摘要:目的 　对比小鼠前后肢基因表达谱的变化,筛选小鼠后肢特异表达的基因。方法 　通过NCBI GEO数据库查找小鼠前后肢基因表达芯片,使用Transcriptome Analysis Console 软件对原始数据(5 个前肢E10. 5 d 芯片及4 个后肢E10. 5 d 芯片)进行质控,利用差异倍数为2 倍以上或0. 5 倍以下及 P 值小于0. 05 进行数据过滤,绘制差异表达基因的火山图,并进行聚类分析,构建后肢特异表达基因的相互作用分子网络图。结果 　小鼠胚胎E10. 5d 后肢相较于前肢的差异表达的基因共有275 个,其中上调的基因45 个,下调的基因230 个,构建了后肢特异表达的差异基因分子网络图,找到后肢特异表达核心基因,使用qPCR 检测部分后肢特异表达的基因,结果与芯片结果一致。结论 　应用小鼠表达谱芯片成功筛选出后肢特异表达的基因,为哺乳动物肢体发育的研究提供基础。

摘要:目的 　建立基于临床肿瘤标本的胃癌转移模型,为胃癌的转移研究提供个体化动物模型。方法 将胃癌新鲜的手术标本移植到裸鼠皮下,建立胃癌患者异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型。进一步通过手术将皮下瘤组织原位移植到裸鼠胃部肌层,连续观察裸鼠的体征状态,通过近红外荧光活体成像技术检测肿瘤转移的发生。解剖荷瘤小鼠,将肺部转移灶进一步移植裸鼠皮下获得实体瘤。HE 染色观察原发瘤与转移瘤的结构特征,(short tandem repeat)STR 分析原发瘤和转移瘤的遗传特性。PCR-Array 分析转移瘤和原发瘤中转移相关基因的表达。结果 　成功建立胃癌PDX 模型,移植瘤组织结构与患者保持基本一致;通过胃部原位移植发现编号C19751 的小鼠发生肺和肝的转移。其中肺转移灶皮下移植后获得了实体瘤,STR 分析显示原发瘤保持了与肺转移瘤一致的遗传特征。PCR-Array 结果显示,与原发瘤相比,转移瘤中CXCL12,IGF1 和MMP2 基因表达均显著上调。结论 利用临床肿瘤标本成功建立胃癌转移模型,为胃癌转移研究提供了良好的个体化模型。

摘要:目的 　观察电刺激下布比卡因心肌细胞线粒体形态变化及活性氧(reactive oxygen species, ROS)生成量,探讨建立理想的布比卡因中毒的大鼠心肌细胞模型。方法 　采用Langendroff 装置新鲜分离雄性SD 大鼠心肌细胞,细胞计数后将其转移至doff 管中随机分为四组:DMEM 静置组、DMEM 电刺激组、布比卡因静置组、布比卡因电刺激组。实验重复五次。采用透射电镜观察心肌细胞线粒体形态,并使用多功能微孔板检测仪测量ROS 生成量。结果 　DMEM 电刺激组线粒体肿胀程度及ROS 生成量与DMEM 静置组相比差异无显著性( P > 0. 05);而布比卡因电刺激组线粒体肿胀程度明显高于布比卡因静置组( P = 0. 000),且ROS 生成量也明显升高( P < 0. 05)。结论 电刺激下心肌细胞呈节律性收缩,能更好地模拟临床布比卡因中毒时心肌线粒体损伤。

