摘要: 目的 探索前列腺癌神经内分泌分化( neuroendocrine differentiation,NED) 进展中单胺氧化酶 A(monoamine oxidase A,MAOA)和叉头框蛋白 A1(forkhead box A1,FOXA1)的动态变化特征,为临床神经内分泌型前列腺癌(neuroendocrine prostate cancer,NEPC)的治疗提供新的策略。 方法 通过恩杂鲁胺(enzalutamide,ENZ)长期持续诱导的方式建立 NED 的细胞模型和小鼠移植模型;采用 Western Blot 和 Real-time PCR 方法检测 MAOA、FOXA1 在 NED 中的动态表达;选用 GEO 数据库分析在多种 NED 模型中 MAOA 与 FOXA1 的动态变化趋势;构建前列腺癌细胞系小鼠移植模型,通过免疫组化分析体内模型中 MAOA、FOXA1 在 NED 中的动态表达;通过慢病毒转染干预 MAOA,检测 MAOA 对 FOXA1 的调控作用。 结果 MAOA 与 FOXA1 在 NED 过程中均呈现先升高后降低的动态变化特征;敲低前列腺癌细胞中 MAOA 可以导致 FOXA1 的表达降低,这可能是 MAOA 通过 FOXA1 在 NED的不同阶段发挥不同作用。 结论 MAOA 和 FOXA1 在 NED 过程中呈先升高后降低的趋势,MAOA 的表达能影响FOXA1 的水平,MAOA/ FOXA1 可能在 NED 过程中发挥动态调控的作用。

摘要: 目的 建立干扰素诱导跨膜蛋白 3 基因(Ifitm3)敲除小鼠模型,探究 Ifitm3 对小鼠神经干细胞增殖和分化的影响。 方法 利用 CRISPR/ Cas9 技术,建立 Ifitm3 敲除小鼠模型,通过基因型鉴定和 Western Blot 检测IFITM3 的敲除效果;利用苏木素-伊红(HE)染色和流式细胞术等方法分析 Ifitm3 敲除小鼠和野生型小鼠的表型差异。 分离并培养野生型和 Ifitm3 敲除小鼠成体神经干细胞,统计神经球数量和大小,qRT-PCR、Western Blot、免疫荧光技术检测神经干细胞增殖和分化的能力。 结果 成功建立Ifitm3 敲除小鼠模型,Ifitm3 敲除小鼠发育正常,组织病理学及免疫系统未见明显异常。 体外实验显示 Ifitm3 敲除抑制小鼠神经干细胞的自我更新潜能,导致神经干细胞增殖能力下降,并且抑制神经干细胞向未成熟神经元和星形胶质细胞分化。 结论 IFITM3 缺失导致神经干细胞增殖和分化能力下降,IFITM3 可能参与了神经干细胞的功能调节。

摘要: 目的 建立双光子显微镜下可视化胶质瘤、壁细胞和血管的活体自发荧光的基因小鼠模型并进行评价。 方法 以 PDGFRβ-Cre^{+ / -}:Rosa26-tdTomato^{+ / -}基因工程小鼠为观察壁细胞和血管结构的载体,接种 GL261-CFP 小鼠胶质瘤细胞并对颅骨进行透明化,通过双光子显微镜动态跟踪观察胶质瘤增殖侵袭过程中血管与壁细胞的动态变化。 结果 通过基因鉴定证实 PDGFRβ-Cre^{+ / -}:Rosa26-tdTomato^{+ / -}基因工程小鼠成功繁育。 对比C57BL/ 6 小鼠,基因工程小鼠的形态外观和繁殖等无显著性差异,组织苏木素-伊红(HE)染色切片分析显示脏器发育无异常。 Tamoxifen 诱导下基因工程小鼠的 Cre 重组酶活性至第 7 天作用完全。 接种 GL261-CFP 后观察到胶质瘤增殖侵袭的动态过程及肿瘤内血管形态结构紊乱、游离壁细胞增多。 结论 成功构建了荧光可视化壁细胞的基因工程小鼠,分别利用异硫氰酸荧光素-葡聚糖标记血管和青色荧光标记肿瘤细胞,使用玻璃圆片与固定环替代小鼠颅骨,实现了活体状态下长期稳定地动态跟踪小鼠接种脑肿瘤后血管及血管支持细胞的形态结构变化,为研究脑胶质瘤提供了病理可视化的动物模型。

