摘要:目的 建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系，并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法 通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列，并构建Cas9-MAD2L1载体，将该载体转染到NIH/3T3细胞中，通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后，提取细胞转染后的基因组DNA，利用PCR方法，结合T7E1分析和桑格尔测序，鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况，并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果 将Cas9-MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后，荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞，PCR结合T7E1结果显示，以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228 bp MAD2L1 PCR产物，可被酶切成166 bp和62 bp片段，测序结果显示，成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑，脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论 成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系，设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。

摘要:目的 通过对吸烟大鼠血浆尼古丁、可替宁含量的测定，探讨香烟在体内的内暴露水平。方法 清洁级SD雄性大鼠160只，随机分为2、4、6、8、12周的低、中、高染毒剂量组及对照组，每组10只。采用呼吸道静式染毒，每日染毒一次，染毒周期为2、4、6、8、12周。观察大鼠的一般毒性效应，运用气相色谱-质谱联用法检测吸烟大鼠血浆中尼古丁、可替宁的含量。结果 香烟烟雾暴露组大鼠在第3周后逐渐开始出现间歇咳嗽，腹式呼吸加剧，鼻噪音等症状，暴露时间越长，症状越明显；染毒剂量越高，染毒周期越长，大鼠体重减少越明显，与空白对照组相比，差异有显著性（P < 0.01）；大鼠血浆尼古丁的保留时间为7.5~8.5 min，随暴露时间的延长，暴露剂量的增加，大鼠血浆中尼古丁含量较空白对照组（155±56.65）ng/mL有所增加；大鼠血浆可替宁的保留时间为11.5~12.5 min；随暴露时间的延长，暴露剂量的增加，大鼠血浆中可替宁含量较空白对照组（340±41.97）ng/mL有所增加，且呈现剂量-反应关系，不同暴露周期间可替宁含量的差异有显著性（P < 0.05），且暴露时间与暴露剂量存在交互效应（P < 0.05）。结论 香烟烟雾暴露可造成大鼠机体不同程度的损伤，大鼠血浆可替宁浓度能够有效反映香烟烟雾内暴露情况，且呈现较好的剂量-反应关系。

摘要:目的 探索铜绿假单胞菌致大鼠肺炎模型的制备方法，为后续研究奠定实验基础。方法 将Sprague-Dawley （SD）大鼠48只随机分为4组：A对照组、B气管注射组、C气管插管感染组和D滴鼻感染组。适应饲喂3 d后，分别给予不同造模干预，分别于干预后5、10和15 d动态监测各亚组大鼠体重、体温、白细胞数、肺组织病理学变化等。结果 各模型组大鼠行为学表现、体重、体温、白细胞、肺组织炎症病理学表现均与对照组差异有显著性；②各模型组均证实为铜绿假单胞菌感染，对照组则阴性。结论 经滴鼻途径以铜绿假单胞菌感染大鼠，可得到合格大鼠肺炎模型；此感染途径可避免手术创口带来的炎症反应干扰，简便易行，可推广。

摘要:目的 通过动物实验及体外实验探索饮酒是否促进乳腺癌恶性进展，且这一作用是否与其诱导的慢性应激有关。方法 利用小鼠乳腺癌移植瘤模型，体内观察2%乙醇慢性处理的小鼠乳腺癌E0771细胞对体内细胞生长转移的影响；利用体外细胞学实验观察0.2%乙醇慢性诱导对小鼠乳腺癌细胞E0771增殖、迁移及非锚定生长能力的影响；同时用分子生物学方法探索细胞内ROS水平及慢性内质网应激蛋白如p-eIF2a、Bip、XBP1-s等蛋白表达水平是否发生改变。结果 与对照组相比，饮酒组小鼠体内肿瘤生长速度加快，转移增加；体外酒精处理可以显著促进乳腺癌细胞增殖、迁移等恶性生物学行为，酒精慢性处理可以诱导ROS、内质网应激活化蛋白p-eIF2a、Bip、XBP1-s表达上升。结论 饮酒可能通过诱导乳腺癌细胞内质网应激促进其恶性进展。

