摘要: 目的 构建肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia,PCP)小鼠模型并进行免疫学评价。 方法 采用重度联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠气管滴注肺孢子菌构建PCP 模型,通过实时荧光定量PCR 及肺组织六胺银染色进行病原学鉴定,通过苏木素-伊红染色评估肺组织损伤程度,通过免疫荧光染色和流式细胞术进行免疫学评价。 结果 模型组小鼠感染6 周后,肺组织肺孢子菌rRNA 拷贝数显著高于假手术组,六胺银染色可见肺孢子菌滋养体和包囊,肺组织肺泡壁增厚,肺间质增宽,大量Gr-1⁺ 中性粒细胞CD68⁺ 巨噬细胞浸润,中性粒细胞活化标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO) 和巨噬细胞活化标志物一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)活化水平显著升高,肺内及肺泡灌洗液的中性粒细胞和单核细胞数量及比例显著高于对照组和假手术组。 结论 采用SCID 小鼠进行气管滴注肺孢子菌能构建稳定的PCP 小鼠模型,该模型表现出与临床相似的免疫学特征。

摘要: 目的 探讨可高效分离小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)的技术方法。 方法 分别采用骨片消化爬片法、全骨髓贴壁法、骨片消化液上清法和骨片消化研钵法等四种方法分离7 ~ 9 周龄雄性C57BL/6 小鼠的mBMSCs;于倒置显微镜下观察原代mBMSCs 形态;运用流式细胞术检测mBMSCs 特征性免疫表型;采用多向分化诱导检测mBMSCs 成骨分化能力与成脂分化能力。 结果 分离获得的原代细胞首次换液后于倒置显微镜下观察:骨片消化爬片法分离的细胞,仅见大量骨碎片和杂细胞,该法所分离细胞不再进行后续检测评估;全骨髓贴壁法分离的细胞,仅可见少量多角形贴壁细胞,夹杂大量杂细胞;骨片消化液上清法分离的细胞也可见较多长梭形、三角形贴壁细胞,但杂细胞较多;骨片消化研钵法分离的细胞,可见较多长梭形、多角形贴壁细胞,杂细胞少。分离细胞经培养传代到第3 代(P3 代)时,一方面采用流式细胞术分析mBMSCs 特征性免疫表型,结果表明骨片消化液上清法和骨片消化研钵法分离的mBMSCs 纯度均较高,全骨髓贴壁法不理想;另一方面,进行成骨分化诱导与成脂分化诱导,结果表明与全骨髓贴壁法分离的细胞相比,骨片消化液上清法和骨片消化研钵法所分离出的细胞具有较强的多向分化潜能。 结论 骨片消化液上清法和骨片消化研钵法分离获得的mBMSCs 纯度较高、质量较好。

摘要: 目的 研究虎杖醇提物(ethanolic extract of Polygonum cuspidatum,PCE)对小鼠肾间质纤维化的保护作用及其潜在分子机制。 方法 将50 只雄性C57BL/6N 小鼠随机分为5 组(n=10):正常对照组、模型组、虎杖醇提物低、中、高(75、150、300 mg/ kg)剂量组。除正常对照组外,其他各组灌胃腺嘌呤构建肾间质纤维化模型,虎杖醇提物低、中、高剂量组同时灌胃给予不同剂量的虎杖醇提物混悬液。各组经灌胃给药42 d 后用生化试剂盒测定血清肌酐(serum creatinine, Scr)和尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)水平,通过苏木精伊红染色和Masson 三色染色分别观察小鼠肾组织病理学变化及胶原沉积情况,采用Western Blot 法检测小鼠肾组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad6、α 平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、I 型胶原蛋白(Collagen I)的表达情况。 结果 与正常对照组比较,模型组小鼠BUN、Scr 水平显著增高(P< 0. 01)。肾组织病理学HE 染色可见肾小管结构破坏,炎细胞浸润肾间质,完整的健存肾单位明显减少;Masson 染色可见胶原纤维蓝色阳性染色面积明显增多。肾组织TGF-β1 的表达明显增多(P< 0. 01),而TGF-β/ Smad 通路的负调节因子Smad6的表达显著下调(P< 0. 01)。上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT) 标志蛋白之一α-SMA、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)蛋白之一Collagen I 的表达明显增加(P< 0. 01)。与模型组相比,虎杖醇提物各给药组BUN、Scr 水平以及肾组织TGF-β1、α-SMA 及Collagen I 的蛋白表达水平呈剂量依赖性降低,Smad6 的表达水平呈剂量依赖性升高。肾组织的病理改变及纤维沉积面积均有不同程度的改善。 结论 虎杖醇提物能减轻腺嘌呤诱导的小鼠肾功能损伤,改善肾间质纤维化,其机制与干预TGF-β1/ Smad 信号通路,抑制EMT及ECM 蛋白沉积有关。

