摘要:目的 在我们的前期研究工作中，通过Tol2转座子介导的插入突变，筛选到了一批组织特异性表达绿色荧光蛋白GFP的斑马鱼品系。其中一个品系Tol2：20141221t的GFP在神经系统中表达，但还没有鉴定到Tol2转座子插入到基因组什么位置，造成了哪个基因的突变。本文的主要研究目标就是对这一由Tol2转座子插入诱导的斑马鱼突变品系进行鉴定。方法 使用交错式热不对称PCR（thermal asymmetric interlaced PCR，TAIL-PCR）鉴定Tol2转座子插入的基因组位置；利用原位杂交检测被突变的基因的时空表达是否与该品系GFP表达具有一致性；筛选鉴定纯合体突变体，并进一步分析该基因突变造成的发育缺陷。结果 在该品系中，Tol2转座子插入到了亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶1a（spermidine/spermine N1-acetyltransferase 1a，sat1.a）的第八个内含子区域，致使sat1.a基因转录提前终止。我们筛选到了sat1.a纯合突变体，但是没有检测到明显的发育缺陷。结论 筛选鉴定的Tol2转座子介导的斑马鱼sat1.a突变体没有明显的发育缺陷，但可以作为研究神经系统发育的有力工具。

摘要:目的 建立应用蕨麻小型猪建立心肌梗死（心梗）的造模方法和具有临床意义的模型指标，探讨心梗边缘区的基因表达与代谢失偿的相关性。方法 选取13只雄性蕨麻小型猪，随机分组，其中假手术对照组和心梗手术组各5只，不经任何手术处理的正常对照组3只。麻醉后在左前冠状动脉行靠近心尖的三分一降支主干支进行永久性结扎形成心肌缺血、梗死。术后4周进行心功能超声检测、采血并进行血清生化分析；安乐死后取梗死边缘区进行病理和基因芯片分析。结果 超声图可见明显的心梗区域，数据显示心梗手术组的收缩末期左心室腔射血分数及短轴缩短率较假手术组分别降低32%和40%；血清中有谷草转氨酶、血清胆红素、乳酸脱氢酶等升高；病理切片显示梗死边缘区域的心肌纤维断裂、溶解，结缔组织增生，中性粒细胞和淋巴细胞增多；基因表达谱分析显示在梗死边缘区有2个调控心梗后重构和组织病理通路，3个炎症和免疫调节通路，8个脂肪、蛋白、糖能量代谢途径的基因表达有显著性改变。结论 成功建立了蕨麻小型猪的心梗模型，其冠状动脉分支少，便于手术且成模稳定性，模型表征可与临床指标相吻合；模型梗死边缘区的基因表达谱特征与临床上代谢失偿表现有相同变化趋势，为心梗机理的研究提供了实验动物模型及心梗边缘区的具有参考价值的特征性改变。

摘要:目的 研究七甲川菁近红外荧光（NIRF）染料在胃癌原位移植模型活体成像中的应用效果。方法 将标记荧光酶素的人胃癌细胞系HepG2原位移植裸鼠建立肿瘤模型，同时诱发制备胃溃疡模型；对上述模型分别采用生物发光成像和NIRF成像，观察胃癌组织对近红外荧光染料的吸收；探索缺氧和阴离子转运肽（OATP）对胃癌组织吸收NIRF染料的影响，明确NIRF染料靶向识别肿瘤细胞的特异性。结果 NIRF信号与生物发光信号在胃癌原位移植模型活体成像中具有较好的相关性。胃癌组织部位可获得较强的NIRF荧光信号，而胃溃疡部位未检测到荧光信号。缺氧能够增强胃癌细胞对NIRF染料的吸收，而阴离子转运肽特异性抑制剂磺溴酞钠（BSP）能够显著降低肿瘤细胞对NIRF染料的吸收。结论 七甲川菁近红外荧光染料能够靶向识别胃癌原位移植模型。