摘要:目的 　构建不同程度恐惧应激大鼠模型,探究恐惧应激对LE 大鼠视觉认知能力的影响。方法 　采用足底电击作为应激刺激,设计认知抉择实验,采集杏仁核脑区神经响应信号进行功能网络分析,评价大鼠视觉认知效果。首先,将实验大鼠分成强(S+)、弱(S)恐惧应激组与对照组(N),分别设定不同强度的足底电击刺激;然后对其进行单一图形“△”的视觉认知强化训练;最后,采用双图(“△”和“十”图形)进行视觉抉择测试实验。另外结合复杂网络理论,构建恐惧应激大鼠杏仁核神经核团的视觉认知功能网络,通过平均路径长度和聚类系数表征脑功能网路的信息传递效率。结果 　完成视觉认知强化训练所需时间,S+组显著高于S、N 组,强化训练前期S 组显著高于N 组,后期两组无显著性差异;认知抉择实验中,S 组与N 组均形成视觉认知联结,而S+组未形成视觉认知联结;脑功能网络分析中,S 组与N 组杏仁核神经元之间形成有效的视觉信息传递,而S+组未形成。结论 　恐惧应激对视觉认知造成消极影响,且随着恐惧程度的增强认知效果显著变差。

摘要:目的 　观察一种新型高脂血症易感WSHc 大鼠经高脂饲料诱导后血脂的动态变化和心血管并发症病理特点,为WSHc 大鼠的应用提供参考。方法 　取7~8 周龄雌性WSHc 大鼠20 只和Wistar 大鼠10 只,进行高脂饲喂,另取同周龄同性别的WSHc 大鼠和Wistar 大鼠各10 只饲喂普通饲料,分别作为正常对照。观察高脂饲喂2、4、8、12、16 周时的血脂动态变化,饲喂16 周后采用心动超声检测大鼠心功能及左心结构,病理组织学观察心脏及主动脉病变。结果 　与正常对照组比,高脂饲喂2 周后WSHc 大鼠与Wistar 大鼠血清总胆固醇(TC)与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)均显著升高;高脂饲喂的WSHc 大鼠TC、LDL-c 水平为:(6. 34±2. 12)mmol/ L、(2. 56±0. 94)mmol/ L,而高脂饲喂的Wistar 大鼠TC、LDL-c 水平仅为(2. 93±0. 23)mmol/ L,(0. 63±0. 12)mmol/ L;在高脂饲喂期间,WSHc 大鼠TC 始终维持在高水平状态。饲喂16 周后,WSHc 大鼠心脏射血分数升高,左心室室壁增厚,并出现心肌纤维化,心肌细胞凋亡程度增高;主动脉内膜增厚,弹力纤维排列紊乱,形成早期动脉粥样硬化病变。而Wistar大鼠经高脂饲料诱导后,心功能及心血管病变不明显。结论 　WSHc 大鼠对外源性胆固醇敏感,高脂饲喂后易发高脂血症及心血管疾病,且TC、LDL-c 水平与临床高脂血症更接近,相较于普通大鼠,更适用于高脂血症及相关心血管并发症的实验研究。

摘要:目的 　为大鼠慢性进行性肾病(chronic progressive nephropathy,CPN)的发病和相关的病理学研究积累资料。方法 　进口SD 大鼠60 只、国产SD 大鼠120 只、国产Wistar 大鼠240 只,分别给予进口饲料和国产饲料,持续饲养104 周后剖杀,采集大鼠肾并进行常规制片,HE 和特殊染色后,显微镜观察组织形态改变,总结和比较不同品系、不同性别、不同饲料喂养的大鼠CPN 的发生率和病变特点。结果 　肾小球毛细血管基底膜和系膜增生及节段硬化为CPN 发病的先发病变,肾小管上皮的变性和再生以及间肾质纤维化是继发性改变;CPN 的总发病率为31. 87%,其中雄性大鼠的发生率为48. 54%,雌性大鼠的发生率为15. 12%;Wistar 大鼠CPN 的发生率高于SD 大鼠;进口SD 大鼠CPN 发病率高于国产SD 大鼠;用蛋白含量高的饲料喂养大鼠CPN 的发生率高于蛋白含量低的饲料喂养的大鼠。结论 　肾小球病变在先,导致肾小管出现继发性改变。CPN 有较高的发病率,性别和品系之间有差异,饲料蛋白含量不同CPN 发生率有差异。

