摘要: 目的　利用10-11易位蛋白2(ten-eleven translocation 2,TET2)基因敲除(TET2^-/-)小鼠模型,探究TET2突变在咪喹莫特(imiquimod,IMQ)诱导的小鼠银屑病皮炎损伤中的影响。 方法 　将小鼠随机分为野生型(wild type,WT)凡士林组、WT咪喹莫特组、TET2^-/-凡士林组、TET2^-/-咪喹莫特组,在小鼠背部涂抹IMQ建立银屑病样皮炎模型;造模期间每日观察对比WT咪喹莫特组及TET2^-/-咪喹莫特组小鼠的皮损程度及病理变化;待皮损达到最高峰处死小鼠,评估4组小鼠脾指数;RT-qPCR检测小鼠背部病灶处炎症因子TNF-α、IL-6、IL-17A与IL-23的mRNA表达水平;制作皮肤病理切片,苏木素-伊红(HE)染色对比4组皮肤组织病理学变化;免疫组化检测4组小鼠背部皮肤中IL-17、INF-γ和TNF-α的表达情况;利用透射电镜对比观察4组小鼠真表皮层超微结构。 结果　WT咪喹莫特组小鼠皮损处TET2表达下调;TET2^-/-咪喹莫特组较WT咪喹莫特组小鼠皮炎损伤进程更快更严重,总PASI评分及脾指数更高;TET2^-/-咪喹莫特组小鼠皮损组织中TNF-α、IL-6、IL-17A与IL-23在mRNA的表达均高于WT咪喹莫特组小鼠;TET2^-/-咪喹莫特组小鼠表皮增厚及炎症细胞浸润更为显著;TET2^-/-咪喹莫特组小鼠皮损处IL-17、INF-γ和TNF-α蛋白的阳性表达显著高于WT咪喹莫特小鼠;超微病理观察显示TET2^-/-咪喹莫特组小鼠皮损处细胞连接消失,并存在大量线粒体脊断裂溶解、线粒体空泡以及线粒体膜质地变深现象。 结论　TET2缺失会促进炎症反应,从而加剧IMQ诱导的小鼠银屑病样皮炎损伤。

摘要: 目的　比较不同剂量的完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)足底注射诱导的慢性疼痛抑郁共病大鼠模型的成功率和稳定性。 方法 　将60只SD大鼠随机分为空白组、CFA低剂量(CFA-L)组、CFA高剂量(CFA-H)组,每组20只。CFA-L组及CFA-H组大鼠分别以左后足足底注射50、100 μL CFA,空白组左后足足底注射0.9%氯化钠溶液。造模后第0、7、14、21、28天分别观察各组大鼠一般状态、体质量变化,机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)、热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal lantency, TWL)评价大鼠的疼痛反应,旷场实验(open field test,OFT)、强迫游泳实验(forced swim test,FST)、悬尾实验(tail suspension test,TST)评价大鼠的抑郁行为,酶联免疫吸附实验检测大鼠前扣带回皮层的谷氨酸(glutamate,Glu)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量,免疫组化法检测大鼠前扣带回皮层脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的改变,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠前扣带回皮层的病理变化。 结果　(1)一般情况:造模后第7天,CFA-L组和CFA-H组大鼠左后足踝关节和足趾均红肿明显,CFA-H组肿胀更甚;造模后第14、21、28天,CFA-L组大鼠左后足踝关节和足趾红肿渐恢复,CFA-H组大鼠仍红肿明显,且饮水进食量减少;(2)体质量:造模后第14、21、28天,CFA-H组大鼠体质量显著低于空白组、CFA-L组(P<0.05,P<0.05);(3)疼痛相关行为学:造模后第7、14天,与空白组比较,CFA-L组、CFA-H组的MWT、TWL明显降低(P<0.05,P<0.05);造模后第21天,CFA-H组的MWT显著低于空白组和CFA-L组(P<0.05,P<0.05),CFA-L组、CFA-H组的TWL显著低于空白组(P<0.05,P<0.05);造模后第28天,CFA-H组的MWT、TWL显著低于空白组和CFA-L组(P<0.05,P<0.05);(4)抑郁相关行为学:造模后第7天,CFA-H组的OFT运动总距离较空白组、CFA-L组明显降低(P<0.05,P<0.05);造模第14、21、28天,与空白组、CFA-L组比较,CFA-H组OFT运动总距离及中央停留时间明显降低(P<0.05,P<0.05),FST、TST明显升高(P<0.05,P<0.05);(5)Glu、GABA、BDNF表达:CFA-H组Glu含量较空白组、CFA-L组明显升高(P<0.05,P<0.05),GABA含量、Glu/GABA和BDNF表达明显降低(P<0.05,P<0.05,P<0.05);(6)前扣带回皮层病理:CFA-L组前扣带回皮层区有较少损伤,锥体细胞数量较多,细胞排列较整齐,核仁清晰,少量细胞表现出核固缩和深染色;与CFA-L组比较,CFA-H组前扣带回皮层损伤区细胞排列紊乱,大量神经元细胞固缩、深染,锥体细胞数量明显减少、甚至消失,组织间隙有空泡、红细胞和神经纤维缠结出现。 结论　足底注射100 μL CFA可成功建立慢性炎性疼痛抑郁共病大鼠动物模型,引起大鼠痛觉过敏、抑郁样行为改变及前扣带回皮层Glu、GABA、BDNF改变,诱导前扣带回皮层病理形态变化,符合慢性疼痛抑郁共病的生理病理学特点。

