摘要:目的 以SD大鼠为模型,观察孕前炔雌醇(ethinyl estradiol,EE)暴露对子代糖代谢变化和肝脏内与糖代谢相关基因表达的影响。方法 52只雌性大鼠随机分为4组:对照组(芝麻油)、50、200、800μg/kg EE组,每天1次,连续灌胃暴露15 d后受孕。在子代出生后第23天(postnatal day,P23)和P25分别进行口服葡萄糖耐量(OGTT)和胰岛素耐量(ITT)实验,并用RT-PCR检测肝脏中糖代谢相关基因表达水平。结果 子代雌鼠OGTT:200μg/kg EE组空腹血糖值显著低于对照组(P < 0.05);800μg/kg EE组第15min血糖值显著高于对照组、50、200μg/kg EE组(P< 0.01,P< 0.01,P< 0.01),50、800μg/kg EE组2 h血糖值显著低于对照组(P < 0.05,P < 0.01)。子代雄鼠OGTT:在第15 min,800μg/kg EE组血糖值显著高于对照组(P < 0.01);第30 min时,200μg/kg EE组血糖值显著低于对照组(P < 0.05)。子代雌鼠ITT:第15 min时,50、200μg/kg EE组血糖值显著高于对照组(P < 0.001,P < 0.01)。子代雄鼠ITT:第30 min时50、200μg/kg EE组血糖值显著高于对照组(P < 0.01,P < 0.01)。子代雌鼠RT-PCR:50,200μg/kg EE和800μg/kg EE组Glut2和Lpk mRNA表达水平显著低于对照组(P < 0.01,P < 0.05,P < 0.05);50、200μg/kg EE组Gys2 mRNA表达水平显著低于对照组(P < 0.01,P < 0.01)。子代雄鼠RT-PCR:200μg/kg EE组G6pase和Pepck mRNA表达水平显著高于对照组(P < 0.01,P < 0.01),50μg/kg EE组Glut2 mRNA表达水平相对于对照组显著降低(P < 0.01),800μg/kg EE组Gys2 mRNA表达水平显著高于对照组(P < 0.01)。结论 孕前炔雌醇暴露会导致子代雌鼠葡萄糖耐量受损、子代出现胰岛素抵抗及肝脏内糖代谢相关基因表达异常。而且这些效应具有性别差异,子代雌鼠对孕前EE暴露更敏感。

摘要:目的 探讨小凹蛋白-1(caveolin-1)基因敲除小鼠的鉴定方法与最优繁育方式,为深入研究caveolin-1在脑缺血损伤修复中的作用提供理想的动物模型。方法 将引进的caveolin-1基因敲除小鼠饲养于SPF级实验室,煮沸裂解法提取鼠尾组织基因组DNA,根据美国杰克逊实验室(Jackson Laboratory)提供的引物序列进行PCR反应检测其基因型,采用caveolin-1^+/-杂合子互交、杂合子与caveolin-1^-/-纯合子杂交(正交及反交)、纯合子互交4种不同的交配方式,观察亲代小鼠的受孕率、子代小鼠的外形特征及纯合率。结果 琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量大小约200 bp和661 bp,与预期的目的基因片段分子量大小一致,成功鉴定了caveolin-1基因敲除小鼠的不同基因型;不同交配方式的繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌性、雄性caveolin-1^-/-纯合鼠具有一定的繁殖能力,三种不同基因型小鼠的外形特征无明显差异。结论 煮沸裂解法提取基因组DNA、PCR法能够快速可靠鉴定caveolin-1基因敲除小鼠的基因型;caveolin-1杂合子小鼠互交与纯合子互交相结合的繁育方法可能是短期内获得足量纯合子子鼠与同源野生子鼠的较好方式。

