摘要: 目的 探讨藤黄酸(gambogic acid,GA)对胰腺癌细胞吉西他滨(gemcitabine,GEM)化疗敏感性的调控作用及其潜在分子机制。 方法 采用 GEM 浓度递增法构建胰腺癌耐药细胞株,评估 GA 对耐药细胞的增殖抑制效应。 通过实时荧光定量逆转录 PCR(RT-qPCR)和 Western Blot 检测 GA 对富含亮氨酸重复序列蛋白 8A(leucine-rich repeat-containing protein 8A,LRRC8A)表达的影响。 进一步构建 LRRC8A 敲低的胰腺癌类器官(patient-derived organoids,PDOs)模型,利用 Cell Titer-Glo 发光法测定敲低 LRRC8A 后 GEM 的半数抑制浓度(IC50 ),探究 GA 联合 GEM 对细胞活力的协同作用。 运用网络药理学与分子对接技术预测 GA 降低耐药的潜在靶点,并通过 Western Blot 实验进行验证。 建立胰腺癌异种移植小鼠模型,观察 GA 治疗对肿瘤体积的影响,并通过免疫组化检测 LRRC8A 在治疗前后表达水平的变化。 结果 GA 显著抑制胰腺癌耐药细胞及PDOs 的生长,且通过调节 LRRC8A/ STAT3 信号通路有效提高细胞对 GEM 的敏感性。 体内实验进一步证实,GA 干预可显著降低 LRRC8A 的表达水平,并抑制胰腺癌的生长。 结论 GA 可通过抑制 LRRC8A 的表达,增强胰腺癌细胞对 GEM 的化疗敏感性。

摘要: 目的 探讨肾纤康对慢性肾病-矿物质和骨代谢异常( chronic kidney disease-mineral and bone disorder,CKD-MBD)的防治作用和潜在机制。 方法 构建大鼠 CKD-MBD 动物模型,检测大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平;ELISA 检测大鼠血清中骨碱性磷酸酶(BALP)、全段甲状旁腺激素(iPTH)、维生素D3(VD3 )、软骨寡聚基质蛋白(COMP)、成纤维细胞生长因子 23(FGF23)、klotho、成纤维细胞生长因子受体 1(FGFR1)含量;苏木素-伊红(HE)、Masson 和 PSR 染色观察肾组织病理学改变;HE、Masson 和 TRAP 染色观察股骨组织形态;显微 CT(Micro-CT)分析股骨结构特性;实时荧光定量逆转录 PCR(RT-qPCR)和 Western Blot检测肾组织中 COMP、FGF23、klotho、FGFR1 mRNA 及蛋白水平;免疫组化观察肾和骨组织中上述分子的表达。 结果 与模型组 CKD-MBD 大鼠相比,肾纤康可显著降低血清 Scr、BUN、BALP、iPTH、COMP 及 FGF23 水平(P<0. 01,P<0. 05),升高 VD3 、klotho 及 FGFR1 水平(P<0. 01),减轻大鼠肾损伤、胶原纤维沉积及炎性浸润,改善骨质疏松与骨代谢,下调肾组织中 COMP、FGF23 的 mRNA 及蛋白表达(P<0. 01),上调 klotho 和FGFR1 的 mRNA 及蛋白表达(P<0. 01,P<0. 05),免疫组化结果与分子检测趋势一致。 结论 肾纤康能有效防治 CKD-MBD 大鼠的肾骨异常,其机制可能与下调 COMP 和调控 FGF23-klotho 信号轴有关,且肾纤康高剂量组效果最佳。

摘要: 目的 建立改良型小鼠铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)慢性肺部感染模型,并对该模型进行系统评价,为药物治疗 PA 慢性肺部感染提供一种可靠的模型建立方法。 方法 通过一种改良的简便可行的方法制备包被 PA 的藻酸盐微菌珠,采用气管插管滴注法构建 C57BL / 6J 小鼠 PA 慢性肺部感染模型。 通过观察小鼠生理状态变化,血常规分析,支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)与肺组织载菌量测定、炎症因子表达量测定及组织病理切片分析对模型是否成功进行系统评价并确认。 结果 当小鼠经气管内滴注包被 PA 的藻酸盐微菌珠后,与正常组及 0. 9%氯化钠溶液藻酸盐微珠组相比,感染组小鼠生理状态不佳,体质量减轻。 其肺组织匀浆液及 BALF 均培养出 PA,且血液中白细胞和中性粒细胞数目显著增多(P<0. 05),同时 BALF 中促炎因子 TNF-α 及降钙素原( procalcitionly, PCT)含量均显著升高。 此外,肺组织病理切片苏木素-伊红(HE)和 Masson 染色结果也显示模型组小鼠肺组织有明显的炎症细胞浸润及病理改变。 结论 本研究通过改良的方法成功制备了包裹 PA 的藻酸盐微菌珠,将其通过气管插管滴注法接种至小鼠肺部,成功建立了小鼠 PA 慢性肺部感染动物模型,为 PA 的药物治疗提供了一种切实可行的实验动物模型。

