摘要: 目的 本文通过比较常见斑马鱼骨质疏松( osteoporosis,OP)模型不同建立方法,优化建立一种快速、稳定、灵敏的造模方法。 方法 采用铁过载及泼尼松龙(prednisolone,Pred)诱导 OP 模型,观察骨形成情况及动物死亡率,分组为:空白对照组(Control 组)、模型组(包括 FAC 组和 Pred 组)、阳性对照组(AC 组)。 铁过载诱导法采用枸橼 酸 铁 铵 ( ammonium ferric citrate, FAC) 为 造 模 药 物。 Pred 诱 导 法 有 Pred-3 受 精 后 天 数 ( day post fertilization,dpf)法,造模时间为 3 ~ 9 dpf;Pred-5 dpf 法,造模时间为 5 ~ 10 dpf;Pred 撤药法,3 dpf 开始造模,7 ~9 dpf 每天撤去 1 / 3 造模药物。 进而比较常用药物阿尔法骨化醇( alfacalcidol,AC)、骨化三醇( calcitriol,CA)、阿仑膦酸钠(alendronate,AL)抗 OP 效应,选择稳定、灵敏的阳性药,并进一步对不同染色方法及染色条件进行优化。 结果 FAC 在 500 μg / mL 剂量下未能观察到对骨形成的显著影响。 骨节数及第一椎骨长度结果显示,与 Control组比较,Pred-3 dpf 诱导法 Pred 组均降低,具有显著性差异(P<0. 01,P<0. 05),但斑马鱼死亡率较高;Pred-5 dpf法无显著性差异;Pred 撤药法 Pred 组均降低,具有显著性差异(P<0. 01),且无死亡。 给予 AC、CA、AL 后均具有抗 OP 作用,CA 抗 OP 作用更为灵敏、稳定。 茜素红(alizarin red,ARS)染色参数优化结果显示,染色浓度为 0. 02%,染色 2 h, 0. 5% KOH 和甘油分别以(3 ∶ 1,3 h)和(1 ∶ 1,14 h)洗涤条件为最佳。 染色对比结果显示,钙黄绿素对骨节部位染色较为灵敏,ARS 则对第一椎骨处染色较为灵敏。 结论 采用 Pred 撤药法可诱导建立快速、稳定、灵敏的斑马鱼 OP 模型,是研究 OP 的稳定可靠模型。

摘要: 目的 探讨八宝丹(Ba Bao Dan,BBD)对阿霉素诱导的斑马鱼心脏损伤的作用。 方法 建立化疗药物阿霉素(doxorubicin,Dox)诱导的斑马鱼心肌损伤模型,在体视显微镜下观察 BBD 在不同浓度下对心包水肿比例及心率的干预作用;采用转基因斑马鱼 Tg(mpx:EGFP)原位观察 BBD 对心脏中性粒细胞浸润的抑制作用;观察BBD 对超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶( catalase,CAT)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的影响;Real-time qPCR 检测铁死亡相关因子包括谷胱甘肽过氧化物酶 4( glutathione peroxidase 4a,gpx4a)、前列腺素内过 氧 化 物 合 成 酶 ( prostaglandin-endoperoxide synthase 2, ptgs2 )、 花 生 四 烯 酸 5 脂 氧 合 酶 ( arachidonate5-lipoxygenase,alox5a)、酰基辅酶 A 合成酶长链家族成员 4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,acsl4)的mRNA 表达;采用亚铁离子荧光探针检测斑马鱼心脏亚铁离子的积累情况。 结果 BBD 能够减缓 Dox 导致的斑马鱼心包水肿和心率减慢,减少心脏中性粒细胞的浸润(P<0. 05);降低 MDA 的浓度(P<0. 05),同时增强 SOD 和CAT 的活性(P<0. 05);显著抑制铁死亡,减少斑马鱼心脏亚铁离子的积累,抑制 ptgs2、alox5a、acsl4 的表达(P<0. 05),同时促进 gpx4a 的表达(P<0. 05)。 结论 BBD 通过抑制脂质过氧化的发生调节铁死亡从而减弱 Dox 诱导的斑马鱼心肌损伤,改善心功能。

