摘要: 目的 　通过颈内动脉单侧、单次注射月桂酸钠,建立脑小血管病(cerebral small vessel disease,CSVD)大鼠模型,并通过检测行为学、血清相关指标、脑梗死体积、脑微血管密度、血流动力学、脑组织病理学及血脑屏障相关指标,评估模型的有效性。 方法　将SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组)和模型组(Model组),每组6只。模型组经颈内动脉,单次注射100 μL的月桂酸钠(2 g/L),对照组行相同手术,注射等体积的生理盐水。利用Longa评分及姿势反射实验进行大鼠神经行为学评估;ELISA检测大鼠血清同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)含量;核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测脑梗死体积、脑血管成像观察脑血管密度改变;超声检测颈动脉血管阻力指数(resistance index,RI)及血流灌注指数(perfusion index, PI);苏木素-伊红(HE)染色观察大脑组织病理变化;免疫组化(IHC)检测脑组织中脑微血管密度CD31及紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin)的表达。 结果　与对照组相比,模型组Longa评分与姿势反射评分均显著升高(P<0.05),脑梗死体积显著增加(P<0.05),脑血管密度明显下降,颈动脉RI、PI值及血清中HCY的含量均显著升高(P<0.05);HE染色结果发现模型组的脑皮质区神经元核固缩,血管周围间隙变大;免疫组化结果显示脑皮质区CD31、ZO-1、Occludin的表达显著减少(P<0.05)。 结论　通过颈内动脉单侧、单次注射高浓度月桂酸钠可以快速、有效地建立CSVD模型;该方法建立的CSVD大鼠模型,存在神经行为学异常、脑梗死、脑供血不足、血管密度减少和血脑屏障破坏现象,可作为CSVD研究的有效动物模型。

摘要: 目的 　探讨桑寄生水煎液对先兆流产大鼠的安胎作用及其机制。 方法　将72只SPF级雌雄比例为2∶ 1的SD大鼠合笼后,将48只孕鼠分为正常组、先兆流产模型组、阳性对照组、桑寄生水煎液高、中、低剂量组,每组8只。阳性对照组给予灌胃3.02 mg/kg的地屈孕酮,桑寄生水煎液低剂量、桑寄生水煎液中剂量、桑寄生水煎液高剂量分别给予2.5、5、10 g/kg桑寄生水煎液灌胃,正常组和先兆流产模型组灌胃等体积蒸馏水,每天1次,连续给药10 d。第10天灌胃相应药液后,除正常组,其余各组灌胃3.75 mg/kg的米非司酮混悬液,观察桑寄生对阴道出血率、流产率等的影响;ELISA法检测大鼠血清促卵泡生成素(follicle stimulating hormone,FSH)、促黄体生成素(luteinising hormone,LH)、雌激素(estrogen,E)、孕酮(progesterone, P)、睾酮(testosterone,T)、芳香化酶(aromatase)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和大鼠卵巢E、P含量;免疫荧光法观察孕鼠子宫蜕膜组织雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕酮受体(progesterone receptor,PR)、血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2, VEGFR2)、血小板内皮细胞粘附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31)阳性表达情况,并进行半定量分析。 结果　米非司酮造模后,各组孕鼠阴道出血率和流产率均极显著升高,桑寄生治疗组能够有效降低大鼠的阴道出血率和流产率,能够升高血清E、P、VEGF和卵巢E、P的含量(P<0.05),降低血清LH含量、维持FSH的分泌,增强蜕膜组织中ER、PR、VEGFR2、CD31的表达活性。 结论　桑寄生水煎液对先兆流产大鼠有明显的安胎作用,作用机制与调整子宫上游HPG轴的正常生理功能、增强P/PR/VEGF/VEGFR2、E/ ER/VEGF/VEGFR2通路的下游表达有关。

