摘要: 目的　观察七味糖脉舒胶囊对2型糖尿病小鼠的治疗作用,并基于网络药理学探究其治疗2型糖尿病的作用机制。 方法 利用TCMSP,ETCM等数据库查询七味糖脉舒胶囊中所有成分及其靶点;利用OMIM,DrugBank等数据库搜索2型糖尿病的靶点;通过Venny 2.1.0将2型糖尿病与七味糖脉舒胶囊成分的靶点取交集。利用Metascape网站对交集靶点进行GO与KEGG通路富集分析。建立2型糖尿病小鼠模型,设七味糖脉舒胶囊低,中,高剂量组(234,468,936 mg/kg),二甲双胍(MET)组(200 mg/kg)治疗给药干预2周,治疗前后测量小鼠体质量,检测空腹血糖。给药2周后,检测空腹胰岛素(insulin,INS);ELISA检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB),Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察胰岛形态,半胱氨酸蛋白酶3(cysteine protease 3,Caspase3)和INS免疫荧光检测胰岛细胞的凋亡及胰岛β细胞的数量。Western Blot检测胰腺组织磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt),蛋白激酶B(protein kinase B,Akt),磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K),磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)促凋亡蛋白bcl2associated X蛋白质(bcl2-associated X protein,Bax),抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤因子2(B-cell lymphoma-2,Bcl2)等蛋白的表达水平。 结果　共筛选出七味糖脉舒胶囊活性成分靶点1260个;2型糖尿病靶点1205个。Venny交集靶点312个,核心靶点涉及Akt1,TNF,IL-6,TLR4等;富集分析确定了240条KEGG通路,其中“INS抵抗”和“PI3K/Akt信号通路”是富集到的关键通路。动物实验结果显示:与模型组相比,七味糖脉舒胶囊和二甲双胍治疗型给药干预后的血糖,INS抵抗均显著改善;血清中炎症因子含量降低,胰岛细胞凋亡率显著降低;胰岛β细胞数量显著增加;Bax表达含量降低,Bcl2表达含量明显升高,且上调了p-PI3K,p-Akt的表达。 结论　七味糖脉舒胶囊可显著降低2型糖尿病小鼠血糖水平、恢复INS敏感性、减少胰岛细胞凋亡,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

摘要: 目的　本研究旨在构建地塞米松(dexamethasone,Dex)诱导的糖皮质激素性骨质疏松与高血压症双重表型斑马鱼模型,并系统评估其表型特征验证其有效性。 方法　选用3受精后天数(day post fertilization,dpf)或4 dpf斑马鱼幼鱼,随机分为对照组(0.1% DMSO)和实验组(10 μmol/L Dex),分别于给药0、48、96 h时对斑马鱼进行脊柱茜素红染色与背主动脉血流检测,以分别反映骨矿化指标与血管直径(n= 10)。在确认最佳给药时间后用Western Blot检测骨形成相关蛋白(Akt、GSK-3β、β-catenin)及血管生成相关蛋白(AMPK、NF-κB)的表达,确认模型分子层面的有效性。 结果　Dex处理96 h后斑马鱼骨矿化量及骨密度均明显低于对照组,经统计学分析,4 dpf给药96 h为糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)模型的最佳造模时间。Dex处理后的斑马鱼血管直径较对照组显著减小(P<0.05),且处理时间越长模型组与对照组之间的差异越显著,各给药时间段中以4 dpf给药96 h后两组的差异最明显。将4 dpf斑马鱼给药96 h后检测蛋白表达,可见Dex显著降低Akt、β-catenin、NF-κB的蛋白表达(P<0.05),显著升高GSK-3β、AMPK的蛋白表达(P<0.05),提示Dex有效抑制骨形成、抑制血管生成。 结论　用10 μmol/L Dex作用于4 dpf斑马鱼96 h可有效建立快速、可靠的糖皮质激素性骨质疏松与高血压双重表型斑马鱼模型,该模型在造模周期与实验成本方面具有明显优势,是深入探讨两病共同机制及筛选新药的理想动物模型。

