摘要: 目的 本研究拟通过在体内和体外诱导训练免疫反应,以探讨诱导训练免疫是否可能逆转免疫耐受状态。 方法 以 β-glucan 作为训练免疫诱导剂,建立体外小鼠胫骨来源的巨噬细胞( bone marrow derived- macrophages,BMDM)训练免疫模型:40 μg / mL β-glucan 刺激 BMDM 24 h,随后用 PBS 洗涤后让 BMDM 在完全培养基中静息 6 d,在第 3 天的时候补充培养基,第 7 天收集细胞 100 ng / mL LPS 再刺激,4 h 后收集细胞抽提 RNA 和 24 h 后收集细胞上清;建立 β-glucan 体内训练免疫模型:野生型 C57BL/ 6J 腹腔注射 1 mg β-glucan,对照组腹腔注射 200 μL 的 PBS,7 d 后感染金黄色葡萄球菌(每只 1 × 10⁴ / 200 μL PBS)。 LPS 诱导体外免疫耐受,体外免疫耐受逆转通过在耐受的 BMDM 中加入 40 μg / mL β-glucan 刺激 24 h,随后让细胞静息 1 d,通过促炎因子的恢复水平来反映耐受逆转情况。 盲肠结扎穿刺( cecal ligation and puncture,CLP)诱导体内免疫耐受,体内免疫耐受逆转通过向 CLP 组腹腔注射 1 mg β-glucan,通过再次感染非致死剂量的细菌或真菌的生存率反映耐受逆转情况。 结果 (1) 经过 β-glucan 训练的 BMDM,在 LPS 再次刺激时产生更高水平的促炎因子 TNF-α、IL-6 和 NO。 同时,β-glucan 训练 的 BMDM 通过激活 m-TOR 信号通路,导致细胞代谢模式向糖酵解转变,引起细胞内乳酸增多;(2)β-glucan 诱导的体内训练免疫具有保护作用;(3)β-glucan 在体外能够逆转 LPS 诱导的免疫耐受,恢复 BMDM 促炎细胞因子的产生;(4)目前我们的结果尚未证实 β-glucan 在体内可以逆转 CLP 诱导的免疫耐受。 结论 本研究成功地建立了 β- glucan 体外和体内训练免疫模型,并证明了在体外 β-glucan 能逆转 LPS 诱导的免疫耐受,但是目前结果尚未证实 β-glucan 在体内能够逆转 CLP 诱导的免疫耐受,提高二次感染生存率。

摘要: 目的 探究中等强度有氧运动对尼古丁戒断小鼠 VTA 多巴胺神经元抑制性突触可塑性的影响,以期为运动减少尼古丁复吸提供一定的实验依据。 方法 8 周龄雄性 C57BL/ 6 小鼠随机分为生理盐水安静组( SS 组)、生理盐水运动组(SE 组)、尼古丁安静戒断组(NS 组)、尼古丁运动戒断组(NE 组),采用条件性位置偏爱实验建立小鼠尼古丁成瘾模型。 之后停止给药,SE 组和 NE 组小鼠进行连续 2 周的中等强度有氧运动干预,SS 组和 NS 组小鼠自由饮食及进水。 采用条件性位置偏爱实验检测小鼠尼古丁复吸行为。 使用全细胞膜片钳技术记录 VTA 多巴胺神经元的自发抑制性突触后电流(sIPSC)、微小抑制性突触后电流(mIPSC)和抑制性突触后电流配对脉冲比(IPSC PPR)。 使用免疫荧光染色检测 VTA γ-氨基丁酸限速酶 GAD67 的表达。 结果 (1)NS 组 CPP 得分高于 SS 组,NE 组 CPP 得分低于 NS 组;(2)NS 组 sIPSC 的平均频率和平均幅度高于 SS 组,NE 组 sIPSC 的平均频率和平均幅度低于 NS 组;(3)NS 组 mIPSC 的平均频率和平均幅度高于 SS 组,NE 组 mIPSC 的平均频率和平均幅度低于 NS 组;(4)20 ms 和 50 ms 刺激间隔时,NS 组的 IPSC PPR 小于 SS 组,NE 组的 IPSC PPR 大于 NS 组;(5)NS 组 VTA GAD67 蛋白表达低于 SS 组,NE 组 VTA GAD67 蛋白表达高于 NS 组。 结论 2 周的中等强度有氧运动减少尼古丁戒断模型 VTA 多巴胺神经元突触前 GABA 释放,下调突触后 GABAA 受体的数量和/或功能,减弱抑制性突触传递效能,这可能是有氧运动减少尼古丁复吸的机制之一。

