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李道群 , 彭杰 , 甸子芩 , 王文广 , 张阿梅 , 冯悦 , 牛华 , 代解杰 , 夏雪山
2017, 25(2):111-116. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.001
摘要:目的 探究树鼩原代小肠上皮细胞的增殖特性,建立人轮状G1P[8]型病毒体外感染树鼩原代小肠上皮的细胞模型。方法 采用胶原酶XI和中性蛋白酶I联合消化法获取树鼩原代小肠上皮细胞,经纯化和鉴定,用人轮状G1P[8]型病毒感染细胞,测定培养上清的病毒滴度和载量,并用Western blot和间接免疫荧光检测法检测人轮状病毒G1P[8]型VP6蛋白的表达情况,评价人轮状G1P[8]型病毒体外对树鼩原代小肠上皮细胞的感染性。结果 分离的树鼩原代小肠上皮细胞经传代培养纯化,获得纯度达90%树鼩原代小肠上皮细胞。对树鼩原代小肠上皮细胞、原代肾细胞、HCT116细胞和MA104细胞进行轮状病毒易感性比较,确定树鼩原代小肠上皮细胞可以被人轮状病毒G1P[8]感染,培养72 h时病毒滴度可达到2.0×105 TCID50/mL。经Western blot和间接免疫荧光发现在人轮状G1P[8]型病毒感染树鼩原代小肠上皮细胞1~5 d均能检测到人轮状病毒VP6蛋白的表达和分布。结论 确立了树鼩原代小肠上皮细胞的分离、纯化与培养方法,并建立了人轮状G1P[8]型病毒感染树鼩原代小肠上皮细胞的体外模型。
杨铭 , 胡晓星 , 王文广 , 张莉 , 董书维 , 冯悦 , 代解杰 , 夏雪山
2017, 25(2):117-122. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.002
摘要:目的 建立EV71对树鼩原代肾细胞的感染模型。方法 胰蛋白酶消化法获得树鼩的原代肾细胞,用EV71感染树鼩肾细胞,测定1、2、4、6和8 d培养上清病毒滴度,分别用Western blot和间接免疫荧光法检测细胞中EV71病毒VP1蛋白的表达,以确定EV71病毒对树鼩原代肾细胞的感染性。结果 对分离得到的树鼩原代肾细胞进行传代纯化和形态鉴别,建立以树鼩原代肾细胞为主的细胞培养。用EV71病毒感染树鼩原代肾细胞,感染后48 ~ 96 h病毒滴度可达到1.3×106 TCID50/mL,说明EV71病毒可有效感染树鼩原代肾细胞并有效增殖。Western blot检测发现,EV71病毒VP1蛋白可在感染后2 ~ 8 d的树鼩原代肾细胞中有效检出,间接免疫荧光法则在感染后2 ~ 6 d细胞的细胞质中检测到病毒VP1蛋白的分布。结论 在成功建立树鼩原代肾细胞培养的基础上,确定了EV71病毒对树鼩原代肾细胞的感染性和病毒增殖特性,初步建立了EV71树鼩原代肾细胞感染模型。
周广龙 , 杨冬梅 , 梁佳芮 , 陈黎 , 代蕊 , 张弛 , 李娜 , 胡敏 , 代解杰
2017, 25(2):123-131. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.003
摘要:目的 初步探索树鼩作为一种新的弱视模型的可行性分析研究;探讨形觉剥夺树鼩初级视皮质的可塑性机制,为进一步认识弱视形成及恢复机制提供理论依据。方法 60只出生30 d左右树鼩随机分为5组(每组12只):右眼缝合1月组;右眼缝合2月组;右眼缝合1月打开换缝合左眼1月,即换缝合组;对照组1,为A组同龄大小树鼩正常环境饲养;对照组2,为B、C组同龄大小树鼩正常环境饲养。造模完成后进行视皮质定位取材,观察不同条件下树鼩视皮质组织学、超微结构、神经元细胞凋亡情况以及c-fos 的表达变化情况。结果 与对照组相比各实验组视皮质组织学及电镜均出现了不同程度的损害,且缝合2月组损伤更为明显;凋亡染色显示实验组跟对照组无差异性;c-fos蛋白及mRNA表达量在各实验组均出现了降低,且缝合右眼两月组表达量最低,换缝合以后表达量有一个小幅度的升高,对照组间c-fos表达无差异性。结论 不同程度的形觉剥夺性弱视引起了不同的组织病理学变化; 弱视引起的神经元损伤具有可塑性;树鼩可作为形觉剥夺性弱视的理想动物模型。
