摘要: 目的 本研究旨在通过 Purina 5008 饲料诱导 ZDF 大鼠构建糖脂代谢病模型,并系统评估其病理特征,为糖脂代谢病机制研究及药物开发提供临床前模型工具。 方法 选取 12 周龄雄性 ZDF 大鼠(模型组,n= 9)和 ZL 大鼠(正常对照组,n=9)。 模型组喂饲 Purina 5008 饲料,正常对照组喂饲维持饲料,持续 7周。 观察大鼠体征、体质量、Lee’s 指数、进食/ 饮水量;测定空腹血糖、口服葡萄糖耐量、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、胰岛素水平及 HOMA-IR;通过苏木素-伊红(HE)和油红 O 染色分析肝、胰腺及主动脉的病理改变。 结果 与正常对照组相比,模型组大鼠出现多饮多食、被毛暗淡等典型体征(P<0. 01),体质量、Lee’s 指数、进食/ 饮水量显著增加( P<0. 01),空腹血糖、血脂及 HOMA-IR 水平均显著升高( P<0. 01)。 病理显示,肝脂肪变性严重,胰腺胰岛细胞空泡样变,主动脉壁结构紊乱增厚。 结论 Purina 5008 饲料诱导的 ZDF 大鼠模型可稳定模拟糖脂代谢病的核心特征,包括糖脂代谢紊乱、胰岛素抵抗及多器官损伤,为机制研究与药物评价提供了可靠的实验平台。

摘要: 目的 对比 2 型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)模型建成后不同饮食干预方案及二甲双胍联合干预效果,建立及维持更契合临床实际的 T2DM 大鼠模型。 方法 50 只雄性 SD 大鼠随机分为 2组:空白对照(Control,n= 10)组、模型制备(n= 40)组,模型制备组大鼠采用高糖高脂饲料喂养,从第 3 周起联合每日灌胃脂肪乳,4 周后两次腹腔注射 25 mg / kg 链脲佐菌素( streptozotocin,STZ)诱导 T2DM 大鼠模型。模型建成后,将模型制备组随机分为高糖高脂-模型(HSHF-M)组、常规饮食-模型(ND-M)组、高糖高脂-二甲双胍(HSHF-Met)组、常规饮食-二甲双胍(ND-Met)组,每组 10 只。 HSHF-Met 组与 ND-Met 组大鼠采用饮食联合二甲双胍干预,HSHF-M 组与 ND-M 组大鼠仅进行饮食干预,Control 组大鼠采用常规饮食,持续 12 周。 饮食干预期间监测大鼠一般状态及生存指标检测;12 周干预结束后,进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT),检测大鼠血清空腹胰岛素(FINS)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛 β 细胞功能指数(HOMA-β),检测大鼠血清中血脂水平、肝功能、肾功能、氧化应激指标及炎症因子水平;并对大鼠胰腺、肝、肾组织病理变化观察且进行病理分析。 结果 实验表明,T2DM 模型大鼠制备成功后,采用常规饮食,12 周内模型稳定,与HSHF-M 组相比,ND-M 组体质量显著增加(P<0. 05),尿量及血糖显著下降(P<0. 05);OGTT 实验 0、30、60、120 min 血糖明显低于 HSHF-M 组(P<0. 05),曲线下面积显著减小(P<0. 05);血糖相关指标中 GSP、FINS、HOMA-IR 出现显著性差异(P < 0. 05);血脂相关指标中 TC、TG、FFA、LDL-C 水平显著降低(P< 0. 05),HDL-C 水平显著升高(P<0. 05);肝功能相关指标 ALT、ALP、AST 及肾功能相关指标 CRE、BUN 指标显著降低(P<0. 05)、NO 显著升高(P<0. 05);氧化应激指标中 MDA 水平显著下降(P<0. 05)、SOD 水平显著上升(P<0. 05);炎症因子 TNF-α、IL-1β 水平显著下降(P<0. 05);组织病理学显示,ND-M 组因未长期摄入高糖高脂饮食,其肝索紊乱、胰岛细胞减少及肾小球空泡等病理变化较 HSHF-M 组显著减轻。 与 HSHF-M 组相比,HSHF-Met 组和 ND-Met 组的生存指标及生化指标均显著改善(P<0. 05),其中 ND-Met 组改善效果更显著,胰腺、肝和肾病理损伤较 HSHF-Met 组较弱。 结论 模型建成后喂养常规饮食可有效避免高糖高脂所致糖脂代谢紊乱、氧化应激、炎症反应及多器官病理损伤,成功建立并维持更契合临床路径的 T2DM 大鼠模型。