摘要: 目的 利用自发类风湿关节炎小鼠模型(Tg-huTNFα 小鼠),探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对类风湿关节炎及其继发骨量丢失的影响。 方法 3 周龄Tg-huTNFα 小鼠分为3 组:(1)模型组(Model),每周腹腔注射1 次0. 1 mL/10 g 的生理盐水;(2)huTNFα 抗体干预组(Anti-huTNFα),每周腹腔注射1 次10 mg/ kg 的huTNFα抗体;(3)BMSCs 干预组(BMSCs),每周双侧膝关节腔各注射1 次5×10⁶ Cells 的BMSCs。干预期间每周称量1 次动物体重,同时对踝关节进行临床评分,各组动物干预10 周后处死取材。利用流式细胞仪分析外周血T 细胞、B 细胞、CD4⁺ / CD8⁺ T 细胞比例,液相芯片法检测血清中huTNFα、IL-4 及IL-1β 含量,HE 染色后评价左侧膝关节和踝关节病理改变,骨形态计量学方法分析右侧股骨骨结构变化。 结果 与模型组比较,BMSCs 和Anti-huTNFα 干预均可缓解Tg-huTNFα 小鼠体重的下降,抑制小鼠关节肿大变形,下调外周血huTNFα 含量,降低Tg-huTNFα 小鼠的关节病理评分,减少关节滑膜和软骨损伤面积。此外,骨形态计量学分析发现,BMSCs 干预可提高骨小梁数量和骨小梁面积百分数等,改善Tg-huTNFα 小鼠股骨骨结构。 结论 关节腔注射BMSCs 可以显著缓解Tg-huTNFα 小鼠类风湿关节炎症状,改善股骨骨结构,缓解RA 继发的骨量丢失。

摘要: 目的 建立白色念珠菌诱导的大鼠真菌性中耳炎模型,为药效评价提供动物模型支持。 方法 SD大鼠50 只,雌雄各半,随机分为正常对照组、空白注射组、潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组,每组10 只。实验开始1 ~ 3 d,潮湿组每日对大鼠右侧耳部滴入2 次0. 9%氯化钠注射液,免疫抑制组每日经口灌胃给予0. 81 mg/ kg 醋酸地塞米松药液,潮湿+免疫抑制组每日对大鼠右侧耳部滴入两次0. 9%氯化钠注射液的同时每日经口灌胃给予0. 81 mg/ kg 醋酸地塞米松药液。第4 天,各组麻醉后,潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组将1×1010 CFU/ mL 白色念珠菌悬液经鼓膜穿刺注入到大鼠右侧中耳腔,每只50 μL,空白注射组大鼠注入等体积空白培养液,正常对照组不做任何处理;每日对潮湿组、潮湿+免疫抑制组大鼠右侧耳部滴入2 次0. 9%氯化钠注射液。造模期间,观察各组大鼠一般症状;造模第5、10、15 天采集耳道分泌物进行白色念珠菌培养和革兰氏染色计数,造模第15 天ELISA 检测耳道灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β),HE 染色观察中耳组织病理学改变。 结果 与空白注射组相比,潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组大鼠均出现不同程度中耳炎症状,IL-6、TNF-α 和IL-1β 水平显著升高(P< 0. 05,P< 0. 01),中耳出现不同程度的黏膜充血、水肿及炎性细胞浸润现象,且免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组大鼠耳道分泌物中白色念珠菌数量均显著增加(P< 0. 05, P< 0. 01)。 结论 本实验使用鼓膜穿刺方式注射白色念珠菌建立真菌性中耳炎大鼠模型成功,在潮湿+免疫抑制条件效果更佳,可用来进行药效学作用的评价。

