mg/kg注射MTX可以造成大鼠肠黏膜的持续损伤,由此成功建立肠黏膜持续损伤大鼠模型。

摘要:目的 探讨黄芪多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用,并建立一套可行的多糖类物质免疫调控指标与评价体系。方法 运用黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)分别处理正常及环磷酰胺(Cytoxan,CTX)致免疫抑制模型小鼠,通过测定其胸腺和脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数,并对小鼠胸腺和脾脏的组织发育情况进行观察;结合流式细胞术检测了各组小鼠外周血T淋巴细胞亚群(CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺)百分含量的变化。结果 黄芪多糖能显著促进正常小鼠及免疫抑制小鼠的免疫器官增重,增大其脾脏和胸腺器官指数;组织学观察结果也显示黄芪多糖可以促进正常小鼠脾脏和胸腺的组织发育,并能改善CTX所致的小鼠脾脏和胸腺组织发育损伤。黄芪多糖可提高正常小鼠及免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率及吞噬指数,并可明显提高正常及免疫抑制小鼠外周血血清中CD3⁺、CD4⁺和CD4⁺/CD8⁺比值,降低CD8⁺百分含量(P<0.05或P<0.01)。结论 黄芪多糖可提高小鼠机体的免疫机能,并建立了较为全面的多糖类物质免疫调控评价指标。

摘要:目的 用环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)建立大鼠免疫抑制和免疫亢进模型,并从免疫器官、免疫细胞、抗体和细胞因子等方面对该模型进行评价。方法 SD大鼠随机分为A、B、C三大组,所有大鼠腹腔注射100 μg鸡卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)进行免疫,B组大鼠于免疫OVA后6 h,以不同的方式腹腔注射不同剂量的Cy,C组大鼠于免疫OVA前3 d,以不同的方式腹腔注射不同剂量的Cy,A组为对照组。结果 免疫OVA后6 h,一次性注射不同剂量Cy (125、100 mg/kg),能使大鼠产生明显的免疫抑制,免疫OVA前3 d注射不同剂量Cy,超大剂量时(225 mg/kg)依然会引起动物的免疫抑制,小剂量(20 mg/kg)一次注射或者更小剂量(每天5 mg/kg, 连续3d)注射在不同时间点均能引起机体免疫亢进。结论 为免疫抑制和免疫亢进模型的建立提供方法和数据支持具有重要参考意义。

摘要:目的 制备甘草酸脂质体,评价其在小鼠肝脏中的靶向性。方法 以薄膜分散-超声法制备甘草酸脂质体,于小鼠尾静脉给药,RP-HPLC法测定肝脏和血液中不同时间的药物浓度。以甘草酸注射剂为对照,通过相对摄取率(r_e)、靶向效率(t_e)和峰浓度比(C_e)3个参数来评价脂质体的肝靶向效率。结果 甘草酸脂质体肝脏相对摄取率r_e=1.4;甘草酸脂质体肝靶向效率t_e=0.092;甘草酸注射液t_e=0.059,肝脏中C_e=1.59,血液中C_e=0.99。结论 与甘草酸注射剂相比,甘草酸脂质体有明显的肝靶向性。

摘要:目的 HGF及其受体c-met是很多系统中间充质-上皮互相作用的主要的介导者,毛囊周期性生长是典型的间充质-上皮互作模型,为证实HGF/c-met信号在小鼠毛囊周期生长过程中是否发挥作用。方法 本实验运用免疫组织化学的方法对HGF/c-met在ICR小鼠毛囊生长期、退化期和休止期进行组织定位。结果 HGF主要位于真毛乳头和皮脂腺,c-met主要位于毛基质、根鞘部和表皮。HGF及其受体在小鼠毛囊生长期表达量达到最高值,在退化期基本不表达,在休止期-生长期过渡时HGF及其受体表达量均上升。结论 HGF/c-met信号在ICR小鼠毛囊生长过程中起调控作用。

摘要:目的 改良并比较机械分离法、胰蛋白酶消化法和木瓜蛋白酶消化法在大鼠皮质神经元培养中的优缺点,为科技工作者根据各自条件选择合适的培养方法提供理论依据。方法 采用胎龄为16~18 d 的SD大鼠胚胎,分别用机械分离、胰酶消化以及木瓜蛋白酶消化三种方法对SD胎鼠皮层神经元进行培养,并对不同培养时间的神经元进行形态学观察和免疫荧光显微镜纯度鉴定。结果 三种方法均能成功培养出杂质少且纯度高的皮层神经元,其在不同生长阶段具有典型的形态学特征。经NSE免疫荧光染色,神经元纯度分别在96.28%,95.63% 及97.34%,三组间无统计学差异(P>0.05)。结论 三种方法均成功培养出杂质量较少且纯度高的皮层神经元,均可作为神经元体外培养的良好实验模型,且三种培养方法都有其不同的特点。

