摘要: 目的 探讨衰老与特发性肺纤维化( IPF)的相关性,挖掘二者关联的潜在分子机制。 方法选择青年(2 月龄)和老年(18 月龄)C57BL / 6J 小鼠,充分暴露气管后采用缓慢注射盐酸博来霉素(BLM)溶液(2. 5 mg / kg)方法制作 IPF 模型,各对照组以相同的方式滴注等体积生理盐水,实验分为青年对照(Ctrl-Y)组、青年模型(IPF-Y)组、老年对照(Ctrl-A)组和老年模型(IPF-A)组。 采用苏木素-伊红(HE)和 Masson 染色评估组织病理改变,免疫组化检测 COL1A1、α-SMA 及 FN 表达水平,SA-β-Gal 染色评估衰老程度。 基于转录组测序筛选差异基因,进行 GO 功能注释和 KEGG 通路富集分析,并经 RT-qPCR 验证核心基因表达。 结果IPF-A 组纤维化评分均显著高于 IPF-Y 组(P<0. 05)。 IPF-A 组 α-SMA 和 FN 蛋白表达较 IPF-Y 组分别显著增加 36%和 25%(P<0. 05),且 SA-β-Gal 衰老阳性面积显著高于 IPF-Y 组。 鉴定出 55 个衰老-IPF 交互基因,其中 Cdkn1a、MMP3、Pdcd1 等在 IPF-A 组协同上调(P<0. 05)。 KEGG 分析显示 ECM-receptor interaction、phagosome、cytokine-cytokine receptor interaction、efferocytosis 和 PI3K-Akt 等信号通路激活(FDR<0. 05)。 结论衰老会促使 IPF 进展,IPF 会诱发肺组织衰老,其机制可能与免疫衰老、炎症累积及代谢紊乱驱动的 ECM 重构相关。

摘要: 目的 探究大鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对由 D-半乳糖引起的脑组织衰老的影响及其潜在的作用机制。 方法 通过注射 D-半乳糖建立大鼠大脑衰老模型,治疗组予以尾静脉注射MSC,实验 结 束 后 评 估 大 鼠 脑 组 织 中 超 氧 化 物 歧 化 酶 ( superoxidedismutase, SOD ) 活 性 和 丙 二 醛(malondialdehyde, MDA) 水平,通过苏木素-伊红( HE) 染色观察脑组织病理切片变化,最后通过 PCR 与Western Blot 观察炎性因子白介素( interleukin, IL)-1 和 IL-6、通路蛋白脑源性神经营养因子( brain-derived neuotrophyic factor, BDNF)-原肌球蛋白激酶受体 B(tropomyosin receptor kinase B, TrkB)、生长负调节因子 p53和 p16 以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达。 结果 与模型组相比,治疗组大鼠脑组织内的 SOD 活性显著升高,MDA 水平则明显降低(P<0. 05)。 HE 染色病理图像显示,治疗组能够改善大脑皮层和海马区的病理状态,增加脑内神经元数量和核仁比;同时,PCR 和 Western Blot 结果显示,治疗组相较模型组,其 IL-1 和 IL-6、p53 和 p16 的表达显著降低,BDNF 和 TrkB、VEGF 和 bFGF 的表达则明显增加(P<0. 05)。 结论 综上,推测 MSC 可能通过BDNF-TrkB 信号通路抑制氧化应激及炎性途径,同时增加 VEGF 与 bFGF 等营养因子的分泌营养从而改善 D-半乳糖诱导的大脑衰老。

