摘要: 目的 探讨炎症性肠病( inflammatory bowel disease,IBD) 小鼠子代中患 IBD 是否存在性别差异。 方法 将 BALB/ c 雌鼠随机分为正常对照组(Na?ve 组)和 DSS 模型组(DSS 组),Na?ve 组小鼠自由饮用高压灭菌水,DSS 组连续饮用 2%葡聚糖硫酸钠溶液(dextran sodium sulfate,DSS),7 d 后更换为自由饮用高压灭菌水 10 d,共进行 3 ~ 4 个循环,同时与健康雄鼠合笼构建 IBD 母鼠模型。 待幼鼠出生后 8 周,将幼鼠分为 Con 组和 IBD 组,Con组自由饮用高压灭菌水 7 d,IBD 组饮用 3% DSS 溶液 7 d 构建 IBD 模型。 造模期间通过每日监测小鼠体重、粪便一致性以及便血情况进行疾病活动指数评分;观察结肠组织的病理切片、杯状细胞和黏液层变化;酶联免疫吸附法检测结肠中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、IL-33 和 IL-10 的含量;实时荧光定量 PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)测定结肠中紧密连接蛋白和 MUC-2 mRNA 表达水平。 结果 与 IBD 雌性小鼠相比,IBD 雄性小鼠疾病活动指数评分更高、结肠显著缩短,结肠中出现大量炎性浸润、隐窝异常和杯状细胞缺失的现象,闭合蛋白(occludin,OCLN)的 mRNA 相对表达量显著降低,IL-6、IL-33 水平显著升高、IL-10 水平显著下降。 结论 IBD 小鼠的子代中雄鼠比雌鼠的结肠炎症状更严重,主要与肠道上皮屏障功能严重受损有关。

摘要: 目的 探讨孕期恐惧应激对胎盘葡萄糖营养物转运体( glucose transporter,GLUT)表达的影响,为孕期应激致胎损理论提供证据。 方法 将 20 只 Wistar 孕鼠,随机分为对照组和模型组,每组 10 只。 其中,模型组采取旁观电击法造模持续 19 d,对照组正常饲养。 实验结束后记录胎产数量、胎盘与胎鼠重量,计算胎盘效率。 透视电镜观察胎盘细胞形态学变化。 生物信息学分析筛选孕期恐惧应激胎盘的差异基因,进行基因富集分析( gene set enrichment analysis,GSEA)。 蛋白质免疫印迹法(Western Blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、免疫组化法检测葡萄糖转运蛋白 1( glucosetransporter 1,GLUT1)、葡萄糖转运蛋白 3(GLUT3)、葡萄糖转运蛋白 6(GLUT6)和葡萄糖转运蛋白 7(GLUT7)表达水平。 结果 与对照组相比,模型组胎产数量和胎盘效率显著降低;模型组胎盘微绒毛稀疏短少,线粒体及内质网肿胀;GSEA 分析发现,模型组胎盘基因显著富集在细胞葡萄糖稳态;Western Blot、Real-time PCR 和免疫组化结果表明,模型组胎盘中 GLUT1、GLUT6 以及 GLUT7 表达均下降。 结论 孕期恐惧应激暴露导致不良胎产结局,可能与胎盘中 GLUT1、GLUT6、GLUT7 三种关键葡萄糖转运体降低有关。

摘要: 目的 明确急性臭氧暴露后大鼠肺泡灌洗液来源的外泌体中微小 RNA(microRNA,miRNA)表达谱的变化,并分析其与肺损伤的潜在关系。 方法 将成年雄性 Wistar 大鼠放入气体染毒舱内分别暴露于 0、0. 5 和2 ppm 臭氧 6 h。 实验结束后 24 h 麻醉大鼠,收集肺泡灌洗液并提取外泌体。 采用 miRNA-seq 技术检测外泌体中差异表达的 miRNA,使用 miRDB 数据库对组间差异表达 Top 10 miRNA 进行靶基因预测,并对靶基因进行 Gene Ontology 功能富集和 KEGG Pathway 分析。 利用 qRT-PCR 方法对表达丰度较高且组内均一性较好的差异表达miRNA 进行验证。 结果 与 0 ppm 组相比,0. 5 ppm 组大鼠肺泡灌洗液中外泌体 miRNA 有 8 个上调、55 个下调,而2 ppm 组中有 32 个上调、61 个下调。 与 0. 5 ppm 组相比,2 ppm 组大鼠肺泡灌洗液中外泌体 miRNA 有 90 个上调、74 个下调。 差异表达 Top 10 miRNA 的靶基因主要参与调控 DNA 结合、杂环化合物结合和影响转录等方面,并与癌症、MAPK、PIK3-AKT、TNF、ErbB、线粒体自噬和 FoxO 等信号通路密切相关。 qRT-PCR 结果表明测序结果基本可靠。 结论 急性臭氧暴露可导致大鼠肺泡灌洗液中外泌体 miRNA 表达谱发生变化,差异 miRNA 可能参与了臭氧暴露所致的肺组织炎症、肺损伤等病理进程。