摘要: 目的　采用香烟烟雾(cigarette smoke,CS)暴露联合肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)滴鼻建立慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)小鼠模型,探讨COPD气道重塑及其机制。 方法 　将SPF级BALB/c小鼠随机分为对照(Control)组、香烟烟雾(CS)组、肺炎克雷伯菌(KP)组和香烟烟雾联合肺炎克雷伯菌(CS + KP)组。1 ~ 8周造模,每4周检测肺功能,于第4、8、16和24周取材。观察小鼠肺功能、肺组织病理结构、炎症因子、胶原纤维、胶原蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)和转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1的变化。采用CS提取物和脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激人支气管上皮细胞16HBE,检测细胞间连接蛋白、自噬及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号等。 结果　与Control组比,CS + KP组小鼠肺功能第4 ~ 24周每分钟通气量(minute volume,MV)显著降低(P<0.05或P<0.01),第8 ~ 24周气道狭窄指数(enhanced pause,Penh)显著升高(P<0.05或P<0.01);CS组在第8 ~ 16周MV显著降低、Penh显著升高(P<0.05或P<0.01)。与Control组比,CS + KP组小鼠第8 ~ 24周肺组织大量炎细胞浸润、肺泡壁增厚、肺泡破裂和融合、气管壁增厚等,第4 ~ 24周平均肺泡数(mean alveolar number,MAN)显著降低,肺泡平均截距(mean linear intercept,MLI)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)显著升高(P<0.05或P<0.01);CS组、KP组第8 ~ 16周肺组织出现以上炎症与组织损伤。与Control组比,CS + KP组小鼠第8 ~ 16周肺组织Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COLⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ,COL Ⅲ)、αSMA和TGF-β1显著升高(P<0.01);CS组、KP组第8 ~ 16周COL Ⅰ显著升高(P<0.01)。此外,与Control组比,CS与LPS联合诱导16HBE细胞E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)显著降低和N-钙粘蛋白(N-cadherin,Ncad)显著升高(P<0.05),自噬相关蛋白LC3B和Beclin-1显著降低(P<0.05),p-mTORC1、p-P70-S6K、及p4E-BP1显著升高(P<0.05或P<0.01)。 结论　香烟烟雾联合肺炎克雷伯菌诱导的COPD小鼠肺功能下降、肺组织病变及气道重塑出现早、持续时间长,其机制可能与激活mTORC1信号抑制细胞自噬诱导气道上皮细胞损伤有关。