摘要:目的 　研究生理盐水实验性干预对肉鸡盲肠微生物区系和短链脂肪酸含量的影响,以期为早期菌群干预实验的研究提供一定的理论依据。方法 　选取80 只初出壳的小鸡,随机分为2 组,分别为对照组(C 组)和生理盐水组(S 组)。出壳后前2 d,连续每天给S 组小鸡灌服0. 5 mL 灭菌的生理盐水,C 组不做处理。第3 天,第7天于两组分别随机挑选8 只鸡,测定其体重后屠宰取其盲肠内容物,采用Illumina Miseq 高通量测序技术对盲肠内容物菌群结构进行测定,并用气相色谱法测定盲肠内容物中短链脂肪酸的含量。结果 　生理盐水实验性干预对肉鸡早期阶段的平均日增重无显著影响( P > 0. 05)。在门的水平上,两组肉鸡盲肠菌群占比基本相似,厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)为早期肉鸡肠道内的优势菌门。在属的水平,3日龄时S 组肉鸡盲肠中拟杆菌属(Bacteroides)和蓝细菌属(Cyanobacteria_norank)的相对丰度较C 组分别提高了160%和143%( P < 0. 05);7 日龄时,两组间盲肠菌属的相对丰度无显著差异。此外,生理盐水实验性干预可极显著降低3 日龄肉鸡盲肠内容物中乙酸、丁酸和异戊酸的含量( P < 0. 01),但7 日龄时两组肉鸡盲肠内容物中短链脂肪酸的含量无显著差异( P > 0. 05)。结论 　生理盐水实验性干预会对3 日龄肉鸡盲肠菌群结构及短链脂肪酸含量产生一定的影响,但这种影响不具有持续性,随着日龄的增加会逐渐消失。

摘要:目的 　通过足底电击建立大鼠内脏高敏感动物模型,并评价其有效性和优势。方法 　将雌性SD 大鼠随机分为正常对照(NC)组、足底电击(FSS)组和避水应激(WAS)组。NC 组每天放入模拟应激箱中1 h 不予刺激;FSS 组每天置于电击箱中1 h,给予电击刺激,刺激电压为40 V,刺激频率为20 次/ min,每次1 s,共5 min;WAS组每天给予1 h 避水应激;造模期为10 d。观察记录大鼠一般情况和排便情况,用腹壁回缩反射(AWR)检测内脏敏感性,用ELISA 法检测血清CRF、ACTH、CORT、5-HT 浓度和结肠组织5-HT 浓度。结果 　(1) FSS 组大鼠的内脏敏感性明显高于WAS 组和NC 组( P < 0. 05),结肠黏膜无明显病理性损伤。(2) FSS 组大鼠血清CRF、ACTH、CORT、5-HT 浓度和结肠组织5-HT 浓度均较WAS 组和NC 组明显升高( P < 0. 05)。(3) FSS 组大鼠排便量明显高于WAS 组和NC 组( P < 0. 05),其粪便含水量明显高于NC 组( P < 0. 05),而且其大鼠排便量和粪便含水量数值稳定。结论 　足底电击造模法可建立大鼠内脏高敏感模型且优于避水应激法。

摘要:目的 　研究姜黄素对慢性肾病(CKD)肾纤维化的保护作用,并探讨可能作用机制。方法 　30 只C57BL/6 J 小鼠随机分成假手术对照组(NC)、5/6 肾结扎模型组(LIG)和姜黄素治疗组(LIG+CUR),每组10 只,按照改良的5/6 肾结扎方法制作CKD 动物模型,姜黄素组小鼠给予含姜黄素饲料(每日100 mg/ kg),其余组给予正常饲料,三月后牺牲小鼠,检测纤维化指标α-SMA 及参与慢性肾病纤维化的Hippo 通路转录激活子Yap。结果 肾功能检测结果显示,与假手术组相比,结扎组中的尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)显著增高,给予姜黄素可以有效保护肾功能受损;H&E、Masson 和免疫组化结果均显示,结扎组小鼠的肾出现明显肾小管病变和一定程度的纤维化改变,给予姜黄素后纤维化程度显著减轻( P < 0. 05);而Yap 蛋白在造模后mRNA 和蛋白水平均出现升高,姜黄素处理后则显著下降( P < 0. 05)。结论 　姜黄素可有效改善5/6 肾结扎诱导的慢性肾病病症和减轻纤维化病变,机制研究结果初步提示可能与降低Hippo 信号通路中的Yap 表达有关。