罕园园 , 孙晓梅 , 匡德宣 , 陆彩霞 , 陈玲霞 , 仝品芬 , 王文广 , 李娜 , 代解杰
2017, 25(2):132-137,152. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.004
摘要:目的 区分并鉴定树鼩中APP基因mRNA的多种可变剪接体,对APP基因特征进行描述,并确定其在各组织中的表达分布。方法 参考已知人的和树鼩基因组预测的APP基因序列,设计树鼩APP基因mRNA剪切体外显子的共同特异性引物。分别从树鼩不同组织中提取总RNA,反转录为cDNA,利用高保真酶扩增目的剪切体DNA。根据PCR扩增产物电泳条带的有无和大小初步判断剪接体的型别,最后将PCR产物胶回收进行测序鉴定,对获得的基因进行特征描述,并结合定量PCR的结果确定了各剪接体在不同组织中分布情况。结果 结果表明树鼩APP剪接体的全长为3514 bp,有一个109 bp的5'-UTR,1092bp的3'-UTP。APP基因在调查的9个物种中高度同源保守,显示树鼩与灵长类存在一个较近的亲缘关系。通过三维建模获得了树鼩和人的APP基因共同拥有的4个结构域。同时确认这4种通过外显子跳跃产生的APP可变剪接体在不同组织中的分布和表达。4种检测到的剪接体APP770,APP695,APP751,APP677均表达于肺、肾和肠,表达量最高的是肺、肌肉和睾丸。结论 对树鼩APP基因可变剪接体的表达研究,有助于推动树鼩作为阿尔茨海默病模型深入研究疾病的发生机制和药物研发。
2017, 25(2):138-145. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.005
摘要:目的 探讨肾血管性高血压大鼠(RHR) 血清、脑及血管组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9) 和组织型基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)的表达以及血压与两者的关系。方法 雄性SD大鼠80只随机分成RHR组(40只) 和假手术组(40只)。RHR组采用双肾-双夹法制作高血压大鼠模型,鼠尾测压仪测定血压。根据Longa 5评分法和病理学结果确定脑卒中;Western blot和免疫组化测定脑组织和血管中MMP-9和TIMP-1的表达,双抗体夹心ELISA 检测血清MMP-9和TIMP-1水平。结果 与假手术组比较,RHR组大鼠术后2、4、6、8、10、12 周血压均明显升高[(157±9.0)比(128±7.0),(176±10.0)比(122±6.0),(194±8.0)比(117±6.5),(202±12.0)比(124±8.0),(218±15.0)比(126.±8.5),(224±20.0)比(129.±9.0) mmHg,均P < 0.05];术后12周,RHR大鼠血清MMP-9高于假手术组[(783.4±109.79)比(573.4±109.59)ng/mL,P < 0.05];而RHR大鼠血清TIMP-1低于假手术组[(313.02±83.9)比(976.19±191.1) pg/mL,P < 0.05]。同时,RHR大鼠脑组织和血管MMP-9的表达均明显高于假手术组 (均P < 0.05),而TIMP-1的表达则均明显低于假手术组(均P < 0.05)。Pearson相关分析显示收缩压与血清、脑及血管组织中的MMP-9水平均呈正相关(r=0.557,r=0.774和r=0.661,均P < 0.05),而与TIMP-1水平均呈负相关(r=-0.481,r=-0.535和r=-0.685,均P < 0.01)。结论 肾血管性高血压大鼠血清、脑和血管组织中MMP-9表达升高,而TIMP-1表达降低。两者在血液和组织中的变化趋势保持一致,血压的升高与血液和组织中MMP-9的升高和TIMP-1的降低相关。