摘要:目的 比较分析我国广西、云南两个树鼩群体的遗传差异和分化程度，推动树鼩优良品系的培育和优化实验动物模型。方法 提取广西和云南各32只树鼩的全血基因组DNA，分别采用9对荧光标记微卫星引物进行PCR扩增，通过毛细管电泳技术检测扩增片段，并利用POPGENE等软件比较两个树鼩群体的遗传相关指标。结果 广西和云南两个树鼩群体平均期望杂合度（He）为0.703，平均多态信息含量（PIC）为0.725，Fis均值>0。CCBL1B、CCDC61、EDA1和OPA3四个位点表现为极显著偏离哈迪-温伯格平衡。两群体的遗传距离及无偏遗传距离分别为1.277和1.268，遗传相似系数约为0.28。遗传结构变异的分布情况显示61.57%的微卫星遗传变异来自于群体内部，38.43%存在于群体之间。STRUCTURE分析发现广西和云南树鼩为中缅树鼩群体的两个不同的亚种。结论 广西和云南树鼩两个群体的遗传多样性都较丰富，两个群体间具有较大的遗传差异和分化程度，遗传变异主要来源于群体内部。

摘要:目的 利用程序化冷冻的方法，探究冷冻前、后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎中Hba-α蛋白的分布和差异表达的变化，为今后开发和利用新型哺乳动物源抗冻蛋白提供理论依据。方法 从妊娠d5小鼠体内获取孵化囊胚；从小鼠延迟着床模型获取休眠胚胎，利用Confocal显微镜和Western Blot技术对程序化冷冻前、后的各组胚胎进行Hba-α蛋白的分布和表达检测。结果 孵化囊胚和休眠胚胎在程序化冷冻前、后均有Hba-α蛋白的表达；孵化囊胚经程序化冷冻后Hba-α蛋白的表达与冷冻前相比差异无显著性（P>0.05）；冷冻前休眠胚胎与程序化冷冻前后的孵化囊胚相比，Hba-α蛋白的表达量显著下调（P<0.05）；冷冻后休眠胚胎Hba-α蛋白的表达量显著低于其他各组（P<0.05）。结论 程序化冷冻处理对小鼠休眠胚胎Hba-α蛋白的表达影响明显大于孵化囊胚；Hba-α基因具有作为新型哺乳动物源抗冻蛋白的潜力。

摘要:目的 探讨巨噬细胞NF-κB活化因子1（nuclear factor kappa B activator 1，Act1）在炎症性肠病中的作用。方法 以巨噬细胞Act1表达被靶向抑制的小鼠（anti-Act1）为研究对象，利用葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate，DSS）诱导溃疡性结肠炎模型，通过检测小鼠体重变化、便血情况、粪便黏稠度等进行疾病活动指数评分，对结直肠组织进行HE染色评价炎症严重程度，免疫组化方法分析白细胞和巨噬细胞等的浸润情况并用RT-qPCR法检测相关细胞因子的表达变化。结果 在DSS诱导7 d后与C57小鼠相比，anti-Act1小鼠结直肠炎症指标评分较低，巨噬细胞等浸润数量较少，TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达较低。结论 靶向抑制巨噬细胞Act1表达能够减轻DSS诱导的溃疡性结肠炎。

摘要:目的 探究白色念珠菌（C.albicans）经口感染ICR小鼠建立系统性感染模型，观察C.albicans经黏膜感染后在小鼠体内组织增殖及分布规律。方法 46只ICR雄性小鼠随机分为模型组A（n=20）、模型组B（n=20）、对照组（n=6）。模型组采用棉签法口腔接种C.albicans（7×10⁶cfu/mL），对照组同方法接种等容积生理盐水。模型组A小鼠用于临床、生存、剖检观察试验；模型组B接种后第3、5、7天随机解剖5只小鼠用于组织载菌量和病理检验（对照组每个时间点解剖2只），活菌平板计数法检测小鼠组织载菌量，光镜观察小鼠舌、胃、肝、肾病理组织学变化。结果 模型组小鼠接种后第3天舌面出现明显白斑并随时间加重引起死亡，第5天小鼠死亡率超过50%，第7天死亡率达100%，并能从舌（87.5%）、胃（87.5%）及内脏组织肝（54.5%）、肾（50.5%）、肺（20%）和心脏（4%）中分离到C.albicans，显微镜观察在舌、食道、胃、肝、肾存在菌丝的增殖，对照组未见C.albicans生长，提示模型组小鼠因C.albicans黏膜感染引起小鼠播散性的系统性感染。结论 C.albicans可在一定条件下突破黏膜免疫屏障引起小鼠机会性系统性感染，从而加重感染死亡。

