摘要:目的 研究小鼠早期肺腺癌的病理学表现,重点观察肿瘤生长类型和肿瘤-支气管关系.方法 KM小鼠10只每周皮下注射诱癌剂亚硝基胍(MNNG,浓度2.0 mg/mL)0.2 mg,连续4周.喂养至第100天时处死,解剖肺叶并肉眼计数肿瘤,甲醛固定后,随机选择100个肿瘤石蜡包埋、3 μm切片、HE染色、光镜下观察和测量肿瘤的组织病理学类型、大小、形态、边缘、生长方式以及与支气管的关系.结果 肉眼共见187个肿瘤,随机选取的100个病理证实均为肺腺癌.肿瘤大小0.19~1.33 mm,平均0.48 mm.镜下见三种生长方式:匍匐性、膨胀性和混合性,数量分别为6个、28个和68个;平均大小分别为0.34、0.54 mm和0.47 mm.100个肿瘤中96个与支气管形成直接关系,其中13%和96%的肿瘤分别与通气支气管和换气支气管有关.肿瘤中心部、周边部和外周部支气管的显示率分别为19%、49%和96%;平均直径分别为67、91 μm和110 μm.肿瘤生长遇支气管阻挡或沿支气管间扩展可形成分叶(33%)或毛刺(35%).结论 小鼠早期肺腺癌生长方式及肿瘤-小支气管关系的病理学研究有助于我们加深对人早期肺腺癌相应CT表现的认识.

摘要:Objective To establish a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method for detecting diarrhea pathogens (Shigella and Salmonella) in rhesus monkeys and evaluate the application of the LAMP method for detecting bacterial diseases in non-human primate laboratory animals. Materials and Methods A total of 205 fecal samples of rhesus monkeys were detected in this LAMP assay. The specificity and sensitivity of LAMP for Shigella and Salmonella were analyzed, and real-time polymerase chain reaction (REAL-TIME PCR) assay was employed as control. Results The LAMP method established here needed only 45 min to complete the reaction at 63℃. Its detection limit was 10 pg/μL and with a high specificity. The positive rate of Shigella and Salmonella was 1.5% and 6.3%, respectively. Conclusions Here we have established a fast and simple Shigella and Salmonella LAMP detection method that has strong specificity and high sensitivity and is suitable for rapid detection of bacterial disease in macaques. The development of this rapid detection kit is underway, and it will be helpful to the diarrhea detection.

摘要:目的 利用裸鼠移植模型研究雄激素阻断对人前列腺癌骨转移发生的影响,并初步探索肿瘤转移过程中循环肿瘤细胞(CTCs)的生物学特性.方法 将40只裸鼠随机平分为两组,一组裸鼠手术切除睾丸以阻断雄激素的分泌,另一组为正常对照.心脏注射绿色荧光蛋白和荧光素酶双标的人前列腺癌细胞PC3-Luc-GFP,剂量为每只1×10⁶/50 μL,制备实验用骨转移模型.通过小动物活体成像系统检测人前列腺癌骨转移模型的建立;将发现转移的骨组织切片进行HE染色分析,并分离转移模型中CTCs,通过Western blot检测CTC中转移相关分子RANKL 和TOPK的表达.结果 成功建立了前列腺癌骨转移模型,切除睾丸组的骨转移发生率为2/13(15.38%),而正常对照组的骨转移发生率为5/14(35.71%);再次重复裸鼠移植模型的建立,合并两次动物实验结果得出:切除睾丸组的骨转移发生率为3/26(11.54%),而正常对照组的骨转移发生率为10/27(37.04%),两组间差异有显著性(P<0.05);CTCs中RANKL 和TOPK表达量均明显高于原始的前列腺癌细胞.结论 在裸鼠移植模型中阻断雄激素能显著降低前列腺癌骨转移的发生率.CTC的转移能力高于原始的前列腺癌细胞.