摘要:目的 观察黄连解毒汤(HLJDD)对ApoE^-/-小鼠斑块、炎症因子及调节性T细胞(Tregs)的影响。方法 高脂饲料喂养雄性ApoE^-/-小鼠建立动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)模型,40只雄性ApoE^-/-小鼠随机分为:模型组,辛伐他汀组,HLJDD高、中、低剂量组(n=8)。HLJDD灌胃剂量依次为:每日3.5、7.0、14.0 g/(kg·bw),辛伐他汀灌胃剂量为每日5 g/(kg·bw),另设8只同龄雄性C57BL/6J小鼠为对照组,喂以普通饲料,连续给药16周后处死小鼠。检测血脂水平,观察主动脉斑块形成情况;ELISA法检测血清炎症因子水平;流式细胞术检测Tregs数量;RT-PCR法检测Foxp3 mRNA水平。结果 与对照组相比,模型组中主动脉斑块明显,TC、TG与LDL-C浓度显著升高,促炎因子超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平显著升高,而HDL-C、白介素-10(IL-10)、生长转化因子-β(TGF-β)、Foxp3 mRNA水平显著降低,Tregs数量减少,二者差异有显著性(P < 0.01);HLJDD能显著缩小主动脉斑块面积,降低血清TC、TG与LDL-C,并降低IL-6、hs-CRP与TNF-α水平,增加血清HDL-C、IL-10、TGF-β及Foxp3 mRNA水平,并增加Tregs数量,与模型组相比差异有显著性(P < 0.01)。结论 HLJDD可显著减轻ApoE^-/-小鼠主动脉斑块损伤,可能与增加Tregs数量,从而降低血清炎症因子水平有关。

摘要:目的 建立一种BALB/c裸小鼠肝癌原位移植模型。方法 采用异氟烷气化对实验动物进行全身麻醉,分别用"包埋法"和"夹心法"建立BALB/c裸小鼠肝癌原位移植瘤模型。手术后用小动物活体成像系统对肿瘤组织的生长情况进行检测,4周后对肝及肿瘤组织进行组织病理学检查。结果 采用夹心法建立的肝癌原位移植BALB/c裸小鼠模型,具有操作时间短,难度低,成瘤率高的特点,肿瘤组织生长良好,在腹腔内未出现肿瘤广泛种植现象,组织病理学检查无异常,动物死亡率低等特点。结论 与包埋法相比,夹心法更具优势,可快速制备大批量小鼠肝癌原位移植模型,为肝癌原位药效学及其他研究提供更便利的平台。

摘要:目的 探讨通过胃管灌胃改良口服补液盐(oral rehydration salts,ORS)降低氯化锂-匹罗卡品诱发惊厥持续状态(status epilepticus, SE)模型的死亡率的方法。方法 选用成年组(60 d)SD大鼠30只和幼年组(20 d)SD大鼠45只,随机分为成年SE+ORS组、成年SE组、幼年SE+ORS组、幼年SE组、幼年血糖组各15只。经腹腔注射氯化锂和匹罗卡品,诱发大鼠惊厥发作,惊厥60 min后,给予安定止惊。各ORS组于SE后1、12、24 h根据不同年龄予以不同剂量改良ORS灌胃。其余各组不给予处理。记录实验大鼠惊厥发作情况,惊厥前后体重变化及死亡情况;血糖测定组于SE后8 h取血检测血糖,探索降低该模型死亡率的方法。结果 (1)各组惊厥后体重均降低,约占体重的5%~8%。(2)氯化锂-匹罗卡品惊厥持续状态模型死亡率较高,幼年组40.00%,成年组57.14%;死亡发生时间集中在惊厥后24 h内,72 h后死亡数趋于平稳。(3)SE后实验大鼠血糖明显降低,给予ORS液灌胃后,血糖趋于正常水平。(4)以改良ORS灌胃后,幼年组和成年组72 h内死亡率明显降低。结论 SE后改良ORS液灌胃有效改善实验动物死亡率,是有效提高其生存率的方法。