摘要: 目的 探讨石斛酚抑制碱烧伤大鼠角膜新生血管( corneal neovascularization,CNV) 的作用。 方法构建 SD 大鼠角膜碱烧伤模型,随机分成正常对照组、模型对照组、低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组,每组各 10 只。 低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组分别于伤后第 1 天结膜下注射 2. 5 mg / 0. 05 mL、5 mg / 0. 05 mL 石斛酚,2 mg / 0. 05 mL 阿柏西普。 伤后第 3、7、14 天,观察并计算角膜新生血管占全角膜面积的百分比、角膜混浊评分并测量角膜厚度。 碱烧伤第 14 天,处死全部大鼠,通过苏木素-伊红(HE)染色和免疫组化观察角膜组织中 VEGF 和 CD34 蛋白表达水平,以及通过 ELISA 检测各组 VEGF、IL-1β、TNF-α 的蛋白含量。 结果 碱烧伤后第 7、14 天,低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组角膜新生血管面积占全角膜面积百分比均显著低于模型对照组(所有 P<0. 05)。 碱烧伤后第 14 天,高浓度石斛酚组角膜混浊评分显著小于模型对照组(P<0. 05),模型对照组、低浓度石斛酚组角膜厚度均显著高于正常对照组(所有 P<0. 001)。 但是,高浓度石斛酚组、阿柏西普组角膜厚度与正常对照组相比较,均无显著性差异(所有 P>0. 05)。 此外,低浓度石斛酚组、高浓度石斛酚组、阿柏西普组角膜组织中 VEGF、IL-1β、TNF-α 蛋白表达均显著低于模型对照组(所有 P<0. 01)。 结论 结膜下注射石斛酚对碱烧伤大鼠角膜新生血管有抑制作用,并能促进角膜水肿的吸收。

摘要: 目的 针对 10 岁以上中老年食蟹猴开展心脏结构和功能基础研究,为研究老年疾病动物选择提供基础数据。 方法 本研究选取 144 只 10 岁以上中老年食蟹猴作为研究对象,分为 10 ~ 15 岁组雌性 37 只、雄性 66只,16 ~ 20 岁组雌性 21 只、雄性 20 只,通过一般指标(身体质量指数、血压、心率)、血液生化指标(血糖、血脂和离子指标)、心脏结构和功能指标比较分析,获得中老年食蟹猴心脏结构和功能相关基础数据。 结果 10 ~ 15 岁组和 16 ~ 20 岁组,一般指标比较,随着年龄增加,雌猴和雄猴血压和心率升高,雄猴血压变化具有显著性差异。 两组血液生化指标比较,随着年龄增加,雌猴和雄猴血糖、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、血钙、血钠、血钾都显示升高,其中,血糖、甘油三酯(雄)、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(雄)、低密度脂蛋白胆固醇(雄)、血钙、血钠、血钾变化具有显著性差异;乳酸脱氢酶显示下降,具有显著性差异。 两组心脏收缩功能比较,随着年龄增加,雌猴和雄猴左房前后内径都下降,具有显著性差异;雌猴室间隔收缩末径,左心室舒张和收缩末径显示减小,左心室舒张末容积,左心室收缩末容积,左心室质量指数下降,具有显著性差异,雄猴变化不显著。 两组心脏舒张功能比较,随着年龄增加,雄猴二尖瓣舒张晚期速度下降,具有显著性差异;雌猴左室侧壁舒张早期速度升高,具有显著性差异。 对雌猴和雄猴代谢指标与心脏结构和功能指标进行相关性分析,结果雌猴代谢指标与心脏结构和功能指标的相关性较弱,Γ 绝对值最高不超过 0. 39,雄猴代谢指标与心脏结构和功能指标的相关性相对较强,Γ 值绝对值最高达到 0. 66。 结论 基于超声诊断结合代谢指标对食蟹猴心脏功能进行研究,建立中老年食蟹猴心脏结构和功能相关指标基础数据,随着年龄的增加,食蟹猴的血糖、血脂指标升高,心脏收缩和舒张功能有下降趋势,与中老年人群变化相似,为开展心脏功能相关的老年性疾病研究动物选择提供数据支撑。