摘要: 目的 探究自主跑轮运动能否调控 Nrf2 / HO-1 通路影响肝氧化应激从而缓解 HFFC 膳食诱导的肝脂质沉积。 方法 将 8 周龄 C57BL/ 6J 小鼠适应性饲养 1 周后随机分为普通饮食组(NC 组,n= 10)和高脂肪、果糖和胆固醇饮食组(HFFC 组,n= 20)。 饲养 10 周后将 HFFC 组分为安静组(HFFC 组,n= 10)和 HFFC 结合运动干预组(HFFC + EX 组,n= 10)。 HFFC + EX 组小鼠笼中装有自主跑轮供其自由活动,每天记录跑轮圈数,连续8 周。 末次干预结束后间隔 24 h 禁食 12 h 处死小鼠,取血液和肝进行检测。 结果 (1) HFFC 饮食诱导小鼠的体重、肝重及肝指数显著高于 NC 组,运动干预后显著降低(P<0. 05);(2) 与 NC 组相比,HFFC 组小鼠 HDL-C 和LDL-C 显著升高,运动干预 8 周后 LDL-C 水平显著降低(P<0. 05);(3)HFFC 组小鼠肝脂滴面积及肝 TG 含量显著高于 NC 组,而 HFFC + EX 组显著减少(P<0. 05);(4)与 NC 组相比,HFFC 组小鼠氧化酶 MDA 含量显著上升,Nrf2 入核及基因表达显著减少,运动干预后 SOD 和 T-AOC 活性明显增强,Nrf2 入核及基因表达、HO-1 和 SOD-1 的表达水平显著升高(P<0. 05);(5)HFFC 饮食组小鼠肝细胞凋亡数及 CHOP 表达水平较 NC 组显著增加,运动组肝细胞凋亡数、CHOP 和 Bax / Bcl-2 表达水平显著下降(P<0. 05)。 结论 自主跑轮运动可通过调节 Nrf2 / HO-1 通路减轻 HFFC 膳食诱导的肝脂质沉积,从而缓解肝细胞氧化应激状态,减少细胞凋亡。

摘要: 目的 探讨 13 个品系的遗传多样性高血压小鼠的血压表型差异、肾病理变化以及相关致病通路。 方法 将 13 个品系的遗传多样性小鼠分别与 Cckbr^{- / -} 小鼠进行杂交,得到不同遗传背景的 Cckbr^{+ / +}、Cckbr^{+ / -}、Cckbr^{- / -}3 种基因型的小鼠。 利用 BP-2000 无创血压分析系统测量小鼠血压,利用 Western Blot 检测小鼠肾 CCKBR蛋白表达变化,利用苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化( IHC)检测小鼠肾组织病理学变化,利用转录组测序(RNA-Seq)分析筛选原发性高血压致病相关通路。 结果 3 个特定小鼠品系(A/ J、LOT、FIM) 中,收缩压( systolic bloodpressure,SBP)Cckbr^{- / -}组较 Cckbr^{+ / +}组具有显著性差异( P<0. 05)。 HE 染色及 IHC 发现高血压对小鼠造成了一定程度的肾损伤。 通过 GO 与 Pathway 富集分析,发现差异表达基因富集在新陈代谢与昼夜节律调节等方面。 结论遗传多样性高血压小鼠在血压表型、病理特征及基因表达等方面呈现显著性差异,有效模拟了人群的遗传异质性对疾病表型的影响。