摘要:目的 探讨大鼠左全肺切除后是否导致肺血管重塑,以及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在肺血管重塑中的作用。方法 切除大鼠左全肺建立动物模型,12周后检测平均肺动脉压(mPAP)和动脉血氧分压(PaO₂),在电镜、光镜下观察大鼠肺小血管结构改变,计算其肌型动脉(MA)、部分肌型动脉(PMA)、非肌型动脉(NMA)、中膜厚度(MTV)、中膜面积(MAV)及其百分比作为肺血管重塑指标。通过免疫组组化学法检测HIF-1α和VEGF在肺动脉管壁的表达。结果 实验组mPAP、MA%、PMA%、MTV、MAV、MTV%和MAV%明显高于对照组(P<0.01), PaO₂、NMA%明显低于对照组(P<0.01)。实验组肺动脉壁HIF-1α及VEGF的IOD值(26.47±4.16,42.04±3.79)明显高于对照组(6.12±2.14,11.53±2.29)(P<0.01)。相关分析表明,HIF-1α及VEGF的表达强度与PaO₂呈负相关,与MTV%及MAV%呈正相关,HIF-1α与VEGF的表达强度呈正相关。结论 通过大鼠左全肺切除可以建立肺血管重塑动物模型。低氧血症是大鼠左全肺切除后肺血管重塑的重要因素,HIF-1α与VEGF在低氧导致的肺血管重塑过程中起着重要作用。

摘要:前列腺癌是男性最为常见的恶性肿瘤之一。近年来有关前列腺癌的相关研究取得了较大突破,但由于缺少有效的体内实验模型,导致研究成果向临床应用的转化受到严重阻碍。人源性前列腺癌移植(patient derived prostate tumor xenograft,PDPTX)模型是将患者新鲜的肿瘤组织移植于免疫缺陷小鼠而建立的体内模型,该模型能较好地复制原发肿瘤的异质性,保持肿瘤在分子学、基因学和病理学的复杂性。特别是采用肾包膜移植建立PDPTX模型的方法较好地解决了传统皮下移植建模成功率低、低级别肿瘤成瘤难、无法实现移植瘤转移等缺点,为前列腺癌研究提供了更为理想的体内模型。尤其是在靶向治疗、新型药物筛选、个体化治疗等方面具有不可取代的优势。

摘要:卵黄免疫球蛋白(IgY)由于其独特的分子结构和稳定性能,使得IgY的制备成为抗体领域的研究热点。核酸疫苗作为一种新型疫苗,在生产成本、免疫剂量和免疫保护力等方面比大多数传统疫苗更具有优势。核酸疫苗制备IgY结合了两者的优点,比常规免疫方法更具有优势,产生的IgY适用范围也更广。本文综述了一种经济、快速的IgY制备方法:核酸疫苗制备IgY。

摘要:系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种慢性多系统复发性自身免疫性疾病,严重危害人类健康。狼疮动物模型对于研究SLE的病因、发病机制和治疗具有重要意义。本文对各种狼疮动物模型进行评述和比较,以期探讨各种模型的优缺点,为研究者在寻找特定的致病机制、开发针对性的干预措施以及更具潜力的治疗药物过程中选择合适的模型提供参考。

摘要:作为一种重要的生命早期刺激方式, 出生后至断乳前的母婴分离刺激已被证实在成年后能够模拟肠易激综合征胃肠道症状及精神症状。利用母婴分离建立的肠易激动物模型, 因其同时模拟了肠易激综合征中枢精神症状及外周胃肠道症状,成为当前研究肠易激综合征生物学机制的一个常用模型。文章综合整理母婴分离对啮齿类动物神经发育及胃肠道发育的影响,对该模型运用于研究肠易激综合征机制的进展稍作总结,以表明母婴分离可以模拟大部分肠易激综合征的外周及中枢表现,证实了该模型模拟脑肠轴异常造成的肠易激综合征的可行性,为采用该模型进行肠易激综合征相关研究提供一定的理论支持。

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