侯林 , 许晟迪 , 张柱霞 , 田小莉 , 姜树原 , 刘友 , 巴德仁贵 , 黄丽华 , 邵国
2017, 25(2):146-152. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.006
摘要:目的 研究蛋白磷酸酶1γ(protein serine/threonine phosphatase,PP1γ)和DNA甲基化在学习记忆中的作用。方法 通过DNA甲基化转移酶(DNA methytransferases,DNMTs)抑制剂5-aza-cdR处理小鼠,观察小鼠学习记忆情况及其PP1γ表达变化,通过水迷宫测定小鼠的学习记忆能力,Real-time PCR 检测小鼠海马区DNMTs和PP1γ mRNA转录水平以及Western-Blot测定PP1γ的蛋白质表达水平。为了进一步探讨5-aza-cdR对小鼠学习记忆的影响是否与细胞增殖和凋亡有关,用5-aza-cdR 处理NG108-15神经细胞,流式细胞仪、xCelligence系统和荧光素酶报告基因分别检测5-aza-cdR对细胞增殖、凋亡和PP1γ的转录活性的影响。结果 侧脑室注射了5-aza-cdR的小鼠空间学习记忆能力增加,同时小鼠海马区的DNMTs和PP1γ的表达降低;10 μmol/L 5-aza-cdR抑制细胞增殖,降低PP1γ的转录活性,但是没有诱导细胞凋亡。结论 5-aza-cdR对PP1γ的表达抑制与小鼠学习记忆有关。
罕园园 , 徐昕 , 陆彩霞 , 匡德宣 , 仝品芬 , 王文广 , 孙晓梅 , 李娜 , 代解杰
2017, 25(2):153-159. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.007
摘要:目的 建立树鼩骨骼系统的三维可视化模型,为树鼩的骨骼系统疾病诊断提供依据。方法 使用日本东芝Aquillon one 320 排螺旋CT进行扫描,100 kV,80 mA,球管转数每转0.35 s,螺距1.35,图像为0.5 mm,层间隔为0.5 mm,使用骨算法重建。在并行计算环境中采用Vitrea软件包,选择Musculoskeletal CT选项,采用容积成像(VR)、多平面成像(MPR)、曲面成像(CPR)技术进行三维重建。结果 重建后的可视化模型结构明显、清楚,可以真实地在计算机中重现出树鼩的骨骼系统三维模型。在此模型中,在头骨背面可见五条隆起的嵴,侧面观可见四个大孔:位于前端的外鼻孔、前颌骨后上方的眶下孔、由颧弓所范围着的眼窝和鼓泡外侧的外耳道。此外,可见一些较小的头骨孔,如视神经孔、颌下神经孔。利用该成像技术可定量测定各主要骨骼的长度、前后径、左右径和身长、尾长等数据。尤其是还获得了以往通过解剖难以测量准确的数据:如腭长、臼齿列长等较细微的数据,以及解剖不易获得脊椎前后径及左右径的数据。同时还利用三维可视化技术发现了树鼩存在有骨盆形态不对称、胸廓增大、骨折、跟腱周围滑膜囊钙化的骨骼异常情况。结论 所建立的CT三维可视化技术可确定树鼩骨骼系统的特殊特征,对树鼩骨骼系统无侵入性的生态分类、鉴定、进化分析均有重要意义。
权金强 , 高彩霞 , 江新杰 , 李昌文 , 路小野 , 赵生国 , 陈洪岩
2017, 25(2):160-165. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.008
摘要:目的 研究分析SPF大白猪、长白猪生殖生理和血液生理生化特性。方法 常规方法测定SPF大白猪、长白猪群体10项生殖生理指标、19项血液生理和18项血液生化指标,统计分析各指标在不同群体、不同年龄、不同性别间的差异。结果 SPF大白猪、长白猪生殖生理指标和血液大部分生理生化指标差异不显著(P > 0.05),个别指标如血液生理指标GRAN、HGB、RDW、PLT、PCT,血液生化指标ALKP、CHOL、TBIL、BUN在品种间、不同年龄以及不同性别之间差异显著(P < 0.05),但其偏离正常值范围较小。结论 SPF大白猪、长白猪在生殖生理和血液生理生化等方面基本稳定,与其他实验用小型猪相比差异不大,本研究为其标准化饲养、动物模型的构建以及封闭群猪群遗传质量的评价提供了重要的基础数据。