摘要:目的 　构建大鼠COPD-OSAHS 重叠综合征(OS)模型,为开展OS 基础研究提供可行手段及实验平台。方法 　将14 只SPF 级雌性6 周龄SD 大鼠随机分为实验组和对照组,其中实验组(8 只)予烟熏和间歇低氧暴露,对照组(6 只)予假烟熏和正常氧暴露。8 周后计算实验组大鼠的存活率,并对比两组大鼠的一般情况、血气分析、右心室肥厚指数、平均肺泡数、平均肺泡间隔、肺组织病理改变。结果 　间歇低氧箱氧浓度-时间变化曲线显示氧浓度均周期性降低及恢复正常,成功模拟出间歇低氧气体环境;实验组最终存活6 只,存活率为75%,对照组6只大鼠全部存活。与对照组相比,实验组6 只存活的SD 大鼠一般情况较差,存在酸中毒、低氧血症、二氧化碳潴留、右心室肥厚、平均肺泡截距明显增大、平均肺泡数明显减少( P < 0. 05),差异有统计学意义;肺组织病理观察显示肺间质炎症浸润、支气管壁淋巴细胞增生、细支气管管壁平滑肌增生、管壁平滑肌部分断裂、杯状细胞增生及肺气肿。结论 　采用烟熏联合间歇低氧暴露方法成功建立了大鼠OS 模型,更加有意义及客观的模型评价指标有待研究发现。

摘要:目的 　研究黄芪对高血压大鼠血管重构中内质网应激反应(ERS)的影响,并探讨其血管保护的分子机制。方法 　将140 只大鼠分为对照组、模型组、干预组。采用腹主动脉狭窄术建立高血压大鼠模型,干预组大鼠腹腔注射黄芪注射液8 g/ (kg·d)。各组术后1、2、4、6 周时采用鼠尾动脉测压法测量大鼠血压,测量血管肌层厚度、Western blot 检测CRT 和caspase-12 的表达、TUNEL 法检测血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡率。结果 　模型组术后VSMC 形态改变,血压、动脉血管壁肌层厚度和VSMC 凋亡率可时间依赖性增大,ERS 分子CRT 在术后1、2 周表达显著升高,4、6 周表达降低,而caspase-12 分子2 周以后表达才升高,且随时间推迟,这种高表达越显著。黄芪干预对比模型组,VSMC 形态有一定改善,血压、血管壁肌层厚度和VSMC 凋亡率均显著降低,6 周时降低幅度最大,同时黄芪能抑制CRT 的早期高表达,能抑制caspase-12 的高表达,这种抑制作用随着时间的推迟越明显。结论 黄芪对高血压大鼠有一定降压作用,可改善血管重构,其机制可能与其调节ERS 保护性和促凋亡因子有关。

摘要:目的 　观察不同年龄恒河猴肠道菌群结构和丰度的变化。方法 　50 只恒河猴,分为成年(5 ~ 10岁)、老年(10 岁以上)2 组,其中成年组33 只,老年组17 只。采集动物的新鲜直肠粪便,提取DNA 后使用Illumina高通量测序平台对样本中细菌16S rDNA-V3 区进行测序,定量分析肠道菌群的结构和丰度。结果 　老年组和成年组获得的优化序列数差异无显著性( P > 0. 05)。α-多样性分析,老年组恒河猴肠道菌群的Chao1 指数( P =0. 0174)、Simpson 指数( P =0. 0258)、ACE 指数( P =0. 0121)与成年组比较降低,Shannon 指数与成年组比较升高( P =0. 0132)。老年组与成年组相比,在门水平,拟杆菌门(Bacteroidetes) 相对丰度升高( P = 0. 0013),厚壁菌门(Firmicutes)、螺旋体门(Spirochaetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、粘胶球形菌门(Lentisphaerae)相对丰度降低( P = 0. 0283, P = 0. 0002, P = 0. 0482, P = 0. 0242)。在科水平, Prevotellaceae 相对丰度升高( P = 0. 0001),Ruminococcaceae、Clostridiales、Spirochaetaceae、Christensenellaceae 相对丰度降低( P = 0. 0039, P = 0. 0080, P = 0. 0002, P =0. 0021)。在属水平,老年组unidentified_Prevotellaceae 相对丰度升高( P = 0. 0001),乳杆菌属(Lactobacillus)、八迭球菌(Sarcina)、unidentified_Spirochaetaceae 相对丰度降低( P =0. 0114, P =0. 0227, P =0. 0028)。β-多样性分析,老年组肠道菌群与成年组分布在不同区域, 差异有显著性( P = 0. 003)。LEfSe 分析, 在成年组, 链球菌属(Streptococcus)、布赫纳氏菌属(buchnera)、乳杆菌属(lactobacillus)是具有统计学意义的生物标记物。结论 　恒河猴肠道菌群的结构随年龄增长而改变。丰度降低,多样性增高。