摘要: 目的 对比单纯机械损伤法和人流刮宫法,探索更符合子宫内膜损伤临床病因和疾病特征的动物模型,并探讨妊娠期宫腔操作更易造成损伤的原因。 方法 将 42 只雌性大鼠随机分为 3 组,即假手术组6 只、单纯机械损伤(S)组 18 只、人流刮宫(A)组 18 只,除假手术组外其余两组分为 3 个亚组,分别于术后第一、二、三动情期取材。 苏木素-伊红(HE)染色观察子宫内膜组织病理学改变;Masson 染色观察子宫内膜纤维化程度;免疫组化检测大鼠子宫组织 CD31、LIF 表达情况;免疫荧光检测子宫内膜 CD68 表达情况。 ELISA 检测大鼠血清炎性因子及激素水平,Western Blot 检测大鼠子宫内膜组织 CD68、CD86、TGF-β 蛋白表达。 结果(1)术后第三个动情期时,S 组大鼠子宫病理形态变化较小,子宫内膜厚度、上皮细胞及巨噬细胞变化、炎症水平较假手术组无显著性差异,仅纤维化水平和血管再生能力符合子宫内膜损伤临床特征。 而 A 组大鼠子宫内膜变薄,腺体数目减少,腔上皮细胞显著减少,巨噬细胞表达增加并伴有明显的炎症反应,子宫纤维化水平大幅增加,血管再生能力下降,四个维度均符合临床特征;(2)两种方法造模后大鼠子宫内膜纤维化水平可随损伤时间增加而增长,血清炎性因子水平随损伤时间增加而减少,但 A 组大鼠炎性因子水平下降更缓慢,炎症反应持续时间更长。 结论 人流刮宫造模更符合现阶段对人类子宫内膜损伤临床病因和疾病特征的认识,且妊娠期宫腔操作更易损伤的原因可能与巨噬细胞持续高表达导致子宫内膜处于慢性炎症状态有关。

摘要: 目的 建立评价肾虚血瘀型 Kümmell 病(Kümmell disease, KD)的动物模型以探究其潜在治疗靶点与作用机制。 方法 将 40 只 SD 大鼠随机分为正常组、骨质疏松组、假手术组、对照组与模型组。 模型组行卵巢切除术诱导肾虚状态,2 个月后于尾椎制造骨缺损模型,施加 4 周机械应力。 骨缺损术后 1 周皮下注射盐酸肾上腺素诱导血瘀证。 对照组行卵巢切除与骨缺损术,注射 0. 9%氯化钠溶液。 监测各组体温、体质量、摄食饮水量及舌象变化。 建模结束后进行行为学观察,并行影像学、血液流变学及组织病理学检测。 结果模型组较假手术组及对照组呈现体温升高、体质量减轻、摄食减少、舌质紫暗伴舌下络脉迂曲、毛发枯槁、精神萎靡及运动障碍。 影像学显示模型组皮质变薄、骨小梁稀疏断裂、椎体内真空裂隙征。 血液学检测提示模型组全血黏度(低/ 中/ 高切)及血浆黏度显著升高,纤维蛋白原上升,凝血酶时间、凝血酶原时间及活化部分凝血活酶时间缩短;血清钙磷降低,骨转换标志物升高;甲状腺激素及雌二醇水平较假手术组显著降低。 组织病理学显示模型组骨小梁结构破坏,新生骨低于对照组。 结论 卵巢切除联合肾上腺素诱导及机械应力干预可成功构建肾虚血瘀证候的 KD 大鼠模型,为其机制研究和治疗提供了有效的平台。