摘要: 目的 探究丙烯酰胺(acrylamide, ACR)对小鼠肺组织的损伤及其可能机制。 方法 以4 周龄SPF级雄性小鼠为实验动物,随机分为对照组和ACR 组(10 mg/ (kg·d)组和20 mg/ (kg·d)组),每组8 只。对照组给予常规饮用水;ACR 组按小鼠每日饮水5 mL 来配制ACR 的染毒浓度,每3 d 更换1 次,连续处理4 周。实验结束后取肺组织制作切片,进行组织病理学分析;利用试剂盒检测其氧化损伤的相关指标;进一步利用免疫荧光与Western Blot 技术检测Nrf2-ARE 通路相关蛋白表达。 结果 与对照组相比,随ACR 摄入浓度的增加,小鼠体重逐渐下降(P< 0. 01);组织病理学分析发现,ACR 组小鼠肺组织出现细支气管上皮肥大,肺泡上皮增生及肺泡腔面积明显减少,20 mg/ (kg·d)组病理学改变更为明显;氧化应激指标检测发现,与对照组相比,随着ACR 摄入浓度的增加,肺组织中GSH-PX 活性逐渐下降(P< 0. 05)、SOD 活力逐渐下降(P< 0. 05)、CAT 活力逐渐下降(P< 0. 01),而MDA 的含量明显上升(P< 0. 01);免疫荧光结果显示,与对照组相比,ACR 组肺组织中Nrf2蛋白表达显著上升,在10 mg/ (kg·d)组表达最高(P< 0. 001),且出现核转位现象,其伴侣蛋白Keap1 蛋白表达显著下降,在10 mg/ (kg·d)组表达最低(P< 0. 001);Western Blot结果显示,与正常对照组相比,ACR 组肺组织中Nrf2 基因及下游抗氧化基因HO-1 蛋白表达升高,在10 mg/ (kg·d)组最高(P< 0. 01),伴侣蛋白Keap1 表达显著下降,在10 mg/ (kg·d)组表达最低(P< 0. 01),而基因NQO-1 蛋白表达随着ACR 摄入浓度增加逐渐升高(P< 0. 01)。 结论 青春期小鼠ACR 暴露可导致肺组织损伤,该过程可能与肺组织氧化还原失衡有关。

摘要: 目的 构建痰湿阻肺型COPD 大鼠模型,并应用代谢组学技术揭示其代谢特征。 方法 采用烟熏联合LPS 气道滴注、强迫游泳和隔日禁食的方式构建痰湿阻肺型COPD 大鼠模型,通过观察大鼠行为变化,测定体重、肛温、血液指标、IL-6、IL-1β、TNF-α 含量,观察组织病理形态学变化对该模型进行评价;应用LC-MS 技术检测并筛选出正常组与模型组大鼠的血浆差异代谢物,进行通路富集分析。 结果 与正常组相比,模型组大鼠出现不同程度的咳嗽、喘息、精神萎靡、行为倦怠、毛色干枯、体重减轻、饮水增加、体温升高、粪便稀溏、舌苔肥大白滑;外周血中白细胞数和淋巴细胞数显著升高;BALF 中IL-6、IL-1β、TNF-α 含量显著升高;肺组织中炎性细胞浸润明显、肺泡腔体大小不一,结肠、十二指肠、回肠粘膜局部脱落;正常组与模型组间共有116个差异代谢物,主要涉及氨基酸生物合成和代谢、维生素消化吸收与代谢、脂质及类脂质合成与代谢等代谢通路。 结论 本研究提供了一种成功构建痰湿阻肺型COPD 大鼠模型的方法及其相应评价体系,并初步揭示了该模型的主要代谢特征。