摘要: 目的　观察乳腺癌荷瘤裸鼠病症结合特点及姜制江香薷多糖对其中医证候的改善作用。 方法 取38只实验裸鼠进行造模然后分成6组,设定为正常组、模型组、阳性组、姜制江香薷多糖低、中、高剂量组。正常组不接种肿瘤,正常组和模型组给予生理盐水灌胃;阳性组给予塞来昔布溶液灌胃;姜制江香薷多糖低、中、高剂量组给予同剂量不同浓度姜制江香薷多糖溶液灌胃。连续给药4周,记录裸鼠体质量和肿瘤大小变化。实验结束后观察裸鼠的病症特点,通过采集各组裸鼠舌、尾、爪照片,分析记录裸鼠舌、尾、爪的RGB值依据计量化辩证的方法计算裸鼠的血虚程度、阴虚程度、肿瘤痰瘀邪盛程度,剥离肿瘤,称重,计算肿瘤体积和抑瘤率,探究姜制江香薷多糖对乳腺癌荷瘤裸鼠中医证候的改善作用。 结果　乳腺癌荷瘤裸鼠存在血虚、阴虚和痰瘀邪盛表现,姜制江香薷多糖给药组可以明显减少肿瘤的大小,姜制江香薷多糖能够抑制肿瘤生长,对乳腺癌荷瘤裸鼠血虚程度、阴虚程度、肿瘤痰瘀邪盛体质有改善效果,且姜制江香薷多糖高剂量组最佳。 结论 姜制江香薷多糖对乳腺癌荷瘤裸鼠的血虚、阴虚、肿瘤痰瘀邪盛体质有改善作用,且高剂量组效果最佳。

摘要: 目的　评价在肝硬化模型大鼠的基础上,建立肝硬化门静脉血栓(PVT)模型的可行性。 方法 将50只10 ~ 12周龄、体质量300 ~ 350 g、雄性SD大鼠随机分为模型组和空白组,模型组首先建立肝硬化模型,在此基础上,通过门静脉间断结扎联合钳夹方法建立门静脉血栓模型,空白组仅开腹后行门静脉游离术。大鼠造模后1周行肝彩色多普勒超声检查确认门静脉血栓。而后模型组随机分为模型对照组和模型恢复组。模型对照组、空白组开腹后游离截取肝、门静脉待检,模型恢复组继续饲养2周后截取肝、门静脉。各组肝、门静脉标本进行苏木素-伊红(HE)、Masson染色、门静脉弹力纤维(EVG)染色。 结果　超声检查显示术后1周模型组门静脉内形成稳定血栓,造模成功率68%;模型对照组与模型恢复组HE和Masson染色均发现肝组织假小叶、门静脉血栓,中膜水肿增厚,胶原纤维附着,EVG染色显示门静脉血管内膜损伤;空白组门静脉内未见血栓形成,血管结构完整;透射电镜肝硬化大鼠肝窦出现胶原纤维束,肝细胞线粒体大小不一、呈多形性、灶性聚集。门静脉内皮脱落、凋亡、平滑肌细胞表型化迁移至原内皮处、内膜下纤维组织增生。至术后3周,模型恢复组大鼠无一死亡且PVT稳定存在。 结论　肝硬化时门静脉内皮脱落、内膜纤维化、平滑肌细胞表型化并向内膜迁移是肝硬化门静脉血栓形成的重要病理基础。在肝硬化基础上,利用间断结扎联合钳夹法可成功建立稳定的大鼠肝硬化门静脉血栓模型,其血管内皮损伤、内膜增厚和纤维化、血流速度减慢等病理改变,与肝硬化PVT形成机制一致,并且模型大鼠至少可生存3周以上,为深化肝硬化门静脉血栓研究提供了建模方法及生存时间依据。

摘要: 目的　探讨气管内滴注不同浓度的博来霉素(bleomycin,BLM)诱导特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)小鼠的建立与评价。 方法 　雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型低(1.5 mg/kg BLM)、中(2.5 mg/kg BLM)、高(3.5 mg/kg BLM)剂量组。采用一次性气管内滴注博来霉素构建IPF小鼠,比较不同组小鼠的一般状态、体质量、生存率和肺系数,观察小鼠肺组织病理学改变、羟脯氨酸、纤维化标志物和炎症因子水平。 结果　与对照组相比,模型低、中、高剂量组生存率降低,体质量呈下降趋势,肺系数均显著增加;模型低、中、高剂量组肺组织出现炎性浸润(P<0.01)和胶原沉积(P<0.0001);肺组织和血清中的羟脯氨酸显著升高(P<0.05);纤维化标志物α-Sma、Fn1和Col1a1的mRNA水平表达上调(P<0.001),相应蛋白表达也显著上调(P<0.05),炎症因子Tgfb1的mRNA表达增加(P<0.0001)。 结论　1.5、2.5和3.5 mg/kg的博来霉素均可诱导C57BL/6J小鼠IPF,结合生存率、体质量和肺系数变化、肺组织大体观和病理学改变、纤维化和炎症相关指标等结果,2.5 mg/kg博来霉素为诱导的IPF小鼠的最适宜浓度。