摘要: 目的 基于代谢组学技术,明确肺纤维化小鼠肺组织中特异性内源性生物标志物及其机制。 方法 16 只 C57BL / 6J 小鼠随机分为空白组、博来霉素造模组(BLM)组。 制备肺纤维化小鼠模型,检测各组小鼠肺功能、肺病理、羟脯氨酸(HYP)等指标;进行关键差异代谢物与病理指标相关性分析及价值评估以获得潜在生物标志物,并功能分析及通路富集;结合“生物标志物-疾病相关靶标-通路”多层互联网络阐明生物标志物在肺纤维化的核心机制,采用 qPCR 技术检测核心靶点 mRNA 水平。 结果 与空白组小鼠相比,BLM组小鼠体质量降低,肺功能明显降低(P<0. 01),肺组织结构紊乱、肺泡壁被破坏,肺系数及 HYP 增加(P<0. 01);代谢组学结果显示肺纤维化小鼠代谢谱发生改变,差异代谢物主要富集到花生四烯酸代谢途径;对显著性排名前十的关键差异代谢物进行病理指标相关性分析及价值评估,得到 8 个生物标志物与肺纤维化特征显著相关(P<0. 001,P<0. 01,P<0. 05);多层互联网络阐明生物标志物在的核心机制主要涉及炎症反应和细胞增殖;qPCR 显示,6 个核心靶点在肺纤维化小鼠肺组织中显著升高(P<0. 05, P<0. 01)。 结论 肺纤维化小鼠代谢谱发生改变,Capryloylglycine、S-(PGA1)-glutathione、Corticosterone、Thymidine、3-Oxotetradecanoic acid、3-Hydroxybutyric acid、Uridine、3-Hydroxysebacic acid 等生物标志物可能通过 IL-6、EGFR、CXCL8、MMP9、PTGS2、MAPK3 等调控炎症反应和细胞增殖等机制在肺纤维化的进展中发挥重要作用。

摘要: 目的 建立载脂蛋白 E(apolipoprotein E,ApoE)和巨噬细胞特异性 Krüppel 样因子 2(Krüppellike factor 2,KLF2)双基因敲除小鼠模型,观察巨噬细胞 KLF2 对小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的调控作用。 方法 KLF2^{flox / flox}/ Lyz2-Cre⁺ 小 鼠 与 ApoE^{- / -} 小 鼠 的 子 代 通 过 繁 配、 多 轮 筛 选 得 到 基 因 型 为KLF2^{flox / flox}/ Lyz2-Cre⁺/ ApoE^{- / -}小鼠。 使用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western Blot 对KLF2 mRNA、蛋白敲除水平进行验证。 高脂饲料喂养诱导 AS 小鼠模型,观察模型组小鼠(基因型 KLF2^{flox / flox}/Lyz2-Cre⁺/ ApoE^{- / -})与对照组小鼠(基因型 KLF2^{flox / flox}/ ApoE^{- / -})斑块水平及脂质代谢差异。 结果 建立了KLF2^{flox / flox}/ Lyz2-Cre⁺/ ApoE^{- / -}基因型小鼠,即 ApoE 和巨噬细胞特异性 KLF2 双基因敲除小鼠。 病理染色显示,模型组小鼠主动脉根部斑块面积、脂质堆积水平较对照组小鼠显著升高。 脂质代谢方面,与对照组小鼠比较,模型组小鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平、肝脂质堆积水平显著升高。 此外,模型组小鼠主动脉根部斑块巨噬细胞浸润水平较对照组显著升高。 结论 巨噬细胞特异性敲除 KLF2 促进小鼠 AS斑块进展,这可能与 KLF2 调控巨噬细胞代谢、黏附及浸润有关。 本研究为进一步挖掘巨噬细胞 KLF2 对 AS相关疾病的调控机制提供有效动物模型和奠定实验基础。