摘要: 目的 着力于解决盲肠穿刺结扎(CLP)模型因水肿肠道封堵结扎穿刺部位随机影响模型动物感染进程的问题,探索通过复合感染支架整合盲肠结扎穿刺法和植入带菌物法,建立感染可持续的脓毒症动物模型。 方法 将 54 只雄性 SD 大鼠随机分为假手术组(Sham 组,n= 18)、盲肠穿刺结扎组(CLP 组,n= 18)、复合感染脓毒症模型组(MIM 组,n= 18),其中每组 10 只用于考察各组动物一般生存状态、盲肠结扎部位封堵情况和生存率; 每组另 8 只用于考察各组脓毒症损伤指标。 采用 HE 染色观察大鼠心脏、肝、肺、肾组织病理形态改变;取腹主动脉血检测脂多糖(LPS)、白介素-6( IL-6)、心肌钙蛋白-Ⅰ( cTn-I)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、总胆红素(TBil)、乳酸(Lac)和肌酐(Cr)含量;取肝组织检测丙二醛(MDA)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量。 结果 造模 96 h 后,Sham 组大鼠无死亡,CLP 组大鼠生存率 70%,MIM 组生存率 0%;MIM 组心脏、肝、肺、肾 组织损伤程度较 CLP 模型组更为严重;MIM 组分别与 Sham 组和 CLP 组比,LPS、IL-6、cTn-I、ALT、AST、TBil、Cr、 Lac、MDA 含量最高,ATP 含量最低,均具有显著性差异(P< 0. 05);MIM 组 LPS、IL-6、TBil、MDA 等指标的变异系 数较 CLP 组明显更小。 结论 MIM 组可使肠内容物不断渗漏引发持续感染,反应感染和炎症的关键指标(LPS、IL- 6、MDA 等)变异性远低于 CLP 组,病程进展更为一致,其模型的结构效度更好;MIM 组较 CLP 组,术后感染表现更 为剧烈、器官损伤程度更深、而死亡率更高且组内死亡时间更为均一,其模型的表面效度更好,因而更符合严重感 染导致机体过度反应而产生脓毒症 MODS 的临床实际。

摘要: 目的 探索苦参碱在胰腺癌吉西他滨(GEM)耐药中的作用,以期为恢复胰腺癌化疗敏感性提供新的治疗手段。 方法 选择胰腺癌细胞系 AsPC-1,使用吉西他滨诱导构建胰腺癌吉西他滨耐药细胞株 AsPC-1- GEM,通过 CCK-8 实验测试其耐药性,检测细胞活力分析苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药细胞株的作用;进一步通过 RT-PCR 和 Western Blot 检测耐药前后多药耐药蛋白 2(ABCG2)的表达变化以及苦参碱对 ABCG2 的影响;利用裸鼠建立胰腺癌吉西他滨耐药细胞系异种移植模型,观察使用苦参碱治疗后肿瘤体积的变化;通过免疫组化检测苦参碱对 ABCG2 表达的影响。 结果 耐药细胞 AsPC-1-GEM 中 ABCG2 表达增高(P< 0. 01),苦参碱可有效降低耐 药细胞 ABCG2 的表达(P< 0. 01),提高胰腺癌吉西他滨耐药细胞的敏感性(P< 0. 01)。体内实验进一步验证了苦参碱治疗可降低 ABCG2 的表达(P< 0. 01),并减缓肿瘤生长(P< 0. 01)。 结论 苦参碱通过降低 ABCG2 的表达,提高胰腺癌吉西他滨耐药细胞株的敏感性。