摘要: 目的 探讨来曲唑(雌激素合成抑制剂)是否会对多囊卵巢综合征患者的肠道微生物群的组成、多样性和丰度有影响。 方法 利用来曲唑诱导并构建了 PCOS 大鼠模型,通过 16S rRNA 的测序方法分析了正常和PCOS 大鼠模型的肠道菌群结构。 结果 在门水平,PCOS 组的厚壁菌门(73. 29% ± 5. 34% vs. 77. 17% ± 4. 01%)的丰度较正常组降低,拟杆菌门(23. 85% ± 6. 22% vs. 17. 21% ± 6. 90%)的丰度增加。 在属水平,PCOS 的罗氏菌属(5. 61% ± 3. 20% vs. 16. 13% ± 6. 20%)和苏黎世杆菌属(1. 75% ± 2. 23% vs. 9. 98% ± 7. 34%)的丰度较正常组降低,而乳杆菌属(18. 83% ± 11. 50% vs. 15. 88% ± 7. 06%)、普雷沃氏菌属(4. 58% ± 1. 09% vs. 0. 46% ± 0. 15%)和瘤胃球菌属(2. 97% ± 1. 56% vs. 1. 16% ± 0. 60%)的丰度增加,进一步分析了两组差异菌群的 KEGG 信号通路,结果显示 PCOS 大鼠模型的肠道内胆汁酸生物合成相关的信号通路发生了变化。 结论 来曲唑灌胃构建的 PCOS 大鼠模型的肠道菌群结构明显发生紊乱,并且可能与胆汁酸生物合成相关的信号通路有关。

摘要: 目的 DNA 甲基化微单倍型是指极短范围内多个甲基化位点的组合,其单倍型具有丰富的多样性。筛选和验证小鼠血液中年龄相关的 DNA 甲基化微单倍型。 方法 首先,构建基于小鼠参考基因组的 DNA 甲基化微单倍型理论数据集。 其次,利用网络数据库中小鼠血液 DNA 甲基化高通量测序信息,采用 Spearman 秩相关分析方法筛选年龄相关的 DNA 甲基化微单倍型。 最后,以验证数据集交叉验证。 结果 小鼠基因组中 50 bp 范围内的DNA 甲基化微单倍型位点数量共计 6787 142 个,由个位数的 CpG 位点所组成的 DNA 甲基化微单倍型占比98. 64%。 在 58 个小鼠血液样本中共筛选出 5835 个年龄相关的 DNA 甲基化微单倍型( Spearman 秩相关检验,|rho | > 0. 5, P<0. 01),在 DNA 甲基化微单倍型中占 0. 086%。 最后,在 95 例独立的样本中对具有高相关性的前100 个年龄相关的 DNA 甲基化微单倍型进行验证,最终得到 44 个位点。 结论 本研究筛选出的年龄相关的 DNA甲基化微单倍型可以为后续小鼠血液表观年龄预测及衰老研究提供借鉴。

摘要: 目的 本研究旨在探索智能针灸机器人针刺可行性及安全性评价的实验动物平台,为后续进一步开展研究奠定基础。 方法 将 6 只 2 月龄广西巴马小型猪作为实验对象,进行麻醉后针刺验证。 首先进行人工针刺验证,每只实验动物选取 6 个穴位,行提插捻转手法后留针 20 min,并进行自身前后对照。 实验共进行 28 d,每2 d 进行 1 次实验,共 10 次。 人工针刺验证后在已选 6 个穴位的基础上每个穴旁 10 mm 处取一点,共 12 点,使用针灸机器人智能针刺模块对实验动物进行不同频率及角度的针刺操作进一步验证动物平台的稳定性及可行性。 结果 血常规中安全性相关指标均无异常,较自身前后对比稳定。 血生化指标无异常,较自身前后对比稳定。 在实验全程监测中动物的平均心率为每分钟 124 次。 动物的平均血压为 87 / 36 mmHg。 巴马小型猪在室温 25 ℃ 下的平均体温为 36 ℃ 。 体温在实验过程中及实验前后均无明显的变化。 在搭建的实验平台基础上,针灸机器人智能针刺模块针刺手法操作预实验均顺利完成,实验过程中未出现针刺相关异常情况如弯针、断针、滞针等,实验动物未出现明显异常。 结论 本研究借鉴了已有的小型猪实验方法,初步建立起了稳定的智能针灸机器人针刺可行性及安全性评价实验动物平台,为进一步智能针灸机器人的相关研究开展奠定基础。