摘要: 目的　从“以方测证”的中医证候角度,探讨围绝经期干眼肝肾阴虚证大鼠模型的建立。 方法30只SPF级SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、杞菊地黄汤组,每组10只。除假手术组外,其余2组大鼠行双侧卵巢切除,并予以0.1%苯扎氯铵滴眼液滴眼联合激怒法持续10周建立围绝经期干眼肝肾阴虚证模型。造模结束后,杞菊地黄汤组大鼠予以杞菊地黄汤按8.37 g/(kg·d)的剂量进行灌胃,假手术组和模型组大鼠按1 mL/100(g·d)灌胃生理盐水,持续21 d。观察并记录各组大鼠的一般情况、网屏实验评分、泪液分泌量、泪膜破裂时间、角膜荧光素染色;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E₂)和孕酮(PROG)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠角膜、泪腺病理损伤;免疫组化染色检测大鼠角膜中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。 结果　与假手术组对比,模型组大鼠在行为学上表现为行动迟缓、反应迟钝、易激怒、体质量减轻、肛温上升(P<0.05),网屏实验评分下降(P<0.05),泪液分泌量减少(P<0.05),泪膜破裂时间缩短(P<0.05),角膜及泪腺病理损伤严重,血清性激素FSH水平升高,E₂、PROG水平下降(P<0.05),泪腺炎性因子IL-1β、TNF-α表达增加;与模型组比较,杞菊地黄汤组上述各指标均显著改善。 结论　从“以方测证”的中医证候角度,成功建立了围绝经期干眼肝肾阴虚证病证结合大鼠模型,为今后围绝经期干眼方证对应机制的系统深入研究提供了理论和实验依据。

摘要: 目的　本研究通过检测不同消毒剂和不同作用时间来获取斑马鱼胚胎消毒的高效方案,促进鱼房管理质量。 方法　本研究使用试剂级聚维酮碘、次氯酸钠和二氧化氯三种在国内市场上容易获取的试剂用于斑马鱼胚胎消毒,从胚胎发育的存活率、孵化率、畸形率等方面评估这三种化学消毒剂在不同浓度和不同消毒时间下对不同年龄的斑马鱼胚胎的毒性影响,并从细菌学角度即消毒后带菌胚胎量对三种消毒剂的效果进行比较。 结果　本研究发现次氯酸钠和二氧化氯都能较好杀灭胚胎表面细菌,而聚维酮碘消毒效果不佳;30 ppm的次氯酸钠和二氧化氯处理下斑马鱼胚胎的存活率、孵化率、畸形率与对照组无显著性差异;次氯酸钠和二氧化氯处理10 min比处理5 min的杀菌效果要更好。 结论　本研究推荐使用30 ppm的次氯酸钠,对6 ~ 30 hpf胚胎消毒10 min的操作方法。

摘要: 目的　系统构建前列腺癌(prostate cancer,PCa)的类器官模型(patient-derived tumor organoids, PDO)和异种移植瘤模型(patient-derived xenografts,PDX),探索藤黄酸(gambogic acid,GA)对PCa的抑制作用及其机制。 方法　利用PubChem、SwissTargetPrediction、SuperPred、SEA、GeneCards、OMIM、STRIN、DAVID数据库以及Venny 2.1.0在线网站、Cytoscape 3.8.2构建蛋白互作网络,进行GO和KEGG富集分析,并可视化处理,最终获取GA作用于PCa的靶点和通路。以GA作用于PDO及PCa细胞(22Rv1、PC3和DU145)48 h, CellTiter-Glo检测和CCK-8实验观察GA对其细胞活力的影响;qRT-PCR、Western Blot分析靶点蛋白水平的变化。GA处理PDX模型,测量肿瘤体积及质量;免疫组化分析肿瘤组织中靶点的表达变化。 结果　网络药理学筛选出GA抑制PCa的核心靶点为STAT3,并与HIF-1α信号通路相关。细胞实验显示GA降低了细胞和PDO的活力;HIF-1α、STAT3、P-STAT3蛋白水平均显著下调。体内实验显示GA组的肿瘤体积和重量均显著减少,同时免疫组化显示STAT3、HIF-1α表达降低。 结论　应用更具临床代表性的PDO及PDX模型,结合细胞系验证了网络药理学预测结果:GA对PCa呈现显著杀伤,其作用机制可能与STAT3/HIF-1α信号通路有关。

