摘要: 目的 建立肿瘤坏死因子受体超家族成员 4(TNFRSF4)基因人源化小鼠模型,同时建立 TNFRSF4 基因敲除小鼠模型,为针对 TNFRSF4 靶点的肿瘤治疗性抗体研发和筛选提供有效的小鼠模型,并为研究 TNFRSF4 在免疫过程中的作用机制提供小鼠模型。 方法 利用 CRISPR/ Cas9 技术,建立 TNFRSF4 基因人源化和敲除小鼠模型,利用 PCR、RT-PCR、免疫组织化学、流式细胞术等方法鉴定及比较分析人源化小鼠、敲除小鼠和野生型小鼠的差异。 结果 获得表达人源 TNFRSF4 基因小鼠和 TNFRSF4 基因敲除小鼠。 在 TNFRSF4 人源化小鼠中稳定表达人源 TNFRSF4,未检测到小鼠 TNFRSF4 表达。 在 TNFRSF4 敲除小鼠中未检测到 TNFRSF4 表达。 TNFRSF4 人源化及敲除小鼠出生后 6 个月内均正常存活,组织病理学表型及免疫系统未见明显异常。 结论 利用 CRISPR/ Cas9 技术构建 TNFRSF4 人源化小鼠及敲除小鼠,可用于筛选及评估与 TNFRSF4 基因相关的治疗性抗体及药物或研究 TNFRSF4 在免疫过程中作用机制。

摘要: 目的 胆碱能系统损伤是阿尔兹海默病(Alzheimer’ s disease,AD)的重要发病机制,但单纯应用拟胆碱药物治疗 AD 效果不理想,这可能与其复杂的网络通路有关。 本研究旨在建立一种基底前脑 Meynert 基底核 (nucleus basalis of Meynert,NBM)催产素受体(oxytocin receptor,OXTR)基因沉默的大鼠模型,评价 OXTR 敲低对认知行为和胆碱能通路的影响,为研究 AD 的复合治疗靶点提供基础。 方法 (1)利用重组腺相关病毒( recombinant adeno-associated virus,rAAV)和短发夹 RNA( short hairpin RNA,shRNA)介导的基因干扰技术,将不同稀释倍数的 rAAV9-EGFP-Oxtr-shRNA(OXTR-shRNA)病毒注射至大鼠基底前脑 NBM 区,分别于注射后 2、3、4、5 周,观察各组脑组织 NBM 区 EGFP 荧光表达,比较病毒感染效果,确定最佳的病毒感染剂量与感染时间进行下一步实验。 (2) 将大鼠随机分为假手术( Sham)组、阴性对照病毒(Con-shRNA)组、OXTR 沉默(OXTR-shRNA)组,Morris 水迷宫和避暗实验检测大鼠的空间学习记忆和恐惧记忆;免疫荧光染色检测 NBM 区 OXTR 蛋白表达水平,评估 OXTR 沉默 效果;ELISA 法检测大鼠皮质区乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)水平变化;免疫荧光染色检测皮质区乙酰胆碱转移酶 (choline acetyltransferase,ChAT)的表达。 结果 ( 1) OXTR-shRNA 的感染效果呈剂量和时间依赖性;( 2) OXTR- shRNA 组大鼠在水迷宫实验中的逃避潜伏期高于假手术组和 Con-shRNA 组;在避暗实验的巩固阶段,OXTR- shRNA 组大鼠进入暗箱的潜伏期低于假手术组和 Con-shRNA 组;免疫荧光染色结果显示 OXTR-shRNA 组 NBM 区 OXTR 表达减少;OXTR-shRNA 组皮质中 Ach 水平以及 ChAT 表达低于另外两组。 结论 成功建立了一种基底前脑 OXTR 敲减动物模型,该模型具有学习记忆障碍、胆碱能系统损伤的表型,将为认知功能障碍相关疾病的研究提供依据。