摘要: 目的 　探讨结肠炎相关性结肠癌(colitis-associated colon cancer,CAC)小鼠模型不同时间点肠道病理发展的动态变化特征。 方法　采用偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)构建C57BL/6小鼠结肠炎癌模型,分别在造模后的第7、10、14周3个时间点取材,观测小鼠脾指数、结肠长度、质量及结肠单位长度质量;苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察小鼠结肠病理学变化特征;实时荧光定量逆转录PCR法检测不同病理阶段肿瘤干细胞标记物CD44及Wnt信号通路Wnt2b、Lrp5、Axin2、Znrf3基因表达;多重免疫荧光组化(mIHC)和细胞免疫荧光(IF)检测成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)、CD44、增殖标记物Ki67、杯状细胞MUC2蛋白表达。同时,体外分离培养第10、14周模型小鼠来源的结肠类器官,观察类器官的形态及特征标记物变化。 结果　AOM/DSS诱导7周模型小鼠结肠病理表现为隐窝结构减少、扭曲、分支等变化,伴随少量胶原纤维沉积,10、14周模型小鼠结肠呈现不同程度上皮内瘤变,并随着时间延长出现高级别上皮内瘤变的比例增加,胶原纤维沉积范围增多,伴随结肠长度缩短、肠壁增厚,脾增大等现象。与正常组相比,第14周模型小鼠结肠CD44、Wnt2b表达显著升高(P<0.05),Axin2表达下降(P<0.01)。与第7周相比, Wnt2b、Lrp5、Znrf3表达升高(P<0.01、P<0.05、P<0.01),Axin2表达下降(P<0.01)。多重免疫荧光组化染色显示:第10、14周模型小鼠结肠FAP、CD44表达增多,而MUC2表达降低。其来源的体外类器官呈现囊球样扩张,尤以14周模型来源的类器官更为突出,Ki67和CD44在14周模型来源的类器官中表达明显增强。 结论　AOM/DSS诱导的小鼠模型在7、10、14周可分别呈现结肠慢性炎症、低级别上皮内瘤变、高级别上皮内瘤变为主的动态病理改变,病变区域以成纤维细胞激活及上皮细胞异常增殖为特征。

摘要: 目的 　制备稳定的慢性肝衰竭大鼠动物模型,为开展相关基础研究提供造模方法。 方法　取66只SPF级SD大鼠,随机分为正常组18只,造模组48只,造模组以50% CCl₄橄榄油混合溶液腹腔注射,剂量为1.5 mL/kg,每周2次,分别于第8、16、24周B超观察各组大鼠的肝形态、测量肝硬度值、门静脉直径、出现腹水症状后,采集血清、血浆,剖取肝,肉眼观察各组大鼠肝组织变化,检测大鼠肝功能、凝血功能,苏木素伊红(HE)染色观察各时间点大鼠肝组织损伤情况,Masson染色观察肝组织纤维化程度,水迷宫实验检测各组大鼠肝性脑病发生情况,并统计不同时间点大鼠死亡情况。 结果　与正常组对比,造模组大鼠出现不同程度活动减少、食欲下降、尿液变黄、腹部变大等体征;随着造模时间延长,超声下可见大鼠肝实质回声逐渐增高、增粗,继发出现腹水,门静脉直径变宽并门脉高压形成;水迷宫及血氨检测发现造模组24周大鼠出现记忆力、定向力减退,在重度肝损伤基础上发生肝性脑病;肉眼观察造模组大鼠肝组织外观逐渐变粗糙、凹凸不平,最终肝体积缩小;肝组织HE染色见不同程度肝细胞肿胀、脂肪病变、坏死;Masson染色见肝纤维化程度逐渐加重,伴假小叶形成;肝功能AST、ALT、TBIL水平在造模周期持续攀升,凝血酶原时间延长,国际标准比值升高,血氨水平持续上升。 结论　50% CCl₄橄榄油混合溶液大鼠腹腔注射24周(每周1.5 mL/kg),能较好地再现持续慢性肝损伤病理进程,且能在肝硬化失代偿的基础上出现慢性肝衰竭的典型病理改变及并发症,能较好模拟人体从肝炎→肝纤维化→肝硬化代偿期→肝硬化失代偿期→慢性肝衰竭的病理演变过程,可作为慢性肝衰竭基础研究的模型参考。