摘要:目的 采用临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染ICR小鼠，建立MRSA系统性感染小鼠模型。方法 采用连续3 d腹腔注射环磷酰胺（100 mg/kg）进行免疫抑制后，将浓度为1×10⁷ cfu/mL的MRSA菌液经尾静脉接种ICR小鼠，通过生存分析、外周血白细胞计数、组织载菌量和病理学检查对模型进行评价。结果 MRSA接种后第2天小鼠开始死亡，14 d内累积死亡率达60%；外周血白细胞总数显著升高，细菌在多个器官定植，载菌量由高到低依次是肾、关节、肺、肝和脑，肾载菌量高达10⁹ CFU/g，关节、肺、肝和脑的载菌量范围在10⁴~10⁹ CFU/g。病理观察显示肾、心脏、肺、肝、脑和关节多器官感染的组织病理学改变。结论 采用环磷酰胺免疫抑制后静脉接种MRSA的方法首次成功建立MRSA系统性感染小鼠模型，该模型可应用于MRSA发病机理及药物筛选等研究领域。

摘要:目的 研究人参辅酶Q₁₀防晒霜对紫外线损伤小鼠的保护作用。方法 36只小鼠随机分组，皮肤脱毛后分别涂抹相应霜剂，正常对照组不做任何处理，其他组进行紫外线照射，连续8周后，小鼠眼球取血处死进行指标检测。结果 与正常组小鼠比较，模型组小鼠皮肤粗糙有皱纹、且角质层脱落，T-SOD与GSH-Px活力均明显下降，白细胞数与MDA含量明显增高（P<0.05）；与模型组比较，人参辅酶Q₁₀防晒霜组小鼠皮肤光滑、角质层没有脱落，T-SOD活力、红细胞与血红蛋白含量上升，白细胞数量、MDA含量与明显下降（P<0.05），阳性对照组小鼠皮肤光滑、角质层没有脱落，GSH-Px活力上升，白细胞数量、MDA含量下降（P<0.05）。结论 人参辅酶Q₁₀防晒霜具有抗紫外线损伤的作用，其预防效果与甲氧基肉桂酸辛酯辅酶Q₁₀霜剂相当。

摘要:目的 建立与分析条件性感染金黄色葡萄球菌感染关节炎模型，为关节炎机理研究及药物开发提供动物模型。方法 先对小鼠进行环磷酰胺免疫抑制处理，再尾静脉接种金黄色葡萄球菌，通过关节表观特征观察、关节炎指数分析和病理观察评分对模型进行评价。结果 接种后第1天开始，小鼠关节部位轻微肿胀，关节组织病变由少量滑膜增生且排列疏散紊乱，发展至滑膜增厚，往关节腔内延伸生长，中性粒细胞浸润增多等病理变化。结论 成功建立条件性感染SA模型，能在较短时间内模拟人关节炎的临床症状和病程发展，且在感染和免疫机理方面体现了人关节炎发病病因。

摘要:目的 建立直接多肽结合试验（DPRA）和人细胞系活化试验（h-CLAT）的皮肤致敏组合检测方法，对化学品及植物提取物的致敏性进行初筛。方法 选择12种化学品和7种植物提取物为受试物，把不同受试物分别与两种肽（半胱氨酸肽和赖氨酸肽）共孵育24 h，采用高效液相色谱法分析反应后多肽消耗。同时将不同浓度的受试物与体外培养的人急性单核细胞白血病细胞（THP-1）共孵育24 h，通过流式细胞仪检测暴露后细胞表面标志物CD86和CD54的变化。再进一步比较DPRA和h-CLAT预测结果的一致性。结果 DPRA方法和h-CLAT方法准确区分了12种化学品的皮肤致敏性，其中2种判定为阴性，10种判定为阳性，两种方法检测结果一致。DPRA对植物提取物致敏性的预测中，除绿茶提取物无法判定外，其余6种均为皮肤致敏疑似物质。h-CLAT预测中，除绿茶提取物、马齿笕提取物和人参果提取物为非致敏物，其余4种植物提取物为致敏物。DPRA与h-CLAT预测的一致性为0.57。结论 DPRA与h-CLAT的简单组合可以实现对单一化合物的准确预测，对于复杂混合物可实现初步预测，确认需要进一步组合其他方法。