摘要: 目的 评估围绝经期综合征肾阴虚证“病证结合”模型大鼠的汗液分泌情况,并探讨其生化指标的变化。 方法 将 18 只 SD 雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组,每组 6 只。 假手术组行假手术,模型组和阳性药组大鼠行双侧去卵巢手术,术后第 7 天给予 L-甲状腺素(92 mg / kg),每天 1 次,连续给药 7 d 建立围绝经期综合征肾阴虚证“病证结合”模型。 阳性药组每日灌胃清骨散汤剂(7. 3 g / kg),假手术组和模型组灌胃等量蒸馏水,每天 1 次,共 14 d。 采用和田-高垣试剂着色法测定大鼠足跖部汗液分泌。 酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠血清 cAMP、cGMP、LH、GnRH、E₂ 水平。 蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定大鼠足趾肉垫组织的激动 M₃ 胆碱能受体(M₃R)、激动 β₂ 得上腺素能受体(β₂AR)、水通道蛋白 5(aquaporin,AQP₅ )表达水平。 结果 (1)与假手术组相比,模型组出现体温升高、双耳发红、易激惹、毛发干枯等阴虚证的典型行为学表现,且大鼠汗液分泌显著增多。 (2)模型组血清 cAMP 水平显著升高,cGMP 水平显著降低,cAMP / cGMP 比值显著升高,LH、GnRH 水平显著升高,E₂ 水平显著降低。 (3)大鼠足趾组织的 M3R 表达下调,β₂AR、AQP₅ 表达水平上调。 与模型组相比,阳性药组体温降低、毛发脱落减少等阴虚证典型行为学表现缓解;血清 cAMP 水平显著下降,cAMP / cGMP 比值显著降低,LH、GnRH 水平降低,但不影响血清 E₂ 水平。 大鼠足趾组织的 M₃R 上调,β₂AR、AQP₅ 表达水平下调。 结论 去势联合 L-甲状腺素建立的围绝经期综合征肾阴虚证“病证结合”模型大鼠汗液分泌显著增多,其机制可能与 cGMP、cAMP 及其在汗腺上调控汗液分泌的关键蛋白 M₃R、β₂AR、AQP₅ 的变化有关。

摘要: 目的 探究宣肺解毒方对多重耐药铜绿假单胞菌肺炎的机理研究。 方法 除空白组外,其余组采用气管插管的方法建立 MDR-PA(9 × 10⁸ CFU/ mL,0. 5 mL)肺炎大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、宣肺解毒方低剂量组、宣肺解毒方中剂量组、宣肺解毒方高剂量组以及亚胺培南西司他丁组,每组 12 只;以上除空白组与模型组外,剩余给药组统称为干预治疗组。 造模 1 d 后,宣肺解毒方低、中、高剂量组分别给予相应剂量的宣肺解毒方(Xuanfei Jiedu Formula,XFJDF)灌胃,亚胺培南西司他丁组给予亚胺培南西司他丁( imipenem,IPM)腹腔注射,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,每天 2 次,持续 7 d。 观察大鼠的一般状态、体重变化、肺湿重/ 肺干重(W/ D),采用苏木素-伊红(HE)染色法于光镜下观察大鼠肺组织病理学改变,采用酶免疫吸附测定法检测大鼠血清中 IL-1β、TNF-α、TGF-β、IL-6 炎症因子水平,采用比色法检测大鼠血清中 GSH 含量与 MPO 活性,采用 TBA 法检测大鼠血清中 MDA 含量,试剂盒法检测总抗氧化能力 T-AOC;采用免疫组化法对肺组织中 TLR4、Myd88、NF-κBp65 蛋白进行定位与半定量观察,采用 qPCR 和 Western Blot 技术检测大鼠肺组织中 TLR4、Myd88、NF-κBp65 mRNA 和蛋白表达水平。 结果 与空白组比,模型组大鼠反应迟缓,呼吸频率加快、呼吸杂音增多且出现不同程度寒颤,饮食饮水减少,体重下降;肺 W/ D(P<0. 01)显著升高,肺组织的肺泡腔以及肺支气管周围存有大量炎性细胞浸润,部分肺泡壁出现断裂融合形成气腔并伴有炎性渗出,肺间质增厚,局部可见肺纤维形成等;血清中 IL-1β、TNF-α、TGF-β、IL-6水平明显升高(P<0. 01),MDA 含量增加、MPO 活性增强、GSH 含量与 T-AOC 能力降低(P<0. 01),肺组织中TLR4、Myd88、NF-κBp65 mRNA 和蛋白表达显著升高(P<0. 01)。 与模型组相比,干预治疗组均不同程度改善上述指标变化(P<0. 05,P<0. 01),以宣肺解毒方高剂量组以及亚胺培南西司他丁组最为显著(P<0. 05,P<0. 01)。 结论 宣肺解毒方能够显著改善 MDR-PA 大鼠的一般状态、体重、肺 W/ D 以及肺病理,降低炎症与氧化应激反应,其作用机制可能与宣肺解毒方抑制肺组织中 TLR4 / Myd88 / NF-κB 通路表达有关。

