摘要:目的 基于UPLC-Q/ TOF-MS 研究H1N1 病毒感染树鼩动物模型的血清代谢特征。方法 H1N1 病毒滴鼻法制备感染树鼩动物模型,测量病毒载量和抗体血抑滴度,进行肺组织的病理学检查,采集树鼩血清样本并进行非靶向代谢组学研究。结果 模型制备第3 ~ 7 天,体温和病毒载量逐渐达峰,多变量统计分析发现H1N1 病毒感染树鼩血清中24个差异离子,它们导致磷脂酰胆碱代谢、鞘脂代谢、花生四烯酸代谢等代谢紊乱。结论 本研究首次发现H1N1 病毒感染树鼩模型的代谢特征,H1N1病毒感染树鼩模型紊乱的代谢与炎症反应有关。

摘要:目的 探讨不同浓度Matrigel 对小鼠Lewis 肺癌异位皮下移植瘤的影响。方法 将24 只C57BL/6JNifdc 小鼠随机分为肺癌组、50%基质胶组、75%基质胶组、100%基质胶组,每组各6 只。将Lewis 肺癌细胞(LL/2)分别与0%、50%、75%、100% Matrigel 按照体积1∶1 混合,于小鼠右侧前肢腋下进行皮下注射,每日测量各组小鼠体重、饮食量及饮水量;观察比较各组成瘤时间、成瘤率和肿瘤大小,于肿瘤形成后每天测量肿瘤的长径、短径,计算肿瘤体积变化;于肿瘤接种第15 天处死动物,完整剥离肿瘤组织并称重,HE 染色检测肿瘤组织病变情况。结果 与肺癌组相比,75%基质胶组小鼠自造模第2 天起体重显著升高( P < 0. 05 或 P < 0. 01);100%基质胶组小鼠自造模第10 天起,体重明显上升( P < 0. 05 或 P < 0. 01)。各组小鼠平均饮食量于造模8 d 后有所降低,饮水量总体呈现上升趋势。各组小鼠成瘤率均为100%,添加基质胶组的小鼠相比肺癌组小鼠成瘤时间早,肿瘤生长速度快,且肿瘤较大。其中,75%基质胶组肿瘤体积增长最快,肿瘤重量最大,为(1358. 88 ± 388. 14) mg,与肿瘤组相比,具有显著性差异( P < 0. 05);100%基质胶组肿瘤体积增长次之,肿瘤重量为(1142. 37 ± 423. 08) mg,与肿瘤组相比,具有显著性差异( P < 0. 05);50%基质胶组肿瘤体积增长最慢,肿瘤重量最小,为(808. 83 ± 393. 41) mg。HE 染色结果显示,相比于肺癌组,添加基质胶组的肿瘤细胞生长旺盛、轮廓清晰、细胞核体积较大,肿瘤组织间质中血管成分明显增多。结论 基质胶能稳定成瘤率,加快肿瘤生长,增大成瘤体积,且75%基质胶浓度条件下肿瘤增长最快、肿瘤体积最大,肿瘤的均一性较好。

摘要:目的 通过对比大鼠结肠组织中的Toll 样受体4(TLR4) 和核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2(NOD2)治疗前后水平的变化,从修复肠粘膜屏障的角度探讨四神丸治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的作用机制。方法 UC 大鼠模型制备采用三硝基苯磺酸/ 乙醇溶液灌肠法。将40 只大鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺嘧啶组(0. 36 g/ (kg·d))和中药组(5 g/ (kg·d)),通过采用HE 染色法、RT-qPCR 法、SP法和Western Blot 法观察结肠组织中TLR4、NOD2 的基因和蛋白表达。结果 与空白组相比较,模型组大鼠结肠损伤严重,损伤评分显著增高( P < 0. 01),TLR4、NOD2 mRNA 和蛋白表达显著升高( P < 0. 01, P <0. 05);与模型组相比较,各治疗组大鼠结肠损伤有一定程度的恢复,损伤评分显著降低( P < 0. 01, P <0. 05),TLR4、NOD2 mRNA 和蛋白表达显著降低( P < 0. 01, P < 0. 05)。结论 四神丸可以通过提高大鼠的免疫功能,抑制肠道炎症反应,达到治疗UC 的目的。