摘要: 目的 通过研究不同造模周期对羟基脲致肾阳虚动物模型相关指标的影响,得出最佳造模时长,并对模型稳定性进行评价,为温补肾阳治疗肾阳虚证提供稳定的动物模型。 方法 用30 mg/ mL 羟基脲混悬液灌胃,300 mg/ kg 体重,每日1 次,在灌胃的第7、14、21、28 天分别对动物模型一般情况、肾阳虚相关生化指标、脏腑形态学等方面进行研究,得出最佳造模周期。 结果 羟基脲致肾阳虚大鼠在羟基脲灌胃第7 天,能量代谢:大鼠体温、肾Na⁺ -K⁺ -ATP 酶活性显著性降低、血清中cAMP、cAMP/ cGMP 比值均呈显著性降低(P< 0. 05),大鼠四肢末端及尾部温度、肾Ca²⁺ -Mg²⁺ -ATP 酶与总ATP 酶活力、cGMP 均无显著性差异(P> 0. 05);神经内分泌系统、免疫功能、泌尿生殖系统均无显著性差异。在羟基脲灌胃第14 天,能量代谢:血清中cGMP 显著性上升(P< 0. 05),总ATP酶活力显著性下降(P < 0. 05),大鼠四肢末端及尾部温度变化、肾Ca²⁺ -Mg²⁺ -ATP 酶活力均无显著性差异(P >0. 05);神经内分泌系统: 血清T、T4 均显著降低(P< 0. 05),尿17-OH-CS、血清T3 均无显著性差异(P> 0. 05);泌尿生殖系统:肾、睾丸均出现结构性病理变化,肾指数显著性下降(P < 0. 05);免疫功能:胸腺出现结构性病理变化,脾指数尚未出现显著降低(P> 0. 05)。在羟基脲灌胃第21 天,能量代谢:大鼠四肢末端及尾部温度、肾Ca²⁺ -Mg²⁺ -ATP 酶活力均显著降低(P< 0. 05);神经内分泌系统:尿17-OH-CS、血清T3 含量均呈显著降低(P< 0. 05);在羟基脲灌胃第28 天,免疫功能:脾指数显著降低(P< 0. 05),胸腺病理变化显著且不可逆,泌尿生殖系统:肾、睾丸的病理变化显著且不可逆。能量代谢、神经内分泌系统、免疫功能、泌尿生殖系统各指标在第28 天仍呈现下降趋势,与21 d 相比,能量代谢、神经内分泌系统、泌尿生殖系统各指标均无显著性差异(P> 0. 05)。 结论 羟基脲致肾阳虚大鼠模型各个检测指标出现显著性差异的时间段不尽相同,能量代谢、神经内分泌系统、免疫功能、泌尿生殖系统等多方面表现出显著性差异,最佳成模时间为28 d。

摘要: 目的 制备并评估慢性淋巴细胞白血病小鼠模型,以期为慢性淋巴细胞白血病的治疗提供临床前模型。 方法 通过文献查阅及实验确定环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)注射剂量以制备免疫抑制小鼠模型;通过腹腔注射、尾静脉注射将1 × 10⁷ 个MEC-1 细胞连续3 d 移植到小鼠体内,以制备慢性淋巴细胞白血病小鼠;应用流式细胞术、免疫组化等方法,检测慢性淋巴细胞白血病小鼠外周血白细胞、CD19⁺ CD5⁺ B 淋巴细胞变化情况,并分析肝、脾、胸腺、肺、淋巴及骨髓中MEC-1 细胞浸润情况。 结果 确定CTX 注射剂量为150 mg/ kg 注射4 d 能够显著降低小鼠免疫系统功能;移植MEC-1 细胞后小鼠表现慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)特征,其白细胞及B 淋巴细胞数量增多、骨髓细胞发生增殖。 结论 CTX 注射剂量为150 mg/ kg 连续注射4 d,可 以使小鼠免疫功能显著下降;成功制备CLL 小鼠模型。