摘要: 目的 基于网络药理学研究川芎挥发油抗心绞痛的作用机制,并用动物实验加以验证。 方法 通过水 蒸 气 蒸 馏 法、 气 相 色 谱-质 谱 联 用 仪 ( gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)、 口 服 利 用 度 ( oral bioavailability,OB)筛出挥发油成分;使用 Pubchem、SwissTarget、DisGeNET、DrugBank 数据库和 R 语言分别获取挥发油成分的靶点、心绞痛的靶点和交集靶点;蛋白质-蛋白质相互作用通过 String 数据库完成;使用 R 语言的ClusterProfiler 包对交集靶点进行基因本体分析( gene ontology,GO) 和京都基因与基因组百科全书分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG) 富集分析, 并通过 Cytoscape 构建中药-成分-靶点-通路网络; 借助AutoDock vina 1. 2. 3、Pymol 3. 0、Discovery Studio 2016 软件进行分子对接,分析关键靶点和主要挥发油成分的亲和力。最后,通过动物实验进一步验证川芎挥发油对心绞痛的治疗效果。 结果 网络药理学研究共得到 10 个挥发油成分和 22 个关键靶点,这些靶点与神经递质、突触膜上的受体、物质代谢等生物过程以及神经活性配体-受体相互作用、视黄醇代谢、药物代谢-细胞色素 P450 等通路密切相关;分子对接结果表明 3-butylidenephthalide、Alphaselinene、Trans-ligustilide 等挥发油成分与多个关键靶点结合发挥治疗作用。 动物实验表明川芎挥发油通过调节射血分数 ( ejection fraction, EF)、短轴缩短率 ( fractional shortening, FS)、左室收缩末内径 ( left ventricular internal diameter in systole,LVIDs)和每搏输出量(stroke volume,SV)水平以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)、天冬氨酸转氨酶( aspartate aminotransferase,AST)活性,促进受损心肌细胞中 ADRA1A、CHRM5 蛋白的表达,改善心肌纤维状态,减小细胞间隙,减少炎性细胞浸润表现出保护心肌的作用。 结论 川芎挥发油具有有效保护受损心肌组织,治疗心绞痛的作用。

摘要: 目的 探讨兰香草水煎液对寒凝血瘀证原发性痛经大鼠的防治效果及其作用机制。 方法 随机将60 只健康 SPF 级 SD 雌性大鼠分为正常组、模型组、布洛芬组、兰香草高剂量组、兰香草中剂量组、兰香草低剂量组,每组 10 只。 除正常组外,其余各组采用寒冷刺激联合苯甲酸雌二醇以及缩宫素建立寒凝血瘀证原发性痛经大鼠模型。 于造模第 5 天开始灌胃给药,连续给药 10 d。 观察记录大鼠症状表现,测定大鼠扭体反应情况、血液流变学指标,测定大鼠血清中血浆血栓素 B₂ ( thromboxane B₂ ,TXB₂ )、6-酮前列环素 F_1α( 6-Ketoprostacyclin F_1α ,6-KetoPGF_1α )、雌二醇(estradiol,E₂ )和孕酮( progesterone,PROG) 水平,测定大鼠子宫组织中前列腺素 F_2α( prostaglandinF_2α ,PGF_2α )、前列腺素 E₂(prostaglandin E₂, PGE₂)、一氧化氮(nitric oxide,NO)和钙离子( calcium,Ca²⁺)水平,以及计算子宫、卵巢脏器指数并观察其组织病理形态变化。 结果 与正常组比较,模型组大鼠出现明显寒凝血瘀证症状及扭体反应,子宫、卵巢组织形态出现明显增生、炎症、水肿等病变,血浆粘度、红细胞压积和全血粘度均明显升高(P<0. 01),血清中 TXB₂ 、E₂ 水平和 E₂/ PROG 比值明显升高(P<0. 01)以及 6-Keto-PGF_1α 和 PROG 水平明显降低(P<0. 01),子宫指数和卵巢指数均明显增高(P<0. 01),子宫组织中 PGF_2α 、Ca²⁺水平和 PGF_2α/ PGE₂ 比值明显升高(P<0. 01)以及 PGE₂ 、NO 水平明显降低(P<0. 01)。 与模型组比较,兰香草水煎液可明显改善模型大鼠的症状表现和子宫、卵巢组织形态病变,显著延长扭体反应潜伏时间和降低扭体次数(P<0. 01),显著降低血浆黏度、红细胞压积和全血粘度(P<0. 01),降低血清中 TXB₂ 、E₂ 水平及 E₂/ PROG 比值和升高血清中 6-Keto-PGF_1α 、PROG 水平,降低子宫指数和卵巢指数(P<0. 01,P<0. 05),降低子宫组织中 PGF_2α 、Ca²⁺水平及 PGF_2α/ PGE₂ 比值(P<0. 01,P<0. 05)和升高子宫组织中 PGE₂ 、NO 水平(P<0. 01)。 结论 兰香草水煎液可有效改善寒凝血瘀证原发性痛经大鼠的临床症状,具有良好的防治效果,其作用机制可能与大鼠血清中 TXB₂ 、6-Keto-PGF_1α 、E₂ 、PROG 水平和子宫组织中 PGF_2α 、PGE₂ 、NO、Ca²⁺水平有关。