摘要:目的 CatSper1 是精子特定的电压门控Ca2+通道蛋白,在精子生成和受精过程中具有重要作用。本研究旨在分析 CatSper1 基因在版纳微型猪近交系(BMI)的表达调控模式、序列特征与潜在的生物学功能。 方法 取成年BMI 公猪睾丸进行转录组测序;采用RT-PCR 技术克隆 CatSper1 的完整编码序列;分析CatSper1 的序列、结构特征及相互作用蛋白;利用转录组测序数据构建 CatSper1 的lncRNA 和miRNA 调控网络,并进行GO 功能注释。结果 RNA-seq 获得 CatSper1 基因的平均表达量和平均TPM 值分别为2817. 5 和33. 6。CatSper1 CDS 区全长为2166 bp(GenBank 登录号:OK042306),编码721 个氨基酸,含有233 个氨基酸残基组成的Ion_trans 保守结构域以及与精子生成相关的保守跨膜螺旋结构。CatSper1 蛋白与10 个雄性育性相关蛋白质存在相互作用,尤其与该基因家族成员CatSper2-4 蛋白互作最为紧密。 CatSper1 基因受10个miRNAs 靶向调控,分别有16 个和14 个lncRNAs与CatSper1 竞争性结合ssc-miR-1343和ssc-miR-744。GO 注释发现CatSper1 基因在分子功能(MF)、生物学过程(BP)、细胞成分(CC)等方面均具有重要功能。 结论 本研究报道了CatSper1 在BMI 睾丸中的表达,基因的分子结构特征和表达调控网络,为深入研究CatSper1 基因在BMI精子发生、精子获能和顶体反应等重要生物学过程中的功能奠定了基础。

摘要:目的 骨骼肌糖代谢水平是影响有氧运动能力的重要因素,骨骼肌糖代谢水平又受到生物钟的调控。Chrono 是近年新发现的生物钟基因,它可反馈性抑制核心生物钟转录因子BMAL1 对其下游生物钟靶基因的转录,被认为是BMAL1 的转录抑制因子。研究表明BMAL1 参与骨骼肌糖代谢的调控,而CHRONO 作为BMAL1的转录抑制因子,CHRONO-BMAL1 通路对运动能力和糖耐量的影响目前尚未可知。因此,本研究拟通过骨骼肌特异性Chrono 过表达小鼠和野生型小鼠,探讨CHRONO-BMAL1 通路对糖耐量和运动能力的影响,为阐明调节糖耐量与影响骨骼肌健康的新机制提供理论依据。方法 健康8 周龄C57BL/6N 野生鼠(WT)和骨骼肌特异性Chrono过表达鼠(TG)各20 只,雌雄各半。记录小鼠体重和摄食量,进行体成分测试,对小鼠进行自主活动性测试、递增负荷运动能力测试,葡萄糖耐量测试和抓力测试,取小鼠骨骼肌称重,进行实时荧光定量PCR 检测Chrono、MyhcI、MyhcIIa、MyhcIIb、MyhcIIx、Pdha1 的mRNA 表达,试剂盒检测肌糖原含量。结果 (1)与WT 鼠相比,TG 鼠的自主活动性和递增负荷运动能力均明显降低( P < 0. 05 或 P < 0. 01);(2)与WT 鼠相比,TG 鼠腓肠肌、股四头肌、比目鱼肌、趾长伸肌和胫骨前肌重量均明显增加( P < 0. 01),TG 雌鼠腓肠肌和股四头肌重量则明显低于TG 雄鼠( P <0. 01);(3)与WT 鼠相比,TG 雄鼠前肢抓力显著下降( P < 0. 05),骨骼肌MyhcII 型mRNA 表达也明显下降或呈现下降趋势,TG 雌鼠的抓力和II 型肌纤维mRNA 的表达则均显著高于TG 雄鼠( P < 0. 05 或 P < 0. 01);(4)与WT鼠相比,TG 鼠糖耐量测试时各点血糖值和曲线下面积均显著升高( P < 0. 01),TG 雌鼠则显著低于TG 雄鼠( P <0. 01);(5)与WT 鼠相比,TG 鼠肌糖原含量明显增多( P < 0. 05),Pdha1 mRNA 表达明显减少或呈减少趋势,而TG雌鼠肌糖原含量和Pdha1 mRNA 的表达均显著高于TG 雄鼠( P < 0. 05 或 P < 0. 01)。结论 骨骼肌Chrono 过表达可降低小鼠自主活动性,导致糖耐量降低,并影响有氧运动能力。