摘要:目的 以MMTV-PyMT小鼠为乳腺癌模型探讨枸杞多糖对乳腺癌生长和转移的作用。方法 扩群鉴定转基因自发乳腺癌MMTV-PyMT小鼠，将阳性雌性小鼠随机分为LBP组和对照组，每组8只，小鼠8周龄时给药，LBP组给予LBP（50 mg/kg，腹腔注射）治疗，对照组给予生理盐水，每2 d给药一次测量肿瘤体积一次，4周后脱臼处死，肺Bouin’s溶液固定后观察肺表面转移结节数目，肿瘤组织固定包埋后免疫组化法检测肿瘤细胞增殖及血管密度。结果 MMTV-PyMT阳性小鼠成瘤率100%，与对照组相比，LBP组的肿瘤重量（4.208±0.4463 g）明显地比对照组（6.477±0.3724 g）轻，肿瘤体积也明显比对照组小；LBP组肺表面结节数目（12±1.155个）明显比对照组（20±2.745个）少，免疫组化染色结果显示LBP组肿瘤组织中细胞增殖数目及微血管密度明显比对照组少。结论 枸杞多糖可通过抑制MMTV-PyMT小鼠乳腺癌的生长和转移，并抑制肿瘤细胞增殖和血管新生，MMTV-PyMT小鼠可作为乳腺癌肺转移模型运用于抗肿瘤药物研究。

摘要:目的 观察电针对2型糖尿病合并肾性高血压大鼠模型的疗效，并探索其可能的作用机制，进一步完善针灸在临床急、慢性疾病中的应用。方法 将50只Wistar大鼠随机选择10只作为空白组，余下40只用于模型制作，并随机均分为单纯糖尿病组、单纯肾性高血压组、复合模型电针组、复合模型未电针组。大鼠高脂高糖膳食4周后，予快速腹腔注射链脲佐菌素（STZ），制作成单纯2型糖尿病模型，待模型血糖稳定，再用改良的“两肾一夹法”结扎大鼠单侧肾动脉，造成肾动脉狭窄，形成肾性高血压。最后获得稳定的2型糖尿病合并肾性高血压病的复合模型。其中除复合模型未电针组大鼠不予电针治疗外，其余各组大鼠均给予两个周期（2周）的电针治疗。最后，检测各组大鼠电针前后的血压（BP）、空腹血糖（FBG）、血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、糖化血红蛋白（GHbA1c）、肾素（PRA）及血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）值的变化。结果 电针2周后，复合模型电针组与复合模型未电针组相比，BP、FBG、GHbA1c、PRA、Ang Ⅱ值均降低（P<0.01），但Cr和BUN值变化不明显（P>0.05）。结论 电针刺激2型糖尿病合并肾性高血压模型大鼠的双侧足三里穴，能使复合模型大鼠的血糖和血压降低至正常水平，且经单次电针刺激后2-3天内，复合模型大鼠的血糖和血压均能稳定在治疗后水平。另外，针灸疗法较其他治疗方法还具有经济、安全、无副作用等优点，更适合应用于2型糖尿病合并肾性高血压病的早期临床治疗及基础研究。