摘要: 目的 建立树鼩永生化角膜基质细胞( corneal stromal cells,CSCs)系,并探讨其在病毒感染中的应用。 方法 利用组织块贴壁培养法分离培养树鼩原代 CSCs,将携带 SV40T 基因的慢病毒转染细胞后,再挑取单克隆进行传代培养,传至 50 代以上进行形态学观察并与 40 代细胞形态进行比较,波形蛋白( vimentin)和 SV40T 基因免疫荧光鉴定、核型鉴定、细胞增殖曲线测定。 用单纯疱疹病毒 1 型( herpes simplex virus-1,HSV-1) (McKrae 株)、寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)(GZ01 株)、登革病毒Ⅱ型以及甲型流感病毒 H1N1(PR8 株)在该细胞上进行病毒感染实验。 结果 传至 50 代以上的树鼩永生化 CSCs 呈梭形,细胞形态结构与 40 代相比仍较好。 vimentin 和 SV40T 基因免疫荧光表达阳性。 增殖曲线结果显示:细胞生长旺盛,第 4 ~ 5 天时处于对数生长期。 原代细胞核型的染色体数稳定为 62 条,而永生化细胞第 21、56 代突变为 64 条且保持稳定。 病毒感染实验显示:树鼩永生化 CSCs 对 HSV1(McKrae 株)、ZIKV(GZ01 株)、登革病毒Ⅱ型以及 H1N1(PR8 株)病毒敏感,产生较高感染滴度,分别为 1. 32 ×10⁵、5. 62 × 10⁶、2. 69 × 10⁷、7. 76 × 10⁴ CCID50 / mL。 结论 成功建立了树鼩永生化 CSCs 细胞系,提示该细胞系可用于单纯疱疹病毒、寨卡病毒、登革病毒和甲型流感病毒感染眼角膜疾病的作用机制及抗病毒药物的研究。

摘要: 目的 观察不同结扎位点和禁食方法对部分胆管结扎( partial bile duct ligation,pBDL)致胆汁淤积C57BL/ 6J 小鼠模型的影响,研究成模率高、症状典型、稳定性好的 pBDL 造模方法。 方法 分别采用选择性结扎左肝胆管(L-pBDL 法)和左侧与正中胆管汇合处(ML-pBDL 法)进行造模,观察不同 pBDL 结扎法对 C57BL/ 6J 小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、总胆红素、总胆汁酸和肝组织病理学的影响。同时,通过术前分别禁食 12 h 和禁食 16 h、术后均禁食禁水 4 h,观察不同禁食方法对 ML-pBDL 模型体症和肝损伤的影响。 结果 ( 1) ML-pBDL 组黄疸出现率 52. 94%、术后 3 周内存活率 64. 71%,而 L-pBDL 组黄疸出现率11. 76%、术后 3 周内存活率 82. 35%;与假手术组比较,L-pBDL 组和 ML-pBDL 组血清肝功能指标均显著升高(P<0. 01),且 ML-pBDL 组 ALP 活性明显高于 L-pBDL 组(P<0. 05);相对于 L-pBDL 组,ML-pBDL 组术后 3 周的肝纤维化更严重(P<0. 01);(2)禁食 16 h 组黄疸出现率 93. 33%、术后 3 周内存活率 73. 77%,而禁食 12 h 组黄疸出现率 42. 86%、术后 3 周内存活率 71. 42%;与假手术组比较,禁食 16 h 组和禁食 12 h 组 ALP 活性、谷草转氨酶/ 谷草转氨酶比值、总胆汁酸水平与胶原纤维面积占比均显著升高(P<0. 05)。 禁食 16 h 组各观察指标均高于禁食 12 h组,但无显著性差异(P>0. 05),禁食 12 h 和禁食 16 h 组均出现明显的胆管增生与肝纤维化(P<0. 01),且禁食16 h 组纤维化更严重(P<0. 01)。 结论 L-pBDL 和 ML-pBDL 结扎法均可建立小鼠胆汁淤积模型,但 L-pBDL 模型症状仅表现为一过性的损伤特征,而 ML-pBDL 模型的肝病变典型、症状稳定,且适当延长术前禁食时间可提高ML-pBDL 模型的成模率和稳定性,且病理症状更典型。