摘要: 目的 通过构建小鼠坐骨神经横断模型,利用 16S rRNA 测序研究坐骨神经损伤对肠道菌群的影响。 方法 将 18 只 C57BL / 6 小鼠随机分组,分别为假手术组、实验组(D1 组、D4 组、D7 组、D14 组、D28组)。 造模时,假手术组仅开皮暴露神经取肠道内容物,其余在造模后第 1、4、7、14、28 天收集小鼠结肠内容物进行 16S rRNA 测序,分析肠道菌群的物种丰度变化和菌群基因功能预测。 结果 术后第 4 天开始,肠道内微生物群落的物种丰富度及多样性明显下降,第 7 天时物种水平开始回升。 厚壁菌门(Firmicutes)、疣微菌门(Verrucomicrobiota)、变形菌门(Proteobacteria)的变化趋势明显,其中且以阿克曼氏菌属(Akkermansia)、库特氏菌属(Kurthia)、杜博西氏菌属(Dubosiella)等细菌表现最为显著。 与假手术组相比,实验组 Akkermansia 水平逐渐下降;Kurthia、Dubosiella 等水平于第 4 天开始上升,且第 7 天达到峰值。 另外,根据菌群基因功能预测结果推断:多种代谢通路(如脂质代谢、氨基酸代谢等)在小鼠神经横断后可能受影响。 结论 坐骨神经横断引发小鼠肠道微生物菌群发生显著变化且通过基因功能预测观察到代谢相关通路的变化,提示微生物潜在功能可能受到影响。 该结果需通过代谢组学进行验证,以期将来为探索肠道菌群在周围神经损伤修复中的潜在作用提供研究线索。

摘要: 目的 通过肝左叶种植 hepa1-6 肝癌肿瘤组织,建立肝癌痛小鼠模型,并通过观测行为学、影像学、组织学及分子生物学相关指标,评估模型的有效性。 方法 将 100 ~ 150 μL 每毫升 4 × 10⁶ 个 hepa1-6细胞悬液缓慢接种于小鼠前肢腋区皮下,待皮下肿瘤凸出体表,取皮下肿瘤切成大小约 1 mm × 1 mm × 1 mm的肿瘤组织块。 将 SPF 级雄性 C57BL / 6J 小鼠随机分为假种植(sham)组和模型(model)组,每组 30 只。 模型组小鼠于肝左叶种植 hepa1-6 肿瘤组织块,假种植组开腹后不种植。 观察小鼠一般情况;利用弓背疼痛评分进行小鼠肝癌痛行为学评估;超声检测小鼠肝大体形态;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织结构、细胞构成及炎症细胞浸润情况;免疫组化(IHC)检测脊髓组织中小胶质细胞活化情况;实时荧光定量 PCR(qPCR)检测脊髓组织中白细胞介素 1β(IL-1β)、白细胞介素 6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的 mRNA 表达;Western Blot检测脊髓组织中 IL-1β 的蛋白表达。 结果 与假种植组相比,模型组小鼠一般情况明显异常,体质量降低(P<0. 05);弓背疼痛评分显著升高(P<0. 05);超声示模型组小鼠肝肿瘤组织凸出;HE 染色示模型组小鼠肝组织结构异常,可见大量肿瘤细胞及炎性细胞浸润;免疫组化结果显示模型组小鼠脊髓组织中小胶质细胞的标志物(ionized calcium-binding adapter molecule 1, Iba1)的表达显著增多;qPCR 结果显示模型组小鼠脊髓组织IL-1β、IL-6、TNF-α 的 mRNA 表达显著增多(P<0. 05);Western Blot结果显示模型组小鼠脊髓组织 IL-1β 的蛋白表达显著增多(P<0. 05)。 结论 通过肝左叶种植 hepa1-6 肝癌肿瘤组织可以有效地建立肝癌痛小鼠模型;该 方法建立的肝癌痛小鼠模型存在弓背疼痛行为学异常、肝组织形态及结构异常、疼痛因子和炎症因子活化现象,可作为肝癌痛研究的有效动物模型,为研究肝癌痛的发病机制及药物治疗效果提供有效手段。