摘要: 目的 研究安儿宁颗粒单次给药和 3 个月重复给药对幼年大鼠的毒性影响,评估安儿宁颗粒对临床儿童患者的长期使用安全性。 方法 20 只幼年大鼠(3 ~ 4 周龄),按最大给药量法,单次给予安儿宁颗粒 240 g 生药/ kg 体重的剂量,观察大鼠的毒性反应和死亡情况;200 只幼年大鼠(3 ~ 4 周龄)按体重均衡随机分为溶媒对 照组、唐古特乌头组、安儿宁颗粒低、中、高剂量组,每组 40 只,雌雄各半,分别灌胃给予纯水、唐古特乌头 5. 5 g 生 药/ kg 体重、安儿宁颗粒 3、11、40 g 生药/ kg 体重,每天 1 次,连续 91 d,于给药中期(给药 1. 5 个月)、停药(给药 3 个月)和恢复期结束(停药后 4 周)分别抽样剖检大鼠 40 只(每组 10 只,雌雄各半)、80 只(每组 20 只,雌雄各半) 和 40 只(每组 10 只,雌雄各半),检测体重、摄食、血液学、血清生化学、凝血、尿液、眼科及组织病理学等相关指标。 结果 幼年大鼠单次经口给予最大给药量的安儿宁颗粒,未见明显急性毒性;重复经口给予安儿宁颗粒 91 d,仅见 高剂量雄鼠摄食量减少和体重增长减缓、唐古特乌头组和给药组雄鼠中性粒细胞和单核细胞数、血清白蛋白均可逆性升高,AST、Na⁺ 、Cl^-可逆性下降,其余指标均未见显著毒性反应。 结论 安儿宁颗粒对幼年大鼠无显著毒性反应。 相对安全剂量为 40 g 生药/ kg 体重,未观察到有害作用(NOAEL)剂量为 11 g 生药/ kg 体重。

摘要: 目的 观察 C57BL/ 6 背景的 Mdr2 基因敲除小鼠自发肝肿瘤形成情况。 方法 (11. 3 ± 4. 2)周龄 Mdr2 基因敲除 C57BL/ 6-Abcb4^tm1 小鼠 9 只和野生型 C57BL/ 6 小鼠 5 只,连续饲养 65 周后处死小鼠,留取血清及肝标本。 检测血清 ALT、AST、AFP 水平,肝组织石蜡切片做 HE、天狼猩红染色,免疫组织化学检测肿瘤及肿瘤旁组织 CK-7、CK-19 表达情况。 结果 9 只 Mdr2 基因敲除小鼠均自发形成肝肿瘤,血清 ALT、AST、AFP 水平均显著高于野 生型小鼠(P< 0. 01),Mdr2 基因敲除小鼠肝肿瘤 CK-7、CK-19 染色均为阴性。 结论 Mdr2 基因敲除小鼠连续饲养 至(76. 3 ± 4. 2)周龄时均自发形成肝肿瘤,其病理组织分型为肝细胞癌。

摘要: 目的 本研究拟建立一种小鼠肺癌原位移植瘤模型,用于模拟临床患者肺癌的发生及发展。 方法 构建表达荧光素酶报告基因的小鼠肺癌细胞 LLC-luc,通过手术将 LLC-luc 细胞注射至小鼠左肺,构建原位移植瘤模型。 使用 CT 和活体荧光成像系统对原位移植瘤模型进行示踪监测,并于肿瘤移植后第 14 天取材,IHC 检测组织免疫学及免疫微环境特征。 结果 LLC-luc 细胞注射后,原位移植肿瘤成功定植于左肺,可通过 CT 和活体荧光成像示踪监测肿瘤的发展过程,IHC结果显示肿瘤具备转移潜质,肿瘤内部存在免疫细胞浸润。 结论 本研究成功建立了一种易于评价,贴近于临床患者肺癌的发展的小鼠肺癌原位移植瘤模型。