摘要:目的 探讨高脂饮食对西藏小型猪胰岛素抵抗（IR）及肝胰岛素受体底物（IRS）1、2表达的影响。方法 将10只西藏小型猪随机分为正常对照组（Ctr）5只饲喂普通饲料、IR模型（IR model）组5只饲喂高脂饲料，连续造模12周。造模12周后，称重并测量体长，计算体质量指数（BMI），空腹取前腔静脉血测定总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）、空腹血糖（FBG）和胰岛素（insulin），计算胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment-estimated insulin resistance，HOMA-IR）；同时进行糖耐量试验，并计算糖耐量曲线下面积（AUC）；取肝组织检测IRS-1和IRS-2基因和蛋白表达，并行油红O、PAS和HE染色，分别观察肝脂质沉积、糖原及组织病理变化。结果 与正常对照组比，IR模型组体重、BMI指数、TC、LDL-C、HDL-C、FFA、FBG、insulin和HOMA-IR指数均显著升高（P<0.05，P<0.01）；糖耐量试验显示血糖和胰岛素水平曲线下降延缓，而AUC_血糖和AUC_胰岛素均明显升高（P<0.05，P<0.01）；肝组织中出现脂质沉积、糖原增加和局部肝细胞浊肿、部分胞核消失或被挤向一端，偶见淋巴细胞浸润；同时肝组织中IRS-1和IRS-2 mRNA和蛋白表达均显著降低（P<0.05，P<0.01）。结论 高脂饮食可引起西藏小型猪胰岛素抵抗，肝组织IRS-1和IRS-2表达降低是高脂饮食影响西藏小型猪胰岛素敏感性的分子机制之一。

摘要:目的 利用护骨素-核因子κB受体活化子-核因子κB受体活化子配体（OPG-RANK-RANKL）系统，探讨饲粮不同钙水平对生长期WHBE兔骨代谢影响。方法 选择21只雄性断奶WHBE兔，随机分为3组（I、Ⅱ、Ⅲ组），分别饲以钙水平为0.95%，1.10%和1.30%，其他营养水平基本一致的饲粮。实验期42 d。实验结束，测定兔血清钙（Ca）、甲状旁腺素（PTH）和骨源性碱性酶（BALP）含量；分别运用荧光定量PCR法和免疫组织化学法对WHBE兔骨组织进行OPG-RANK-RANKL的基因转录和蛋白表达分析。最后以RANKL/OPG比值为指标，评估WHBE兔骨代谢与饲粮钙水平间的相关性。结果 实验结果表明，I、Ⅱ、Ⅲ组在血清Ca、PTH含量和BALP活力上差异无显著性（P>0.05）。WHBE兔骨组织RANKL mRNA表达水平和RANKL/OPG mRNA比值均以Ⅱ组最低，与I、Ⅲ组差异有显著性（P<0.05）。钙水平对WHBE兔骨组织OPG-RANK-RANKL蛋白表达影响显著（P<0.01），Ⅱ组和Ⅲ组OPG蛋白表达阳性指数均极显著高于I组（P<0.01）；而Ⅱ组兔骨组织RANK蛋白表达阳性指数则极显著低于I组和Ⅲ组（P<0.01），RANKL/OPG的蛋白表达阳性指数比值以Ⅱ组最低，与I组差异有显著性（P<0.01）。此外，WHBE兔骨组织RANKL/OPG mRNA比值和的蛋白表达阳性指数比值均与饲粮钙水平间存在显著的二次曲线相关（R²=0.4068，0.8433，P<0.05，P<0.001）。结论 生长期WHBE兔的骨代谢与饲粮钙水平间呈显著相关性，当饲粮钙含量为1.10%时，生长期WHBE兔可获得较理想的骨代谢水平。

摘要:目的 探讨自配的获能液和受精液用于长爪沙鼠体外受精的可行性，为长爪沙鼠的胚胎保种提供参考。方法 用自配的获能液和受精液对长爪沙鼠进行体外受精，并用改良后的KSOM培养液对长爪沙鼠的2细胞胚胎进行体外培养试验。结果 长爪沙鼠体外受精率在60%以上，沙鼠2细胞胚胎能够在体外进一步发育。结论 初步建立了长爪沙鼠体外受精和胚胎发育体系，但需要进一步优化。

摘要:目的 探讨IL-6/STAT3/miR-21在松树皮提取物对脑缺血再灌注损伤小鼠的神经治疗作用和机制。方法 将120只KM小鼠随机分为正常对照组、假手术组、14 d及28 d模型组、14 d及28 d治疗组，每组20只，采取双侧颈总动脉夹闭法制作脑缺血再灌注损伤模型；治疗组在处死前7 d给予松树皮提取物原花青素灌胃治疗，对照组和假手术组采用等量生理盐水灌胃。检测各组小鼠学习、记忆能力的差异及海马组织病理学改变、白介素6、STAT3、p-STAT3蛋白、miR-21的表达水平。结果 同时间节点治疗组小鼠比模型组小鼠学习记忆能力强；治疗组尼氏体排列紊乱，其中一部分细胞形态不规则，胞质着色相对较浅，但比模型组好；28 d模型组IL-6表达水平低于14 d模型组，同时间点治疗组海马组织中的IL-6较模型组明显减少；海马组织中STAT3总蛋白含量各组间差异无显著性（P>0.05），同时间点治疗组p-STAT3含量低于模型组；海马组织中miR-21在14、28 d治疗组的表达低于同时间点模型组，且随时间的延长而降低。结论 松树皮提取物原花青素能通过有效抑制IL-6，显著降低STAT3磷酸化水平，最终降低miR-21表达，从而发挥减轻小鼠脑缺血再灌注脑损伤的作用。