摘要: 目的 观察大鼠在自然衰老过程中动脉血管老化情况及黄精的干预作用。 方法 72 周龄 SPF级雄性 Wistar 大鼠被随机分为老年组、黄精低、中、高剂量组,每组 14 只;另设 14 只 8 ~ 12 周龄 SPF 级雄性Wistar 大鼠为青年组。 青年组和老年组灌胃等量蒸馏水,黄精高、中、低剂量组灌胃黄精水煎液 4、2、1 g / kg,每天 1 次,持续 12 周。 在第 4、12 周时,各组取 7 只大鼠麻醉处死,分离胸、腹主动脉。 观察主动脉弓病理组织切片,并进行平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMC)和胶原纤维(collagen fiber,CF)相对含量的分析;检测动脉组织总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量;采用 Western Blot 检测动脉组织细胞周期相关蛋白的表达水平。 结果 随周龄增加,老年组大鼠动脉血管老化现象明显但动脉组织各指标均无显著变化;同周次内,老年组大鼠较青年组动脉组织 SMC 和 CF 相对含量显著升高(P<0. 01);T-AOC、SOD、GSH-Px 含量降低且 MDA 含量升高(P<0. 01),细胞周期相关蛋白表达均显著上调(P<0. 01)。经黄精干预后,老年大鼠动脉组织 SMC 和 CF 相对含量均显著降低(P<0. 05 或 P<0. 01);T-AOC、SOD、GSH-Px 含量升高且 MDA 含量降低(P<0. 05 或 P<0. 01);细胞周期相关蛋白表达均显著下调(P<0. 05 或P<0. 01),以黄精高剂量干预效果较好。 结论 自然衰老 Wistar 大鼠动脉血管老化状态短期内较为稳定,黄精可通过调节氧化应激水平和细胞周期相关蛋白来干预动脉血管老化。

摘要: 目的 比较不同剂量腺嘌呤(adenine,ADE)灌胃口服诱导的小鼠肾纤维化(renal fibrosis,RF)模型的影响,为进一步研究 RF 提供更为适用的小鼠模型。 方法 30 只 C57BL / 6J Nifdc 小鼠随机分为空白组、ADE 低剂量组(50 mg / kg)和 ADE 高剂量组(100 mg / kg),造模后观察小鼠一般状态、死亡情况、体质量变化,第 30 天检测小鼠血清肌(creatinine,CREA)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和尿酸(uric acid,UA),评估肾功能;苏 木 素-伊 红 ( HE)、 Masson 染 色 观 察 肾 组 织 病 理 变 化; Western Blot 检 测 肾 组 织 纤 连 蛋 白(fibronectin,FN)、胶原蛋白Ⅰ(collagen Ⅰ,COL Ⅰ)、α 平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)表达。 结果 ADE 低剂量组与 ADE 高剂量组累积的存活率分别为 91. 7%和 58. 3%。 ADE 低剂量组体质量与空白组相比,无显著性差异(P>0. 05)。 第 3 ~ 30 天 ADE 高剂量组体质量显著低于空白组和 ADE 低剂量组(P<0. 001)。 与空白组比较,第 30 天,ADE 低剂量组肾功能 CREA、BUN 无显著性差异,ADE 高剂量组CREA、BUN 显著升高(P<0. 001),而各组小鼠 UA 水平均无显著性差异。 ADE 低剂量组在第 30 天可观察到炎性浸润、肾小管出现扩张,伴随有小管上皮坏死,ADE 高剂量组在可观察到显著肾小管腔和间质中出现晶体积聚,肾间质纤维化表达程度显著高于空白组(P<0. 01)。 第 30 天,ADE 高剂量组肾间质纤维化相关蛋白表达均显著高于空白组和 ADE 低剂量组(P<0. 05,P<0. 01 或 P<0. 001)。 结论 50 与 100 mg / kg 的 ADE均可成功制备 RF 小鼠模型,不同剂量腺嘌呤诱导可以产生不同程度肾损伤。 ADE 低剂量组在第 30 天形成轻度肾间质纤维化,ADE 高剂量组形成中重度肾间质纤维化。