2017, 25(2):166-168. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.009
摘要:目的 建立来源于我国的日本三角涡虫无性繁殖纯品系。方法 野外采集日本三角涡虫,之后在实验室进行切割损伤再生,通过不断地切割培养,建立日本三角涡虫无性繁殖纯品系。结果 经过10年上万次实验,将来源于山东淄博地区的日本三角涡虫培养成为一个实验室可控条件下稳定生长的单切无性繁殖纯品系Dugesia ZB-1。结论 Dugesia ZB-1的建立,为开展后续相关实验,推动我国涡虫研究的进程及参与国际涡虫研究的竞争奠定了坚实的基础。
王元智 , 马芹 , 陆涛峰 , 张圆圆 , 杨春文 , 陈洪岩
2017, 25(2):169-173. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.010
摘要:目的 建立棕背(鼠平)的实验室繁育方法,测定棕背(鼠平)生长和繁殖数据,为开展棕背(鼠平)实验动物化研究提供基础。方法 将黑龙江省牡丹江市牡丹峰林地的野生棕背(鼠平)引入实验室,于大型硬壁式啮齿动物负压隔离器内进行人工饲育、繁殖,测定棕背(鼠平)生长和繁育数据,评价棕背(鼠平)实验室繁育效果。结果 棕背(鼠平)在实验室条件下可以实现人工饲育、繁殖。妊娠率54.55%,平均妊娠期为20.4 d(18~22 d);一个繁殖期内平均繁殖2.9次,最高繁殖次数为7次,远远超过自然条件下所统计到的繁殖次数(1~4次);平均窝产仔数(4.3±1.22)只,单窝最高产仔数为8只;幼仔离乳率94.8%,生长发育状况良好。结论 实现了棕背(鼠平)的实验室繁育,测定了棕背(鼠平)在实验室条件下的生长和繁育数据,为棕背(鼠平)实验动物化打下了基础。
桑剑锋 , 马虎成 , 施晓雷 , 黄韬 , 伊丹丹 , 丁义涛
2017, 25(2):174-180. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.011
摘要:目的 探索不同比例肝切除体积对巴马小型猪急性肝功能衰竭的影响,为建立合适的小型猪大部分肝切除后急性肝功能衰竭模型提供合适的方法。方法 分别行75%、85%及95%肝切除,CT检查残留肝并记录存活情况,术前、术后 1、3、5 d和术后 1、2、3 周定期抽血检测肝功能,获取肝组织HE 染色,检查肝病理情况。结果 75%、85%及 95%肝切除小型猪平均存活时间为(19.0±5.6)d,(17.3±5.5)d,(1.3±1.5)d,不同肝切除比例的巴马小型猪病理学评分分别为(5.67±0.52)、(8.17±0.82)、(8.50±0.71)。随着肝切除比例增加,肝功能衰竭发病率升高。85%肝切除可引起谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、总胆汁酸水平显著增高。结论 85%体积肝切除可造成典型的小型猪急性肝功能衰竭模型。
2017, 25(2):181-185. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.012
摘要:目的 研究沙疗温度对骨重建实验的影响及传热数值模拟研究。方法 采用CT扫描的手段分别进行4次扫描(建立实验对象OA模型前后各1次、进行沙疗第1周和第2周后各1次)。将扫描数据导入MIMICS软件,分析了各股质层骨量的变化,将肌肉、股骨和骨髓,装配后划分网格,把建立的三维模型的STL格式导入到COMSOL软件进行传热模拟及分析温度场产生的应力对骨重建的影响。结果 分析4次CT扫描数据的变化和热应力模拟,在沙疗温度产生的热应力环境下,软质骨体积减少,而密、硬质骨体积增加。传热数值模拟很好的体现了大腿及股骨部位的温度分布。结论 沙疗温度对股骨产生的热应力对骨重建起促进作用。
汪伟 , 周俊明 , 王小敏 , 何孔旺 , 温立斌 , 倪艳秀