摘要: 目的　本研究旨在建立一种基于RNA测序阐明衰老过程中小鼠骨髓组织参与主要功能活动和细胞过程的特征性变化的研究方案,发掘用于衰老预测和干预的代表性潜在靶点。 方法　提取来自2、10和18月龄的各3只C57BL/6J雄鼠双侧胫骨和股骨的骨髓细胞,经过红细胞裂解处理后提取RNA用于RNA测序分析。 结果　基因表达量和Venn分析的结果显示2 ~ 10月龄基因的表达变化以下调为主,10 ~ 18月龄则以上调为主,在小鼠成熟发育的过程中基因表达经历了由下调为主向上调为主的变化。通过京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)的功能和富集分析以及基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)关注到的不同年龄阶段小鼠骨髓组织在“免疫系统”“发育和再生”“运输和分解代谢”“细胞生长和死亡”等通路存在显著的表达差异,其中在炎症、细胞骨架和DNA修复通路表现出持续激活,与逐渐下降的造血功能和波动的免疫调节形成对比。通过富集通路筛选出的差异表达上调的基因Bmpr1a和Inhba之间、差异下调的Dntt和Ccnd1之间以及Col1a1、Col1a2、Fcgr1、Fyn、Lgmn、Ctsl、Ctsk、Ctss、Gnail、Myl4和Ccr5之间均存在相互作用, 参与HSCs稳态、细胞周期、DNA损伤修复、免疫调节、细胞凋亡等功能调控。 结论　本研究提供了不同年龄阶段骨髓组织转录水平基因表达变化的数据,为探究小鼠衰老中骨髓组织发生的主要特征性变化提供研究策略,发掘揭示衰老的相关基因和信号通路,为延缓衰老和预防衰老相关疾病提供新的策略。

摘要: 目的　通过在B6-hSNCA-A53T转基因小鼠脑内注射α-突触核蛋白预形成纤维(α-Syn PFF),促进帕金森病病理改变的快速出现,从而加快帕金森病小鼠模型的建立。 方法 选择C57BL/6J背景的α-Syn A53T转基因小鼠作为模型组,同系C57BL/6J小鼠为对照组,通过脑立体定位技术将α-Syn PFF注射至小鼠双侧纹状体内。造模后,通过旷场实验评估小鼠的自主活动能力和焦虑行为;转棒、抓力及爬杆实验测定其运动协调性和四肢肌张力;埋藏食物实验评价小鼠的嗅觉功能;通过免疫组织化学染色法探究小鼠脑内炎症和病理性α-突触核蛋白发生。 结果　与对照组比较,A53T小鼠α-Syn PFF脑内注射后1月旷场实验中运动距离增加;转棒、抓力与爬杆实验无统计学意义;埋藏食物实验中寻找食物时间增加。造模2月后模型组旷场实验中运动距离减少;转棒、抓力与爬杆实验中运动协调能力以及肌张力减弱;埋藏食物实验中寻找食物时间增加。模型组小鼠黑质、皮层、海马区的病理性α-突触核蛋白增加;小胶质细胞增加,路易小体沉积;黑质多巴胺能神经元显著减少。 结论　A53T小鼠脑内注射α-Syn PFF后其嗅觉障碍和运动功能缺陷的发生显著提前;模型组小鼠黑质、皮层及海马区出现明显的α-突触核蛋白/路易小体沉积,并伴有黑质多巴胺能神经元丢失。因此,该模型可作为一种快速建立的α-突触核蛋白帕金森病动物模型。

摘要:焦虑作为一种主要的情绪障碍,表现为个体对未来威胁的预期,发病率约为7.3%,终生患病率位居首位,且与抑郁存在重叠机制,为多种精神疾病(中医情志病证)的典型症状,共病率及致残率高,严重危害人民健康。动物模型作为研究焦虑的重要载体,对破解焦虑发病机制及研发药物具有重要意义。但传统上的应激致焦虑公认范式却较为局限,本文基于“传统理论 + 临床数据 + 动物实验数据”初步提出一种“志意失畅”致焦虑新假说,定义为“个体经过多次尝试后自身需求无法满足、需求受限或被剥夺,是一种因愿望受阻又无能为力时所诱发的焦虑状态”,本假说把现代医学焦虑临床患者绝望放弃、快感缺乏和社交退缩的典型表现,与“饥而不能食,食而不能得,得而不能饱”的传统中医情志病证理论建立联系提出“志意失畅”致焦虑的中医病机观点,并在一种仿真饲料设计及造模的动物实验中得到数据支撑,据此建立的造模范式易于操作、重复性好、成本低廉,可用于建立大小鼠焦虑模型,为抗焦虑药物的研发及药效学评价提供理论和模型依据。