摘要: 目的 探讨柴胡皂苷 D( SSD)是否通过调控长链非编码 RNA-gm33782(LncRNA-gm33782)影响糖酵解途径,从而减轻慢性肾病(CKD)模型中的肾损伤和纤维化。 方法 建立单侧输尿管梗阻(UUO)诱导 C57BL / 6 小鼠 CKD 模型。 30 只小鼠随机分为假手术组、UUO 组、SSD 低剂量组(30 mg / (kg·d))、SSD 高剂量组(60 mg / (kg·d))、厄贝沙坦组(20 mg / (kg·d)),灌胃给药 7 d 后处死小鼠收集肾组织,采用苏木素-伊红(HE)、Masson 和 Sirius red 染色评估肾病理损伤;利用免疫组化和 Western Blot 检测纤维化标志物(FN、α-SMA、Col-Ⅰ)的表达。 通过 RT-qPCR 分析 LncRNA-gm33782 表达;使用试剂盒检测肾组织乳酸浓度,并通过Western Blot 检测糖酵解关键酶己糖激酶 2(HK2)的蛋白表达,评估 LncRNA-gm33782 与肾纤维化及糖酵解的关联。 体外研究采用转化生长因子-β(TGF-β)诱导小鼠肾小管上皮细胞(TCMK-1)构建纤维化模型,通过敲低与过表达 LncRNA-gm33782,观察其对纤维化指标(FN,Col-Ⅰ)、糖酵解关键酶(HK2,PKM2)表达及线粒体功能(细胞耗氧率(OCR))的影响;进一步在 LncRNA-gm33782 过表达条件下给予 SSD 干预,评估其保护效应。 结果 SSD 治疗显著减轻 UUO 小鼠的肾组织损伤、纤维化程度及乳酸堆积。 LncRNA-gm33782 在体内及体外纤维化模型中均显著上调(P<0. 05),而 SSD 干预有效降低其表达(P<0. 05)。 体外实验显示,敲低LncRNA-gm33782 可减轻 TGF-β 诱导的细胞纤维化,并抑制糖酵解活化;反之,过表达 LncRNA-gm33782 则加剧线粒体 OCR 抑制、纤维化程度和糖酵解激活,并削弱 SSD 保护作用(P<0. 05)。 结论 SSD 通过靶向抑制LncRNA-gm33782 的表达,下调糖酵解活化,恢复线粒体功能,从而阻断肾纤维化进程,LncRNA-gm33782 是SSD 发挥肾保护作用的关键分子靶点。