摘要: 目的 探究瑞马唑仑对脓毒症引起的脑损伤的影响及机制。 方法 雄性C57BL/6J 小鼠,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、瑞马唑仑组(8 mg/ kg)、瑞马唑仑+Sirt1 抑制剂(EX527)组(8 mg/ kg 瑞马唑仑+5mg/ kg EX527)、EX527 组,每组38 只。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠模型。给予相应的干预后,观察并记录术后7 d 内小鼠存活率,采用Morris 水迷宫检测小鼠逃避潜伏期和穿越平台次数;手术后24 h,通过伊文斯蓝(EB)渗漏量评估血脑屏障(BBB)通透性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测脑组织白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β 水平,化学比色法检测脑组织丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,HE 染色观察海马组织病理学变化,TUNEL 法检测神经元凋亡,蛋白免疫印迹(Western Blot)检测海马组织沉默信息调节因子1(Sirt1) / 叉头框蛋白O1(FoxO1)通路相关蛋白表达。 结果 与假手术组相比,模型组小鼠的存活率、穿越平台次数、SOD 和CAT 活性、Sirt1 和胞质NF-κB p65 蛋白水平显著下降,逃避潜伏期、脑组织EB 含量、IL-6、TNF-α、IL-1β 和MDA 水平、海马神经元凋亡指数、乙酰化FoxO1(Ac-FoxO1) /FoxO1 比值和乙酰化核因子-κB p65(Ac-NF-κB p65)、胞核NF-κB p65 蛋白水平显著升高(均P< 0. 05);与模型组相比,瑞马唑仑组小鼠的存活率、穿越平台次数、SOD 和CAT 活性、Sirt1 和胞质NF-κB p65 蛋白水平显著升高,逃避潜伏期、脑组织EB 含量、IL-6、TNF-α、IL-1β 和MDA 水平、海马神经元凋亡指数、Ac-FoxO1/ FoxO1 比值和Ac-NF-κB p65、胞核NF-κB p65 蛋白水平显著降低(均P< 0. 05);EX527 可抑制Sirt1 表达,显著减弱瑞马唑仑对SAE 小鼠的上述保护作用(均P< 0. 05)。 结论 瑞马唑仑可提高脓毒症小鼠存活率,通过维持BBB 完整性、抑制神经炎症和氧化应激,减少神经元凋亡,减轻脓毒症引起的脑损伤;其作用机制可能与激活Sirt1/ FoxO1 通路,抑制NF-κB 活化有关。

摘要:神经根型颈椎病(cervical spondylotic radiculopathy,CSR)是由颈椎小关节紊乱或颈椎间盘退行性改变而压迫神经根的一种疾病,典型症状表现为神经根支配区的颈肩部和上肢放射痛或麻木,严重影响着患者的生活质量。为深入研究该疾病病因病机、发展过程、健康防护和药物治疗等,正确地选择和建立符合疾病临床特征的动物模型是解决问题至关重要的环节之一。本文查询国内外相关文献报道,将CSR 动物模型的制备归纳总结为单纯压迫模型(血管钳钳夹法、丝线结扎法、L 形钢柱压迫法、硅胶片压迫法、自体骨压迫法、尼龙鱼线压迫法)、联合刺激模型(钳夹法联合铬制肠线压迫法、福尔马林定量滤纸刺激法、药物介导联合动静失衡法)和无创性干预模型(低头屈曲固定法)三类。将CSR 动物模型制备进行总结概述,分析其特点和优劣势,以期为临床前研究选择适宜的动物模型和探索理想模型提供重要参考依据。