摘要: 目的 建立不同剂量的滴鼻和气管内定量气溶胶感染途径的豚鼠结核模型,并进行对比分析,为标准化豚鼠呼吸道感染结核模型建立提供基础。 方法 雌性哈氏豚鼠 24 只,随机分为 6 组,每组 4 只,气管内定量气溶胶和滴鼻途径感染豚鼠均用两个剂量,均分为 3 个组(A、B、C 组,D、E、F 组)。 气溶胶感染途径分为 3 组:A 组(气溶胶对照组,未感染对照)、B 组(气溶胶低剂量感染组,5 × 10² CFU)和 C 组(气溶胶高剂量感染组,5 × 10³CFU);滴鼻感染途径也分为 3 组:D 组(滴鼻对照组,未感染对照)、E 组(滴鼻低剂量感染组,1 × 10⁴ CFU)和 F 组(滴鼻高剂量感染组,5 × 10⁴ CFU)。 结核菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染豚鼠后观察其一般表现,第 14 天解剖,取肺、脾、肝组织,记录大体病变,用苏木素-伊红(HE)染色分析组织中结核肉芽肿病变,采用抗酸染色分析原位菌的分布和数量,菌分离培养分析脏器荷菌量。 结果 4 个感染组(B、C、E、F 组)豚鼠的肺、脾、肝均有肉眼可见的结核病灶及 HE 染色后可见结核肉芽肿病变。 抗酸染色和荷菌量提示,B、C 组的菌主要分布在肺组织,少数分布在脾和肝,荷菌量为 10⁴~ 10⁵ CFU/ mL;E、F 组的菌在肺、脾、肝均有分布,荷菌量为 10⁴~ 10⁵ CFU/ mL。 B、C、E、F组的病变和荷菌量,组间均无显著性差异,但 B、C、F 组内病理学及病原学指标的标准差较小。 结论 两个剂量的气溶胶和滴鼻途径均能制备豚鼠急性结核模型,病理学检查和病原学分析表明,气溶胶 5 × 10² CFU Mtb 即可成功制备该模型,且模型均一性较好;滴鼻途径 5 × 10⁴ CFU Mtb 也可制备更均一的豚鼠急性结核模型,然而气溶胶 5 ×10² CFU 比滴鼻途径 5 × 10⁴ CFU 发展为更严重的急性结核模型。