摘要: 目的 通过香烟烟熏(cigarette smoke, CS)法建立小鼠慢性阻塞性肺疾病( chronic obstructive pulmonary disease,COPD) 模型,并对该模型进行系统评价。 方法 将 40 只 BALB/ c 小鼠随机分为对照 (control)和香烟烟熏(CS)组。 采用香烟烟熏法使香烟烟熏组小鼠被动吸烟 20 周,建立小鼠 COPD 模型。 通过苏木素-伊红 (HE)和马松三色(Masson)染色观察小鼠各脏器的形态学变化及肺、心脏、肝、肾的纤维化程度;利用肺功能仪、小动物超声和 Morris 水迷宫实验评估小鼠肺功能、心功能及脑认知功能;采用酶联免疫吸附测定(ELISA) 法检测小鼠肺、脑组织中肿瘤坏死因子-α( tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的水平;采用生化方法检测小鼠的肝功能和肾功能。 结果 香烟烟熏组小鼠肺泡间隔变窄,部分肺泡间隔断裂,相邻肺泡腔扩大融合,符合 COPD 病理改变;脑组织海马区可见神经元变性、坏死;其他脏器未见明显形态学改变。 Masson 染色可见香烟烟熏组小鼠的肺、心脏、肝、肾组织均无明显纤维化。 肺功能检测结果显示,与对照组小鼠相比,香烟烟熏组小鼠第 0. 1 s 用力呼气量/ 用力肺活量(forced expiratory volume in 0. 1 s/ forced vital capacity,FEV 0. 1 / FVC)和肺动态顺应性(dynamic compliance,Cydn)明显降低,而气道阻力(airway resistance,RI)则显著增加。 水迷宫实验证实香烟烟熏组小鼠出现认知障碍。 香烟烟熏组小鼠的肺和脑组织中 TNF-α、IL-6 及 IL-1β 的水平均明显高于对照组。香烟烟熏组小鼠的心脏、肝、肾的观察指标无明显改变。 结论 采用香烟烟熏 20 周可建立小鼠 COPD 模型,肺组织形态学变化、肺功能、脑认知功能及炎症因子水平可作为模型成功与否的评价指标。

摘要: 目的 本研究旨在探讨正常和高脂饮食下结直肠癌小鼠模型 Apc^{min/ +}小鼠在癌症早期、中期、晚期 m6A 甲基化修饰和氧化应激水平变化对结直肠癌( colorectal cancer, CRC)进展的影响。 方法 分别给予 C57BL / 6J 小鼠和 Apc^{min/ +}小鼠普通维持饲料和日粮型高脂饲料(60%脂肪)2 周( S 组)、6 周(M 组)、12 周(L 组)。 干预后测量小鼠进食量、体质量、小肠息肉和结肠肿瘤大小、数量和体积;免疫组化染色检测小鼠结肠组织中癌症标志物 Ki-67 和 PCNA 蛋白表达水平;试剂盒检测小鼠血清中抗氧化酶 CAT、GSH 和脂质过氧化物 MDA 的活性或浓度;RT-qPCR 检测小鼠结肠组织中 m6A 甲基化相关酶的 mRNA 表达水平;试剂盒检测小鼠结肠组织中 m6A 甲基化修饰总水平。 结果 (1)Apc^{min/ +}小鼠癌症早期到中期肿瘤生长迅速;癌症中期到晚期时,正常饮食下肿瘤增殖减慢,而高脂饮食促进癌症进一步发展;(2)正常饮食下 Apc^{min/ +}小鼠 m6A 甲基化水平降低与抗氧化能力增强可能延缓肿瘤晚期发展;(3)高脂饮食可能通过提高 Apc^{min/ +}小鼠 m6A 甲基化总水平促进 CRC 持续发展, 而此时抗氧化能力增强可能不足以抵抗 m6A 甲基化对 CRC 的促进作用。 结论正常饮食和高脂饮食对 CRC 作用的不同主要是由于 m6A 甲基化修饰的差异。 两种饮食中抗氧化能力均增强,提示机体可能在癌症进展中利用抗氧化作用启动自我保护机制。