摘要: 目的 构建 2 型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中医“湿证”病证结合动物模型,并对模型进行宏观表征及微观指标评价。 方法 基于自发性 db / db 小鼠疾病模型,采用 60%高脂饲料构建内湿证,探索 DN 湿证病证结合(TSSZ)动物模型的构建。 观察各组小鼠的一般情况及体质量;测定小鼠的尿微量白蛋白肌酐比、血糖值、肾功能及糖脂代谢等生化指标;苏木素-伊红(HE)、PAS、Masson、油红 O 染色观察肾的病理学改变;PCR 技术检测肾组织的微炎症和纤维化水平;免疫荧光法检测肾组织巨噬细胞极化程度;HE 染色和PCR 技术检测肠组织黏膜屏障情况;收集小鼠粪便,运用 LC-MS 技术检测粪便代谢组。 结果 与正常组相比,糖肾组的尿微量白蛋白肌酐比升高(P < 0. 05),HE 和 PAS 染色提示明显肾小球基底膜均质性增厚,系膜区基质明显增生,PAS 染色提示糖原沉积现象明显加重(P<0. 05),符合 DN 疾病模型构建成功的标准;在宏观体征方面,与糖肾组相比,糖肾湿证组出现明显的皮毛滑腻出油、大便稀软、精神萎靡、倦怠乏力、扎堆蜷卧、多尿等现象,体质量明显增加( P<0. 05);在脂毒性指标上,糖肾湿证组的总胆固醇指标明显升高( P<0. 05),油红 O 染色见显著的脂滴沉积,糖肾湿证组的 Masson 染色提示明显的胶原蓝染,肾小球间质纤维增生加重(P<0. 001),且促纤维化因子 α-SMA、CTGF、FN、TGF-β mRNA 表达水平显著升高(P<0. 001);在微炎症水平上,糖肾湿证组的炎症因子 TNF-α、MCP-1、IL-6 明显升高(P<0. 001),M1 型巨噬细胞极化明显加强(P<0. 05);在肠道微生态水平上,肠组织 HE 染色提示糖肾湿证组的肠道损伤加重,糖肾湿证组的肠 ZO-1、Occludin mRNA 表达水平明显降低(P<0. 001),粪便代谢组学结果表明湿证造模影响相关代谢通路,包括 α-亚麻酸代谢、色氨酸代谢等。 结论 采用 60%高脂饮食喂养复合自发性 db / db 小鼠疾病模型的 方法,能够成功构建 2 型 DN 湿证病证结合动物模型。 该研究为后续深入探索 2 型 DN 湿证病证结合动物模型的构建及中药复方对 DN 的药效学提供了较理想的动物模型。

摘要: 目的 探讨三叶青总黄酮(Radix Tetrastigma hemsleyani flavone,RTHF)通过激活 Nrf2 信号通路对脓毒症急性肝损伤小鼠焦亡和铁死亡的影响以及分子机制。 方法 将 KM 小鼠随机分为 6 组:对照组、模型组、阳药组(地塞米松 10 mg / kg)、RTHF 低、中、高剂量组。 RTHF 低、中、高剂量组分别腹腔注射 RTHF 60、90、120 mg / kg 预处理 7 d,阳药组腹腔注射地塞米松 10 mg / kg 预处理 7 d。 用腹腔注射 LPS(10 mg / kg)建立脓毒症小鼠模型,24 h 后处死小鼠,收集肝、血液标本。 通过大体标本与组织病理检查、生化检查以及分子生物学检查验证 RTHF 治疗脓毒症急性肝损伤的药效及药理机制。 结果 与模型组相比,RTHF 低、中、高剂量组能显著降低小鼠血清 ALT、AST、IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18 和肝组织 MDA、Fe^{2 +}、ROS 水平( P<0. 01,P<0. 05),同时显著提高肝组织 SOD、GSH 含量(P<0. 01,P<0. 05)。 此外,RTHF 低、中、高剂量组小鼠肝组织病理损伤与炎症细胞浸润状况均得到显著改善,肝指数亦有所降低。 在分子层面,RTHF 能上调细胞核内Nrf2 蛋白的表达,以及 Nrf2、HO-1、SLC7A11、GPX4 蛋白表达水平( P<0. 01,P<0. 05),并下调 CleavedCaspase-1、GSDMD-NT 蛋白的表达,以及 Keap1、NLRP3、Caspase-1、Cleaved-Caspase-1、GSDMD、GSDMD-NT 蛋白表达(P<0. 01,P<0. 05)。 结论 RTHF 可通过激活 Nrf2 信号通路,有效减少炎性因子的释放,缓解氧化应激,抑制铁死亡以及 NLRP3 介导的细胞焦亡,从而对 LPS 诱导的脓毒症肝损伤小鼠发挥保护作用。