摘要:目的 建立良好、快捷、稳定的小鼠原发性肝癌模型.方法 将128只雄性KM小鼠随机均分为8组:正常组给予自由饮食;二乙基亚硝胺(DEN)水溶液组每天给予含DEN(16.5 mg/kg)的水溶液;高剂量DEN麻油组(7次/周、3次/周、1次/周),经口给予含DEN(16.5 mg/kg)的麻油溶液;而低剂量DEN麻油组、nano-DEN组、纳米载体组则分别每周经口给予含DEN(8.25 mg/kg)的麻油溶液和nano-DEN或同量的纳米载体.20周后,处死小鼠,取肝脏标本,固定后行HE染色.结果 (1)含DEN的各组小鼠均出现不同程度毛色枯燥、无光泽、行动迟缓、体重增长缓慢;(2)20周时,同DEN水溶液组,高剂量DEN麻油组小鼠均出现肿瘤,且其1次/周的小鼠死亡率较低;(3)Nano-DEN组小鼠无死亡,且其肝脏损伤的HE评分较低剂量DEN麻油组严重.结论 DEN溶于麻油的经口给药增加了小鼠服药的顺应性,长期低频率给药能大大降低造模过程中的死亡率.而DEN的纳米微乳制剂,能增强对肝脏的损伤程度.

摘要:目的 建立一种评价芍药苷对大鼠背根神经节神经元细胞内游离Ca²⁺浓度影响的方法.方法 显微解剖获取大鼠背根神经节(DRG),通过胰蛋白酶消化,过筛,用DF-12和抗有丝分裂培养液交替培养纯化,获得原代大鼠DRG神经元细胞,并采用细胞免疫荧光技术测定DRG神经元细胞纯度;采用激光共聚焦显微成像技术,观察细胞内Ca²⁺荧光强度的变化,并对Ca²⁺荧光强度变化率进行分析,探讨芍药苷对DRG细胞内游离钙离子浓度及辣椒素受体的影响.结果 采用上述方法分离得到的DRG细胞纯度可高达95%以上,辣椒平可通过阻断辣椒素激活的瞬时受体电位通道的作用而抑制细胞内Ca²⁺的增加.芍药苷表现出与辣椒平类似的作用,可以阻断细胞外Ca²⁺内流.结论 芍药苷可能是通过作用于TRPV1通道,而抑制DRG细胞内Ca²⁺大量增加,本方法可以用于评价药物对大鼠DRG细胞内Ca²⁺浓度的影响.

摘要:目的 探讨阴虚动风证帕金森病(PD)异动症(LID)大鼠纹状体内大麻素CB1受体的表达及复方地黄方的干预作用.方法 采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)偏侧损毁黑质制备帕金森病大鼠模型,进一步腹腔注射左旋多巴+苄丝肼(50 mg/kg 左旋多巴和12.5 mg/kg苄丝肼)制备LID大鼠模型,并随机分为LID组、复方地黄方组,另取正常对照组、假手术组大鼠为对照,每组6只.分别在4周、6周进行神经行为学检测后,处死大鼠并取纹状体,应用Western blot法测定各组大鼠纹状体内大麻素CB1受体的表达情况.结果 LID大鼠随造模时间延长,AIM评分呈增加趋势(P<0.05),旋转启动时间呈缩短趋势(P>0.05),旋转持续时间呈增加趋势(P<0.01),剂峰旋转圈数呈减少趋势(P>0.05),复方地黄方可改善上述变化.LID大鼠大麻素CB1受体表达增加,且随造模时间延长呈现减少趋势(P<0.01),而复方地黄方干预后大麻素CB1受体的表达呈现逐渐增加的趋势(P<0.01).结论 LID模型大鼠大麻素CB1受体的含量明显升高,其变化能够较好的反映阴虚动风证的严重程度,复方地黄方干预LID模型大鼠可能是通过激活纹状体内大麻素CB1受体,抑制兴奋性氨基酸(主要是谷氨酸)的释放和诱导细胞发生级联反应来减弱神经元的兴奋性,从而起到减轻L-dopa的兴奋毒性的作用.

摘要:目的 构建慢病毒介导的NogginRNAi干扰序列,并分析这些干扰序列对Noggin基因的沉默效果.方法 针对目的基因Noggin的mRNA设计四条干扰序列,并将这些序列连接到Lenti-KD慢病毒载体,将重组质粒瞬时转染HEK-293T包装细胞,获得重组慢病毒.将重组病毒感染MC3T3-E1细胞,利用puromycin进行筛选,获得稳定表达细胞系.通过实时荧光定量PCR和Western blot技术分析不同干扰序列的干扰效果.结果 实时荧光定量PCR结果显示,四种干扰序列对Noggin基因的表达都有一定的沉默效果,但只有shNoggin-1(P<0.01)对其表达影响显著.Western blot结果显示,四种干扰序列中只有shNoggin-1(P<0.01)对Noggin的表达蛋白具有显著的降低作用.结论 获得了一种Noggin基因的干扰序列,该序列能够干扰Noggin基因mRNA的稳定性,从而影响蛋白的表达.该干扰序列可以用于部分敲除Noggin基因,从而用于研究Noggin基因的功能.