摘要: 目的 探究天麻芎苓止眩片对自发性高血压模型大鼠肾的作用及机制。 方法 购买 SHR 作为自发性高血压模型大鼠,WKY 大鼠作为正常血压对照鼠,大鼠适应性饲养后分为 4 组:(1)对照组(WKY 大鼠);(2)模型组(SHR);(3)模型 + 止眩片组(SHR + 天麻芎苓止眩片灌胃);(4)模型 + 缬沙坦组(SHR + 缬沙坦灌胃),灌胃前后分别检测各组大鼠血压,分别使用 ELISA 和生化试剂盒检测 TNF-α、GSH 生化仪检测肾功能四项(肌酐、尿素氮、尿酸和尿微量白蛋白),苏木素-伊红(HE)、TUNEL 染色检测肾组织损伤程度和细胞凋亡情况,免疫荧光检测肾组织中 NF-κB P65、p-P65、SIRT1 和 PGC-1α 表达情况。 结果 与对照组相比,模型组血清中 TNF-α 含量升高,GSH 含量降低,尿液中肌酐、尿酸和尿微量白蛋白含量上升,与模型组相比,模型 + 止眩片组和模型 + 缬沙坦组大鼠收缩压显著下降,舒张压有下降趋势但不明显,表明天麻芎苓止眩片和缬沙坦具有降血压作用;与模型组相比,模型 + 止眩片组和模型 + 缬沙坦组大鼠血清中 TNF-α 含量下降,GSH 含量升高,大鼠尿液中肌酐、尿酸和尿微量白蛋白含量下降,表明天麻芎苓止眩片和缬沙坦可抑制炎症因子释放,抑制氧化应激,增强肾功能。 与对照组相比,模型组大鼠肾组织中 NF-κB P65、p-P65 表达上升,SIRT1、PGC-1α 表达下降,与模型组相比,模型 + 止眩片组和模型 + 缬沙坦组 NF-κB P65、p-P65 表达下降,SIRT1、PGC-1α 表达上升,表明天麻芎苓止眩片和缬沙坦可提高 SIRT1、PGC-1α 表达,抑制 NF-κB 通路激活,从而抑制炎症反应。 结论 天麻芎苓止眩片可对自发性高血压大鼠肾起保护作用,机制为升高自发性高血压模型鼠肾中 SIRT1、PGC-1α 表达、降低 NF-κB P65、p-P65 表达,抑制炎症反应相关。

摘要: 目的 探讨低氧预处理的间充质干细胞外泌体(hMSC-Exos)对妊娠期糖尿病(GDM)大鼠模型的疗效、机制及安全性,评估其作为 GDM 新型治疗策略的潜力。 方法 人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)于5% O2 条件下培养,采用超滤浓缩结合超速离心法分离外泌体。 雌性 SD 大鼠随机分为 4 组(每组 10 只):正常对照(Control)组、模型对照(Diabetic)组、外泌体治疗(Exosome)组、胰岛素治疗(Insulin)组。 妊娠第 0 天腹腔注射链脲佐菌素(STZ,1%,pH = 4. 5)建立 GDM 模型,每日监测体质量、血糖,于妊娠第 0 天(gestational day0,GD0),GD5,GD10,GD15 检测糖化血红蛋白(HbA1c)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。 于 GD0 及 GD15行口服葡萄糖耐量实验(OGTT),并计算曲线下面积(AUC)。 超声评估妊娠大鼠不同时期胎儿发育。 妊娠结束时检测血常规,淋巴细胞亚群(Th17、Treg)及妊娠结局。 结果 与模型对照组相比,外泌体治疗组自 GD15起体质量显著增加(P<0. 0001);自 GD10 起血糖显著降低(P<0. 0001),并于 GD20 接近正常水平。 外泌体治疗组 HbA1c 自 GD10 显著降低(P<0. 0001),GD15 时较模型对照组降低 22. 6%;妊娠末期,外泌体治疗组HOMA-IR 显著低于模型对照组(P<0. 0001);GD15 时 OGTT-AUC 降低 46. 65%(P<0. 0001);超声显示外泌体治疗组宫内生长受限改善;治疗未引发严重血液毒性或免疫失衡,外泌体治疗组 Th17 比例显著低于模型对照组(P<0. 01),Treg 比例显著高于模型对照组(P<0. 05),Th17 / Treg 比值下降 3 倍;胎儿体质量及数量均显著高于模型对照组(P<0. 001)。 结论 hMSC-Exos 治疗可有效改善 GDM 大鼠血糖代谢、减轻胰岛素抵抗,并通过调节 Th17 / Treg 免疫平衡改善妊娠环境,促进胎鼠发育,安全性良好。