摘要: 目的 　探讨S100A8/9及介导的NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路在由D-gal诱导的大鼠肾衰老模型和H₂ O₂诱导的HK-2细胞衰老模型中的作用。 方法　12只SD大鼠随机分为正常组和D-gal组,经颈背部皮下注射D-gal(150mg/kg)建立大鼠肾衰老模型,8周后麻醉状态下收集肾标本,荧光定量逆转录PCR检测衰老相关基因p21,p16和p53 mRNA表达水平;SA-β-Gal染色观察肾组织衰老情况,苏木素-伊红(HE)和Masson染色观察肾组织病理学变化;检测血清中BUN和CREA含量,检测肾组织中SOD、CAT、GSH-PX和MDA活性,DHE染色观察肾组织ROS水平变化;免疫荧光染色检测S100A8/9蛋白表达水平,Western Blot检测纤维化标志物Collagen Ⅲ、α-SMA和TGF-β1以及NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路上相关蛋白的表达水平。体外利用H₂ O₂构建HK-2细胞肾衰老模型,检测衰老蛋白p21、p16表达水平和炎症因子IL-18、TNF-α mRNA表达水平,SA-β-Gal染色观察细胞衰老情况;并使用S100A8/9抑制剂帕奎莫德(paquinimod,PAQ)干预,检测S100A8/9 及NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路上相关蛋白的表达水平。 结果　与正常组大鼠比较,D-gal组大鼠肾组织衰老基因p21,p16和p53 mRNA表达水平显著增加(P<0.01),衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence associated β-galactosidase,SA-β-Gal)染色显示衰老细胞数量显著增多(P<0.01);血清中BUN和CREA含量上升(P<0.05);组织内CAT、GSH-PX和SOD活性显著下降(P<0.01),MDA活性显著增加(P<0.01);纤维化标志物Collagen Ⅲ、α-SMA和TGF-β1的蛋白表达增加(P<0.05);组织内ROS含量增多(P<0.05);Dgal组大鼠肾小球出现一定程度的萎缩及缺失,肾小囊囊腔和肾小管管腔增大,细胞核深染、固缩,出现大量胶原纤维沉积;S100A8和S100A9蛋白表达增加(P<0.01);NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路上NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达增加(P<0.05)。H₂ O₂诱导HK-2细胞衰老后,使用S100A8/9抑制剂PAQ减轻了HK-2细胞衰老情况,衰老蛋白p21、p16表达水平和炎症因子IL-18、TNF-α mRNA表达水平均降低(P<0.05,P<0.01),SA-β-Gal染色显示衰老细胞数量减少(P<0.01),并抑制S100A8和S100A9蛋白表达(P<0.01)以及NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白的过表达(P<0.05或P<0.01)。 结论　S100A8/9通过激活NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路参与慢性炎症反应,从而促进D-gal诱导的肾衰老过程。

摘要: 目的 　以槟榔碱为研究对象,采用慢性不可预知温和应激(chronic and unpredictable mild stress,CUMS)所致小鼠抑郁模型,旨在评估槟榔碱在抗抑郁方面的潜在活性,并初步探讨其可能涉及的作用机制,从而为深入挖掘槟榔的健康功能提供实验依据,并为其资源的科学开发与利用提供理论支撑。 方法 选取60只检疫合格的SPF级C57BL/6J小鼠,根据体质量随机分为空白组、模型组、氟西汀组(20 mg/kg)、槟榔碱低剂量组(10 mg/kg)、槟榔碱中剂量组(20 mg/kg)、槟榔碱高剂量组(40 mg/kg),每组10只。采用旷场、悬尾和强迫游泳等行为学方法评价槟榔碱对抑郁小鼠的行为影响;采用酶联免疫法检测分析小鼠血清Cort含量、血清和脑组织中SOD、MDA、CAT水平以及脑组织中5-HT、NE、DA、GABA、TNF-α、IL-10和IL-1β等生化指标;Western Blot检测BDNF、TrkB、CREB的表达。 结果　实验结果表明,槟榔碱能显著降低模型小鼠在旷场活动中总路程、平均速度,增加小鼠活动次数;显著降低模型小鼠在悬尾和强迫游泳实验的不动时间。槟榔碱显著降低小鼠血清皮质酮水平,提高SOD、CAT水平同时降低MDA水平;显著增加神经递质5-HT、DA、NE、GABA水平;显著降低细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平;以及显著上调小鼠脑组织内BDNF、TrkB和CREB的表达水平。 结论　根据研究发现,槟榔碱具有显著的抗抑郁能力,其机制可能通过减轻氧化应激伤害、抑制神经炎症、调节神经递质平衡,以及调节BDNF/TrkB/CREB信号通路来实现。本研究挖掘了槟榔碱的抗抑郁功效并初步揭示其可能的调控机制,可为槟榔发挥神经活性提供数据支持并为槟榔的药用开发奠定理论基础。