摘要:目的 建立一种新型SD大鼠胫骨牵张成骨模型的方法.方法 40只雄性SD大鼠右侧胫骨截骨并短缩4 mm,以自行研究设计的环状牵张外固定器固定,于骨折修复期予以牵张外固定器恢复胫骨高度,术后通过大体观察、影像学观察以及组织形态学方法观察截骨部位的愈合与恢复情况.结果 术后外固定器稳定有效,对大鼠功能活动无明显影响.胫骨高度恢复,骨性愈合.结论 实验所建立的大鼠胫骨牵张成骨模型可靠实用,具有可重复性.

摘要:目的 探讨久泻灵颗粒对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65蛋白基因的表达的影响.方法 通过灌服大黄水煎液,肌肉注射氢化可的松并结合TNBS(2,4,6-三硝基苯磺酸)混合乙醇灌肠建立动物模型.将90只大鼠随机分为空白组、模型组、久泻灵颗粒治疗7、14、21 d组及阳性对照(SASP)组,用药治疗后采用免疫组化SP法和RT-qPCR法分别检测大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB p65蛋白和基因的表达.结果 结肠黏膜形态学评分结果显示,各治疗组评分均有降低,差异有显著性(P <0.01);免疫组化SP法结果显示:TLR4、NF-κB p65在模型组大鼠中表达均显著增强(P<0.01);药物干预后各治疗组大鼠TLR4、NF-κB p65表达均减弱(P<0.05);RT-qPCR法结果显示:与空白组比较,模型组大鼠TLR4、NF-κB p65表达增强(P<0.01);与模型组比较,治疗后各组大鼠TLR4、NF-κB p65表达减弱(P<0.05).结论 久泻灵颗粒可减轻结肠黏膜炎症反应,起到修复黏膜的作用,其原因与降低脾肾阳虚型UC模型大鼠结肠组织中 TLR4、NF-κB p65基因的转录和蛋白的表达有关.

摘要:目的 使用两种心脏特异性CYP2E1基因修饰小鼠来评价药物西布曲明(sibutramine)的心脏毒性作用,选择出在评价药物的心脏毒性中具有更高敏感性的动物模型.方法 8周龄雄性Tg(+)型小鼠、sTg(+)型小鼠、野生型C57BL/6小鼠(WT),各50只,分别随机分成5组,每组10只,溶媒对照组(灌胃给予纯净饮用水)及4个实验组(50、100、150、300 mg/kg西布曲明).给药过程中进行一般症状观察以及存活率的测定;给药15 d 后取血并解剖取心脏,测定各组实验小鼠血生化心脏损伤指标:乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK),肌酸激酶同工酶(CK-MB).并进行病理组织学检查,免疫组织化学方法观察心脏组织缝隙蛋白43(connexin 43,CX43)的表达情况.结果 (1)血生化指标显示,在给药剂量50 mg/kg和100 mg/kg时,Tg(+)型小鼠均显著高于WT型小鼠(P<0.05 或P<0.01);在给药剂量50、100和150 mg/kg时,Tg(+)型小鼠均显著高于sTg(+)型小鼠(P<0.05 或P<0.01);而在给药剂量300 mg/kg时,Tg(+)型小鼠均显著低于WT和sTg(+)型小鼠(P<0.05 或P<0.01),且sTg(+)型小鼠减小的程度最小.(2)病理组织学结果显示,Tg(+)和WT型小鼠各个给药组均表现出心脏损伤的迹象.(3)免疫组织化学染色显示,随着给药剂量的加大,Tg(+)、sTg(+)和WT型三种小鼠CX43在心肌细胞闰盘处的表达数量均逐渐下降,且染色颜色逐渐变浅;而CX43在心肌细胞闰盘处的表达数量下降程度和染色颜色变浅程度由高到低分别为,Tg(+)型小鼠,其次是WT型小鼠,sTg(+)型小鼠.结论 Tg(+)型小鼠在评价药物潜在心脏毒性试验中可能比WT型小鼠具有更高的敏感性,而sTg(+)型小鼠则是很好的心脏毒性保护模型.