摘要:动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心脑血管疾病的共同病理基础,建立具有中医瘀毒证候特色的动脉粥样硬化动物模型及客观规范的评价体系是现代心脑血管疾病研究的重要内容,对中医药防治心脑血管疾病基础研发及药效机制评价具有重要意义。本文通过对动脉粥样硬化瘀毒证的动物模型构建及评价进行了多方面的总结和归纳,同时分析了当前模型构建及评价存在的问题,以期为建立规范化的动物模型提供参考。

摘要:随着航天技术不断发展,航天员太空飞行的时长不断增加。研究发现,航天失重环境可能会使航天员的生理和心理发生一定变化,对航天员的身体健康产生一些影响。为探究这些影响的机制并找出合理的对抗措施,使用实验动物建立模拟失重模型进行深入的研究至关重要,选择与人体组织器官、生理机能和习性相似的实验动物建立模拟失重模型,能更好地帮助相关研究。失重模型应参照能否模拟出由于失重引起心血管骨骼、肌肉等主要系统的变化,来评估模拟失重模型是否成功建立。本文对现有的地面模拟失重动物模型建立和相关研究情况进行了概述,以期为开展相关研究工作提供参考借鉴。

摘要:随着经济的发展,人们生活方式和饮食结构发生改变,高尿酸血症的临床检出率逐年增加,高尿酸血症是继高血压、糖尿病、高血脂之后的“第四高”,其发病率已趋于年轻化,因此,建立合适的动物模型是研究高尿酸血症发病机制及预防疾病的重要渠道。近年来关于高尿酸血症模型建立的文献较多,笔者对近年相关文献进行了查阅,总结了常见的动物模型并对增加尿酸来源、抑制尿酸酶活性、抑制尿酸排泄及其他造模方法进行了综述。可为研究治疗、预防高尿酸血症相关药物以及模型的构建方法提供参考。

摘要:改良的多平台水环境法(modified multi-platform method,MMPM)由单平台及多平台水环境法发展而来,目前多用于制备睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)动物模型。与单平台和早期的多平台水环境相比,MMPM 可扩大动物的活动范围,减少群体分离和社会孤立带来的应激,具有易行性和适用性高及造模死亡率低的优点,是国内外较常用的一种SD 造模方法。不过,影响SD 模型制备的实验因素较多,MMPM 在不同研究中的造模效果参差不齐。为提高模型的稳定性和实验的可重复性,本文梳理了MMPM 在SD 动物模型中的具体应用和评价方法,以供后期相关研究参考。

摘要:美国农业部《动物福利法》监管大中型动物如猴犬猫兔、海洋哺乳动物等的生产运输交易和使用等诸多商贸过程及其用于医学实验或非医学测试。该法规不管辖常用的实验室大鼠和小鼠,因而从动物类型上或从条例细则上不能全覆盖也不适合生物医学研究机构的实验动物管理。美国卫生署和NIH 的动物政策管辖全美生物医学研究机构的脊椎类动物实验使用,被国际生物医学研究机构普遍借鉴采纳。美国的这两套动物法规管理体系,目的职能明显不同,既平行,又交叉和相互补充。本文介绍其主要沿革,侧重生物医学研究机构的实验动物使用与管理委员会组成和职能演变,期望对我国实验动物的使用和管理有所启示。

摘要:美国卫生署是负责联邦实验动物法规的行政部门,国立卫生研究院(NIH)是实施该法规的专业部门并监管全美生物医学机构脊椎类实验动物使用和管理。1961 年NIH 最早建立了美国的实验动物管理框架,在实践中改进。1990 年代后发布著名的《IACUC 工作手册》和《实验动物管理与使用指南》,形成了较为完善的现代生物医学实验动物管理体系,被国际生物医学领域普遍采纳借鉴。本文介绍NIH 实验动物政策演变、管理体系、实验动物使用与管理委员会IACUC 的组成职责和工作运行机制,以期对我国实验动物行业有所启示。