摘要: 目的 利用卡泊三醇( MC903)、2,4-二硝基氯苯( DNCB)、恶唑酮( OXA) 三种药物诱导BALB/ c 小鼠特应性皮炎(AD)样改变,并初步探索不同小鼠模型的铁死亡情况。 方法 根据不同造模部位(耳朵及背部皮肤),将健康 7 周龄雌性 BALB/ c 小鼠随机分为 8 组,即对照耳/ 背组、MC903 耳/ 背模型组、DNCB 耳/ 背模型组、OXA 耳/ 背模型组,每组 8 只,分别给予相应浓度药物涂抹至相应部位造模。 MC903 连续诱导 14 d;DNCB 与 OXA 连续致敏 3 d,致敏完成后间隔 4 d,于实验第 8 天起,每 2 d 于小鼠造模区域涂抹药物激发,共激发 12 次,于实验第 30 天时完成激发。 观察小鼠造模后的皮损情况,测量皮肤厚度,检测血浆中ROS、IL-4、IFN-γ、MDA 细胞因子,对皮肤进行病理组织学染色和电镜超微结构观察,Western Blot 检测铁死亡有关蛋白(GPX4、FTH1、ACSL4、TfR1)的表达情况。 结果 与各对照组相比,三种药物造模后小鼠皮肤均出现明显红肿、抓挠脱屑、皮肤粗糙增厚;模型组小鼠皮肤厚度均极显著增加(P<0. 01);各模型组小鼠 ROS、IFN-γ、IL-4、MDA 水平均不同程度升高(P<0. 05);病理结果显示模型小鼠皮损表皮增厚,表皮细胞变性、坏死、真皮层增厚且伴不同程度毛细血管淤血扩张、淋巴细胞和肥大细胞浸润等病理改变;透射电镜观察到皮肤细胞内线粒体质膜断裂,膜密度增加,膜嵴减少和断裂等铁死亡改变;铁死亡相关蛋白 GPX4、FTH1 表达量显著下调(P<0. 05),ACSL4、TfR1 表达量显著上调(P<0. 05)。 结论 三种药物不同造模部位均成功构建出AD 样改变小鼠模型,铁死亡参与了 AD 样小鼠模型的病理过程,但不同药物诱导及造模部位之间存在异质性。

摘要: 目的 评价分析 2 型糖尿病 (type 2 diabetes mellitus, T2DM) 食蟹猴是否存在焦虑抑郁样行为,并在此基础上探讨生化指标与焦虑抑郁样行为的相关性。 方法 筛选 3 只空腹血糖( fasting plasma glucose, FPG) ≥ 5. 6 mmol / L 的食蟹猴纳入 T2DM 组和 3 只 FPG < 4. 2 mmol / L 食蟹猴纳入正常组。 检测各组年龄、性别、体质量、身体质量指数( body mass index, BMI)、FPG、血脂、动脉粥样硬化指数( atherosclerosis index, AI)、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α, TNF-α)水平;采用人类入侵者测试(human intrude test,HIT)评估食蟹猴的焦虑样行为,冷漠喂养测试( apathy feeding test, AFT) 评价食蟹猴的抑郁样行为。 通过Pearson 分析焦虑抑郁样行为与血生化指标、炎症因子水平的关联。 结果 (1)T2DM 组 FPG、AI、TNF-α 水平高于正常组(P<0. 05),T2DM 组高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)水平低于正常组(P<0. 05);(2)HIT 实验中,T2DM 组在焦虑行为-正面、笼后-正面的行为持续时长高于正常组(P<0. 05);T2DM 组在运动-基线、运动-侧面、运动-背面的行为持续时间显著短于正常组(P<0. 05);(3)AFT 实验中,T2DM 组对食物的拿取时间显著高于正常组(P<0. 05);(4)Pearson 相关分析显示:HIT 实验中,笼后-正面的持续时长与 AI 水平呈正相关(r=0. 828, p=0. 042);运动-背面的持续时长与 AI 水平呈负相关(r=-0. 842, p= 0. 035)。 结论 T2DM 食蟹猴表现出焦虑抑郁样行为,AI 与焦虑样行为密切相关,为 T2DM 与焦虑抑郁行为的关联机制研究提供新的证据。