摘要: 目的 　肺纤维化的进展是急性肺损伤(acute lung injury,ALI)后临床上常见的预后问题,本实验通过脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)多次打击筛选构建模拟临床上ALI后肺纤维化的模型,观察急性肺损伤后到肺纤维化的发展过程,并探索介导炎症损伤向纤维化转化的可能机制。 方法　采用1、2、4、8 mg/kg不同剂量的脂多糖不同次数经鼻腔滴入造成急性肺损伤,分别于造模后7、14、21、28、35、42 d,通过观察肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、胶原蛋白-1(collagen-1,Col-1)的表达,肺组织中羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,Masson染色观察肺组织胶原纤维沉积,比较不同造模方法肺组织纤维化形成过程及纤维化程度,检测各节点肺组织中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达变化,探讨纤维化形成的机制。 结果　以1、4、4 mg/kg LPS连续3 d进行打击的M-1组小鼠可以构建稳定的ALI后肺纤维化模型:M-1组小鼠肺组织中α-SMA、Col-1的表达、HYP含量和胶原纤维沉积从7 d后开始随时间依赖性增加,造模后21 d肺组织间质出现明显的胶原沉积,第28、35、42 d纤维化指标持续显著性升高。其余不同剂量、不同打击次数的各模型组小鼠肺组织HYP含量、胶原纤维表达与对照组小鼠比较没有增加或增加不显著。Western Blot结果显示:M-1组小鼠肺组织中的TGF-β1在打击后的14 d开始表达逐渐增加,到28 d显著高于对照组,促炎细胞因子TNF-α、IL-1β在第7天(急性期)均显著增加,TNF-α的表达至观察的28 d持续增加,IL-1β则在第7天急性期后表达逐渐下降。其余未形成纤维化的各模型组小鼠肺组织中TNF-α、IL-1β在急性期后表达均持续降低。 结论　LPS以1、4、4 mg/kg剂量连续3次打击可成功构建ALI后肺纤维化模型,其机制主要可能与TNF-α持续高表达调控TGF-β1诱导成纤维细胞活化与增殖有关。

摘要: 目的 　对8周龄SPF级和GF级金黄地鼠的血常规、血生化、组织病理学及脂代谢相关细胞因子进行比较分析。 方法　8周龄SPF级和GF级金黄地鼠各20只,雌雄各半。采用全自动血液细胞分析仪、全自动血液生化分析仪、ELISA试剂盒分别测定血常规、血生化及脂代谢相关血清细胞因子指标。并对盲肠、小肠、肺、脾、前胃、腺胃进行组织病理学观察。 结果　8周龄SPF级金黄地鼠和GF级金黄地鼠比较:(1)血液生理指标中雌性白细胞数(white blood cell,WBC)、血红蛋白浓度(hemoglobin,HGB)、平均红细胞血红蛋白 (mean corpuscular hemoglobin,MCH)、平均血小板体积(mean platelet volume,MPV)的测量值具有显著性差异(P<0.05),平均红细胞血红蛋白浓度(mean erythrocyte hemoglobin concentration,MCHC)、血小板分布宽度(platelet distribution width,PDW)、淋巴细胞(lymphocyte,LYM)的测量值有极其显著性差异(P<0.001);雄性平均红细胞体积(mean corpuscular volume,MCV)、MCH、LYM、嗜中性粒细胞(neutrophil,NEUT)、嗜碱性粒细胞(basophils,BAS)、嗜碱性粒细胞百分比(percentage of basophils,BAS%)的测量值具有显著性差异(P<0.05),MCHC、PDW、淋巴细胞百分比(percentage of lymphocytes,LYM%)、嗜中性粒细胞百分比(percentage of neutrophil,NEUT%)的测量值有极其显著性差异(P<0.001);(2)血液生化指标中雌性低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、糖化血清蛋白(glycosylated serum protein,GSP)的测量值有显著性差异(P<0.05),甘油三酯(triglycerides,TG)的测量值有极其显著性差异(P<0.001);雄性GSP的测量值有显著性差异(P<0.05),总胆固醇(total cholesterol, TC)、TG、LDL-C、FINS、C-肽(C-peptide)的测量值有极其显著性差异(P<0.001);(3)脂代谢相关血清细胞因子指标中雌性白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、脂联素(adiponectin,ADP)的测量值有显著性差异(P<0.05),白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、超敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)的测量值有极其显著性差异(P<0.001);雄性hs-CRP的测量值有显著性差异(P<0.05),ADP和肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)的测量值有极其显著性差异(P<0.001);(4)HE结果显示与SPF级金黄地鼠相比,GF金黄地鼠盲肠肌层变薄,附着于黏膜皱裂的隐窝数量减少;回肠管腔增大,杯状细胞数量增多;肺泡隔增宽;脾白髓中免疫细胞增多,血窦中含血量增加;前胃黏膜层变薄;腺胃管状腺嗜碱性强度减弱。 结论 通过对8周龄SPF级和GF级金黄地鼠的血常规、血生化、组织病理学及脂代谢相关细胞因子的比较分析。初步得出其血常规、血生化、组织病理学及脂代谢相关细胞因子参数的参考范围。

