摘要:目的 观察Pin1在皮肤中的表达情况，构建Pin1在皮肤中可诱导表达的转基因小鼠模型。方法 将小鼠Pin1基因克隆到改造过的可与Myc标签蛋白融合的pTRE2载体中，并将线性化的DNA通过显微注射的方式构建TRE-Pin1小鼠。结果 成功获得TRE-Pin1转基因首建鼠，该小鼠与上皮特异的K14-rtTA转基因小鼠配繁，获得Pin1在皮肤上皮特异性可诱导表达的双转基因鼠；通过将多西霉素（又名强力霉素，Doxycycline）加入饮水的方式诱导Pin1基因的表达，并通过Western blot，免疫组织化学等方式证明了Pin1蛋白在皮肤上皮中能特异性地过表达。我们还发现内源的Pin1在皮肤中主要表达于上皮细胞。结论 成功构建了Pin1在皮肤中可诱导表达的转基因小鼠模型，为后续研究Pin1在皮肤中的功能奠定基础。

摘要:目的 应用CRISPR/Cas9技术靶向敲除编码小鼠T、B细胞的Rag2基因及编码NK细胞的IL2rg基因，构建T、B细胞及NK细胞联合免疫缺陷小鼠。方法 根据Genbank报道的Rag2及IL2rg基因序列，分别针对其外显子设计25 bp左右的sgRNA并进行合成， sgRNA退火后克隆入pX330载体。Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA及Cas9重组质粒体外转录为mRNA后显微注射入BALB/c小鼠受精卵细胞，受精卵细胞移植到受体动物获得子代小鼠，首建鼠（F0）与野生型小鼠交配获得F1代小鼠，突变的F1代小鼠互交后筛选F2代纯合子小鼠。通过基因测序、流式细胞技术及接种人源性肿瘤细胞系方法检测子代小鼠基因型和表型。结果 成功构建了Rag2-sgRNA、IL2rg-sgRNA重组质粒并对其进行了体外转录，mRNA显微注射并移植后获得57只F0小鼠。连续交配后，获得F2代纯合子小鼠。序列分析表明子代小鼠中IL2rg有两个基因型，分别是10 bp和11 bp的缺失突变；而Rag2只有一个基因型，为8 bp的缺失突变。与野生型BALB/c小鼠相比，小鼠外周血中CD3、B220及NKp46阳性细胞数量明显降低。接种人乳腺癌细胞系SKBR-2HL后，肿瘤生长良好，且随着时间延长肿瘤组织逐渐增大。结论 利用CRISPR/Cas9技术可有效实现BABL/c小鼠体内Rag2、IL2rg基因突变，并导致小鼠T、B及NK细胞功能异常。

摘要:目的 利用反义寡合甘酸技术抑制肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）的表达，评估MSTN基因的沉默效果，并检测RNA干扰后对下游基因的影响。方法 通过构建黄河裸裂尻鱼（Schizopygopsis pylzovi）MSTN基因RNA干扰（RNAi）重组腺病毒载体1P3（DSP MSTN 273+250+1737）和1P2（DSP MSTN 195+1670），并将其注射黄河裸裂尻鱼肌肉组织，进行活体RNA干扰；利用real-time PCR和Western blotting评估MSTN基因的沉默效果，并检测MSTN基因RNA干扰后肌肉肌酸激酶（muscle-type creatine kinase,M-CK）基因转录水平的调控作用。结果 real-time PCR分析结果表明，与HK组（病毒通用阴性对照组）和N组（空白对照组）相比，重组腺病毒载体1P3对黄河裸裂尻鱼肌肉MSTN基因的转录具有明显的干扰作用（P<0.05），抑制率达53.5%；而重组腺病毒载体1P2对MSTN基因的转录无明显干扰作用（P>0.05）。Western-blotting分析结果与real-time PCR结果相一致。同时，经1P3干扰后随着MSTN基因转录水平的下降，其肌肉肌酸激酶M-CK基因表达水平显著上升。结论 通过RNAi技术能够有效的抑制MSTN基因的表达，并能够上调M-CK基因的表达量。因此，证明了在黄河裸裂尻鱼中MSTN能够抑制M-CK的转录。揭示高原土著鱼类MSTN基因的对肌肉的生长发育起到调控作用。