摘要: 目的 探究羊骨胶原肽钙螯合物(collagen peptide chelated calcium,CPCC)对雌激素缺乏大鼠肾的保护作用及相关机制。 方法 摘除大鼠双侧卵巢,CPCC 高(CPCC-H) 和低(CPCC-L) 剂量组的灌胃剂量分别为 5 g / (kg·d)和 1 g / (kg·d),假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水。 8 周后测定肾抗氧化指标并观察肾组织形态学变化;qRT-PCR 测定 JAK/ STAT 通路相关基因 mRNA 表达量。 结果 与假手术组相比,去卵巢模型组大鼠肾 T- SOD、GSH-Px 和 T-AOC 水平极显著下降、MDA 含量极显著增加(P< 0. 01),肾组织结构紊乱、淋巴细胞浸润;血清中炎性因子 IL-2、TNF-α 和 IFN-γ 水平极显著增加(P< 0. 01),JAK2、STAT1 和 STAT3 基因 mRNA 的相对表达量极显著增加(P< 0. 01)。 与模型组相比,CPCC 剂量组的 T-SOD、GSH-Px 和 T-AOC 水平极显著增加,MDA 含量极显著下降(P< 0. 01);肾组织病变明显减轻,淋巴细胞数量减少;血清中各炎性因子水平极显著下降(P< 0. 01); JAK2、STAT1 和 STAT3 基因 mRNA 表达量均极显著下降(P< 0. 01)。 结论 CPCC 可抑制去卵巢大鼠的氧化应激水平,可能通过 JAK/ STAT 通路改善肾组织病变。

摘要: 目的 本研究旨在探讨蜂王浆(Royal Jelly, RJ)对雌性未孕大鼠(青春期末到性成熟初期)血清激素水平和乳腺组织的影响。 方法 将 50 只 Wistar 大鼠随机分为 5 组,每组 10 只。 处理组大鼠每只灌服不同浓度 (100、200、400、800 mg / (kg·d))RJ,对照组(CK 组)大鼠每只灌服无菌水(每天 2 mL)。 35 d 后,测定大鼠生长指标和乳头直径;运用酶联免疫吸附测定法测定大鼠血清雌激素(E2)、孕激素(P)、催乳素(PRL)水平;对乳腺组织进行苏木精-伊红染色后,观察其组织学形态变化。 结果 RJ200 组和 RJ400 组大鼠血清 E2、PRL 水平显著高于 CK 组(P< 0. 05),而 RJ200、RJ400 和 RJ800 组血清 P 水平显著低于 CK 组(P< 0. 05),RJ100 组与 CK 组血清 E2、P、 PRL 水平均不显著(P< 0. 05)。 乳腺导管直径结果显示,与 CK 组相比,各处理组导管直径均显著升高( P< 0. 05),其中 RJ100 组 < RJ200、RJ400 和 RJ800 组,乳腺组织学变化与导管直径结果相一致。 另外,RJ200 和 RJ800 组大鼠乳头直径较 CK 组略有增加(P< 0. 05)。 结论 每日摄入低剂量(100 mg / kg)RJ 不会对雌性未孕大鼠血清激素水平和乳腺发育造成影响。 但当摄入量达到 200 mg / (kg·d)或 400 mg / ( kg·d)时,可能对雌性未孕大鼠乳腺组织的发育和血清激素水平的稳定带来不利影响。

摘要: 目的 研究增龄雌性小鼠肝蛋白组学变化,寻找增龄相关核心差异蛋白,基于蛋白质组学探讨增龄机理,为衰老机制的研究提供分子靶位。 方法 使用同位素标记的相对与绝对定量( iTRAQ 法)、LC-MS 及生物信息学分析 12 月龄、3 月龄雌性小鼠间差异蛋白。 结果 两组对比鉴定到差异蛋白数 369 个,其中 182 个表现为上调,187 个表现为下调。 筛选后得到核心 DEP 中与增龄相关的差异蛋白共 7 个。 结论 差异蛋白的挖掘与深入研究,将有助于阐明衰老机制及发现潜在的标志物,为衰老的预防及增龄性疾病的诊断和治疗提供新的分子靶位。