摘要: 目的 研究虫草菌丝(cultured mycelium Cordyceps sinensis,CMCS)对四氯化碳(CCl₄ )诱导肝纤维化模型小鼠肝腺苷酸活化蛋白激酶/ 沉默信息调节因子 1(AMPK/ SirT1)信号通路的作用机制。 方法 将 C57BL/ 6小鼠(n= 40)按体重分层随机分为 5 组:正常对照组、CMCS 对照组(3. 0 g / kg)、模型对照组、CMCS 1. 5 g / kg 组(1. 5 g / kg)和 CMCS 3. 0 g / kg 组(3. 0 g / kg),采用腹腔注射 10% CCl₄(2 mL/ kg)诱导小鼠肝损伤模型。 造模与给药2 周后,检测血清 ALT、AST、TBil 水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝炎症;天狼星红染色观察肝胶原沉积;Jamall’ s法检测肝羟脯氨酸( Hyp) 含量;流式蛋白定量技术( cytometric bead array,CBA) 检测肝组织 IL-6、MCP-1、IFN-γ、TNF、IL-10、IL-12p70 水平;免疫组化观察肝组织 Collagen Ⅰ和 SirT1 表达情况;RT-qPCR 检测肝组织 Prkaa1、Prkaa2、Lkb1 和 p53 水平。 结果 CCl₄ 染毒 2 周后,模型对照组血清 ALT、AST、TBil 水平均明显升高(P<0. 05);HE 染色和天狼星红染色分别提示肝内大量炎症细胞浸润和胶原沉积;肝 Hyp 含量及 IL-6、MCP-1、TNF 表达明显增多(P<0. 05),IL-10 和 IL-12p70 表达明显减少(P<0. 01);免疫组化染色提示肝组织 Collagen I 表达增多;SirT1在肝窦间隙表达减少,在胶原沉积处表达增多;RT-qPCR 检测提示肝组织 Prkaa1、Prkaa2、Lkb1 表达下降,p53 表达增多(P<0. 05)。 CMCS 可显著降低纤维化小鼠血清 ALT、AST 水平;降低肝组织 IL-6、MCP-1、TNF 表达( P<0. 05),上调 IL-10、IL-12p70 水平(P<0. 05);减少肝炎细胞浸润、胶原形成和 Hyp 含量,促进肝窦内 SirT1 表达,上调肝 Prkaa1、Prkaa2、Lkb1 表达(P<0. 05);减轻肝内 Collagen Ⅰ、p53 表达(P<0. 05)。 与 CMCS 1. 5 g / kg 组相比,CMCS 3. 0 g / kg 组抑制肝炎症、胶原沉积及上调 AMPK/ SirT1 表达更为明显(P<0. 05)。 结论 CMCS 可通过上调AMPK/ SirT1 信号通路而发挥抗 CCl₄ 诱导小鼠肝纤维化的作用。

摘要: 目的 基于网络药理学和体内动物模型实验,评价表没食子儿茶素没食子酸酯( epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对顺铂(cisplatin,CIS)诱导的大鼠急性肾损伤( acute kidney injury,AKI) 的保护效果。 方法 通过TCMSP、Gene Cards、OMIM 网站收集 EGCG、AKI 作用靶点,取交集后构建蛋白质-蛋白质互作网络(PPI),Cytoscape3. 9. 1 对交集靶点进行可视化分析,筛选出关键靶点,通过 DAVID 数据库进行 KEGG 和 GO 富集分析。 32 只雄性Wistar 大鼠,随机分为对照组(CON 组)、EGCG 组、顺铂组(CIS 组)和 CIS + EGCG 组。CON 组和 CIS 组灌胃生理盐水,EGCG 组和 CIS + EGCG 组灌胃 EGCG(40 mg / kg),连续 28 d,第 26 天 CIS 组、CIS + EGCG 组腹腔注射 CIS(7mg / kg),第 29 天收集血液和组织。 检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肾病理变化;TUNEL 检测肾组织细胞凋亡情况;Western Blot、qRT-PCR 及免疫组化验证分析结果。 结果 网络药理学筛选出 87 个 EGCG 与 AKI 交集基因,25 个核心靶点,通过 PI3K/ AKT 等信号通路和多种生物过程影响 AKI 的发展;EGCG 预处理明显降低 AKI 大鼠血清中 BUN、SCr 水平,改善 AKI 大鼠肾病变,缓解 AKI 大鼠肾组织凋亡;WesternBlot、qRT-PCR 及免疫组化结果表明预处理 EGCG 可激活 PI3K/ AKT 通路。 结论 基于以上研究结果,推测出EGCG 可能通过激活 PI3K/ AKT 信号通路进而缓解 CIS 诱导的大鼠 AKI。