摘要:目的 了解斑马鱼核纤层蛋白（lamins）的重要遗传信息。方法 在UCSC、Vega及Ensemble数据库上收集了不同物种核纤层蛋白家族相关蛋白质序列，利用ClustalX工具进行分析，并用MEGA 4.0软件绘制进化树；通过NCBI网站上BLAST工具将斑马鱼核纤层蛋白的蛋白质序列与不同物种的相对应的蛋白质序列进行对比，最后将人类、小鼠及斑马鱼的lamins基因信息，进行共线性分析。结果 对核纤层蛋白相关基因进行生物信息学分析后显示斑马鱼的核纤层蛋白与人类的相似程度高，推断lmna、lmnb1和lmnb2基因在进化过程中高度保守。结论 编码斑马鱼lamins的基因lmna、lmnb1和lmnb2等可能是人类LMNA、LMNB1和LMNB2等基因的直向同源物。

摘要:目的 探讨Helq缺失是否影响干细胞的多能性。方法 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术获得Helq敲除的胚胎干细胞。结果 免疫荧光染色结果显示敲除Helq后，Oct4及Nanog的表达与对照组相比无明显差异，通过四倍体补偿实验证明胚胎干细胞的多能性不受影响。同时我们利用Helq敲除的胚胎干细胞继续进行体外分化，最终可以得到Day2的上胚层样细胞。通过免疫染色及real-time PCR分析，结果表明Helq敲除的胚胎干细胞分化为上胚层细胞液无明显异常。结论 Helq缺失不影响多能性干细胞的多能性。

摘要:目的 建立一种可靠的通过组织块贴壁法分离培养原代小鼠气管平滑肌细胞及免疫组化鉴定的方法。方法 体视显微镜下立体分离小鼠气管平滑肌组织，组织块贴壁法培养原代细胞，对分离培养细胞通过免疫组化方法进行鉴定，并用MTT法对其增殖特性进行检测。结果 从BALB/c雄性小鼠分离气管平滑肌组织，剪碎为1 mm³，用含1%青-链霉素的PBS及培养液漂洗，使组织块贴于培养皿底，并加入5 mL培养液，放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱培养，3～5 d后有明显梭状细胞从组织块爬出，5～6 d后，细胞可见明显“峰-谷”结构。经免疫荧光鉴定，在传代、纯化后，可得纯度为99%以上的气管平滑肌细胞。用MTT法测量其生长曲线。结论 本方法操作简单、经济，获得的气管平滑肌细胞具有较好增殖能力，细胞数量和纯度能够满足后续细胞生物学实验研究的需要。

摘要:目的 用基因敲入CaV1.1-R528H小鼠建立甲亢性低钾型周期性麻痹模型并对其进行评价。方法 8周龄基因敲入CaV1.1-R528H雄性小鼠及8周龄野生型C57BL/6J雄性小鼠各36只，采用三因素两水平2×2×2析因设计方法按体重随机原则（三因素分别为突变、甲状腺素及胰岛素因素，两水平为有或无）分为8组。其中有甲状腺素处理组的小鼠制备高甲状腺素毒症，按350 μg/kg体重连续腹腔注射左旋甲状腺素钠12 d，末次给药后有胰岛素处理组按0.8 U/kg体重给予腹腔注射短效胰岛素，分别检测并记录各组小鼠注射前（0 min）及注射后（30、60 min）的血钾。结果 （1）制备高甲状腺素毒症的小鼠出现烦躁不安、易激怒及毛色枯燥现象，相比对照组，饮食及饮水量明显增多，而体重增加缓慢。甲状腺功能检测显示T3、T4明显高于相应对照组，TSH明显低于相应对照组，且差异均有显著性（P<0.05）。（2）单独给予甲状腺素或胰岛素处理，突变组与野生组血钾同时间点比较并没有统计学差异，而在高甲状腺素毒症下给予胰岛素处理后，突变组与野生组同时间点（30、60 min）比较突变组血钾显著低于野生组（P<0.05）。（3）主效应及交互作用：单独突变因素或甲状腺素因素对血钾并没有作用，仅有胰岛素对降低血钾有作用（P<0.05）；甲状腺素因素和突变因素之间以及胰岛素因素和突变因素之间均有交互作用（P<0.05）；甲状腺素因素和胰岛素因素之间没有交互作用。结论 （1）高甲状腺素毒症制备成功。（2）利用基因敲入CaV1.1-R528H小鼠成功的建立了甲亢性低钾型周期性麻痹模型。