摘要: 目的 探究羊骨胶原肽(sheep bone collagen peptide,SBCP)对正常状态及脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)活化状态巨噬细胞免疫能力的影响。 方法 以不同剂量的 SBCP 作用于未经 LPS 活化和 LPS 活化的大鼠腹 腔巨噬细胞,分别以 MTT 法和中性红法测定巨噬细胞代谢活力和吞噬活性,Griess 法测定 NO 分泌量,ELISA 检测 TNF-α、IL-6 含量,qRT-PCR 测定 Toll 样受体(Toll-like receptors,TLRs)通路相关基因及负性调控因子单 Ig 区 IL-1 相关受体(Single Ig IL-1-related receptor,SIGIRR)的 mRNA 表达量。 结果 SBCP 作用于正常状态的巨噬细胞,可提高其代谢活力,吞噬活性及 NO、TNF-α、IL-6 分泌量,上调 TLRs 通路相关基因表达量,下调 SIGIRR mRNA 表达量, 均呈剂量依赖性,SBCP 剂量为 10⁵ μg / mL 时,与 LPS 空白组无显著性差异。 SBCP 作用于 LPS 活化的巨噬细胞时, 可抑制其代谢活力,以 10² μg / mL 效果最佳;对吞噬活性及 NO、TNF-α、IL-6 分泌量的抑制均以 10³ μg / mL 最佳;并下调 TLRs 相关基因表达量且上调 SIGIRR mRNA 的表达量。 结论 SBCP 通过 TLRs 信号通路对炎症反应发挥双向调节作用,剂量为 10 ~ 10⁴ μg / mL 时可增强巨噬细胞的免疫能力,10⁵ μg / mL 时可诱导巨噬细胞释放大量炎症介质。 而对 LPS 诱导的炎症反应,SBCP 各剂量组均具有抑制作用。

摘要: 目的 哺乳动物附睾精子成熟、运动能力的获得与维持是保证精子执行正常功能、完成受精的前提和基础,但调控此过程的机制仍未完全阐明。 SRC 激酶参与小鼠精子获能的调控,Ser/ Thr 磷酸酶 PP1γ2 / PP2A 是调控小鼠精子成熟、运动性获得的关键酶,但二者是否具有相互作用且这种相互作用是否调控着精子运动并不清楚。 为此,本研究探究了小鼠精子中 SRC 激酶与磷酸酶 PP1γ2 / PP2A 的关联性及其对精子运动的调控作用,旨在阐明其调控精子运动的作用机制。 方法 通过 Western Blot 技术、酶活性分析技术以及免疫共沉淀技术分析昆明小鼠附睾头和附睾尾精子苏氨酸磷酸化水平、SRC 激酶活性、附睾头和附睾尾精子酶活性和 SRC 激酶与 Ser/ Thr 磷酸酶相互关系,探讨 SRC 激酶抑制剂(SU6656)和激活剂(sc-3052)分别对附睾尾、附睾头精子磷酸酶活性和运动度的影响。 结果 附睾尾精子苏氨酸磷酸化水平高于附睾头精子;附睾头精子中的 SRC 激酶活性低于小鼠附睾尾精子;附睾头精子磷酸酶活性显著高于附睾尾精子磷酸酶活性(P< 0. 05);附睾尾精子中 SRC 激酶与 PP1γ2 / PP2A 具有关联性作用,进而调控精子活力;在 SRC 激酶活性较高的附睾尾精子中,添加 SU6656,磷酸酶 PP1γ2 / PP2A 活性随之增加,精子活力下降;在 SRC 激酶活性较低的附睾头精子中,添加 sc-3052,磷酸酶 PP1γ2 / PP2A 活性随之降,而精子活力增加。 结论 小鼠附睾头与附睾尾精子中 SRC 激酶和磷酸酶 PP1γ2 / PP2A 的活性具有显著差异; 小鼠精子中 SRC 激酶与 PP1γ2 / PP2A 具有相互作用,呈负相关性,即 SRC 激酶通过抑制精子中磷酸酶 PP1γ2 / PP2A 活性以调控精子运动。