摘要: 目的 本研究旨在探讨艾司氯胺酮对慢性疼痛小鼠脊髓背角星形胶质细胞活化的影响,并分析其对 Wnt / β-catenin 信号通路的影响。 方法 选取了 40 只 C57BL / 6J 品系的小鼠,随机分为 5 组:假手术(sham)组、疼痛模型(model)组、艾司氯胺酮低剂量(L-Es)组、艾司氯胺酮中剂量(M-Es)组、艾司氯胺酮高剂量(H-Es)组。 除了 sham 组外,其他组均采用坐骨神经分支选择性损伤法建立慢性疼痛小鼠模型。 各组接受相应药物处理,并测定其机械撤退阈值(MWT)和热撤退潜伏期(TWL)。 此外,通过免疫组织化学方法检测脊髓中抗胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达水平;采用免疫荧光技术观察小鼠脊髓背角星形胶质细胞的激活情况;使用 ELISA 检测脊髓中的炎症因子 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 的水平;通过 qRT-PCR 分析小鼠脊髓中 Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1 的 mRNA 表达水平;利用 Western Blot 评估小鼠脊髓中 Wnt3a、β-catenin 和 Cyclin D1 蛋白的表达情况。 结果 与 sham 组相比,model 组小鼠的 MWT 和 TWL 显著降低(均 P<0. 001);IL-1β、IL-6、TNF-α 的水平及 GFAP 蛋白的表达水平显著升高(均 P<0. 001),且 GFAP 与 Iba-1 存在共表达现象。 Wnt3a、β-catenin 和 Cyclin D1 的 mRNA 及蛋白表达均显著升高(均 P<0. 001)。 与 model 组相比,艾司氯胺酮各剂量组小鼠的 MWT 和 TWL 均显著升高,且存在剂量依赖性(均 P<0. 001);炎症因子 IL-1β、IL-6、TNF-α 的水平及 GFAP 蛋白的表达显著降低(P<0. 001);GFAP 与 Iba-1 不存在共表达现象;Wnt3a、β-catenin 和 Cyclin D1的 mRNA 及蛋白(P<0. 001)表达均显著下降。 结论 艾司氯胺酮能够抑制星形胶质细胞的激活和炎症反应,从而减轻慢性疼痛,其作用机制可能涉及对 Wnt / β-catenin 信号传导途径的调节。

摘要:慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种肺部常见疾病,以持续性气流受限为主要特征的一种可预防和治疗的疾病。 近年来,COPD 相关共病得到普遍关注,严重影响患者生活质量以及预后,加速了 COPD 的恶化进程。 实验动物模型是深入研究 COPD 以及其相关共病发病机制、探索有效治疗手段的关键工具,本文对近年来 COPD 相关共病实验动物模型的造模方法以及研究进展进行了归纳和总结,以期为今后临床研究、筛选相关共病动物模型提供参考和指导。

摘要:小鼠因其基因组与人类高度相似、繁殖能力强、模型构建成本低以及易于基因操作等优势,被广泛应用于原发性肝癌的研究中,包括发病的分子机制和潜在的药物靶点等方面。 传统动物模型因无法复现肿瘤微环境互作、控制分子亚型特异性等缺陷,日益难以满足精准医学研究需求。 本文系统比较尾静脉高压注射联合转座子系统(HTVI-TS)的技术与传统模型在肝癌研究中的技术优势,并重点探讨 HTVI-TS 模型在肿瘤发生发展机制研究、免疫治疗响应预测、靶向药物个体化评估中的应用价值,揭示其通过模拟肝癌异质性进化过程为精准诊疗提供的全新研究平台。 本文为优化肝癌临床前研究模型选择提供理论依据,并展望该技术在肝癌研究中的拓展潜力。