摘要:神经源性膀胱(neurogenic bladder,NB)是最具挑战性的泌尿系统疾病之一,脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是其发病的主要原因之一。动物模型是研究SCI后NB发病机制、治疗策略及筛选新药的重要工具。本文通过回顾与整理国内外近年来SCI后NB动物模型相关的文献,从动物类型、脊髓损伤节段、造模方法、模型评价指标等几个方面归纳和分析SCI后NB动物模型的研究进展,以期为基于SCI后NB动物模型开展的实验研究提供参考。

摘要:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)的核心病理特征是α-突触核蛋白(α-synuclein)的异常聚集及其引发的神经元损伤,α-突触核蛋白在形成寡聚体或原纤维的形式时具有毒性作用,通过线粒体功能障碍、囊泡转运障碍、多巴胺自发氧化以及神经炎症等多重途径导致神经元死亡。此外,α-突触核蛋白可以在细胞间传播,通过外泌体、胞吞胞吐、隧道纳米管(tunneling nanotube, TNT)或迷走神经轴突运输扩散,形成级联病理效应。以α-突触核蛋白为关键病理特征的PD动物模型作为致病机制的阐明、以及PD相关治疗药物研发的模拟工具,目前利用转基因、细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)、病毒介导过表达及基因编辑等多种策略已开发的α-突触核蛋白过表达动物模型助推了PD与α-突触核蛋白的探索研究。本文系统地综述了α-突触核蛋白的结构功能、毒性作用机制、细胞间传播途径、过表达动物模型以及其作为治疗靶点的研究进展。

摘要:线粒体自噬是通过一种独特的机制选择性地清除功能失调或过量的线粒体,与阿尔茨海默病关系密切,其共同特征是聚集性神经毒性蛋白和功能失调的线粒体。近年来大量研究证实,中药治疗阿尔茨海默病效果显著,其多靶点、多通路、多作用等优势已成为阿尔茨海默病的重要组成部分,健脑益智方、当归芍药汤、生物碱、黄酮类等中药复方和单体有效成分可通过调节线粒体自噬相关信号通路和靶点,抑制神经元线粒体自噬缺陷,发挥保护神经元作用。本综述阐述了线粒体自噬的基本过程、相关信号通路、在阿尔茨海默病发病过程中的分子机制及相关中药通过调控线粒体自噬改善阿尔茨海默病的最新研究进展,拟为未来基础研究及临床治疗提供思路与参考。

摘要:神经退行性疾病是以脑和/或脊髓神经元慢性进行性退变为主要病理特征的一类疾病,其病因不清、发病机制复杂,至今尚无有效的治疗方法。近年来,线粒体定位的沉默信息调节因子(silent information regulators,SIRTs)家族成员SIRT3、SIRT4、SIRT5在神经退行性疾病中的作用日益受到关注。研究表明它们通过调节线粒体功能、炎症反应等参与了神经元变性的许多重要环节。本文综述了线粒体SIRTs在阿尔茨海默病、帕金森病和肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病中的研究进展,以期为阐明疾病的发病机制与防治提供新的思路。

摘要:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是常见的神经退行性疾病,是导致患者发生认知功能障碍和行为异常的主要病因。构建与人类病变特点相似的动物模型对于更好地研究AD的发病机制和病理特点,开发新的治疗药物至关重要。本文结合最新研究进展,按照衰老模型、基因修饰模型、化学诱导模型的分类,总结了目前国内外常用的AD动物模型,阐述不同AD动物模型的造模机制、病理变化特点,并对其优缺点进行对比,以期为研究者选择合适的动物模型研究AD提供参考。

摘要:抑郁与肿瘤共病是当前全球公共卫生领域面临的重大挑战,严重影响患者的生存质量和临床预后。本文系统回顾了抑郁与肿瘤共病的流行病学特征、临床危害及当前研究面临的主要挑战,重点分析了抑郁通过神经内分泌-免疫调控网络对肿瘤发生发展的促进作用及其对免疫功能的抑制作用,详细阐述抑郁相关神经递质(如血清素、去甲肾上腺素)和应激激素(如皮质醇)在肿瘤微环境中的动态变化及其相互作用机制,深入揭示了抑郁通过激活HPA轴和交感神经系统,调控肿瘤免疫逃逸、转移和血管生成等恶性生物学行为的分子机制。同时,本文评述了现有动物模型在抑郁与肿瘤共病研究中的应用价值与发展瓶颈,强调建立更为精准的共病模型对于揭示共病机制和探索共病健康管理策略的重要性和急迫性。通过本综述,旨在提高对抑郁与肿瘤共病的风险预测、临床干预和基础研究的关注,为开发抑郁与肿瘤共病模型提供理论依据与新的研究方向。