摘要:目的 　建立体内模型评估药物涂层球囊在动物体内是否有微粒栓塞的风险,探索闭塞血管直径与涂层粒径的关系。方法 　股动脉入路,用裸球囊封堵腹主动脉远心端,将药物涂层球囊输送至兔腹主动脉,在腹主动脉近心端扩张,随访观察双肾是否有典型血管梗塞的组织坏死现象。结果 　异常肾主要表现是体积萎缩,表面布满凹坑,粗糙。切片染色发现肾小球充血、无核、细胞核溶解、纤维化、炎性细胞聚集等。肾坏死的病理历程从皮质到髓质,程度与剂量有关,且随时间未见有自愈好转。结论 　设计的动物模型较灵敏,可以用来评估药物球囊在体内的栓塞风险。

摘要:目的 　观察木豆素于抗抑郁方面的作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法 　采用小鼠慢性不可预见温和应激模型(chronic unpredictable mild stress,CUMS),进行糖水偏好实验评价经木豆素处理的小鼠的快感缺失情况,采用酶联免疫吸附测定法测定小鼠血清皮质酮的含量,采用LC-MS/ MS 法检测小鼠皮层和海马中多种神经递质的含量。结果 　木豆素可以逆转CUMS 引起的糖水偏爱指数降低和血清皮质酮水平升高。并且与正常组相比,模型组小鼠皮层和海马中相关神经递质的含量发生了显著的改变,而木豆素给药对于CUMS 小鼠体内相关神经递质具有明显的调节作用。结论 　木豆素可能通过降低血清皮质酮水平和调节脑内神经递质来实现抗抑郁作用。

摘要:目的 　拟将尼罗红包裹入纳米制剂中,利用其荧光特性来考察纳米制剂在荷瘤鼠体内的肿瘤靶向性与组织分布情况。方法 　采用CCK-8 法检测尼罗红纳米乳[NRNE(O)]对H1688 的细胞毒性。建立BALB/ c 裸鼠肺癌模型,灌胃给予尼罗红混悬液(NRS) 及NRNE(O),通过小动物活体成像系统观察其在荷瘤裸鼠中荧光强度的动态分布情况。结果 　NRNE(O)具有较低的细胞毒性和良好的生物相容性,并且在体内的吸收量及肿瘤部位的蓄积量均高于NRS;NR 在纳米制剂中能快速、稳定、清晰地反映纳米制剂在小鼠体内的动态分布情况。结论 本研究中制备的NRNE(O)的稳定性好,为尼罗红作为示踪剂应用于纳米制剂在动物体内的研究提供了重要的研究手段。