摘要:目的 观察和分析雄性裸鼹鼠中可育个体和不可育个体生殖系统结构和功能的差异,初步探索雄性不可育个体不能繁育后代的原因。方法 雄性裸鼹鼠可育个体和不可育个体各5只,先采集一侧睾丸和附睾组织,称重后换算脏器系数;再采集另一侧睾丸组织,用中性甲醛溶液进行固定后制备组织切片;取另一侧附睾用作精子计数、精子活动度的测定;采集血清测定血清中黄体生成素(LH)和睾酮(T)浓度。结果 与可育个体组相比较,不可育个体组的睾丸重量下降(P < 0.05),附睾重量显著下降(P < 0.01),且睾丸系数和附睾系数均显著下降(P < 0.01);精子数量显著减少(P < 0.01),精子活动度也显著减弱(P < 0.01);血清黄体生成素和睾酮水平均显著降低(P < 0.01);睾丸组织切片观察显示,不可育个体各级生精细胞严重脱落,排列混乱无序,支持细胞和间质细胞均有减少。结论 雄性裸鼹鼠不可育个体生殖系统存在睾丸和附睾萎缩、生精功能下降和性激素分泌减少等现象。

摘要:目的 建立饮入方式,慢性给予皮质酮,观察皮质酮对学习记忆和突触相关蛋白的影响。方法 c57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组和皮质酮组,每组10只。皮质酮组饮用含皮质酮的0.45%羟丙基-β-环糊精溶液,5 mg/(kg·d)。正常组动物给予0.45%羟丙基-β-环糊精溶液。造模35 d后,进行社会识别实验和水迷宫实验。行为学实验结束后,动物断头取海马,应用western blot进行突触相关蛋白测定。结果 社会识别实验显示,正常组和皮质酮组对刺激鼠笼的嗅闻时间均比空鼠笼长(P < 0.05)。对照组对刺激鼠2的嗅闻时间比刺激鼠1长(P < 0.05)。皮质酮组对刺激鼠2的嗅闻时间与对刺激鼠1的嗅闻时间差异无显著性。水迷宫实验定位航行结果显示,皮质酮组学习能力下降,寻台潜伏期延长(P< 0.05)。空间探索结果显示,皮质酮组穿台次数、进入实台象限的次数和实台象限路程均明显减少(P < 0.05,P < 0.05,P < 0.05)。Western blot结果显示,皮质酮组突触后致密物质(postsynaptic density,PSD-95)、突触素(synapsin-1,Syn-1)和磷酸化细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)表达明显下降(P < 0.01,P < 0.01,P < 0.05)。结论 通过饮入方式,慢性给予皮质酮,动物出现社会记忆和空间学习记忆障碍,可能与海马突触相关蛋白表达下降,突触功能受损有关。

摘要:目的 建立稳定的小鼠异位肢体复合组织移植模型。方法 选用25对C57BL/6小鼠行同品系异位肢体复合组织移植手术。取供体小鼠后肢,于腹股沟韧带下缘起沿股动脉、股静脉向上游离,电凝切断除股静脉、股动脉外所有分枝血管至髂外动脉、髂外静脉,断髂外动脉、髂外静脉后,横断股骨、股部肌肉。将供体髂外动脉、髂外静脉分别与受体小鼠右侧颈总动脉、颈外静脉行端侧吻合。连续缝合供体皮缘于受体皮肤切缘固定肢体。于供肢胫骨远端关节处切断,结扎残端。结果 手术成功率76%,总手术时间(87.1±10.1)min,供体获取时间(23.8±4.9)min,血管吻合时间(55.3±9.6)min。结论 小鼠异位肢体复合组织移植成功率较高,稳定可靠,是一种新的研究移植免疫的理想的动物模型。