摘要:目的 探讨外源性的β-NGF在骨缺损愈合过程中对骨改建可能作用机制.方法 利用外科手术方法切取SD大鼠颅骨顶部左右两侧的骨质,建立配对大鼠颅骨标准骨缺损局部持续灌注β-NGF给药模型.通过免疫组织化学技术检测骨缺损区组织中BMP-2的表达水平以及特殊染色技术(TRAP染色)检测骨缺损区组织中抗酒石酸碱性磷酸酶的表达水平,通过图像处理软件IPP6.0分别测定两者积分光密度值(IOD),以探讨BMP-2与破骨细胞活性在β-NGF调节新骨形成和改建过程中的可能作用机制.结果 实验组BMP-2免疫组化染色阳性表达水平在14 d时IOD值明显高于对照组,且差异有显著性(P<0.05); TRAP染色结果显示:实验组骨吸收的活性在第7,21,28天三个时间点上明显低于对照组,且差异有显著性(P<0.05).结论 外源性的β-NGF在骨缺损修复过程中具有重要的调节作用,其可能是通过促进BMP-2表达和抑制破骨细胞的活性以抑制骨吸收.

摘要:目的 探讨SD、Wistar两种品系大鼠在经典条件反射和操作式条件反射中行为学表现差异,为研究脑的高级功能建立稳定的条件反射动物模型提供实验动物选择依据.方法 选择8周龄的正常SD和Wistar大鼠,分别进行奖赏训练、单次操作训练、连续多次操作训练三种检测模式,研究SD、Wistar大鼠学习记忆能力.结果 奖赏训练中,SD大鼠的鼻触次数显著性增多(vs.Wistar,P<0.05);单次操作训练中,与SD大鼠比较,Wistar大鼠的总踏板次数(LPs)、比率(cLP/LP)显著升高(P<0.05),总鼻触次数(NPs)于第5天差异有显著性,踏板潜伏期明显降低(P<0.05),踏板速率则显著性的升高(P<0.05).连续多次操作训练中,Wistar大鼠鼻触次数显著性升高(P<0.05),踏板次数、奖赏次数均增多,反应准确率也高于SD大鼠,但组间差异无显著性(P>0.05).结论 经典条件反射阶段SD大鼠对饮水盒的探索能力强,表现出对奖赏物质较强的兴趣;而在奖赏操作条件反射阶段Wistar大鼠的表现优于SD大鼠.

摘要:目的 比较上海地区7品系常用近交系小鼠核心群的遗传特性. 方法 将筛选到的48对多态性丰富的微卫星引物组合优化,形成11组多重荧光PCR引物混合体系,对来自上海地区两大实验小鼠供应商的7品系近交系小鼠核心群的DNA样进行分型检测.利用遗传分析软件进行数据分析.结果 来自两大供应商的7品系近交系小鼠在48个微卫星位点上都为纯合子.同一种群内小鼠的STR位点结果均一致;不同种群小鼠无论品系是否相同,相互间均存在STR位点差异.但相同品系不同种群近交系小鼠间的遗传距离与不同品系小鼠种群间的遗传距离相比均较近.在UPGMA聚类树中,相同品系的不同种群均首先两两聚成一类.C57BL/6小鼠与其他6品系小鼠的亲缘关系均较远.结论 上海地区不同供应商的7品系近交系小鼠核心群间均存在STR位点差异.

摘要:目的 比较正常大鼠和去卵巢大鼠脑内主要神经信息分子的种类和含量,以观察生理和病理状态下,神经内分泌信号传导通路的异同,初步探讨卵巢(雌激素)对神经内分泌信号传导机制.方法 观察大鼠脑组织神经元细胞病理形态,运用高效液相色谱-荧光检测器定量检测不同脑区及血清中肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)及高香草酸(HVA)的含量变化.结果 脑组织HE染色显示OVX组大鼠脑内神经元退化比假手术组明显.与假手术组相比,OVX组大鼠的NE、E含量降低,差异具有统计学意义的区域分别为海马和血清;HVA在丘脑中含量比假手术组升高;DA含量在皮质区比假手术组下降.与假手术组比较,OVX组在海马和小脑区5-HT含量上升,而5-HIAA含量下降;在皮质、丘脑和血清中,OVX组5-HT含量较假手术组下降,而5-HIAA含量升高.结论 去卵巢大鼠的雌激素水平低下状态可能引起脑组织携带的主要信息分子(经典神经递质、氨基酸类递质)释放或合成发生异常,因此去卵巢模型大鼠可以作为一种神经内分泌信号异常的载体,为围绝经期综合征的信号传导的研究提供了一种新的思路和方法.