摘要:目的 探讨和厚朴酚(Honokiolc,HKL)对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)小鼠的心肌保护作用及其可能的调控机制。方法 80 只雄性C57BL/6J 小鼠随机分为四组,每组20 只:假手术(Sham)组、心梗模型 + 空白溶剂(Vehicle)(MI + V)组、心梗模型 + 和厚朴酚治疗(MI + HKL)组、心梗模型 + 和厚朴酚 + 沉默调节蛋白1(Sirtuin-1,SIRT1)抑制剂(selisistat,EX527)处理(MI + HKL + EX)组。造模后记录28 d 内小鼠的死亡情况;术后第28 天检测小鼠超声心动图后,处死动物留取血清标本,酶联免疫吸附剂(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清炎症指标。留取心脏组织标本,活性氧荧光探针-二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)法检测心肌组织氧化应激水平;末端DNA 转移酶dUTP 缺口末端标记(terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick endlabeling,TUNEL)法检测心肌细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blot)检测目标蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,HKL 口服治疗4 周后可显著改善心梗小鼠的心功能,降低血清炎症因子水平和心肌细胞凋亡率,减轻心肌氧化应激水平,上调SIRT1 表达并下调Ac-Foxo1 表达。而使用SIRT1 抑制剂EX527 阻断SIRT1 信号后,HKL 的上述保护作用明显减弱( P < 0. 05)。结论 口服HKL 可以抵抗心梗引发的心肌损伤,并显著改善心梗小鼠心功能,其作用机制可能是SIRT1/ Ac-Foxo1 信号参与调节。

摘要:目的 研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)A53T 转基因小鼠运动功能障碍及外周免疫的影响。 方法选取8 月龄的A53T 转基因小鼠,随机分成4 组:对照组(WT)、对照治疗组(WT + RES)、模型组(PD)、模型治疗组(PD + RES)。治疗组每3 d 灌胃RES,用药3 个月;对照组和模型组给予等量生理盐水。通过爬杆实验、转棒实验、前脚抓力实验、四肢抱紧实验检测各组小鼠运动水平。流式细胞仪检测小鼠T 淋巴细胞亚群,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-18(IL-18)以及转化生长因子-β(TGF-β)的水平。结果 与对照组相比,模型组运动功能评分均较低;与模型组相比,模型治疗组运动功能评价显著改善。流式结果显示,与对照组比,模型组小鼠外周T 细胞占比、CD4⁺ T 细胞占比、CD4⁺ / CD8⁺比值均降低,CD8+ T 细胞占比无统计学意义。与模型组相比,模型治疗组T 淋巴细胞占比和CD4+ T 细胞占比均显著升高,有统计学意义,CD4⁺ / CD8⁺ 比值也升高,但差异无统计学意义。外周血血清ELISA 结果显示,与对照组相比,模型组小鼠IL-6、IL-18 均升高,TGF-β 降低,TNF-α 浓度无统计学差异。与模型组相比,模型治疗组IL-6、IL-18 浓度显著下降,TGF-β 有所上升,结果无统计学意义。结论 RES 通过调节小鼠外周免疫,减少神经炎症反应,从而显著改善A53T 转基因小鼠的运动功能障碍。