摘要: 目的　急性高原低氧通过调控蛋白表达诱导心肌细胞损伤,常用Western Blot检测蛋白变化,但内参蛋白的选择及其变化尚无系统研究。 方法 　本文主要应用低压低氧大舱模拟6000 m海拔低氧24和72 h,苏木素-伊红(HE)染色确定心肌损伤模型的成功建立;Western Blot检测不同内参蛋白vinculin、αtubulin、EIF5、β-actin、GAPDH、cyclophilin B和cofilin表达,同时应用丽春红S染色和考马斯亮蓝染色检测总蛋白的表达;进一步体外应用成年小鼠心肌细胞(AMCMs)建立低氧12和24 h损伤模型,TUNEL染色确定细胞损伤模型的建立,Western Blot检测上述不同内参蛋白表达,同时应用丽春红S染色和考马斯亮蓝染色检测总蛋白的表达。 结果　在成功建立急性高原低压低氧24和72 h模型的基础上,总蛋白表达量一致;内参蛋白vinculin、EIF5、β-actin、cyclophilin B和cofilin表达量一致;α-tubulin在低压低氧24 h组和平原对照组表达一致,低压低氧72 h组较平原对照组明显下降;而GAPDH在低压低氧24 h组和低压低氧72 h组表达较平原对照组明显上升。在成功建立低氧12和24 h诱导AMCMs损伤的基础上,总蛋白表达量一致,内参蛋白EIF5和β-actin表达量一致,vinculin、α-tubulin、GAPDH、cyclophilin B和cofilin在低氧12 h组和低氧24 h组较常氧对照组表达升高。 结论　急性高原低压低氧和体外低氧诱导心肌细胞损伤模型进行Western Blot时,EIF5和β-actin可作为合适的内参蛋白选择,选择总蛋白作为内参更客观。

摘要: 目的　本研究旨在探讨不同周期睡眠干扰(sleep interruption,SI)应激对ICR小鼠情绪行为的影响,建立SI应激致焦虑抑郁共患小鼠模型。 方法 　雄性ICR(4 ~ 5周龄)小鼠72只,分别按1、2、3周应激周期,随机分为空白组和模型组;除空白组外,模型组分别给予1、2、3周的SI应激。应激结束后采用旷场、高架十字迷宫、明暗箱、大理石掩埋和强迫游泳行为学检测方法评估小鼠情绪行为,并采用ELISA试剂盒检测小鼠血清皮质酮(CORT)的含量。 结果　在SI应激1周后,模型组小鼠的大理石掩埋个数较空白组均显著增加(P<0.05);应激2周后,与对照组相比,模型组小鼠明暗箱穿箱次数显著降低(P<0.05)、大理石掩埋个数显著增加(P<0.01);应激3周后,模型组小鼠大理石掩埋个数显著增加(P<0.05),明暗箱穿箱次数显著降低(P<0.05),小鼠强迫游泳的不动时间显著增加(P<0.01)。 结论　睡眠干扰应激2周时小鼠表现出明显的焦虑样行为,而3周后出现显著的焦虑和抑郁行为变化,表明睡眠干扰应激3周后成功构建了小鼠焦虑抑郁共患模型。

摘要:特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种慢性进行性疾病,确诊后生存期较短,目前西药治疗效果欠佳,且肺移植治疗价格高昂,因此亟须寻求新的、安全有效的治疗手段。动物实验研究是验证药物作用机制的重要手段,合理的IPF动物模型建立方法对IPF实验研究尤为重要。当前使用博来霉素(bleomycin,BLM)诱导IPF模型较为普遍。传统中药具有治疗靶点多、不良反应小等优点,在IPF的治疗中正逐渐受到重视。通过中药干预IPF动物模型进而验证中药治疗IPF的具体作用靶点及作用机制是目前实验研究的中心内容。本文通过对IPF动物模型的选用、诱导方法、建立过程、评估方法及中药对模型的干预作用进行综述,总结出IPF动物模型最佳建模方法及中药治疗现状,以期为IPF的科学研究和临床治疗提供依据。