摘要: 目的 采用尾静脉注射突变 p53 基因 CRISPR/ Cas9 质粒和 H22 细胞建立肝癌模型。 方法 将健康雄性 BALB/ c 小鼠随机空白组(生理盐水)、质粒组(质粒)、对照组(H22 细胞+盐水)、实验组(H22 细胞+质粒),每组 25 只。 尾静脉注射建立肝癌模型。 分别在注射后的 2、3、4、5 周中取材,眼眶采血检测小鼠血清转氨酶(ALT/ AST)水平。 观察肝、肺表面变化及结节数目,计算各组小鼠的成模率、死亡率以及脏器指数。 HE 染色观察小鼠肝的组织病理形态学改变。 免疫组化、Western Blot 等方法检测小鼠肝中 p53 及 PCNA 蛋白的表达情况。 结果 实验组和对照组均能成功构建转移性肝癌小鼠模型,其中实验组和对照组小鼠的成模率分别为 60. 87%和 45. 83%,死亡率为 4. 35%和 29. 17%。 两组小鼠血清 ALT、AST 水平均有显著增加,肝表面按时间顺序也出现大小不等的囊肿和白色颗粒状结节。 HE 结果显示 5 周后实验组和对照组小鼠肝小叶结构均有不同程度的破坏,呈明显肿瘤病理学改变。 质粒组与实验组小鼠肝中 p53 蛋白的表达量明显降低(P< 0. 05);实验组和对照组的肝组织中 PCNA 蛋白表达显著增加,且实验组表达量明显高于对照组(P< 0. 05)。 结论 通过尾静脉注射突变 p53 基因 CRISPR/ Cas9 质粒和 H22 细胞的方法能够成功快速构建转移性肝癌小鼠模型。

摘要: 目的 研究阿里红多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)抗肿瘤作用及其抑瘤机制。 方法 通过腋部皮下接种 S180 小鼠腹水制备荷瘤小鼠模型。 造模后随机分为空白组、模型组、阳性对照组、FOPS 低中高剂量组,每组 10 只。 空白组与模型组灌胃生理盐水,阳性对照组腹腔注射 50 mg / kg 环磷酰胺,低、中、高剂量小鼠分别灌胃不同浓度(50、100、200 mg / kg)FOPS 混悬液。 给药 15 d 后,检测各组小鼠抑瘤率及脏器指数;检测外周血白细胞、淋巴细胞数目;ELISA 法检测荷瘤小鼠血清 TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-1β、IL-6 等细胞因子含量;qRT-PCR 法检测肿瘤组织 p38MAPK、p-c-junmRNA 表达;Western Blot 法检测 p38MAPK、p-c-jun、NF-κB、p-NF-κB 蛋白表达量。 结果 (1)阳性对照组及 FOPS 低、中、高剂量组小鼠平均瘤重均显著低于模型组(P< 0. 05),四组小鼠抑瘤率分别为 84. 87%、54. 29%、40. 57%、30. 84%。 (2)与模型组比较,FOPS 低剂量组小鼠脾指数、胸腺指数显著提高,白细胞数目、淋巴细胞数目显著升高(P< 0. 05)。 (3)与模型组比较,FOPS 低剂量组小鼠血清 TNF-α、IFN-γ、IL-2 含量显著升高(P< 0. 05),FOPS 低、中、高剂量组小鼠血清 IL-1β、 IL-6 含量显著降低( P< 0. 01)。 ( 4) FOPS 低剂量组 p38MAPK、p-c-junmRNA 表达水平高于模型组(P< 0. 05),p38MAPK、p-c-jun 和 p-NF-κB 蛋白表达水平高于模型组 (P< 0. 05)。 结论 FOPS 具有显著抗肿瘤活性,其机制与上调 MAPK/ NF-κB 信号通路中 p38MAPK、p-c-jun 和 p- NF-κB 等相关基因及蛋白的表达有关。

摘要: 目的 疣是因人乳头瘤病毒(HPV)感染导致的皮肤科疾病之一,常表现为寻常疣、尖锐湿疣等症状,治疗后易复发,目前尚无有效的小鼠模型。 为研究皮肤疣的防治策略及产品,本研究拟建立病毒性皮肤疣小鼠模型。 方法 免疫缺陷小鼠麻醉后,利用刀片轻轻刮擦小鼠尾部皮肤制造轻微创口,接种 1. 5 × 10⁸ copies 小鼠乳头瘤病毒,定期观察尾部皮肤变化,使用不同方法检测病毒 DNA、病毒载量及病理分析。 结果 MmuPV1 感染小鼠尾部皮肤 16 周后,肉眼可见乳头瘤状增生,伴有过度角化以及表面粗糙;HE 染色分析为皮肤表面鳞状上皮增生, 棘层和颗粒层有空泡变性,可原位检测 MmuPV1 E4 RNA 转录本。 增生部位也可检测到 MmuPV1 DNA 以及病毒载量。 结论 本研究利用小鼠乳头瘤病毒 MmuPV1 感染免疫缺陷小鼠尾部皮肤,成功建立病毒性皮肤疣小鼠模型, 支撑皮肤型 HPV 感染、致病机制等研究。