摘要:目的 本研究旨在分析布鲁氏菌外膜蛋白OMP25 诱导机体产生的免疫反应。方法 采用PCR 方法扩增羊种布鲁氏菌16M 的omp25 基因,克隆至pET-32a 质粒。重组质粒pET32a-OMP25 转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,并诱导表达。利用Ni2+柱纯化试剂盒进行蛋白纯化。用纯化的重组蛋白(rOMP25)和Rev. 1 疫苗株免疫小鼠,检测小鼠脾细胞中IFN-γ 和IL-2 的水平,以及小鼠血清中IgG 抗体和抗炎因子IL-10 水平,并用Western Blot检测反应原性。结果 (1)omp25 基因大小为642 bp,编码214 个氨基酸,rOMP25 大约在40. 8 × 10³ 处出现蛋白条带,纯化后为单一条带。(2)用t 检验方法统计显示,rOMP25 免疫小鼠后,诱导脾细胞产生IFN-γ 和IL-2 的水平,小鼠血清中IgG 和IL-10 的水平与Rev. 1 组相似,显著高于对照组( P < 0. 01)。(3)Western Blot 检测结果显示,rOMP25 具有较好的反应原性。结论 rOMP25 具有较好的免疫原性和反应原性,为进一步研究OMP25 蛋白的功能,以及研制相关疫苗提供了生物材料。

摘要:目的 本实验通过构建醋酸铅致小鼠肾中毒模型,探讨蛴螬肽提取物对小鼠的解毒保护作用机制,为机体铅性肾病的防治提供试验依据。方法 随机取小鼠分为对照组、模型组、阳性药组以及不同剂量蛴螬肽组(80、160、320 mg/ kg),除对照组外所有组小鼠隔天腹腔注射醋酸铅20 mg/ kg,连续15 d。此时对照组和模型组小鼠同时灌服生理盐水而阳性药组小鼠灌服二巯基丁二酸(DMSA 70 mg/ kg)混悬液,蛴螬肽组小鼠灌服不同剂量蛴螬肽提取物,每天1 次连续15 d,采用HE 染色显微镜观察肾组织状态;检测肾功能指标(BUN、Cr)和肾组织中抗氧化酶水平(SOD、GSH-Px)及过氧化物(MDA)含量;RT-PCR、Western Blot 技术检测分析Ⅱ相解毒酶(NQO1)、抗氧化酶(HO-1)和信号分子(Nrf2)基因和蛋白表达水平。结果蛴螬肽组与模型组小鼠相比,体重增加但低于对照组,肾组织形态显著改善,血清中BUN、Cr 水平显著降低( P < 0. 05),肾组织中抗氧化酶(SOD、GSH-Px)水平显著提高( P < 0. 05),MDA 含量显著减少,Ⅱ相解毒酶基因(NQO1)、抗氧化酶(HO-1)及信号分子(Nrf2)mRNA 及蛋白表达水平均显著上调( P < 0. 01)。结论蛴螬肽提取物激活Nrf2-ARE 信号通路,增强铅中毒小鼠的抗氧化功能和提高解毒酶基因表达而发挥其解毒保护作用。