摘要: 目的 本研究拟通过“套管法”和“吻合法”分别建立大鼠静脉置换模型,评估两种模型建立方法的优缺点,为后续静脉置换相关的病理机制研究提供安全有效的静脉置换模型。 方法 以无特定病原体( specific pathogen free,SPF)级 BN 大鼠作为供体和受体,分别采用套管法和吻合法构建下腔静脉置换模型,分析两组模型术中所用总手术时间和血流阻断时间,术后 48 h 模型存活率,术后每隔 1 周行腹部血管超声观察置换段血管通畅情况及血流速度变化,于术后 1 周、2 周、4 周处死大鼠获取置换段静脉,观察其管径变化,通过组织病理评估血管移植后病理改变特点、qPCR 检测移植段血管组织中 TGF-β1 的表达水平,评估两种模型建立方法的优缺点。 结果 套管法和吻合法各建立大鼠下腔静脉置换模型 18 只,术后 48 h 内成功率无明显差异[100. 0%(18 / 18) vs 94. 4% (17 / 18),P= 0. 310];套管法的总手术时间和血流阻断时间均较吻合法短[(35. 8 ± 3. 6) min vs (56. 8 ± 4. 9) min,P< 0. 05;(14. 6 ± 2. 9) min vs (35. 1 ± 4. 5) min,P< 0. 05]。 腹部血管超声结果显示,移植段静脉血流速度 早期血流速度较前有所增大,随着术后时间的延长,血流速度逐渐减小,4 周时套管组明显低于吻合组(P< 0. 05); 术后 4 周时,套管组模型移植段静脉周围可见静脉侧枝循环形成,但移植静脉尚通畅,吻合组 4 周内未见明显静脉侧枝循环形成随着术后时间的延长,两组模型中移植静脉管壁逐渐增厚直径均逐渐缩小,套管组变化较吻合组 更为明显,术后各个时间内其直径均小于吻合组(P< 0. 05);套管组术后静脉壁外层可见纤维素沉积形成纤维包 壳,肌层和内膜增生,管腔狭窄;吻合组模型术后移植静脉壁中单个核细胞及 CD4+ T 淋巴细胞浸润较套管组明显 (P< 0. 05);随着术后时间的延长,两组模型移植段静脉壁中 TGF-β1 的表达逐渐增多,各个时间点内,套管组均高于吻合组(P< 0. 05)。 结论 套管法和吻合法均能安全有效地建立大鼠下腔静脉置换模型。与套管法相比,吻合法建立的静脉置换模型具有更轻的非特异性验证和管壁重塑,远期通畅率更高,更适用于静脉置换相关实验研究。

摘要: 目的 为推动我国实验动物领域资源共享,满足不同层次、不同研究目的的需求,建立国家动物模型资源共享信息平台。 方法 发布实验动物及动物模型资源征集函,广泛收集实验动物及动物模型资源,并从文献与公共数据库补充相关资源信息。 结果 国家动物模型资源共享信息平台对实验动物资源、动物模型及相关产品资源信息进行系统采集和整理,涵盖实验动物资源、动物模型资源的研发、鉴定、评价和应用,以及实验动物专属试剂和仪器设备、基于实验动物的科技外包服务等。通过网络平台推动资源共享,为开展药物筛选和治疗等提供平台与数据支撑。 结论 本研究团队建立了国家动物模型资源共享信息平台,提供实验动物、动物模型及相关资源数据查询、供求单位需求信息发布和详细资料展示等一站式服务,为科技创新和社会发展提供高质量的实验动物与动物模型资源共享服务。

摘要:随着二代测序技术的快速发展,测序及其相关技术愈发成熟并向高精度和高通量的方向深入。传统的测序方式对样本量要求很高,而许多珍贵样本难以满足要求,因此能够降低样本量需求的技术亟待开发。而 Tn5 转座酶在文库构建中可以在片段化 DNA 的同时将接头序列加入到靶序列两侧,大大缩减了实验流程,同时也降低了对样本量的需求。 因此,Tn5 转座酶在生物技术领域的应用被逐渐开发,例如 CUT&Tag、stLFR 和 TRACE- seq 等技术就是将 Tn5 转座酶应用于表观测序、长片段测序和转录组测序等领域的研究成果。 简单的实验流程和极低的成本使其备受青睐。 本文中,我们对 Tn5 转座子及其在生物技术领域的应用进行了综述,以期方便大家理解 Tn5 转座子及其相关技术,为未来 Tn5 转座子相关技术的改进和推广提供参考。

摘要:昼间啮齿类动物具有与人类相似的昼夜节律,随着生物钟的发现,近年来此类动物逐渐展露出夜间啮齿类动物所不能替代的优势,以新兴模型的姿态出现在代谢、光反应、神经调节、社会行为等医学研究领域。 然而国内尚缺乏此类动物的报道。因此,本文回顾昼间动物时间生态位的调控,着重介绍长爪沙鼠( Meriones unguiculatus)、智利八齿鼠(Octodon degus )、尼罗河草鼠( Arvicanthis niloticus) 和羚羊地松鼠( Ammospermophilus leucurus)这四种较公认的昼间啮齿类动物的活动模式和应用进展,以期为时间生物学研究提供有力工具。