2017, 25(2):186-189. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.013
摘要:目的 检测High Five昆虫细胞系对BALB/c裸鼠致瘤性情况,以确保其作为疫苗生产细胞株的安全性。 方法 将裸鼠随机分为 5 组,分别为High Five基础细胞库细胞试验组、High Five最高限制代次细胞试验组、HEp-2细胞阳性对照组、CEF细胞阴性对照组和不作任何处理的空白对照组,用细胞悬液背部皮下接种裸鼠。3周和12周后对裸鼠解剖及病理组织学检查,其是否有肿瘤形成。结果 阳性对照HEp-2细胞组裸鼠接种后3周注射部位形成结节,病理组织学检查为鳞状细胞癌;阴性对照CEF细胞组和High Five细胞组均无结节形成,接种后12周经解剖用病理组织学检查,均无肿瘤形成。结论 基础代次和最高限制代次High Five细胞均不具有致瘤性,可安全地应用于疫苗生产。
2017, 25(2):190-193,206. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.014
摘要:目的 系统评价音乐刺激孕鼠对子代鼠大脑功能的影响效果,为促进实验动物的福利以及音乐胎教的应用发展提供科学依据。方法 计算机检索Pubmed、Web of Science、Cochrane Library、万方、维普、中国知网和中国生物医学文献数据库,全面收集有关音乐刺激孕鼠对子代鼠大脑功能影响效果的研究文献,检索时限为建库至2016年4月2日。按照纳入与排除标准选择文献、评价文献质量和提取数据,并对数据进行定性描述。结果 共纳入7篇实验研究,4篇中文,3篇英文。研究对象均为大鼠,其中5项研究采用Wistar大鼠,2项研究采用SD大鼠。音乐材料涉及舒适音乐、古典音乐、小提琴协奏曲(梁祝),干预周期为妊娠期至分娩期前后不等。研究结果显示:孕期音乐刺激在一定程度上能促进子代大鼠的大脑神经发生,提高空间记忆能力,但对某些功能性受体的表达影响不显著。结论 适宜的音乐可以促进子代大鼠大脑功能的发展。
汪晶 , 潘永明 , 徐孝平 , 蔡月琴 , 陈方明 , 蔡兆伟 , 陈民利
2017, 25(2):194-200. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.015
摘要:目的 高脂诱导建立五指山小型猪动脉粥样硬化(AS)模型,观察脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)在AS模型血浆和斑块中的表达变化。方法 将10只五指山小型猪随机分为正常对照(Ctr)组4只饲喂普通饲料、AS模型(AS model)组6只饲喂高脂饲料,连续造模24周。造模24周时,空腹取前腔静脉血测定总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、甘油三酯(TG)、C-反应蛋白(CRP)、Lp-PLA2活性和成分的变化,并取主动脉进行油红O染色以及取腹主动脉血管行HE染色和IL-6免疫组化染色,观察血管脂质沉积和斑块病理以及IL-6蛋白表达变化。采用RT-PCR和Western Blot法观察腹主动脉组织中Lp-PLA2mRNA和蛋白的表达情况。结果 与正常对照组比,AS模型组体重、体质量指数(BMI)、TC、LDL-C、HDL-C、CRP、Lp-PLA2活性和成分均显著升高(P < 0.05,P < 0.01),同时主动脉脂质沉积明显(P < 0.01)和AS斑块形成,腹主动脉组织中Lp-PLA2mRNA和蛋白表达以及IL-6蛋白表达均显著升高(P < 0.05)。结论 长期高脂饮食24周能诱发五指山小型猪AS,且Lp-PLA2在参与血管炎症和AS斑块形成中发挥了关键作用。
2017, 25(2):201-206. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.016