摘要:类器官已成为肿瘤研究的重要技术平台,但在模拟肿瘤组织结构和功能方面依旧存在问题。基因编辑技术的发展,尤其与肿瘤类器官相结合时,为精准、全面地模拟体内肿瘤模型特征提供了新的途径。通过基因编辑技术在肿瘤类器官中引入特定基因变异或修正突变,可以深入解析肿瘤的发生发展机制,探索潜在的治疗靶点,并加速药物筛选过程,为肿瘤个体化治疗提供了新的思路。本文综述了肿瘤类器官的形成及基因编辑策略应用于肿瘤类器官研究的技术要点,重点阐述了基因编辑技术在肿瘤类器官上的独特应用及前景。同时,提出准确模拟体内微环境,推动类器官基因编辑技术的标准化和稳定性,优化基因编辑效率,可以加速肿瘤类器官在精准医学研究中的应用。

摘要:DNA修复对于遗传物质的成功复制和转录的保真性至关重要。切除修复交叉互补组1 (Ercc1)是一种结构特异性核酸内切酶,参与核苷酸切除修复和DNA双链断裂修复途径而修复DNA损伤。衰老是DNA损伤和细胞损伤随着时间的推移而积累的结果。Ercc1的缺陷会导致DNA损伤修复功能失常,使细胞损伤不断累积,最终诱导衰老发生。本综述总结了Ercc1在DNA损伤过程中的生物学功能和Ercc1缺陷小鼠模型的表型,并讨论了Ercc1在衰老和衰老相关退行性疾病的不同组织所产生的生物学影响,为开发针对衰老相关疾病的创新疗法、动物模型、药物研制提供了潜在的干预靶点和理论依据。

摘要:慢性疼痛已成为当今社会普遍的医疗难题之一。在遭受慢性疼痛困扰的同时,患者往往还伴随着焦虑、抑郁、创伤后应激障碍以及各类精神综合征等心理疾病。这些心理问题不仅严重影响着患者对疼痛的感知与反应,更可能成为疼痛治疗过程中的关键阻碍。针灸,作为一种拥有悠久历史的临床实践方法,已被大量研究证实对多种类型疼痛具有显著的缓解效果,并且在改善焦虑和抑郁等情绪问题方面也展现出良好的疗效。然而,目前针刺镇痛以及抗焦虑的具体机制仍有待进一步探究。在此背景下,构建理想且稳定的动物模型对于深入研究疼痛情绪的发生发展以及针刺效应机制显得尤为关键。因此,本文综合近年来相关领域发表的文献,从实验动物的选择、模型的建立以及行为学评估等多维度对慢性疼痛伴发痛焦虑动物模型平台的现状进行总结;同时,从针刺参数、选穴、干预周期等多方面深入探讨了针刺干预慢性疼痛伴发痛焦虑动物模型效应平台的研究进展。本文旨在为针刺干预慢性疼痛伴随焦虑情绪的机制研究提供更为广泛且具有参考价值的前期动物模型构建思路,以期推动相关领域的科学研究发展。

摘要:作为一种预后不良的慢性进行性肺病,特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)的发病机制至今尚未明确,其治疗方法仍在不断探索。动物模型是研究疾病的发病机制与治疗作用的重要工具。本文将基于IPF动物模型与人IPF在疾病表型等方面的相似度,从药物和环境因素所诱导的纤维化机制、组织病理学改变、纤维化阶段、造模时间等方面梳理IPF动物模型的研究进展,阐述不同动物模型的优缺点、特征及应用概况。

摘要:苯酚胶浆造模法是一种在妇科疾病动物实验模型中广泛采用的造模技术。在构建盆腔炎、宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎、阴道炎等妇科疾病动物模型时,苯酚胶浆作为粘堵剂被注射入大鼠子宫内,造成盆腔器官组织的化学性烧伤。这种烧伤会引起充血、水肿、炎性渗出、炎性粘连和阻塞,进而形成慢性炎症。此外,苯酚胶浆也被应用于复制中医妇科的动物模型,利用其腐蚀性和黏滞性,制作以湿瘀互结为基础证候的动物模型。该模型的成功建立,为研究妇科疾病的病理机制和治疗方法提供了关键的实验基础。