摘要: 目的 通过不同给药方式不同剂量四氯化碳诱导的 C57BL/ 6J 小鼠肝纤维化模型,通过影像学、分子生物学及组织病理学等方法进行比较,以此优化四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型。 方法 36 只健康 C57BL/6J 雄性小鼠,适应性饲养 1 周后,随机分为空白组、2 周组、3 周组、4 周组、6 周组及 8 周组共 6 组( n=6),除空白组外均作为阳性对照组。 空白组以橄榄油 0. 2 mL 腹腔注射,每周 3 次,各阳性对照组以 20% CCl₄-橄榄油溶液腹腔注射,剂量为 2 mL/ kg,每周 3 次。 记录各组小鼠体重变化情况。 分别于第 15、22、29、43 及 57 天测量小鼠肝弹性值 后 取 血, 分 别 测 量 小 鼠 谷 丙 转 氨 酶 ( alanine aminotransferase, ALT)、 天 门 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 ( aspartateaminotransferase,AST)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏蛋白(laminin,LN)、前Ⅲ型前胶原(pro-type Ⅲ collagen,PC-Ⅲ)及Ⅳ型胶原(type Ⅳ collagen,Ⅳ-C)含量,对肝组织进行苏木精-伊红( hematoxylin and eosin,HE)、Masson 及天狼星红染色,Metavir 评分系统评估肝纤维化程度。 结果 与空白组相比,各阳性对照组小鼠精神萎靡、扎堆喜卧。 在小鼠体重方面,4 周组、6 周组、8 周组与空白组相比均明显下降,而 2 周组与空白组相比体重明显升高。 肝弹性超声显示,随着给药时间增加,弹性值呈进行性升高。 生化结果显示,与空白组相比,各阳性对照组 ALT、AST水平均显著升高,随着给药时间增加,各阳性对照组 HA、LN、PC-Ⅲ及Ⅳ-C 水平呈升高趋势。 病理结果显示:随着给药时间增加,小鼠肝纤维化程度呈进行性加重,4 周时符合肝纤维化病理诊断,6 周时有假小叶形成趋势,而 8 周时已形成假小叶,提示早期肝硬化。 结论 20% CCl₄-橄榄油溶液以每周 3 次、连续 4 周腹腔注射的方法能成功建立 C57BL/ 6J 小鼠肝纤维化模型,稳定性好、成模较快,可以作为肝纤维化模型制造的优化方案。

摘要: 目的 采用非稳态负荷(allostatic load,AL)的理论与方法评估衰老以及左归丸对自然衰老雄性 SD大鼠模型的影响。 方法 自然衰老雄性 SD 大鼠,分别在 2、5、8、14、18、21 月龄剪尾取血,其中 18 月龄时随机分为老年对照组、左归丸低剂量组和左归丸高剂量组。 左归丸干预 3 个月后,取用血样以及肌肉、肝等组织样本。 血样用流式细胞术检测 T 淋巴细胞数量和凋亡率,并检测血清生化指标,包括低密度脂蛋白胆固醇( low-density lipoprotein cholesterol, LDL-c )、 高 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇 ( high-density lipoprotein cholesterol, HDL-c )、 甘 油 三 酯(triglycerides,TG)、 总 胆 固 醇 ( total cholesterol, TC)、 游 离 脂 肪 酸 ( free fatty acids, FFA)、 25 羟 维 生 素 D ( 25hydroxyvitamin D,25-OH-D)、皮质酮( corticosterone,CORT)、C 反应蛋白( C-reactive protein,CRP)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)。 将 LDL-c、TC、HDL-c、FFA、TG、CORT、IL-6、CRP、25-OH-D、CD3⁺T 淋巴细胞计数、CD3⁺T 淋巴细胞凋亡率共 11 项指标用于 AL 评分。 结果 大鼠血清 LDL-c、TG、TC、25-OH-D、CRP、IL-6 随增龄发生显著改变,但变化模式有所不同。 CD3⁺T 淋巴细胞计数随增龄显著降低(P<0. 01),CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T 淋巴细胞凋亡率随增龄显著升高(P<0. 01)。 左归丸干预后,老年大鼠血清 CORT 水平显著提高(P<0. 01)、CD8⁺T 淋巴细胞凋亡率显著降低(P<0. 05)。 AL 评分自 5 月龄开始升高,至 18 月龄到达峰值。 结论 与单一指标比较,AL 能更好地表征衰老过程。 左归丸可以提高衰老大鼠的应激反应能力,延缓其免疫衰老。