摘要:衰老是生物体不可避免的生物学过程,伴随着多种生理功能的衰退和疾病风险的增加。 随着全球老龄化问题日益严峻,衰老的细胞分子机制研究已成为医学生物领域的研究热点。 动物模型在衰老研究中发挥着不可替代的作用。 常用于衰老研究的模式动物有线虫、果蝇、小鼠、大鼠、鼹鼠和恒河猴等。 基于实验成本和实验周期考虑,小鼠是使用范围最广的实验模式动物。 在正常生理和饲养条件下,小鼠在 18 月龄时具有衰老表型,实验周期长且费用高,科学家已通过多种措施建立小鼠早衰模型来缩减实验进程。 衰老表现出明显的组织和细胞异质性,在研究不同组织衰老的时候需要使用不同的早衰动物模型,且同一早衰模型在模拟人类衰老表型、筛选抗衰老靶点及抗衰老药物评价中各有优势与局限性。 本文综述了各种不同的方法建立的早衰动物模型的形态、生理和病理表型差异,并对提出这种早衰模型的适用范围和局限性,为衰老机制研究和转化医学提供了系统的模型选择依据及技术展望。

摘要:特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)是一种以进行性肺实质瘢痕化为特征的致命性间质性肺病,终末期常因呼吸衰竭死亡,患者中位生存期仅为 3 ~ 5 年。 实验模型是研究 IPF 发病机制、药物筛选及疗效评价的核心工具,除了动物模型、细胞模型,随着近年来精准医学与多组学技术的发展,中医病证结合模型及新兴类器官模型的构建也逐渐受到重视。 IPF 实验模型已从单一病理模拟向整合遗传异质性、微环境互作及中医“痰、瘀、虚、损络”病机演变的多维度建模方向推进。 本文系统梳理 IPF 实验模型的造模策略、检测指标、中医证候研究及评价体系,旨在为 IPF 相关研究提供参考。

摘要:慢性血栓栓塞性肺动脉高压(chronic thromboembolic pulmonary hypertension,CTEPH)是一种严重的肺动脉高血压(pulmonary hypertension,PH)形式,属于肺动脉高压的第四大类,主要由于慢性血栓形成导致肺动脉血流受阻,进而引发肺动脉压力的持续升高,由于其发病机制至今尚未阐明,因此会导致早期诊断困难、治疗选择受限和预后评估不准确。 深入研究这些机制不仅有助于了解 CTEPH 的病理生理过程,也为开发新的治疗策略提供了理论基础。 本文主要综述了当前 CTEPH 大鼠模型的制备方法及其优缺点,以便研究者对 CTEPH 大鼠模型的选取和构建提供一定的参考。

摘要:炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病,克罗恩病(Crohn’s disease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是其中两大主要疾病。 IBD 容易反复发作,其发病机制与免疫功能失调、肠道微环境稳态失衡、饮食、环境或遗传等多种因素有关。 目前,其具体发病机制仍不明确。 斑马鱼(zebrafish)作为一种新兴的模式动物,由于其独特的生物学优势,近年来被广泛应用于 IBD的机制研究、模型构建及抗 IBD 化合物的活性评价和筛选研究。 本文综合近年来国内外斑马鱼在 IBD 领域的最新研究进展,系统介绍了斑马鱼肠道发育特点、组织结构、肠道免疫、IBD 模型及其在药物筛选中的应用,以展现斑马鱼在 IBD 研究中的应用价值。

摘要:线粒体自噬是细胞维持内环境稳态的重要机制,与脑缺血损伤的发生发展密切相关,是神经元死亡的重要方式。 近年来大量实验研究已证实,中药治疗脑缺血损伤效果显著,其多靶点、多通路、低毒高效等优势,已成为脑缺血损伤治疗的重要组成部分,小续命汤、滋肾活血方、黄酮类、生物碱等中药复方和单体有效成分可通过调节线粒体自噬相关信号通路和靶点,抑制神经元自噬性死亡,减轻脑组织病理性损伤,发挥脑保护作用。 本文从线粒体自噬概述、相关信号通路、与脑缺血损伤的关系及相关中药调控作用 4 个方面,分析中药调控线粒体自噬治疗脑缺血损伤的分子机制,以期为未来基础研究及临床治疗提供思路与参考。