摘要:目的 测定西藏小型猪的IGF-1基因在不同年龄阶段、不同组织中的表达分布情况，为未来的研究提供基础数据。方法 采用实时荧光定量PCR技术，以GAPDH基因为内参照，检测了IGF-1基因在西藏小型猪不同组织和不同生长阶段间的表达变化。结果 （1）IGF-1基因表达的时序性研究表明在0、0.25、0.5、1、2岁时肌肉组织的表达量最低，在0、0.25、0.5岁时皮肤组织中表达量最高，在0.1、2、3岁时肝组织的表达量最高。（2）IGF-1基因在在7个不同组织中均有表达，0.25岁时其在表达丰度由高到低依次为：皮肤、肺、肝、肾、脾、心脏和肌肉。且在皮肤中的表达量最高且极显著高于其他各组织（P<0.01）。同时在不同年龄阶段的表达中，IGF-1基因0.25岁时在各组织中的表达均达到峰值。结论 西藏小型猪的IGF-1基因的表达呈现出明显的时空特异性。

摘要:目的 探索用机械式胸外按压复制大鼠心肺复苏（cardiopulmonary resuscitation，CPR）模型的可行方法。方法 成年雄性SD大鼠，随机分为对照组（n=6）与模型组（n=10）。10%水合氯醛腹腔注射麻醉后行气管插管和左侧股动脉插管。在监测心电图与动脉血压条件下，模型组行气管阻塞（tracheal obstruction，TO），心脏骤停（cardiac arrest，CA）出现2 min用呼吸机辅助和自制动物胸外按压仪行CPR。结果 模型组TO后迅速出现自主呼吸停止，紫绀，心律失常，4～5 min出现心脏停搏，动脉收缩压降至40 mmHg以下，脉压消失，CA出现。2 min后给予CPR，8只大鼠自主循环恢复（return of spontaneous circulation，ROSC），并出现一过性再灌注心律失常，6只大鼠恢复意识并存活24 h。血液生化分析提示模型组大鼠存在电解质紊乱、酸中毒、肾功能损害、心肌酶谱升高。病理学切片观察发现模型组大鼠心肌横纹溶解，肾小球无复流，神经元减少，肺淤血等器官损害。结论 机械式胸外按压可以提供CA大鼠CPR所需的基本心输出量，可以成功建立大鼠CPR模型。

摘要:目的 探索静脉注射凝血酶造成大鼠高凝态模型，为高凝态的研究提供合适动物模型。方法 SD大鼠分为六组，分别于股静脉恒速注射生理盐水和2.5、5、10、20、40 U/kg凝血酶溶液，5 min内采血测活化部分凝血活酶时间（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶原时间（prothrombin time，PT）、纤维蛋白原（fibrinogen，FIB），并观察大鼠死亡情况以确定最佳凝血酶剂量。在此基础上，以最佳剂量凝血酶溶液股静脉注射给予大鼠，分别于0、10、30、60、120、180、300 s采血测APTT、PT、FIB以确定最佳采血时间。最后将大鼠分为生理盐水组与凝血酶组（最佳凝血酶剂量和采血时间），采集血样测定APTT、PT、FIB以及全血粘度。结果 10 U/kg凝血酶组大鼠血浆APTT、PT明显缩短，FIB明显升高，且大鼠死亡率低。注射凝血酶后60 s大鼠血浆APTT、PT缩短最多，FIB含量升至最高。同生理盐水组相比，凝血酶组大鼠血浆PT、APTT显著缩短，FIB、全血粘度显著增大，且差异有显著性（P<0.05）。结论 注射凝血酶溶液可复制大鼠血液高凝态模型，最佳凝血酶剂量为10 U/kg，凝血酶浓度为2 U/mL，最佳采血测试时间为60 s。

摘要:目的 应用高脂饲喂联合链脲佐菌素（STZ）构建Beagle犬T2DM模型，并观察其相关特征。方法 将普通级雄性Beagle犬30只随机分为3组：对照组，高脂组，糖尿病模型组，每组10只。糖尿病模型组饲喂高脂饲料同时在饲喂2个月时注射STZ；高脂组饲喂高脂饲料；对照组饲喂普通饲料，连续饲喂5个月。定期测定动物Lee指数、空腹血糖、胰岛素、尿糖，并在3月时进行OGTT试验，试验结束后进行血脂等血液生化检测和肝、胰腺组织病理检查。结果 高脂组和糖尿病模型组高脂饲养2个月后Lee指数显著增加（P<0.01），并出现高胰岛素血症和胰岛素抵抗伴血脂异常；糖尿病模型组STZ注射后空腹血糖显著升高（P<0.01），且持续3个月维持在高血糖水平；而高脂组的空腹血糖无明显变化（P>0.05），糖尿病模型组OGTT试验3 h血糖值>11.1mmol/L，且3 h未恢复，胰腺组织病理学检查出现一定程度的损伤和病变。结论 高脂饲料饲喂诱导Beagle犬胰岛素抵抗和高血脂症，但未能形成高血糖状态，而高脂饲料饲喂联合注射STZ后Beagle犬在出现高血脂症的同时发生胰岛素抵抗，与人类T2DM的胰岛素抵抗伴高血糖、高胰岛素血症和高血脂等典型症状相似。