摘要:目的 明晰α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除（GGTA1^-/-）的五指山小型猪SLA经典I类基因分子结构特征及其与人HLA的相似性，对研究异种器官移植细胞性排斥反应具有重要意义。方法 采集6头祖代GGTA1^-/-五指山小型猪耳组织，利用RT-PCR对SLA I类基因（SLA-1、SLA-3、SLA-2）扩增、克隆及测序，对序列进行BLAST分析，并采用生物信息学方法对SLA I类基因分子结构特征及其与人HLA的同源性进行分析。结果 测序分析表明，共获得6条等位基因序列，其中4条为已公布的等位基因（SLA-1*0703、SLA-2*1102、SLA-3*0401、SLA-3*0403），另2条为新等位基因（SLA-1*0401wz01、SLA-2*11wz01）。五指山小型猪与人HLA同源性为70.5%～72.1%。SLA-1*0401wz01、SLA-1*0703、SLA-2*11wz01、SLA-2*1102和SLA-3*0401的CD8+分子识别的关键结合域与人HLA氨基酸序列比对，均仅在位点225、228处发生了突变（T→S、T→M），其他位点高度保守。SLA-2*11wz01和SLA-2*1102与人HLA I类基因NK细胞抑制性受体（killer inhibitory receptor，KIR）结合区氨基酸同源性较高，在NKTA-1亚型结合域内仅有1个氨基酸差异，而在NKTA-2和NKTA-3亚型结合域内有2个氨基酸差异。结论 从免疫细胞介导的异种排斥反应角度出发，GGTA1^-/-五指山小型猪SLA I类基因氨基酸序列与人HLA高度相似，可作为未来猪-人异种器官移植的良好供体之一。

摘要:目的 观察高脂膳食对青春期雄性大鼠下丘脑、垂体、睾丸结构及性激素水平的影响，并探讨6周自由转轮运动的干预效果。方法 3周龄初断乳雄性SD大鼠40只，随机分为普通膳食对照组（C组）、普通膳食运动组（CE组）、高脂膳食组（D组）、高脂膳食运动组（DE组）。C、D组安静饲养8周，CE、ED组在适应性喂养2周后进行6周自由转轮运动，每天上、下午各1 h，每周5 d。8周后，大鼠腹主动脉取血，测血清T、E₂、FSH、LH；制备睾丸组织匀浆液测T、E₂；制备下丘脑、垂体、睾丸组织切片，光镜下观察其结构变化。结果（1）与C组比较，D组血清T、E₂检出率降低，且睾丸组织中T水平显著降低（P<0.05），而血清E₂、FSH、LH显著升高（P<0.05）；下丘脑出现空泡脂滴，垂体中嗜酸性和嗜碱性细胞均减少，睾丸生精小管面积、精子细胞比例和睾丸间质细胞数量降低。（2）与D组相比，DE组大鼠血清T检出值及睾丸T值均增高，而血清E₂、FSH、LH显著降低（P<0.05）；下丘脑组织结构出现空泡脂滴，垂体中嗜酸性细胞数量显著增高，嗜碱性细胞数量无变化，睾丸组织中生精小管面积较高但差异无显著性。结论 6周自由转轮运动可有效改善高脂饲养大鼠导致的性激素分泌异常，雌雄激素比例失衡，但对下丘脑-垂体-睾丸轴的组织结构病理变化改善效果不明显。