摘要:目的 　对广西巴马小型猪组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)基因CDS 区进行克隆及生物信息学分析。方法 　从广西巴马小猪的皮下脂肪中提取总RNA,通过RT-PCR 方法扩增获得CTSK 基因CDS 区序列,并采用相关生物信息学软件对其序列特征、系统进化、编码蛋白结构和理化性质进行分析。结果 　广西巴马小型猪CTSK 基因CDS 全长993 bp,编码330 个氨基酸,与NCBI 上公布的普通猪(NM_214302. 1)CTSK 基因序列完全一致。同源性比对结果发现,CTSK 基因在进化过程中具有较高的保守性。广西巴马小型猪CTSK 蛋白具有明显的亲水性区域,在第17-330 氨基酸位置区域存在一条信号肽序列,不存在跨膜结构域,二级结构元件由α 螺旋、β 折叠、无规卷曲和延伸链组成。修饰结构预测发现CTSK 蛋白存在两处N 糖基化位点,亚细胞定位发现其可能主要分布于内质网和细胞核。结论 　本研究成功克隆了广西巴马小型猪CTSK 基因CDS 序列并进行分析,为今后进一步深入研究该基因功能和建立相关疾病动物模型提供理论基础。

摘要:实验动物广泛应用于科学研究领域,实验小型猪在医学研究领域中越来越得到重视。中国小型猪种源丰富,不同种群各具特色,遗传性状稳定。近年来中国实验小型猪的研究处于快速发展阶段,生产和使用均在逐年增加。我国发展实验小型猪具有天然封闭群特性和高度近交等得天独厚的条件,品系化、标准化、规模化和产业化是我国实验用小型猪的主要发展趋势。我国实验用小型猪发展当前面临的问题主要表现在:保护力度小、发展阻力大、育成品系少三个方面。育成中国各具特色的实验用小型猪品系需要增加投入,利用先进的科学技术例如基因编辑和动物克隆技术,加速小型猪的定向化培育进程。

摘要:目前,心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)是最常见的导致人类死亡原因,但其发病机制和防治仍需要进一步研究。异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)是一种β-肾上腺素能受体激动剂,能够通过炎症反应、氧化应激、内质网应激、自噬和凋亡等直接和间接地作用于心肌组织,可以引起轻度心肌损伤、心肌梗死、心肌肥厚,甚至心力衰竭等。因此,本文从形态与功能学特征、发病机理等方面阐述ISO 所致的动物心肌损伤模型的研究进展。

摘要:随机光学重建显微镜(stochastic optical reconstruction microscopy,STORM) 技术和受激发射损耗(stimulated emission depletion,STED)显微镜技术是近年来发展迅速的两种超分辨率荧光显微镜技术。这两种技术均提供超越传统荧光显微镜分辨率成像的功能,具有多色显像,三维成像以及活细胞内成像的潜力。在这篇综述中,我们关注两种技术荧光控制、激光强度等技术参数设定,同时结合样品制备、图像采集与处理等流程优化对比两者在分辨率、图像采集时间及具体应用中的优劣。STORM 可获得更高的三维分辨率,但可能需要更长的图像采集时间。STED 需要较高损耗光强度,却能在图像采集后立即生成超分辨率图像,不需要额外图像数据处理。最终,选择STORM 和STED 不仅取决于技术的具体应用,还取决于操作者优化各环节技术参数的能力,从而决定图像质量。

摘要:肝癌动物模型是研究肝癌的重要依据,其在揭示肿瘤发病机制、评估治疗方法中的角色不可或缺。近年来,研究人员借助不同类型的动物模型不断获得有关肝癌及其治疗预后的丰富数据。本文通过总结常用的诱发性和移植性大鼠肝癌的建模方式及应用,以呈现近年来在构建大鼠肝癌模型实践中的进展。

摘要:肠道微生物与宿主机体健康息息相关。粪便微生物移植(又称为粪菌移植,fecal microbiota transplantation,FMT)通过将健康供体粪便中的完整肠道菌群移入肠道微生态失衡的患者胃肠道内,经肠道菌群重构、恢复至正常状态。用FMT 治疗某些肠道疾病如复发性艰难梭菌感染、溃疡性结肠炎、肠易激综合症、克罗恩病效果显著,且可能对因肠道菌群紊乱引起的肠道外疾病的治疗有潜在价值。本文主要对FMT 技术的发展进程、在疾病上的研究以及在畜牧业上的应用潜能进行综述,并分析其应用的制约因素。