摘要:目的 验证铁是否能够加速大鼠肝脏纤维化的进程。方法 大鼠分为对照组、高脂组、高铁组、高脂高铁组、高脂去铁组，每组24只。分别自由摄取普通饲料和高脂饲料的同时，高铁组、高脂高铁组大鼠隔天肌注右旋糖酐铁50 mg/kg；高脂去铁组大鼠处死前一个月尾静脉注射甲磺酸去铁铵30 mg/kg，3次/周；干预第4、5、6月分别选取8只大鼠，检测透明质酸（hyaluronic acid，HA）、Ⅳ型胶原（collagen type IV，COL-IV）、层粘连蛋白（laminin，LN）、Ⅲ型前胶原（procollagen Ⅲ，PC Ⅲ）；Masson染色观测肝脏病理改变。结果 干预第5个月高脂高铁组HA水平高于对照组与高脂组；第6个月高脂高铁组COL-IV、LN水平高于高脂组，干预第6月高脂高铁组血清PC Ⅲ水平达到高脂饲料组的1.63倍。第6个月高脂高铁组肝脏标本Massom染色见显著的胶原沉积，但其他组未见胶原沉积。结论 铁可加速高脂所致的大鼠肝脏纤维化进程。

摘要:目的 探索苯对Wistar大鼠肝肾功能及血核苷酸水平的影响。方法 给予Wistar大鼠不同浓度苯21 d，用全自动生化仪检测血液不同成分的水平，用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血液中环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）和热休克蛋白-70（HSP-70）的水平。结果 给予Wistar大鼠不同苯剂量0.19、0.38、0.76 g/（kg·bw），连续21 d，动物血浆中总胆红素水平比对照组升高了134.40%、173.63%、254.75%，谷草转氨酶升高了70.76%、85.44%、106.61%，肌酐升高了24.54%、67.46%、84.50%，肌酸激酶升高了151.35%、180.85%、245.54%，尿素[0.38、0.76 g/（kg·bw）组]升高了0.48%、23.43%；丙氨酸转移酶水平超过了检测值上限，均为1185.60%；cAMP水平比对照组升高了41.84%、264.02%、314.23%，cGMP升高了31.29%、40.46%、272.14%，HSP-70升高了82.11%、187.37%、1484.21%；淀粉酶水平比对照组分别降低了62.03%、63.66%、64.45%。结论 苯污染使血液中cAMP和cGMP比值发生变化，引起新陈代谢的紊乱，导致肝肾功能损伤或病变。

摘要:临床上，肾阳虚是抑郁症患者的主要中医证型之一，针对肾阳虚抑郁症患者采用温补肾阳的方法取得较好疗效，但针对肾阳虚型抑郁症动物模型的复制方法尚无明确统一的规定和标准，为肾阳虚型抑郁症的研究带来困扰，因此，为了进一步完善肾阳虚型抑郁症动物模型的复制方法，现对近十五年来采用糖皮质激素类药物诱导的肾阳虚型抑郁症动物模型的造模方法及评价指标进行系统分析，比较异同，为肾阳虚抑郁症的合理造模提供参考依据。

摘要:热应激是机体长期暴露在热环境中无法充分将体内的热散出而导致机体温度失衡的一种状态。随着miRNA检测技术的进步，许多学者发现，热应激会导致miRNA的表达量发生变化。miRNA可以通过结合其靶基因，抑制miRNA靶基因的表达，从而在调控机体生命活动和抗热应激中发挥重要作用。