摘要: 目的 观察红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导的癫痫大鼠模型神经精神行为表现,在此基础上比较不同性别大鼠在癫痫急性发作和缓解期感觉、运动及学习记忆行为学实验中表现的性别差异,并探讨其可能机制。 方法 4 周龄健康 SD 大鼠随机分为对照组和模型组,每组 22 只,雌雄各半。 腹腔注射 KA 诱导癫痫模型,观察各组大鼠癫痫发作潜伏期及 2 h 内发作次数,采用 Racine 等级标准评定癫痫急性发作等级,并记录皮层脑电图;采用旷场实验、平衡木行走、高架十字迷宫、Y 迷宫及新物体识别等行为学实验观察大鼠感觉、运动及学习记忆能力;ELISA 法检测海马组织中 γ-氨基丁酸( gama aminobutyric acid,GABA)水平,尼氏染色观察海马神经元损伤情况,Western Blot 检测海马区 Synapsin-1 和 Synaptotagmin 1 蛋白表达。 结果 雄性及雌性 SD 大鼠在接受 KA 腹腔注射后均表现出典型的癫痫发作行为,但与雄鼠相比,雌鼠癫痫急性发作的潜伏期显著缩短(p=0. 014)、2 h 内发作总次数显著减少(p=0. 019),且癫痫发作达到Ⅳ ~ Ⅴ级的时间早于雄性大鼠(P<0. 01)。 癫痫缓解期的行为学结果显示,与对照组比较,模型组大鼠在旷场实验中的总运动距离及中央区域运动距离增多,雌性模型大鼠的理毛次数显著减少(P<0. 01)且与雄性模型大鼠比较具有显著性差异(P<0. 01);在平衡木行走实验中完成任务所需时间及评分增加;在高架十字迷宫中雄性模型大鼠在封闭臂的探索次数增加;在 Y-迷宫及新物体识别实验中的新异臂/ 物体优先指数减少。 与对照组比较, 模型组大鼠海马神经元损伤, 且海马 GABA 浓度及 Synapsin-1 和Synaptotagmin 1 的蛋白表达均显著下降,但无性别差异。 结论 KA 腹腔注射可成功诱导大鼠癫痫模型,且不同性别大鼠在癫痫急性发作特点和缓解期感觉、运动行为学实验中的表现有所差异,但不同性别癫痫模型大鼠海马GABA 浓度及突触可塑性相关蛋白表达无显著性差异。 因而,导致 KA 诱导癫痫大鼠行为反应性别差异的机制有待深入探究。