摘要:目的 通过观察他克莫司对大鼠血糖、胰岛素水平、肝脏组织蛋白磷酸酶2A和磷酸化AKT表达的影响,进一步探究他克莫司导致血糖升高的机制。方法 将60只雄性SD大鼠(89.83±4.44) g随机均分为2组,他克莫司组(n=40),每日空腹(禁食水8 h)灌胃给药,剂量为4 mg/(kg·d);对照组(n=20),每日空腹灌胃给予等量生理盐水,每月测量大鼠体重、空腹血糖。5个月后处死大鼠,心脏穿刺取血,取胰腺组织和肝脏组织,测大鼠血清胰岛素水平,行胰腺组织病理组织学观察,并对肝脏行组织处理和免疫组织化学技术检测肝细胞质中蛋白磷酸酶2A和磷酸化AKT的表达。结果 用药2个月后,他克莫司组大鼠的血糖水平明显高于对照组(P < 0.05),他克莫司组大鼠的胰岛素分泌指数、胰岛素敏感指数均明显低于对照组(P < 0.05);胰岛素抵抗指数明显增高(P < 0.05)。他克莫司组大鼠与对照组相比,其肝细胞质内PP2A表达明显增加,磷酸化的AKT表达明显减少。结论 他克莫司导致胰岛细胞坏死,胰岛细胞数量减少,胰岛素的分泌降低、胰岛素敏感性下降、胰岛素抵抗增加,从而导致大鼠血糖升高。他克莫司增加大鼠肝脏组织PP2A的表达,减少肝脏组织磷酸化的AKT的表达,可能通过PI3K/AKT信号转导途径参与胰岛细胞凋亡和胰岛素抵抗,引起血糖的升高。

摘要:目的 构建pEGFP-N1/IL-37b真核表达载体,并检测其在THP-1细胞中的表达情况。方法 从人PBMCs中提取总RNA,利用RT-qPCR技术扩增出IL-37b基因编码区序列,克隆至pEGFP-N1真核表达载体,将构建的重组质粒pEGFP-N1/IL-37b转染到THP-1细胞中,通过RT-qPCR和Western blot检测IL-37的表达。结果 双酶切及基因测序结果显示IL-37b基因正确插入真核表达载体pEGFP-N1中;RT-qPCR和Western blot结果显示转染THP-1细胞后,IL-37表达水平明显升高(P < 0.01)。结论 成功构建了新型抗炎因子IL-37真核表达载体pEGFP-N1/IL-37b,为进一步研究IL-37功能及与相关疾病的关系奠定基础。

摘要:目的 利用牛体内胚胎与其子宫内膜上皮细胞体外共培养的方式,探究共培养前、后子宫内膜上皮细胞中整合素αv,β3基因差异表达的变化,为今后建立快捷有效的牛子宫容受态预判方法提供参考。方法 将体内冲出的牛囊胚与原代培养并传代纯化至第5代的牛子宫内膜上皮细胞进行24 h体外共培养,利用RT-PCR技术对共培养前、后的子宫内膜上皮细胞进行αv,β3基因的表达检测。结果 RT-PCR检测结果显示,共培养前、后均有整合素αv,β3的表达;共培养I组(囊胚组),其共培养后诱导整合素αv,β3基因的表达与未共培养对照组二者之间差异无显著性(P > 0.05);共培养Ⅱ组(孵化囊胚组),其共培养后整合素αv,β3基因的表达显著高于对照组和共培养I组(P < 0.05)。结论 牛体内孵化囊胚经体外共培养诱导牛子宫内膜上皮细胞表达整合素αv,β3的效果,明显优于早期囊胚;整合素αv,β3基因具有作为牛子宫容受态体外检测标志的潜力。

摘要:目的 探讨玛咖提取物对小鼠毒性及免疫器官的影响。方法 给予BALB/c小鼠玛咖提取物15 d,观察玛咖对小鼠的毒性作用,称量胸腺和脾重量。结果24 h内小鼠口服累计剂量为320 g/(kg·bw),未见动物出现任何毒性反应。给予玛咖提取物16.0、32.0、64.0 g/(kg·bw)15 d,胸腺重量比对照组分别增加了36.84%、89.47%、107.89%,脾脏重量分别增加了44.83%、62.01%、89.66%,小鼠碳粒廓清指数分别增加了30.85%、42.55%、54.79%,血清溶血素值分别增加了11.64%、20.03%、31.51%,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05~0.01)。结论 玛咖提取物具有增加免疫器官重量和提高免疫功能的作用,且毒性较低。