摘要: 目的 手足口病(HFMD)流行于 5 岁以下婴幼儿,由多种肠道病毒引发。 由于该疾病具有多病原的特点,单纯针对某一种病原的疫苗具有很大的局限性,开发多价疫苗非常必要。 本文制作了 EV71、CA16 和 CA10 病毒的三价 VP1 蛋白疫苗,在小鼠中检测其免疫活性和安全性,以证明多价蛋白疫苗的可行性。 方法 三价 VP1 蛋白疫苗免疫小鼠后,定期测定血清中特异性抗体情况、确定抗体的中和活性,检测特异性 T 细胞免疫反应和细胞因子的变化情况,并通过体内感染实验评价免疫母鼠对乳鼠的被动免疫保护效果。 结果 三价 VP1 蛋白疫苗免疫小鼠后,血清中能持续检测到特异性的 IgG、IgM 抗体,且免疫血清具有中和活性;除诱导病毒特异的体液免疫,三价 VP1 蛋白疫苗还活化了病毒特异的 T 细胞反应;三价 VP1 蛋白疫苗则只对乳鼠在感染 EV71 病毒时具有被动免疫保护作用。 而在免疫过程中炎性细胞因子保持比较稳定的水平,表明疫苗具有良好的安全性。 结论 三价 VP1 蛋白疫苗对 EV71、CA16 和 CA10 病毒具有一定的免疫保护活性,可用于手足口多价疫苗的进一步开发。

摘要: 目的 建立 2 型糖尿病气阴两虚型病证结合动物模型及评价指标。 方法 SD 大鼠 48 只随机分为空白组、病证模型组和高糖高脂组,空白组喂饲普通饲料,其余两组喂饲高脂饲料。 饲养 4 周后,病证模型组大鼠禁食 12 h 腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40 mg / kg,1 周后测定大鼠空腹血糖值大于 11. 1 mmol / L 视为糖尿病造模成功,继续饲养至 14 周试验结束。 监测大鼠体征变化及各项实验室指标。 结果 与空白组比较,病证模型组大鼠第 8 ~ 14 周精神、运动评分均显著升高(P< 0. 01),体重从第 4 周开始显著降低(P< 0. 05 或 P< 0. 01),进食量和饮 水量均从第 8 周开始显著增加(P< 0. 05 或 P< 0. 01),抓力从第 12 周开始显著降低(P< 0. 01),第 6 ~ 14 周的随机血糖、空腹血糖均显著升高(P< 0. 01),尿糖检测结果均显著升高(P< 0. 01),呼吸频率、脉搏幅度、舌象值、PT、 APTT、胸腺指数、CD4、CD4 / CD8 值均显著降低(P< 0. 05 或 P< 0. 01),TC、TG、LDL-C、cAMP、cAMP / cGMP 值均显著升高(P< 0. 05 或 P< 0. 01),病理结果显示胰岛组织损伤严重,功能明显下降。 结论 采用高糖高脂喂养大鼠 4 周后腹腔注射 STZ 40 mg / kg,继续饲养至 14 周可制备 2 型糖尿病气阴两虚病证结合动物模型,通过对大鼠进食量、 饮水量的测定,运动、精神状态的评分,抓力、呼吸、脉搏、舌象等体征信息的采集,PT、APTT、TC、TG、LDL-C、cAMP、 cAMP / cGMP、CD4、CD4 / CD8 及胸腺指数等指标的检测,结合胰腺组织的病理改变等可较好的反映该模型的证候特点。