摘要:目的 建立无菌太湖猪多项生理数据背景资料。方法 对4头25 d无菌猪和4头同窝普通级群体，雌雄比3∶1，测定并比较血液常规、生化、免疫球蛋白和主要脏器发育指标。运用异速生长建模，对主要脏器重量相对体重的异速生长进行了分析。结果（1）无菌猪与普通级猪的12项血常规和8项血生化指标差异有显著性（P< 0.05）；（2）无菌猪与普通级猪的平均体重、血清中IgM表达量差异达到显著性水平（P< 0.05），且无菌猪缺少肠系膜淋巴结；（3）无菌猪的心脏、脾和胃与体重呈负异速生长（异速生长指数b<1），肠道与体重的异速生长指数为1.78，为正异速生长；而普通级猪的心脏、胃和肠道与体重呈负异速生长（b<1），肾与体重的异速生长指数最大，为1.20，呈正异速生长。结论 微生物学等级差异影响了猪体重、血液及脏器、免疫系统的发育。

摘要:目的 探讨使用激光多普勒血流监测技术制作稳定的大鼠大脑中动脉栓塞脑梗死模型（middle cerebral artery occlusion,MCAO）的可行性。方法 16只SD雄性大鼠随机分成2组：实验组和对照组各8只。实验组将模型制作过程中脑血流下降至基础值的30%判定为模型制作成功；对照组不监测脑血流，将尼龙栓线插入深度为1.8 cm判定为模型制作成功。模型前和模型后24 h分别行神经损伤严重程度评分（modified neurological severity scores,mNSS）；模型后24 h处死大鼠取脑，行2,3,5-三苯氯化四氮唑（TTC）染色并计算脑梗死体积。结果 实验组8只大鼠模型后24 h均出现典型偏瘫症状，mNSS评分稳定在10分～13分，梗死体积稳定性和均一性好，为（37.5±3.9）%。对照组8只大鼠mNSS评分稳定性较差，其中5只大鼠的mNSS评分为10分～13分，5只大鼠的脑梗死灶和实验组相似，但有3只大鼠的脑梗死体积明显小于实验组（P<0.05）。实验组的模型成功率为100%，对照组的模型成功率为62.5%（P<0.05）。结论 激光多普勒血流监测技术可以显著提高大鼠MCAO模型的成功率、稳定性和均一性。

摘要:目的 对颈总动脉穿刺法及传统线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型的时效性、成功率、死亡率比较。方法 将32只雄性大鼠随机分为颈总动脉穿刺法组与传统线栓法组，将线栓从颈总动脉插入，栓塞大脑中动脉。采用Bederson神经功能评分标准，于术后24 h进行神经功能评分，并统计24 h成功率及死亡率。结果 颈总动脉穿刺法和传统手术方法制备大鼠MCAO模型的插线栓时间、成功率、死亡率分别为（82.3±17.4）s和（164.6±22.0）s，差异有显著性（P<0.01）；87.5%和68.75%，差异无显著性（P>0.05）；6.25%和18.75%，差异无显著性（P>0.05）。结论 颈总动脉穿刺法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型简单省时，创伤小，可操作性强。

摘要:目的 探讨高度选择性M4受体阻滞剂MT3对豚鼠形觉剥夺性近视的抑制作用及其潜在作用机理。方法 3周龄豚鼠随机分为三组：对照组、形觉剥夺组、形觉剥夺+MT3组。实验前后使用带状光检影测量屈光度，A超测量眼生物学参数，RT-PCR检测视网膜和脉络膜中TGF-β2的mRNA相对表达量。结果 与对照组右眼相比，形觉剥夺+MT3组豚鼠右眼形成了（-1.44±0.50）D相对近视（右眼-左眼），玻璃体腔和眼轴长度分别延长（0.10±0.02）mm和（0.14±0.07）mm（P=0.001，P<0.001，P<0.001），但近视量、玻璃体腔和眼轴长度增加量均显著小于单纯形觉剥夺组（P<0.001，P<0.001，P<0.001）。单纯形觉剥夺可引起视网膜和脉络膜TGF-β2的mRNA相对表达量下调（P<0.001，P=0.014）；而玻璃体腔注射MT3可导致形觉剥夺眼视网膜和脉络膜TGF-β2的mRNA相对表达量上调（P<0.001，P<0.001）。结论 MT3能抑制豚鼠形觉剥夺性近视的形成，其可能通过上调视网膜和脉络膜中TGF-β2的mRNA水平而发挥作用。