摘要:铁是大脑中最丰富的金属元素,铁稳态是保证大脑发挥正常生理功能的基础。当脑内铁代谢紊乱引起铁沉积,过量的铁会促进自由基的形成和氧化应激,从而导致神经元死亡。 为充分研究脑铁沉积疾病,需要建立动物模型。本文就不同建模方式及其实验鼠品种、铁剂种类进行综述,为脑铁沉积模型建立提供参考。

摘要:家犬(Canis lupus familiaris)与人类社会生态高度融合,已成为人类解析认知进化理论、进行比较认知研究、开展人类认知功能障碍性疾病研究的一种自然模型动物。功能性磁共振成像( functional magnetic resonance imaging,fMRI)是一种非侵入式、安全的能反映生物体大脑神经活动时空分布的神经影像学技术,近年来被应用于家犬行为认知特征神经机制的研究。本文简介了 fMRI技术;概述了部分研究者使用视觉、嗅觉、听觉等不同的实验范式对家犬大脑开展 fMRI,定位不同实验范式下被激活的大脑功能区,从而揭示家犬认知的神经机制;总结了 fMRI 技术在犬认知研究中技术和方法上的挑战。以期为国内开展家犬等动物认知研究者提供新的技术方法。

摘要:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节炎症、滑膜增生、软骨和骨破坏为主要表现的系统性自身免疫性疾病。本文基于中西医理论对 RA 的认识,对常用 RA 动物模型进行梳理,从发病机制、造模方法、模型评价指标、临床症状吻合度以及模型适用研究方面进行分析,以期为建立更好的 RA 动物模型提供参考。

摘要:慢性阻塞性肺疾病急性加重期(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD) 是指在慢性阻塞性肺疾病( chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的基础上持续恶化,并超出了日常变异范围,目前尚无标准 COPD 及 AECOPD 动物模型。 AECOPD 动物模型是研究 AECOPD 病理机制及寻找有效诊疗手段 的基础。 COPD 制备方法包括单纯烟熏法、烟熏联合气管滴注脂多糖法、汽车尾气吸入法等。 AECOPD 制备方法主要是在 COPD 模型基础上进行细菌病毒感染。该文梳理总结了国内外 COPD 及 AECOPD 动物模型的制备方法、评价指标,力争为科研和医务工作者提供有益参考。

摘要:载脂蛋白 E(apolipoprotein E,ApoE)在脑中参与胆固醇和脂质代谢,将胆固醇输送到神经元,并清除 脂质碎片以促进髓鞘修复。 ApoE4 是 ApoE 三种亚型之一,为散发型阿尔茨海默病( sporadic Alzheimer’ s disease, SAD)最主要的遗传危险因素。其发病机制可能涉及增加脑内 β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积并减少其清除率、Tau 蛋白过度磷酸化、脂质代谢异常和血脑屏障损伤。 ApoE4 转基因小鼠最早在 2 ~ 4 月龄出现 Aβ 相关病理 表型,4 月龄时海马总 Tau 蛋白和磷酸化 Tau 蛋白含量增加,且发生神经元丢失、树突损坏及突触减少,9 月龄空间学习记忆能力下降。 ApoE4 转基因小鼠广泛用于 AD 防治药物的研究,如胆碱酯酶抑制剂利斯的明、谷氨酰胺酶拮 抗剂 JHU-083、GABA 能神经元受体增强剂戊巴比妥、改善脑血管功能障碍的表皮生长因子、二十二碳六烯酸、菊粉和姜黄素等。 本综述可为 ApoE4 转基因小鼠在 AD 研究中的应用提供参考与借鉴作用。

摘要:孤独症谱系障碍(austim spectrum disorder,ASD)是一种以社交和沟通障碍以及重复和限制性行为为特征的神经发育障碍。 ASD 的表型异质性使得确定核心症状涉及的确切病因和病理生理机制困难重重,且这些症状通常伴有注意缺陷多动障碍、癫痫发作和感觉运动异常等共患病。动物模型提供了阐明疾病的病因和发病机制的重要平台。越来越多的研究利用如环境暴露、母体免疫激活(maternal immune activation,MIA)等诱导的动物模型进行孤独症谱系障碍病因病机的探讨以及药物治疗靶点的筛选。该文综述常见动物模型的不同神经网络机制、脑组织及相关因子变化、症状表型等方面,为今后进行精准动物实验研究提供针对性的动物模型选择,也可为阐明疾病神经生物学、开发潜在的治疗药物提供参考。