摘要:目的 观察豚鼠频闪光诱导性近视和形觉剥夺近视模型中短波视蛋白(S-opsin)表达差异,并初步探讨原因。方法 36只普通级2周龄豚鼠随机分成三组:频闪组(FLM组,n=13),形觉剥夺组(FDM组,n=12),对照组(n=11)。FLM组,饲养笼具安装有频闪仪(频率0.5 Hz),笼具内装有发光二极管;FDM组豚鼠右眼用半透明眼罩遮盖,并确保豚鼠眼睑能正常活动;对照组豚鼠不予特殊处理。在造模第1天(0周)和第6周测量豚鼠右眼屈光度、眼轴长度和角膜曲率半径,并通过免疫荧光法观察S-opsin表达。结果 第0周,FLM、FDM组与对照组屈光度、眼轴长度、角膜曲率半径差异均无显著性(P > 0.05)。造模6周后,与对照组相比,FLM组、FDM组屈光度变化值、眼轴长度变化值差异均有显著性(P < 0.05),而角膜曲率半径变化值差异无显著性(P=0.358),提示成功建立近视模型。FLM组与FDM组相比,屈光度变化值、眼轴长度变化值、角膜曲率半径变化值差异均无显著性(P > 0.05)。免疫荧光结果显示:FLM组视蛋白灰度值>对照组视蛋白灰度值>FDM组视蛋白灰度值,任意两组进行比较,差异均有显著性(P < 0.001)。结论 频闪光和形觉剥夺均能建立近视模型,频闪光诱导性近视模型中S-opsin产生增加,而形觉剥夺性近视模型中S-opsin产生减少,说明两种近视模型的发生机制可能不同。
张引红 , 李美宁 , 王春芳 , 郭民 , 张锐虎 , 陈朝阳
2017, 25(2):207-210. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.017
摘要:目的 探讨补骨脂素对II型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎的作用并初步探讨其作用的分子机制。方法 选用DBA/1J小鼠,利用牛II型胶原诱导构建类风湿性关节炎小鼠模型。将造模成功的小鼠随机分为补骨脂素(PSO)、甲氨蝶呤(MTX)和模型对照(vehicle)三组,灌胃给药,观察关节改变情况并评分。称重并计算脾指数;流式细胞术测定脾淋巴细胞中Th1、Th2细胞数;ELISA检测血清相关炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的表达量变化。结果 与vehicle组相比,PSO组足踝肿胀、活动受限程度明显减轻; PSO组脾指数显著低于模型对照组,Th1淋巴细胞所占比例亦较Vehicle组显著下降,Th2淋巴细胞比例差异无显著性;ELISA结果显示PSO组血清TNF-α、IL-6和IL-1β显著低于Vehicle组。各项结果PSO组与MTX组无统计学差别。结论 补骨脂素通过调节Th1/Th2细胞平衡及抑制TNF-α、IL-6和IL-1β起到免疫调节作用,从而缓解RA进程。
熊乐 , 张倩 , 沈若武 , 边洪琳 , 孙广强 , 王毅 , 张凤玉 , 张蓓
2017, 25(2):211-217. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.018
摘要:目的 探讨脂多糖对于大鼠坐骨神经损伤瓦勒变性早期髓鞘碎片清除的影响。 方法 将50只Wistar大鼠随机分成假手术组(10只),模型组(20只)和脂多糖LPS组(20只),LPS组及模型组横断大鼠右侧坐骨神经后,行神经外膜端端吻合;假手术组仅游离出坐骨神经,然后关闭切口。LPS组大鼠在神经断端显微注射LPS (2 g/ L) 1 μL,模型组及假手术组大鼠注射同等体积生理盐水。于术后1.5、24 h和7 d 取术侧坐骨神经。实时定量PCR(qRT-PCR)检测坐骨神经中白介素1β(IL-1β)mRNA、单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1) mRNA水平;免疫荧光法检测坐骨神经中CD68+巨噬细胞的表达;HE染色观察坐骨神经的病理变化;油红O染色观察坐骨神经脱髓鞘程度;LFB染色观察坐骨神经髓鞘变化;坐骨神经功能指数(SFI)评价大鼠运动功能的恢复情况。