摘要:疾病动物模型是医学基础研究的重要生物载体。构建理想的动物模型是获取可靠实验数据的关键前提。组学技术在分子水平为动物模型的精准评价提供数据支持,从而提高动物模型的评价标准。本文对组学技术在疾病动物模型评价研究中的应用进行综述,并对组学技术在动物模型质量控制中的应用前景进行展望,为动物模型的精准评价提供新思路。

摘要:体表慢性难愈创面是一种创面不愈合状态,建立一种与人类相似的慢性难愈创面动物模型是防治和了解人体慢性创面形成复杂性及相关病理机制的重要工具。一般来说,创面动物模型是通过一定外界损伤干预引起机体创面形成,诱发分子生物学异常来进行构建的,常用的造模方法有手术切除法、加压缺血处置法、药物处置法、放射线处置法等,通常模型建造是否成功可通过常规治疗后创面能否恢复、创面大小测量、体征观察、体质量测定、脏器指数、红外成像等方法进行评判。尽管当前存在着多种多样的慢性创面动物模型构建与评价方法,但目前这一领域仍缺乏统一的标准。鉴于此,研究者们需高度重视造模方法及模型评价手段的选择,务必依据自身的实际研究需求,精心挑选最为合适的方案。这一举措对于确保实验结果的准确性和可靠性至关重要,是获取最佳科研成果不可或缺的一环。

摘要:随着生物-心理-社会医学模式的发展,慢性心理应激对疾病的影响越来越受到研究者的关注。慢性心理应激属于中医的情志病因范畴,本文系统回顾了慢性心理应激相关病证模型的研究进展,分析了不同模型的优点与局限性,并就未来慢性心理应激相关病证模型研究的方向和改进提出了自己的思考。

摘要:先天性纯红细胞再生障碍性贫血(Diamond-Blackfan anemia,DBA)是一种罕见的遗传性疾病,其特征为骨髓衰竭、先天性畸形和严重的红细胞发育异常。鉴于DBA的发病率较低,患者群体有限,且缺乏足够的研究模型,对于基因突变如何导致DBA的具体病理机制仍存在许多未知,临床上针对DBA的治疗手段也相当有限。本文综述了在DBA研究中所开发的斑马鱼模型、小鼠模型和人类细胞模型进而阐明DBA的病理机制,并对进入临床试验的药物进行了追踪,为深入探究DBA的发病机制和药物开发提供了重要参考。

摘要:动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是一种慢性炎症性疾病,其发生和发展涉及脂质代谢紊乱和铁代谢紊乱。建立理想的动物模型是研究AS病因、发病机制、预防及治疗措施的重要手段。AS动物模型铁脂代谢紊乱的主要研究对象是小鼠和小型猪,其中主要是雄性ApoE^-/-小鼠。单因素高脂饲料诱导AS铁脂代谢紊乱是AS铁脂代谢紊乱动物模型常用的建立方法,表现为脂质和铁代谢紊乱,具体表现为血脂水平升高、主动脉可见大量斑块与铁沉积、血清铁与肝铁增加明显,能更好地模拟人类因高脂饮食引发的动脉粥样硬化和铁脂紊乱。本文通过比较分析不同干预因素对AS动物模型铁脂代谢的影响,分析总结饮食诱导、化学物质干预、基因修饰等方式构建AS动物模型的方法,以期为AS与代谢性疾病的研究及新药开发提供参考与借鉴。

摘要:骨癌痛(cancer-induced bone pain,CIBP)不仅给癌症患者带来巨大痛苦,也降低其生活质量和自信心。导致CIBP的机制是复杂的,并随着癌症的进展而发生演变。目前治疗手段效果有限且存在不良反应。中医药在治疗CIBP方面具有一定优势,但相关镇痛机制有待深入探讨。建立典型、稳定、易重复的动物模型是进一步研究疾病发病机制和验证干预措施有效性的前提和基础。本文总结近3年常用的CIBP动物模型造模方法,并总结CIBP动物模型在中医药相关镇痛机制研究的应用,以期为今后的CIBP研究提供方向。