摘要:肠道微生物作为人体重要的"微生物器官"，在人体发育、肠道屏障、免疫调节、营养物质消化吸收、毒素排出、血管生成，以及疾病的发生、发展等方面发挥着巨大的作用。脊椎动物生物模型斑马鱼因其各系统发育与人类相应系统有许多共同特点，且具有胚胎透明、发育快速、肠道易于取样等优势，故成为研究肠道微生物的理想模型。然而在国内关于斑马鱼肠道微生物的研究尚处于起步阶段。文章总结了斑马鱼中肠道微生物的相关功能、肠道微生物群落的构建及其演替规律及肠道微生物结构的影响因素，为研究肠道微生物对人类健康的影响及其在疾病治疗中的应用前景提供理论依据。

摘要:总结患者来源的胃癌异种移植模型（patient-derived xenograft model，PDX）制备中存在的主要问题，提出相应的解决方案。介绍胃癌PDX模型在靶向药物研究中的独特优势，提出在强调肿瘤个体化模型的同时，要善于运用共性研究思维，分析模型的基因型特征开展肿瘤靶向治疗研究。

摘要:无菌动物与宏基因组技术是驱动人体健康微生物组研究的两大动力。没有无菌动物菌群（株）移植模型，就无法确立菌群与疾病的因果关系；没有无菌动物，就没有菌群与人体疾病研究飞速发展的今天与明天。无菌动物应用已形成有菌与无菌动物比较、菌群（株）移植、基因工程动物无菌化、无菌动物发育四种通用研究模式，研究模式的标准化将加大无菌动物研究应用规模及速度。本课题组经过十几年努力，已建成国内体量大、技术体系稳定、服务单位多、具有较大影响力的无菌动物平台，为国内生物医学、畜牧、食品微生物组科学问题解决提供了有力支撑。但是，目前我国无菌动物规模小、效率低、供用平台与应用条件分离，无菌动物基础理论与技术体系尚待发展，难以满足日益增长的应用需求。亟待建立规模化无菌动物高效研究应用体系，以适应我国微生物组研究高速发展。

摘要:抑郁症是一种基因与环境交互影响的重大精神疾病。其发病机制学说众多，但仍未获得广泛认同。肠道微生物是人体最大、最直接的外环境，已成为解析抑郁症的全新切入点。根据最新研究进展，本文将从以下几个方面来进行综述：（1）肠道微生物通过"微生物-肠-脑"轴影响脑神经生化和行为表型；（2）肠道微生物紊乱与抑郁发生的相关性；（3）肠道微生物在抑郁发生中的潜在致病机制；（4）展望以抑郁症肠道微生物紊乱为靶点，开发抑郁症新的诊治方法。

摘要:越来越多的证据表明，肠道微生物群的组成与结直肠癌的发生发展密切相关。无菌动物模型，尤其是无菌鼠模型简单、易获得，为研究微生物群、结直肠肿瘤及机体间的复杂关系提供了重要工具。无菌鼠模型的建立主要通过剖腹产及无菌隔离器饲养和繁育来实现。在此基础之上，可以根据特定的研究目的，建立转基因或药物诱导的特殊类型无菌鼠模型。目前，无菌鼠模型在结直肠癌研究中已经得到了广泛应用。基于无菌鼠模型的研究结果表明，微生物或微生物群可以激活免疫和诱发炎症，从而促进结直肠癌的发生发展；同时也证明，微生态失衡与结直肠癌的发生发展相辅相成、互为因果关系。由于无菌鼠模型是研究微生态失衡所致的结直肠癌及相关疾病研究重要且有效的研究载体，因此，值得进一步推广应用。

摘要:肠道菌在机体健康中发挥重要作用，而其中肠道菌发挥作用的具体机制是什么?无菌小鼠作为一种动物模型，在研究肠道菌作用机制的研究中必不可缺。本综述以无菌小鼠模型为基础，探讨肠道菌对机体系统发育、维持中的作用，并重点讨论一些特有的肠道菌在免疫调控中的具体作用。

摘要:肠道微生物与宿主的生长发育、免疫、代谢等方面均密切相关，但肠道菌群与宿主之间复杂的相互作用在很大程度上仍然是未知的。目前无菌动物已成为探索肠道微生物与宿主相互作用的重要工具，多项研究使用无菌动物模型探讨肠道菌群在宿主代谢、机体免疫系统的发育和成熟等方面的作用，其中包括肠道菌群在自身免疫性疾病发病及预后中的作用。研究发现，肠道菌群作为环境因素之一可能参与类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）发病，然而其因果关系未明。本文将对使用无菌动物探讨肠道微生物参与类风湿关节炎发病的相关性研究作一综述，为进一步深入研究肠道菌群在RA发病中的作用及机制研究提供理论依据。