摘要: 目的 通过网络药理学技术预测酸枣仁复方(Ziziphi spinosae semen formula,ZSSF)对于抑郁症的关键作用靶点,并通过利血平诱导的抑郁斑马鱼模型验证酸枣仁复方治疗抑郁症的作用机制。 方法 通过 TCMSP数据库检索酸枣仁复方的药物作用靶点,利用 UniProt 数据库对靶点名称进行校正。 采用 GeneCards、OMIM、NCBI数据库检索抑郁症相关靶点,并对 3 个数据库的靶点结果进行汇总去比重。 利用 STRING 数据库预测了交集靶点的蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)信息,利用 Metascape 数据库构建进行富集研究,并利用微生信对 KEGG 和 GO 的富集 结果实现了可视化。 通过利血平诱导的斑马鱼抑郁模型进行行为学实验和 RTqPCR 实验,验证酸枣仁复方对抑郁症的治疗作用。 结果 筛选出抑郁症与酸枣仁复方的交集靶点 188 个,蛋白质-蛋白质相互作用结果显示,酸枣仁复方抗抑郁主要作用于肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血清白细胞介素 2( IL-2)、血清白细胞介素 6(IL-6)、血清白细胞介素 1β(IL-1β)、血清白细胞介素 10( IL-10)等靶点,KEGG 通路富集分析表明,酸枣仁复方通过 TNF 信号通路、PI3K-Akt 信号通路、cGMP-PKG 信号通路等多种信号通路发挥其治疗抑郁症的作用。 动物实验 结果显示,与利血平组相比,酸枣仁复方高、中、低剂量组斑马鱼在声光刺激下的运动距离显著延长(P<0. 05),运动速度显著增快(P<0. 01)。 RT-qPCR 结果显示,与利血平组相比,酸枣仁复方高、中、低剂量给药组斑马鱼脑组织中 TNF-α、IL-2、IL-6、IL-1β、IL-10 mRNA 表达水平上调(P<0. 001)。 结论 酸枣仁复方通过多成分、多靶点发挥抗抑郁作用,且其抗抑郁作用可能与抑制炎症因子的表达有关。

摘要: 目的 梳理盆腔炎性疾病后遗症(sequelae of pelvic inflammatory disease,SPID)动物模型特点,为规范造模流程、提高成模率提供参考。 方法 检索近 40 年有关 SPID 动物模型的文献,总结并分析动物种类、造模方法、阳性对照药、评价指标等。 结果 纳入 243 篇文献,多采用苯酚胶浆法或微生物感染法诱导大鼠建立 SPID 模型,造模周期在 14 ~ 16 d 为主,大多以盆腔组织形态观察和苏木素-伊红(HE)染色判定模型成功与否。 中医病症结合模型研究较少。 结论 SPID 动物模型造模方法缺乏一致性的判定标准,建议综合动物行为学变化、盆腔组织形态学改变以及病理等进行评价。 同时,中医证候造模缺乏有效的方法和评价标准,有待进一步研究发展。

摘要:随着全球人口老龄化加剧,神经退行性疾病发病率逐年上升,严重影响老年患者的生活质量,给社会带来沉重负担。 甘草次酸是中药甘草的主要活性成分之一,具有抑制神经炎症、保护神经元等作用,对于甘草次酸及其衍生物在神经退行性疾病中的作用机制研究日益增多。 本研究综述了甘草次酸及其衍生物在阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、多发性硬化和小脑萎缩的作用及其机制的研究,并对其未来在神经退行性疾病中的应用进行讨论与展望。

摘要:坏死性凋亡介于细胞凋亡和坏死之间,是一种受调控的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶非依赖性程序性细胞死亡,可诱导炎症反应发生。 研究表明,它与胰腺疾病的病程进展及预后密切相关,在胰腺疾病进展中发挥重要的双向调控作用,且相关的坏死性凋亡抑制剂与诱导剂有望用于胰腺疾病的治疗。 基于此,本文对坏死性凋亡发生的机制及其在胰腺疾病进展中的作用进行综述,旨在为胰腺疾病的发病机制和治疗提供新的认识,为其靶向性药物的研发提供理论依据。

摘要:帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是第二大中老年常见的神经退行性疾病,患病周期长、治疗过程复杂,是当今社会的一个巨大挑战。 PD 动物模型的行为学变化可以直观地反映出实验动物的成模情况与药物干预后的变化情况。 因此选择规范的动物模型以及相适宜的行为学检测 方法是进行 PD 机制研究、抗 PD 药物研发的基础。 本文对国内外关于大小鼠的帕金森行为学实验方法进行归纳,对常用帕金森行为学实验的实验设备、实验方法、评价指标、注意事项进行了系统性总结,同时对目前常用的帕金森模型进行了概述,对模型的造模机制、与帕金森临床特征的吻合情况、优缺点进行了分析,以期为研究者根据研究目的选择适宜的帕金森模型与行为学检测方法。