摘要:去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer,CRPC)具有较高的发病率和死亡率,是前列腺癌的主要临床特征,且预后较差。 建立具有 CRPC 特征的肿瘤病人临床手术标本异种移植( patient-derived xenograft,PDX)模型对于前列腺癌研究具有重要的意义。 本文重点综述了多种 CRPC PDX 模型的主要表型特征, 包括激素非依赖表型、雄激素受体相关表型和神经内分泌表型,以及病理生理学特征,以期为 CRPC 的发生机制和靶向药物筛选研究提供良好的实验工具。

摘要:肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是一种预后不良的严重疾病,其发病机制仍不清楚。 现有的治疗手段不能治愈,只能减缓疾病的进程。 动物模型是研究 PAH 的重要工具,在 PAH 病理生理机制研究和防治策略评估中发挥极其重要的作用。 本文对经典 PAH 动物模型(缺氧和野百合碱模型)和 PAH 双击动物模型的血液动力学改变和肺动脉组织学重构特征进行综述,旨在为 PAH 新机制和新靶点研究的动物模型选择提供参考。

摘要:异质性是前列腺癌的主要临床特征,也是影响其治疗效果的主要因素。 建立基于临床肿瘤标本的异种移植转化模型,对于前列腺癌的研究具有重要意义。 本文就前列腺癌的临床异质性进行总结,综述模拟临床特征的 PDX 模型研究进展,重点关注急需的异质性转化模型,以期为前列腺癌的临床转化机制研究和靶向药物筛选提供理想的动物模型。

摘要:动物疾病模型作为研究人类疾病的中介,在医学研究中发挥着巨大的作用。 非人灵长类动物与人类的免疫学和生理学相似性,使非人类灵长类动物模型在研究病毒发病机理、免疫力、疫苗和药物抗感染功效等方面具有重要价值,对研究人类病毒感染性疾病以及新型病毒如 SARS-CoV-2 的治疗和预防发挥着不可或缺的作用。 本文主要介绍了非人灵长类动物作为实验动物模型在人类几种常见的病毒感染性疾病中的研究进展,以及在研究新型冠状病毒 SARS-CoV-2 中发挥的重要作用。

摘要:寨卡病毒(Zika virus)是属于黄病毒科黄病毒属的一种虫媒病毒,可经过埃及伊蚊和白纹伊蚊叮咬传播,也可通过血液、泪液传播,以及性传播和母婴垂直传播。 寨卡病毒一旦感染孕妇,就会有导致胎儿感染的可能。成人多出现一些较轻的临床症状,但胎儿更容易受到中枢神经系统的伤害,继而诱发小头畸形,重症脑部发育缺陷以及一些神经系统性炎症,因此,阻断寨卡病毒的传播及感染迫在眉睫。为了能够对寨卡病毒母婴传播途径有更全面的认识,研究其致病机理,并且找到有效的预防、检测和治疗方法,建立成功的动物模型极为关键。 文章 将对目前已有的寨卡病毒母婴传播在各种动物模型上的研究进展进行综合整理。

摘要:骨关节炎是一种以软骨退化和软骨下骨改变为特征的慢性退行性疾病,其患病率随着人口老龄化的加剧而迅速增长。目前仍没有合适的药物和手术可以完全治疗骨关节炎。 随着细胞疗法的出现,间充质干细胞的独特优势被不断发现,其治疗骨关节炎的研究也越来越多。 本文就间充质干细胞对骨关节炎的修复机制进行综述。本文描述了间充质干细胞的特性和功能,以及它们在骨关节炎动物模型和临床中的治疗机制。

摘要:神经退行性疾病是由神经元结构或功能逐渐丧失导致认知及运动障碍的一类不可逆损伤性疾病。其病理改变主要表现为中枢神经的老年斑、神经元纤维缠结、神经元减少等。 在神经退行性疾病中,嗅觉障碍通常比经典的运动和认知障碍发生的更早,故将嗅觉障碍作为神经退行性疾病的临床标志有助于此类疾病的早期发现,而其病理过程、发病机制的研究以及治疗药物的筛选和评价都需要合适的动物模型。因此,本文就不同神经退行性疾病嗅觉功能障碍的主要动物模型作一综述。