摘要: 目的 探讨长链非编码 RNA-gm33782(LncRNA-gm33782)在急性肾损伤( acute kidney injury,AKI)肾小管损伤中的功能以及异鼠李素改善肾小管炎性细胞凋亡的作用机制。 方法 将 48 只雄性 C57BL/ 6J 小鼠随机分为对照组、模型组、治疗组(AKI 模型构建后灌胃给予 30 mg / kg 异鼠李素)、空载质粒电转染组、LncRNAgm33782 敲低组、LncRNA-gm33782 过表达组、LncRNA-gm33782 敲低组 + 模型组、LncRNA-gm33782 过表达 + 治疗组 8 组,通过腹腔一次性注射 20 mg / kg 顺铂诱导小鼠 AKI,原位电转染技术用于介导肾 LncRNA-gm33782 的敲低和过表达。 采用 Chirp 实验捕获 AKI 肾 LncRNA-gm33782 结合蛋白进行质谱分析,挖掘 LncRNA-gm33782 直接作用靶蛋白;通过观察电转染敲低 LncRNA-gm33782 和异鼠李素( isorhamnetin,ISO)治疗干预后小鼠肾功能、病理结构改变、肾炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达,评价 LncRNA-gm33782 在 AKI 中的作用;NF-κB 被作为介导炎症的关键信号通路,Bax、Bcl-2 蛋白表达量以及流式凋亡检测结果被用于评价异鼠李素对 AKI 肾小管炎性细胞凋亡的治疗作用。 结果 AKI 小鼠肾表现出严重的肾小管损伤以及巨噬细胞浸润和炎症,异鼠李素的治疗干预和 LncRNAgm33782 电转染敲低均能够减轻 AKI 肾损伤。 LncRNA-gm33782 主要表达于 AKI 损伤的肾小管细胞,质谱检测发现补体因子-H(complement factor-H,CFH)与其有直接结合关系。 体外过表达 LncRNA-gm33782 后,CFH 表达量随即升高,而异鼠李素对 AKI 细胞炎性凋亡的治疗作用受到抑制。 结论 异鼠李素是通过抑制 LncRNA-gm33782 对CFH 的调控作用减轻 AKI 肾小管细胞炎性凋亡。

摘要:随着老龄化的加剧,骨质疏松症(osteoporosis,OP)的发病率逐年升高,已成为全球公共卫生问题之一。 其主要特征为骨量降低及骨微结构破坏,临床上常表现为疼痛、驼背、身高降低,甚至出现骨折。 积极进行与OP 相关的科学研究显得尤为重要,动物模型的构建已经成为参与医药研究的关键手段之一,尤其是在探索新的治疗方法和药物开发过程。 其中,融合了中医药特色的“病证结合”动物模型在我国中医药现代化研究中占据着不可替代的地位。 本文从目前病证结合 OP 动物模型的现状出发,总结模型构建及评价方法,以期为病证结合 OP 动物模型的研究提供一定的思路及参考。

摘要:听源性癫痫( audiogenic seizures,AGS)是由于强声刺激引起的癫痫,发作时伴全身性肌肉痉挛,其动物模型在研究癫痫发生机制、寻找致病基因及调控通道、筛选新的抗癫痫药物( antiepileptic drugs,AEDs)等方面具有重要意义。 本文从发病特点、发病机制及致病基因等方面总结了目前常见 AGS 动物模型研究进展,以期为AEDs 研发提供新的研究方向和靶点。

摘要:Duchenne 肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是一种由编码抗肌萎缩蛋白的 Dystrophin基因突变导致的致死性、进行性、X 连锁隐性遗传肌肉疾病。 目前,DMD 尚无治愈手段,临床研究进展缓慢,动物模型的建立对 DMD 的实验研究作用越来越重要。结合研究发现,mdx 小鼠具有 DMD 患者相同的发病机制,广泛应用于 DMD 病理机制和新药开发的研究中。 线粒体损伤是 DMD 重要的病理机制之一,对线粒体的保护是 DMD 的潜在治疗靶点,因此探讨 mdx 小鼠与线粒体损伤的关系具有重要意义。 本文就近年来 DMD 模型鼠 mdx 小鼠线粒体损伤的研究进展进行综述,为相关实验提供参考。

摘要:雪貂应用于抗感染药物评价的优势在于病原微生物(尤其是病毒株)能不经宿主适应直接进行感染和传播,且动物感染后的临床症状与人极为相似。 虽然雪貂在抗病毒药物的研发中起到了极为重要的作用,但其应用范围仍有一定的局限性,可能与雪貂缺少相应的实验动物饲养和应用的国家级标准,缺乏特异性的诊断和检测试剂等因素有关。 本文对雪貂作为感染疾病模型的特点进行总结,并汇总分析了雪貂在抗感染药物研究中的应用方向,旨在促进雪貂作为实验动物的标准化应用。