摘要:目的 研究TGF-β1基因治疗对产后压力性尿失禁大鼠模型的作用，探索该疾病理想的新型非手术治疗方法。方法 对240只SD雌鼠水囊阴道扩张法建模，从185只成功模型中随机选取148只并分为5组，分别进行TGF-β1基因治疗、氨哮素药物治疗、电刺激治疗、空质粒载体注射和未治疗，另外选取未建大鼠模型20只作为空白对照，于治疗后1、21、42 d和63 d进行喷嚏实验、尿动力学检测、盆底耻尾肌的肌力/肌重比值、ELISA法检测TGF-1、免疫组化检测因子TGF-β1。结果 在治疗后的21 d，不论是最大膀胱容量、漏尿点压力还是收缩力/肌重比等，TGF-β1基因治疗组治疗效果更佳，并且与电刺激组之间比较差异无显著性（P>0.05）。结论 TGF-β1基因治疗可能成为新型非手术治疗方法，能对产后压力性尿失禁模型大鼠产生良好效果。

摘要:目的 观察CFA致炎性痛模型大鼠的情绪反应，探讨前扣带皮层（ACC）磷酸激酶Czeta（PKCzeta）与炎性痛大鼠情绪反应的关系。方法 24只清洁级雄性SD大鼠随机分为空白对照组和模型对照组。足底皮下注射弗氏完全佐剂建立慢性炎性痛模型。动态观察各组大鼠造模前（base）、造模后3、7、14、21和28 d的体重和痛阈变化；观察造模后14、21、28 d所有大鼠在高架O迷宫中的总运动距离、开放臂运动距离、开放臂进入次数和开放臂停留时间百分比。观察造模后14、29 d所有大鼠在旷场中的总运动距离、中央象限运动距离、中央象限进入次数和中央象限停留时间。采用免疫印迹法检测造模后14 d和29 d健侧和患侧ACC区域PKCzeta蛋白表达。结果 各个时间点两组大鼠体重差异无显著性（P>0.05）。造模前，两组大鼠痛阈差异无显著性（P>0.05）；造模后1 d，模型对照组大鼠痛阈显著降低（P<0.05），且在整个实验过程中均显著低于空白对照组（P<0.05）。与空白对照组比较，模型对照组大鼠于模后28 d开放臂运动距离和开放臂停留时间百分比显著减少（P<0.05），于模后29 d中央象限运动距离和中央象限进入次数明显减少（P<0.05）。造模后29 d，模型对照组大鼠患侧ACC区域PKCzeta蛋白表达明显多于空白对照组（P<0.05）。且开放臂运动距离、开放臂停留时间百分比、中央象限运动距离、中央象限进入次数与患侧PKCzeta蛋白表达变化呈负相关。结论 CFA诱导的慢性炎性痛大鼠可出现异常情绪行为；慢性炎性痛情绪样行为可能与ACC区域PKCzeta的高表达相关。