摘要: 目的 为了建立适用于含蜂蜜中药制剂血糖生成指数(glycemic index,GI)测定的小鼠实验方法。 方法 参考 WS / T 652-2019 人体测定标准,对小鼠测试实验方法进行优化,并以不同比例果葡糖浆为样本,验证初选条件的可行性;优化后的方法应用于蜂蜜以及含蜂蜜中药制剂古汉养生精 GI 的测定中。 结果研究结果显示:在优化条件下,果葡糖浆 GI 值与理论值最接近,且与果糖比例呈高度线性相关 ( R²=0. 9959);果葡比不同的 4 种蜂蜜 GI 值为 60. 3,54. 3,56. 5,59. 3,均低于同等果葡比的果葡糖浆;含蜂蜜中药制剂古汉养生精 GI 值范围为 45. 2 ~ 59. 6,并随蜂蜜 GI 的降低而降低。 结论 优化后的小鼠实验法可有望成为含蜂蜜中药制剂的 GI 测定和蜂蜜原料筛选的有效手段。

摘要: 目的 探讨菲牛蛭(Poecilobdella manillensis)对角叉菜胶(kappa-carrageenan,KCG)诱导小鼠尾部血栓形成的抑制作用。 方法 连续 7 d 以菲牛蛭提取物 JC-17(2. 5、25、100 mg / kg)和肝素钠(50 mg / kg)腹腔注射处理 KM 小鼠,于末次给药 1 h 后采用 0. 5% KCG 诱发小鼠尾部形成血栓。 结果 48 h Model 组(对小鼠用 0. 2 mL 0. 5% KCG 处理)小鼠黑尾率为(94. 91 ± 3. 93)%,表明造模成功,活性提取物低剂量组(L 组)、活性提取物中剂量组(M 组)、活性提取物高剂量组(H 组)较 Model 组的小鼠黑尾率呈梯度下降趋势,凝血酶原时间(prothrombin time,PT)延长、纤维蛋白原含量(fibrinogen,FIB)降低,差异具有显著性(P<0. 05);Model组 TNF-α、IL-1β、IL-6 含量升高,而 L 组、M 组、H 组、PC 组炎症因子含量降低,差异具有显著性(P<0. 05)。 结论 菲牛蛭提取物 JC-17 能有效抑制小鼠尾部血栓形成,同时具有抗炎作用,提示 JC-17 在炎症相关性血栓疾病的防治中具有潜在应用价值。

摘要:胰腺癌(pancreatic cancer,PC)恶性程度高、起病隐匿且预后差,现有治疗措施常因肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)所具有的免疫抑制特性,易引起复发和耐药。 TME 的特征常影响肿瘤免疫治疗的效果,尤其在抑制性免疫微环境下常出现肿瘤的免疫逃逸和免疫耐受。 PC 的进展是微生物群、宿主遗传背景及环境因素共同作用的结果,微生物群通过重塑免疫微环境成为核心调控环节之一。 通过靶向特定的微生物群调节免疫细胞功能,可以增强免疫检查点抑制剂的治疗效果。 本文聚焦 PC 的免疫微环境,通过与胃肠道肿瘤相关微生物群的差异性分析,综述了微生物群在影响 PC 免疫微环境和增强免疫治疗效果方面的研究进展;分析了通过干预微生物及其代谢途径,改善 PC 抑制性免疫微环境的效能;阐述了微生物群在 PC 免疫反应中的调控机制,期望为 PC 患者提供新的个性化免疫治疗策略。