摘要:目的 探讨芍药苷通过激活肝激酶B1(LKB1) /5’-磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路对急性脑梗死大鼠神经损伤的保护作用。方法 通过线栓闭塞大鼠大脑中动脉建立急性脑梗死模型,随机分为模型组、芍药苷(10 mg/ kg)组、AMPK 抑制剂CC(0. 2 mg/ kg)组、芍药苷(10 mg/ kg)+ CC(0. 2 mg/ kg)组,每组12 只,另取12 只大鼠仅分离出颈总动脉与颈外动脉,不插线栓,设为假手术组,分组给药处理后,采用Morris 水迷宫实验评测大鼠认知功能;采用三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测各组大鼠脑梗死情况;采用TUNEL 染色测定各组大鼠海马神经元凋亡率;采用试剂盒测量各组大鼠血清炎性因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与白细胞介素-1β(IL-1β)水平、脑组织过氧化氢酶(CAT)、活性氧(ROS)与丙二醛(MDA)含量;采用蛋白免疫印迹法检测各组大鼠脑组织凋亡相关蛋白B 淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、BCL2 相关X 蛋白(Bax)与LKB1/ AMPK 通路相关蛋白(p-LKB1/ LKB1、p-AMPK/AMPK)表达状况。结果 与假手术组相比,模型组大鼠跨越原平台次数、原平台象限内停留时间、脑组织CAT 含量、p-LKB1/ LKB1、p-AMPK/ AMPK、Bcl-2 表达水平显著降低( P < 0. 05),脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清iNOS 与IL-1β 水平、脑组织ROS 与MDA 含量、Bax 表达水平显著升高( P < 0. 05)。与模型组相比,芍药苷组大鼠跨越原平台次数、原平台象限内停留时间、脑组织CAT 含量、p-LKB1/ LKB1、p-AMPK/ AMPK、Bcl-2 表达水平显著升高( P < 0. 05),脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清iNOS 与IL-1β 水平、脑组织ROS 与MDA 含量、Bax 表达水平显著降低( P < 0. 05)。CC 可减轻芍药苷对大鼠脑梗死的保护作用。结论 芍药苷可能通过激活LKB1/ AMPK 信号通路,而阻止炎症发生发展,降低氧化应激水平,减轻大鼠脑组织梗死及海马神经元凋亡,改善其认知功能,起到保护神经的作用。CC 可减轻芍药苷对大鼠脑梗死的保护作用。

摘要:目的 建立脊髓型肌萎缩症(SMA)小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外培养体系,研究反义寡核苷酸(ASO)对其生物学特性的影响,为深入研究SMA 发病机制及药物筛选提供可靠的体内模拟工具细胞。方法选取刚出生4 d 的SMA 小鼠,CO2 窒息法处死后,于75%乙醇中浸泡,分离、纯化骨髓细胞。细胞荧光检测细胞表面标志物;RT-PCR 及Western Blot 研究ASO 对运动神经元存活基因2(SMN2 )外显子(exon7)列入水平以及运动神经元存活(SMN)蛋白表达量;EDU 法和TUNEL 法检测细胞增殖和凋亡能力。结果体外分离培养的SMA 模型小鼠BMMSC 具有贴壁生长、可以传代等特点;对P3 代BMMSC 进行细胞免疫荧光鉴定结果显示:CD44、CD29 高表达,CD34、CD45 低表达;转染ASO 后细胞SMN2 exon7 列入率显著上升以及SMN 蛋白表达量显著上调,并显著促进细胞增殖能力,同时核内Gemini bodies(gems)数量也有所增多。结论成功建立SMA 小鼠BMMSC 体外培养体系,通过阳性药物ASO 验证可促进BMMSC SMN2 exon7 列入及SMN 蛋白表达,为SMN2 相关调控机制及药物筛选提供一种新的工具细胞。

摘要:啮齿类动物广泛运用于视觉疾病的造模;为了合理评估动物模型的视觉疾病损害程度和治疗手段干预效果,需要掌握合适的啮齿类实验动物视觉检测手段。视觉行为学检测具有简明、直观、非侵入、可重复的优良特性,能够弥补其他视觉测量手段的缺陷。从定性以及定量两个角度对常用的啮齿类实验动物行为学视觉测量方法进行综述,有助于实验者选择适当的检测方法,提升动物视觉检测效率。