摘要: 目的 本研究采用立体定向手术在一侧海马注射海人藻酸( kainic acid, KA),建立内侧颞叶癫痫(medial temporal lobe epilepsy,MTLE)慢性模型,通过行为学、电生理学和病理学验证其有效性。 方法 取健康的C57BL/ 6 野生型雄鼠 22 只,随机分成对照组(n= 6)和实验组即 KA 注射组(n= 16)。 对照组和实验组分别在海马 CA3 区进行微量注射生理盐水和 KA,1 周后再次进行立体定向手术,植入脑电记录电极。 植入术后 1 周开始记录小鼠脑电活动,统计癫痫发作次数和持续时间。 通过对小鼠的观察与记录,分别从行为学、电生理学和病理学方面验证慢性癫痫模型。 结果 本实验对 22 只 C57BL/ 6 野生型雄鼠进行实验,对照组均无癫痫发作,而实验组存活的小鼠均出现癫痫发作。 成模的小鼠在行为学上发生了凝视、咀嚼、头面部肌肉抽搐、肢体痉挛等慢性癫痫自发发作行为,有 2 只小鼠因手术死亡、4 只小鼠在急性发作期死亡、10 只小鼠模型成功建立;脑电图呈内侧颞叶癫痫样脑电图改变;在病理组织学方面,经免疫荧光染色发现:CA3 区神经元丢失,星形胶质细胞大量增生,符合海马硬化特征性的病理改变。 结论 通过使用 KA 单侧、单次颅内注射构建的模型具有耗时、易操作、易成型等多项优势,该模型展现出与人类 MTLE 相似的脑电图、行为与神经病理改变,有助于研究治疗颞叶癫痫的药物,是癫痫外科手术预后判断的理想动物模型。

摘要:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种中枢神经系统退行性疾病,主要表现为认知功能障碍、言语丧失等,其发病与多种因素有关。 近年来,斑马鱼因其在大脑结构与功能、神经传导及 AD 致病基因等方面与人具有高度同源性而受到广泛关注。 本文就斑马鱼作为动物模型探索 AD 发病机制、进行 AD 药物评估、药物筛选等方面的优势展开综述,以期为 AD 的发病机制及新药开发研究提供新思路。

摘要:肠纤维化(intestinal fibrosis,IF)是炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的并发症之一,其难愈性和复发性给患者带来了严重的负担。 目前该发病机制尚不明确,且尚无有效治疗方法,故造模研究备受关注,但现缺乏公认的动物模型。 本文就国内外肠纤维化动物模型的建立方法、适用范围、关键特征和优缺点,从造模周期和造模方式两个维度做一综述。

摘要:微计算机断层扫描技术(micro-computed tomography, Micro-CT)作为一种无创性技术手段,在动物实验中应用广泛,可用于辅助检测多种动物疾病模型,包括骨骼疾病、肺部疾病、口腔疾病、代谢性疾病、中耳及内耳疾病以及肿瘤等,能够提供多样性、科学性和可靠性的影像数据,因此已经成为动物实验中必不可少的实验工具之一。 本综述将深入介绍 Micro-CT 的成像原理、梳理其在动物疾病模型研究中的应用,并总结了 Micro-CT 技术上的局限性并对未来的前景进行展望。