摘要:白内障动物模型是解析病理机制与筛选药物的重要工具,而晶状体混浊分级的精准性依赖于解剖特征与分级系统的匹配。 目前临床分级系统是基于人眼设计的,但动物眼存在明显的解剖差异:小鼠晶状体直径为(1. 2 ± 0. 1)mm,人眼(8. 5 ~ 9. 5)mm,且核区占比也小于人眼;兔眼角膜曲率为(7. 2 ± 0. 1)mm,人眼(8. 0 ± 0. 2)mm;斑马鱼晶状体缺乏典型的核-皮质分化。 这些差异导致临床分级出现“维度冗余、检出偏差和分级失真”。 本文综述了白内障动物模型的诱导方法,系统分析了上述解剖差异对分级系统适用性的影响,并提出了定制化策略对小鼠采用改良的晶状体混浊分级系统Ⅲ(lens opacities classification system Ⅲ,LOCS Ⅲ)或简化分级、对兔子采用专门针对核混浊的分级,对斑马鱼采用灰度值定量,旨在为白内障动物研究提供精准分级参考。

摘要:高尿酸动物模型在高尿酸研究中应用广泛,但缺少专业规范的制备和评价标准,本文通过对国内外的文献查阅,对高尿酸血症的动物模型应用现状进行了总结分析;总结了构建高尿酸血症常用动物模型的选择,并对诱导型动物模型方法进行了汇总分析,以期为构建良好的高尿酸动物模型提供参考。

摘要:术后认知功能障碍(postoperative cognitive dysfunction,POCD)是老年患者麻醉与手术后常见的中枢神经系统并发症,表现为多维度认知功能下降,显著延长住院周期并增加医疗与社会负担。 近年来,吸入性麻醉剂七氟烷被广泛证实为 POCD 的重要诱发因素之一。 本文系统综述了七氟烷诱导 POCD 的动物模型构建策略及其多机制作用路径,重点从神经炎症、线粒体功能障碍、突触可塑性损伤、tau 蛋白磷酸化、表观遗传调控异常及血脑屏障(BBB)通透性改变 6 个维度展开机制解析。 研究证据表明,七氟烷可通过激活小胶质细胞、上调促炎因子、抑制线粒体复合物Ⅰ/ Ⅲ功能、诱发氧化应激、破坏突触结构蛋白表达、促进 tau 蛋白过度磷酸化、诱导脑源性神经营养因子(BDNF)等关键基因启动子高甲基化及组蛋白去乙酰化等机制,最终导致认知功能损伤。 此外,七氟烷在特定病理状态下可破坏 BBB 完整性,加剧外周炎症因子向中枢浸润,形成神经炎症-认知损伤的正反馈循环。 七氟烷通过多通路协同诱发 POCD,机制交织成网。 未来需从“单靶”转向“多通路协同”干预,为老年患者术后认知保护提供新策略。

摘要:胃癌是全球范围内高发的恶性肿瘤,其发病过程通常经历胃癌前病变阶段,包括慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生和不典型增生等。 近年来,小鼠胃癌前病变模型在研究胃癌发生机制、病理特征及药物干预中起到了重要作用。 本文系统总结了胃癌前病变动物模型的研究进展,涵盖了自发性模型、化学诱导模型、转基因模型、感染模型、饮食诱导模型、细胞移植模型和辐射诱导模型等多种类型。 不同模型通过模拟胃癌前病变的组织学特征(腺体萎缩、肠上皮化生等)和分子生物学特征(NF-κB、Wnt / β-catenin 信号通路激活、炎症递质的作用等),为胃癌的发病机制研究提供了多维度实验平台。 此外,模型研究揭示了幽门螺杆菌感染、基因突变、化学致癌物等多种致病因素与胃癌前病变的密切关联。 然而,现有模型在模拟人类胃癌前病变的复杂性、遗传异质性及肿瘤微环境方面仍存在一定局限性。 本文为胃癌前病变模型的选择和应用提供了全面的参考,为胃癌的基础研究和临床转化提供了重要的理论支持。