摘要:慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是以持续性气流受限为特征的常见呼吸系统疾病,其较高的发病率和死亡率给患者和社会带来了沉重负担。为了复制人类COPD 的病理,深入探讨COPD 的发病机制、药物开发等,近年来动物模型的研究得到越来越多的重视。本文详细综述了近年来常用复合方法造模的优缺点以及评价模型的方法,为COPD 的研究奠定基础。

摘要:焦虑行为学实验是研究焦虑症等神经精神疾病发生机制及开发防护措施的必要手段。焦虑行为实验方法主要是基于啮齿类动物的探索本性与外界环境的矛盾“冲突”从而引起焦虑情绪或动物面临不可避免或即将发生的厌恶性刺激时做出的情绪适应性反应建立的。常用的大小鼠焦虑行为实验方法可分为两大类,非条件反射和条件反射性。非条件反射包括探究行为、社会行为和防御行为,经典的实验方法包括旷场、高架十字迷宫、明暗箱、孔板、新奇环境摄食抑制实验等。条件反射包括饮水冲突、Geller-Seifter 冲突等。本文首次对常用的大鼠和小鼠焦虑行为实验的实验原理、操作步骤和评价指标进行系统的概述,旨在为研究者们在进行焦虑行为学实验时选择合适的行为学方法提供参考。

摘要:斑马鱼作为一种新型的模式动物,因其个体小、发育周期短和透明易观察等优点,已在发育生物学、遗传学、基础医学、药理学、毒理学、药物研发以及生态环境评价等诸多领域得到了广泛应用,并且随着功能性食品、营养品和天然化妆产品的需求不断增加。斑马鱼已经是一种实用工具,可有效鉴别天然产品中的有效物质。近年来,作为国际公认的新型脊椎类模型动物,斑马鱼已用于多种植物多糖及产品的抗氧化、免疫调节及心脏保护等生物活性评价。本文将介绍近年来斑马鱼作为模式动物在多糖,特别是植物多糖生物活性研究的进展。

摘要:胰腺癌是一种恶性程度高、预后极差的恶性癌症之一,发病率和死亡率不断上升。胰腺癌小鼠模型可以表征胰腺肿瘤特征,是研究癌症预防和治疗的最佳工具。胰腺癌小鼠模型分为诱导性模型、移植性模型和基因工程模型。然而,与人类胰腺癌相比,没有简单动物模型可以模拟人类胰腺癌的所有特征。已有胰腺癌小鼠模型各自用途不一,本文对不同胰腺癌小鼠模型的造模方法、特征及优缺点的研究进展做一综述,为胰腺癌疾病的研究提供理论依据。

摘要:胰腺癌是一种较为难治且恶性程度极高的肿瘤,其发病隐匿,进展迅速。传统的治疗方法对胰腺癌患者效果不佳,以免疫检查点抑制剂为代表的免疫治疗在非小细胞肺癌和黑色素瘤等多种恶性肿瘤中显示出良好的效果,但对胰腺癌患者治疗效果有限,这可能与胰腺癌独特的肿瘤微环境有关。针对胰腺癌微环境中的特定位点进行靶向调节,促使肿瘤微环境由免疫抑制状态向免疫激活状态转变,可能是增强免疫检查点抑制剂治疗效果的有效策略,因此,联合免疫检查点抑制剂与靶向治疗可能在胰腺癌治疗中具有良好的应用前景。本文将对靶向胰腺癌肿瘤微环境的药物作用机制及其与免疫检查点抑制剂联合应用的策略进行综述,以期为胰腺癌的联合免疫治疗提供有效参考。

摘要:低频超声激发微泡技术在临床中的应用越来越常见,主要包括靶向输送药物、增强免疫治疗、介导基因转染、开放血脑屏障、损伤肿瘤血管、辅助血栓消融。本文总结了超声微泡的制备、超声微泡技术在动物实验的应用,旨在为临床超声微泡技术的实际应用提供理论参考。