结果 实时定量PCR显示,与假手术组相比,术后1.5 h模型组IL-1β mRNA和MCP-1 mRNA的表达均明显升高(P < 0.001,P < 0.001),与模型组相比,术后1.5 h LPS组IL-1β mRNA和MCP-1mRNA的表达明显升高(P < 0.001,P < 0.001)。术后24 h模型组IL-1β mRNA和MCP-1m RNA的表达均明显升高(P < 0.001,P < 0.001),与模型组相比,术后24 h LPS组IL-1β mRNA和MCP-1 mRNA的表达明显升高(P < 0.01,P < 0.01)。免疫荧光可见,与模型组相比,术后7 d LPS组中CD68+细胞表达显著上调(P < 0.05)。术后7 d坐骨神经HE染色可见,LPS组坐骨神经断端较多炎性细胞浸润,许旺细胞增殖活跃,模型组神经断端炎性细胞和许旺细胞较少。术后7 d坐骨神经ORO染色可见,与模型组相比,LPS组断端远侧脱髓鞘程度较高。术后7 d坐骨神经LFB染色可见,模型组和LPS组坐骨神经断端均出现脱髓鞘反应,但与模型组相比,LPS组神经断端残余髓鞘碎片明显减少(P < 0.05)。SFI显示,与模型组相比,LPS组大鼠在术后10、20、30、40和50 d分别不同程度升高,术后20 d明显增高,差异有显著性( P < 0.05)。结论 脂多糖通过激活固有免疫系统加快大鼠坐骨周围神经损伤后瓦勒变性早期髓鞘碎片的清除。
黎冰林 , 卢鑫 , 李江超 , 王佳 , 王丽京 , 杨永霞
2017, 25(2):218-224. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.019
摘要:目的 Tg2576转基因小鼠与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者的病理改变相近,本文动态研究了Tg2576小鼠在AD发病不同阶段的血清代谢物特征,为临床AD的早期诊断提供代谢依据。方法 收集Tg2576小鼠在AD发病初期(6个月)和末期(12个月)时的血清样本,采集样本的1HNMR谱并运用多变量分析方法进行代谢特征的分析。结果 结果显示Tg2576与C57小鼠分别在6和12个月时的血清代谢特征有明显差异,且不同AD发病阶段的Tg2576小鼠具有明显的代谢差异。与C57小鼠相比,在AD出现的初期阶段,Tg2576小鼠血清中乳酸、肌醇和氨基酸(如亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸)的含量升高,而脂质、胆碱、磷脂酰胆碱/甘油磷脂酰胆碱、甜菜碱、甘氨酸和葡萄糖含量降低;在AD发病的末期,血清中乳酸、肌醇和丙氨酸的含量继续上升,脂质、胆碱、磷脂酰胆碱/甘油磷脂酰胆碱、甜菜碱和甘氨酸含量持续降低,同时谷氨酸和肌酸含量初步显示出下降趋势。通过比较AD的初期和末期血清代谢物,我们能够发现疾病末期血清中乳酸、肌醇和丙氨酸含量升高,脂质、胆碱、磷脂酰胆碱、甘油磷脂酰胆碱含量降低。在这些代谢物中,乳酸、脂质、胆碱、磷脂酰胆碱和甘油磷脂酰胆碱在AD发生初期已具有显著性变化,且与AD发生的严重程度密切相关。结论 结果表明Tg2576小鼠中乳酸与阿尔茨海默病程度的加重呈正相关变化,而脂质、胆碱、磷脂酰胆碱和甘油磷脂酰胆碱呈负相关改变,且这些代谢物随着疾病的发展呈动态进行性变化,可能是AD早期诊断的重要代谢标志物。
罗琴芳 , 黄文科 , 袁文 , 潘金春 , 黄韧 , 陈瑞爱
2017, 25(2):225-228. DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2017.02.020
摘要:目的 分离及鉴定感染实验用鰕虎鱼的病原菌。方法 将病料分离培养,纯化培养后,用16s rRNA及生理生化方法鉴定病原菌。结果 分离到了革兰阴性弧菌,命名为:GDLAMI-1210株,显微镜下观察为逗点样形态,电镜下可看到菌的一端钝圆,一端长杆弯曲的鞭毛,生理生化鉴定结果与弧菌一致,16s rRNA测序结果与创伤弧菌标准菌株(ATCC27562T)等聚为一类菌,回归实验证实该菌对裸项栉鰕虎鱼有一定的致病性。结论 裸项栉鰕虎鱼感染创伤弧菌初报。