摘要:肠道和肝之间通过肠-肝轴紧密相连，肠道疾病可以影响肝功能，肝疾病也可以诱发肠道菌群和功能的改变。无菌动物是一种身体所有部位都没有任何活的细菌、真菌、病毒及寄生虫的动物，无菌动物的出现为研究微生物与宿主之间的相互作用提供了有力的实验工具。同时，由于无菌动物缺乏正常肠道菌群的特点，它在肠-肝轴的研究中也起到了极大的推进作用。本文将对无菌动物在肠-肝轴中的应用前景做简要综述。

摘要:膳食干涉对肠道菌群与健康的影响已成为医学健康领域的研究热点，从发展来看，肠道菌群有可能会成为研究饮食方式、保健食品、中药制剂等对人体健康影响的重要靶标。然而，肠道菌群由于其复杂性，研究它和饮食干涉的关系对动物模型有高标准的要求，无菌动物体内外不携带任何活的微生物和寄生虫，在生物医学及人体疾病和健康等方面均有一定的应用和研究，是当前肠道菌群研究中应用最多的基础动物模型。采用无菌动物构建人源菌群动物是研究饮食、菌群与健康关系的常用方式。本文主要综述无菌动物构建人源菌群动物的研究应用及饮食干涉对肠道菌群的影响。

摘要:肠道菌群在哺乳动物及人类健康的作用正日益受到重视。仔猪的健康生长需要一个动态平衡的肠道微生态环境。然而，在猪的生命周期中，从食管到直肠的微生物分布与组成存在时间和空间的变化。健康的肠道菌群具有促进猪的营养代谢，维持肠黏膜屏障，调节免疫应答，抑制病原菌感染等功能。多种因素对猪肠道菌群的形成与稳定具有重要的作用，包括分娩方式（经过产道或剖宫产）、幼龄时期饮食（母乳或配方饲料）、抗生素或抗生素样分子的使用等。本文主要从仔猪肠道微生物组成与定植、功能、影响肠道微生物的因素等方面论述了仔猪肠道微生物与仔猪肠道健康的关系，从而加深肠道微生物对维护仔猪肠道健康作用的认识。

摘要:新生儿坏死性小肠结肠炎（NEC）是新生儿时期严重的胃肠道疾病，病死率高，多见于早产儿，极低出生体重儿，但确切病因及发病机制尚未阐明。积极探寻其发病机制，需建立可靠的动物模型以助于对该病的病因、发病机制及防治等各方面进行深入研究，以改善NEC患儿预后有重要意义。

摘要:乳房炎是奶牛养殖场中的高发病，经抗生素治愈后极易复发。疾病的反复发作导致奶牛的产奶量持续下降，乳头坏死，进而被淘汰。乳房炎也是哺乳期妇女常患的疾病，传统的抗生素治疗损伤新生儿的神经系统。在乳房炎的治疗方法中，抗生素因其大量的负面作用使得其已不适合在乳房炎治疗中滥用，应加快开发新的且有效的抗生素替代物用以治疗或预防乳房炎。益生菌在多种疾病的预防与治疗中都有成功的应用实例。因此，益生菌在乳房炎的治疗与预防中是否真的有效是一个有趣的研究方向。益生菌主要于宿主的肠道中发挥其关键作用，因此肠道菌群与乳房炎发病是否有关联，是益生菌能否应用于乳房炎的治疗中需要解答的首个问题。通过菌群移植，对哺乳期小鼠的乳腺组织以及身体其他各项免疫指标进行监控，探究移植健康奶牛粪便小鼠组与移植乳房炎奶牛粪便小鼠组以及移植乳房炎奶牛粪便同时进行益生菌干预组小鼠的乳腺组织是否发生炎症以及炎症程度如何。奶牛肠道菌群移植入无菌小鼠之后，这种菌群结构与功能之上的差异同时被放大形成鲜明的对比。表明健康的肠道菌群结构对于保持奶牛的健康状态有直接的影响，益生菌可调节奶牛的肠道菌群，对于维持奶牛健康，预防和缓解乳房炎有不可忽视的潜能。

摘要:菌群与宿主相互关系等热点研究促进了对无菌动物需求的迅猛发展。无菌猪作为一种特殊的模式动物，其在科学研究中不仅排除了背景微生物因素的影响，而且与常用的无菌小鼠相比，其在解剖、生理、代谢等方面与人更为相似，因此在生命科学研究领域具有重要的应用价值。本文结合现有国外无菌猪研究进展和本实验室在无菌猪研究积累，就无菌猪的制备与微生物质量控制进行简要探讨。