摘要:目的 探讨早期预防纤溶紊乱对防止MN进展有重要意义。方法 按改良Border法制作MN大鼠模型,正式免疫第1、2、3、4周末检测全血uPA、tPA及PAI-1的表达水平;取大鼠肾组织进行光镜、电镜观察肾组织病理学改变;采用免疫组化方法检测肾足细胞nephrin、WTl蛋白表达含量,并进行相关性分析。结果 与正常组及干预组大鼠相比,模型组大鼠的全血uPA、tPA水平明显减少,而PAI-1水平明显增加,差异具有统计学意义(P < 0.05);电镜显示肾小球足细胞广泛足突融合至消失;GBM基质出现"钉样突起",肾间质纤维化程度较重。肾小球足细胞分布区WT-1和nephrin蛋白表达下调,其中nephrin蛋白表达量变化有统计学意义(P < 0.01)。相关性分析显示,大鼠全血tPA和uPA水平与肾组织nephrin蛋白的表达变化呈正相关,全血PAI-1水平与肾组织nephrin蛋白的表达变化呈现负相关。结论 在MN发展中,纤溶系统对足细胞损伤凋亡具有重要意义,早期评估预测MN足细胞损伤情况或可为防治早期MN步入终末期肾脏病找到又一治疗靶点,亦可为临床研究治疗MN的药物提供新的思路。

摘要:目的 获得巴马猪外周血淋巴细胞中NK细胞的表型及比例的数据,建立一种高效率猪CIK(cytokine-induced killer)细胞体外诱导培养的方法。方法 分离巴马小型猪外周血淋巴细胞,通过检测CD2⁺/CD8⁺/CD3^-细胞以表征猪NK细胞的表型;通过优化诱导培养条件,提高诱导淋巴细胞中CIK的比例,建立高效率CIK细胞体外诱导方法。结果 利用优化的诱导培养条件,在诱导培养第5天时CD3^-/CD2⁺/CD8⁺的NK细胞的比例可高达43.63%,较最初分离时NK细胞比例提升了5.59倍;细胞增殖活性实验表明诱导培养第5天时可见明显的3个荧光峰,表明诱导后细胞发生了3次分裂,理论上较最初分离增加了8倍;诱导细胞的qPCR表型分析表明该细胞群体在诱导培养第5天时相关的表面标志有明显的上升也与流式分析结果一致。结论 建立了高效的猪CIK细胞体外诱导培养的方法。

摘要:目的 建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测。方法 根据GenBank公布的SeV序列(DQ219803.1),在其保守区域设计了六套LAMP引物,利用LAMP Real-Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立对SeV核酸进行特异性扩增的RT-LAMP检测方法,并可通过加入目测荧光检测试剂肉眼判断结果。对所建立的方法进行了敏感性、特异性评估并对92份样品进行了检测。结果 该方法在63℃恒温下作用60 min,SeV RNA获得了高效率的特异性扩增,与其余常见小鼠病毒无交叉反应;最低检出量为2.1TCID₅₀SeV,比RT-PCR方法高10²倍;肉眼判断结果与RealTime Turbidimeter LA-320仪监测结果一致;通过对92份样品的RT-LAMP,RT-PCR和间接ELISA方法的检测比对,三者符合率为100%。结论 建立的SV RT-LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,具有良好的应用前景。

摘要:目的 利用微卫星标记对无特定病原体金定鸭群进行遗传多样性分析。方法 采用微卫星标记,对SPF金定鸭种群中71个个体进行遗传多样性分析。结果 SPF金定鸭种群中17个位点上共检测到119个等位基因,每个微卫星上等位基因数介于3~13;该SPF金定鸭群体中有13个位点(PIC > 0.5)呈现出高度多态,平均杂合度为(0.5816±0.0142),其他位点均呈现出中度多态。仅有5个位点处于Hardy-Weinberg平衡状态,其余12个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡,达到极显著水平(P < 0.01)。结论 该SPF金定鸭群体内均存在丰富的遗传多样性,满足建立封闭群的遗传特征,可以利用该群体继续开展无特定病原体金定鸭封闭群的建立。