摘要:营养与睡眠是维持机体健康的两大核心要素,二者通过复杂的双向调控网络相互影响。 然而,由于伦理限制和技术挑战,人体研究难以直接验证其因果机制。 因此,本研究系统评述动物模型在该领域的应用,以揭示营养-睡眠相互作用的潜在机制,并为未来研究提供参考。 本研究以动物模型类别为框架,整合当前用于研究营养与睡眠相互作用的临床前模型。 首先,综述啮齿类模型(如小鼠、大鼠),分析通过饮食干预(如高脂饮食、限时喂食)、物理或化学手段诱导的睡眠障碍模型,并结合具体研究案例,探讨特定营养素(氨基酸、脂肪酸、维生素等)对睡眠的调控作用。 其次,评述非啮齿类模型(如果蝇、斑马鱼、线虫)在遗传学和神经环路研究中的优势,重点分析其揭示的跨物种保守信号通路。 研究发现,营养状态可通过能量代谢、神经递质系统(如 5-HT、GABA)调控网络影响睡眠。 啮齿类模型表明,高脂饮食可导致睡眠片段化,而特定营养素(如色氨酸、镁)可改善睡眠质量,并揭示肠-脑轴在营养睡眠调控中的关键作用。 非啮齿类模型中发现了高度保守的营养感应通路。 动物模型为营养-睡眠研究提供了重要的因果机制验证工具,但其结果需谨慎外推至人类。 未来研究应结合多组学技术、跨物种比较及临床数据,以优化实验模型并提高转化价值。

摘要:肌少症(sarcopenia,SP)作为衰老相关骨骼肌退行性病变的典型代表,动物模型的构建在基础和临床研究具有十分重要的意义。 目前,SP 动物模型存在单一模型无法完全展现多病因的挑战,开发更贴近临床异质性多因素复合模型是解决当下困局的关键。 中医基于“痿症”在治疗 SP 方面具有独特的优势且现代医学目前缺乏特异性治疗方案,基于中西医整合思维的评价标准化研究体系有助于推动 SP 的研究进展。本文总结了 SP 的临床病理机制与现有中医治疗肌少症的证型分类得出 SP 中西医临床诊断标准,并由此创新性提出涵盖表型层、功能层、证候特征层和分子标志物层的多层次肌少症动物模型中西医结合评价体系。通过临床吻合度分析发现现有 SP 动物模型中衰老模型吻合度最高为 70%,诱导模型、手术模型等虽时效性强但临床吻合度较低。 基于吻合度分析提出“复合造模法”构建 SP 动物模型,可同步模拟自然衰老进程与“脾虚”“肾虚”造成肌萎的证候特征。 这种中西医结合的造模方法为解析 SP“病-证-靶”关联及靶向药物筛选提供了方法论支撑,将推动中医药抗 SP 研究的国际化进程。

摘要:糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcer, DFU)是糖尿病最严重的并发症之一,给患者和社会带来沉重负担。 构建能有效模拟人类 DFU 病理生理过程的动物模型,是探究其复杂机制研究并研发有效干预策略的基础。 本文从比较医学角度系统梳理了 DFU 实验动物模型的研究进展,重点对比分析了不同模型的优势与局限性。 DFU 动物模型主要分为糖尿病模型和溃疡创面模型两大类:糖尿病模型包括 1 型糖尿病模型(由链脲佐菌素(streptozotocin,STZ )诱导)、2 型糖尿病模型(自发突变型如 db / db 小鼠、ob / ob 小鼠、ZDF 大鼠,以及诱导型如高脂饮食联合 STZ);溃疡创面模型包括缺血性、神经性、感染性和模拟临床症状型模型。 本文重点关注了创面愈合的种属差异及其对研究结果向临床转化的影响:啮齿类动物主要通过皮下筋膜层收缩愈合,而人类主要依赖上皮再生和肉芽组织形成。 性别、年龄等因素对模型构建和表型表现具有显著影响。 展望未来,人源化模型、3D 生物打印技术、多基因编辑或修饰动物模型等新兴技术将为 DFU 基础与转化研究提供更精准的实验平台。

摘要:肌筋膜疼痛综合征(myofascial pain syndrome, MPS)是发生于肌肉及周围筋膜的肌肉骨骼疼痛,病理特征包括局部疼痛、肌肉组织中出现肌筋膜触发点(myofascial trigger points, MTrPs)以及异常自发放电活动。 为深入研究 MPS 的病理机制并开发新型治疗方法,建立可靠的动物模型至关重要。 基于 MPS 的临床病理特征,已开发出多种动物模型构建方法,包括电刺激、药物诱导、打击结合离心等。 本文综述当前主流的 MPS 动物模型的建立方法及其适用场景,并对现有的模型评估体系的优势及局限性提出了多维客观的分析,以期为未来构建更加符合 MPS 病理发生的模型以及为深入研究 MPS 提供参考。