摘要:目的 探究糖尿病大鼠主要脏器SOD活性及蛋白表达水平的变化，并观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）短期治疗（4周）后对机体抗氧化状态的影响。方法 STZ诱导的糖尿病大鼠（D组，n=8）每天给予NAC 1.5 g/kg灌胃治疗（D+N组，n=8），正常对照组（C组，n=8）同时给予同体积生理盐水。4周后，获取心、肺、肝、肾组织，试剂盒检测血浆总SOD、总抗氧化物浓度、脂质过氧化特异性标志物15-F₂t-isoprostane及各组织总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性，Western blotting分析SOD亚型Cu/Zn-SOD及Mn-SOD蛋白表达水平。结果 与C组相比，D组大鼠血浆15-F2t-isoprostane与总抗氧化物浓度及心肌组织中总SOD活性显著升高，而血浆、肺、肝、肾组织总SOD活性显著降低；心、肺组织中Cu/Zn-SOD蛋白表达水平明显升高，而肝、肾组织中明显降低；肺、肾组织中Mn-SOD蛋白表达水平明显降低，而肝组织明显升高，但心肌组织变化不明显。NAC干预能不同程度逆转上述改变，但进一步降低肾组织Mn-SOD表达。结论 糖尿病大鼠各组织中总SOD活性、Cu/Zn-SOD及Mn-SOD蛋白表达水平具有组织差异性，抗氧化剂NAC能不同程度恢复糖尿病大鼠各组织抗氧化水平，从而起到阻止或延缓糖尿病相关的靶器官功能损害的作用。

摘要:目的 研究地鳖多糖提取物体内外抗氧化作用。方法 体外试验采用分光光度法、邻苯三酚自氧化法和Fe²⁺-邻二氮菲法分别检测地鳖多糖对二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）、超氧阴离子自由基（O₂^-·）和羟自由基（·OH）的清除，检测体外红细胞氧化溶血和肝线粒体肿胀程度。体内试验小鼠连续灌胃不同剂量（0、40、80、160 mg/kg）地鳖多糖提取物20 d，硫代巴比妥酸（TBA）比色法测定小鼠组织中丙二醛（MDA）含量，分光光度法检测抗氧化酶（SOD、CAT、GSH-Px）活力。结果 与对照组比较，地鳖多糖组对自由基清除率随多糖浓度升高而显著提高；体外红细胞氧化溶血和线粒体肿胀显著降低。多糖组小鼠肝肾中MDA含量降低，SOD、CAT、GSH-Px抗氧化酶活力提高并明显高于对照组。结论 地鳖多糖提取物能够清除自由基，降低自由基引起细胞氧化损伤，抑制组织中过氧化物生成，提高抗氧化酶活力，具有显著的体内外抗氧化作用。

摘要:目的 采用3种诱导剂分别建立斑马鱼血栓模型，观察冠心宁片的抗血栓作用。方法 分别采用1.5 μmol/L苯肼、80 μmol/L花生四烯酸和5 mg/L普纳替尼建立活体斑马鱼血栓模型，并用冠心宁片、氯吡格雷或阿司匹林等药物干预，观察尾静脉血栓形成情况，并用邻联茴香胺染色法对心脏红细胞染色强度进行定量分析，计算预防血栓药效。结果 苯肼、花生四烯酸和普纳替尼诱导后斑马鱼尾静脉血栓明显增加和心脏红细胞染色强度显著降低（P<0.001），同时冠心宁片均能显著对抗这三种模型的血栓形成，其心脏红细胞染色强度和预防血栓药效均明显增加（P<0.001），具有一定的剂量效应关系，IC50分别为44.32、138.5和459.5 mg/L。结论 苯肼、花生四烯酸和普纳替尼均能建立不同形成机理的斑马鱼血栓模型，而冠心宁片具有明显的抗血栓作用，且其抗血栓机制存在多靶点效应。

摘要:干细胞与医学转化是近阶段比较热门的学科。由于干细胞的多种分化潜能和高度的自我更新能力，已经成为修复生命有机体功能细胞的种子细胞，而且在再生医学和组织工程中愈发引起人们的广泛重视。干细胞在临床转换应用的实验研究结果给许多种疾病带来了希望，它克服了临床常规治疗的局限性。目前，干细胞的临床研究处于一个快速的发展阶段，世界各国均高度重视。我国政府对干细胞研究也高度重视，加大了科研的投入，加强了规范化管理，制定了相关政策。如果在干细胞治疗的领域采用转化医学的模式，将科研与临床密切的联系结合，重视在大型实验动物如猪、犬、猴的人类疾病的动物模型的干细胞治疗应用研究，将会促进干细胞临床转化的速度。