摘要:目的 探讨肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,H.hepaticus)感染对小鼠骨髓源树突状细胞(DC)表面分子形态和机体免疫应答的干扰。方法 以H.hepaticus(ATCC 51450)灌饲SPF级BALB/c雄性小鼠,于末次接种后5个月体外分离培养骨髓DC,经粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4),刺激DC增殖、分化,流式细胞仪分析DC细胞表面分子CD11c、CD40、CD80、MHCⅡ的表达率。此基础上,用新城疫病毒(NDV)ZJ1株人工接种实验组和对照组小鼠,每周测定NDV血清抗体效价,比较抗体产生的差异。结果 实验组MHC Ⅱ和CD40分子的表达率高于对照组。NDV抗体水平第1周实验组略低于对照组;第2~5周内实验组小鼠的抗体水平均高于对照组,差异有显著性;第6周两组小鼠血清抗体均呈下降趋势,差异无显著性。结论 H.hepaticus感染对小鼠骨髓DC成熟有促进作用,能提高MHC Ⅱ和CD40表达水平,可促进BALB/c小鼠产生抗NDV的抗体水平。

摘要:目的 探索测算感染指数的最佳方法,以便更加科学的反映实验动物的感染状况。方法 感染指数,也称感染度,它是对实验动物质量监测的定性指标。通过加工汇总实验动物的病原体感染率,综合反映某一特定实验动物群体的病原体感染状态或趋势的一种指标。结果 总体上,小鼠病原体感染指数略有下降,而大鼠的病原体感染指数则逐年上升。分别比较各类病原体感染指数发现,小鼠中寄生虫感染指数较高,而大鼠中细菌感染指数最高。结论 感染指数分析揭示了实验动物质量的基本状况,需要加强对小鼠寄生虫的监测,而大鼠的细菌检测需要投入更多关注。小鼠病原体感染情况得到控制,大鼠各类病原体的控制情况均逐年趋于严重。

摘要:裸鼹鼠是一种奇特的动物,具有寿命长、抗肿瘤、耐缺氧、新陈代谢率低、痛觉缺失、触觉灵敏、视觉功能低下、骨骼再生能力强等诸多特点。本文在概述裸鼹鼠上述生物学特点的基础上,结合当前肿瘤、衰老、低氧适应以及疼痛等领域研究趋势,对裸鼹鼠在生物医学研究中的应用前景进行分析与展望。

摘要:抑郁症在全球范围内高发,目前尚无有效的治疗手段,使其成为全球性卫生问题之一。抑郁症动物模型作为疾病机理研究以及药物筛选的主要手段,一直以来备受关注,现有的抑郁模型创新性地融合了比较行为学以及最新的分子生物学等相关技术。本文将结合模型的表面效度、结构效度及预测效度对现有的抑郁症动物模型及发病机制研究的最新进展进行综述,主要包括应激模型、损伤模型、化学诱导模型及转基因模型,这些模型均能不同程度的模拟人抑郁症的特征,在抗抑郁药物开发及发病机理研究中发挥重要作用。

摘要:2型糖尿病(DM)并发的动脉粥样硬化(AS)由于具有斑块不稳定、供血区缺血严重及治疗后再狭窄率高等特点成为导致2型DM患者死亡及截肢最常见病因。对2型DM血管并发症制定并实施针对性强的治疗方案对降低此类疾病对人类健康的危害有重要意义。而2型DM背景下严重的血管病变动物模型的建立,则为研究并进一步实施2型DM血管并发症治疗方案提供了实验基础。本文首先对2型DM并发的严重的血管病变发生机制进行探讨,进一步对现阶段国内外建立此类血管病变动物模型的实验方法进行综述。