摘要:目的 研究复合刺激创伤后应激障碍(PTSD)模型大鼠重要脑区的病理变化.方法 成年SD雌性大鼠20只,随机分为正常组、模型组,每组10只.模型组按复合刺激方法建立PTSD大鼠模型,4 周后对两组大鼠行高架十字迷宫和Morris水迷宫检测;行为检测结束后对大鼠大脑皮层和海马CA1、CA2、CA3区和齿状回进行HE染色和Nissl染色,观察其病理变化特点.结果 正常组大脑皮层和海马各区细胞形态规则、分布均匀,核仁及边界清晰,胞质尼氏体丰富,无明显神经元变性坏死;模型组大脑皮层细胞形态较规则、分布均匀,无明显病理改变;海马CA1、CA3区细胞形态不规则,排列紊乱,细胞间隙增大,细胞数量减少,有较多空泡样细胞病变,CA3区更为明显;CA2区细胞排列较规则,分布较均匀;齿状回可见部分细胞排列疏松、细胞间隙增大、尼氏体数量减少.结论 PTSD模型大鼠海马CA1、CA3区和齿状回均有不同程度的病理改变,为探讨PTSD患者的病理机制提供了实验依据.

摘要:目的 了解断奶后Zmu-1:DHP和DHP两个品系豚鼠屈光状态和眼球径的发展规律.方法 首先进行3周龄两品系豚鼠屈光检测,然后选择Zmu-1:DHP品系豚鼠12只,DHP品系8只,按品系分成两组.在4~12周龄,每隔一周检测屈光度、眼轴长和角膜曲率等参数.结果 3周龄,327只Zmu-1:DHP品系豚鼠,屈光度为-5.19±3.92 D,近视率达85.1%;而117只DHP品系豚鼠屈光度为2.13±4.40 D,近视率仅为22.6%.4~12周龄,Zmu-1:DHP品系豚鼠近视不断加深,屈光参差>1.5 D;DHP品系豚鼠屈光发育稳定.t-检验,Zmu-1:DHP品系豚鼠眼轴长度、玻璃体腔深度显著高于DHP品系,视力低于DHP品系.多因素方差分析,Zmu-1:DHP品系豚鼠散光随时间变化显著(P<0.01),而DHP品系不显著(P=0.07).相关性分析,Zmu-1:DHP品系豚鼠屈光状态与眼轴长相关系数为-0.79(P<0.01)、与玻璃体腔深度相关系数为-0.75(P<0.01);而DHP品系相应相关系数为-0.19(P=0.09)和-0.34(P<0.01).结论 Zmu-1:DHP品系豚鼠近视高发,正视化过程难以完成,其近视与眼轴长度和玻璃体腔深度高度相关.

摘要:一种近红外荧光(NIRF)七甲川菁染料不需要化学修饰,可直接被肿瘤细胞吸收呈特异性聚集,从而可用于肿瘤活体成像.这种染料在肿瘤细胞与正常细胞之间的摄取差异可能是由于特异型有机阴离子转运肽的作用,并受到低氧条件控制.这些特性将会拓展NIRF类染料在肿瘤成像研究中的应用.

摘要:心力衰竭是各种心脏疾病的最后阶段,心力衰竭早期阶段选取适当的生物学标志物,对心衰识别、风险评估和患者管理都具有重要的临床意义.本文主要对近年文献报道的心肌应激标志物、心肌损伤相关的标志物、细胞外基质、循环中的微小RNA和炎症因子等在心衰的早期诊断中的重要作用做一综述,并评价了这些标志物在早期心衰诊断,预防和患者管理中的价值.

摘要:嘌呤受体分为P1和P2受体两大类,其中,P2受体又分为配体门控离子通道型受体(P2X受体)和G蛋白偶联型受体(P2Y受体).P2Y6受体是P2Y家族中的一员,P2Y6受体参与心血管疾病、内分泌疾病及神经病变等疾病的发生.随着氯吡格雷(P2Y12受体阻断剂)等嘌呤受体阻断剂被FDA批准应用于临床,且表现出良好的疗效,P2Y6受体的生物学效应的研究,亦成为人们开展针对P2Y受体的新型靶向性药物研究的热点之一.基于分子生物学技术的发展,P2Y6受体生物学效应的研究取得了显著进展.