Abstract:目的 建立整合素αvβ3高表达的黑色素瘤细胞肺转移模型.方法 通过将不同数目的 M21细胞经尾静脉接种裸鼠,适时处死后计数肺表面癌结节.通过实时定量PCR和明胶酶谱的方法比较肺转移灶细胞与亲代M21细胞差异.结果 M21细胞1×106、2×106、5×106尾静脉接种裸鼠,均能形成肺转移灶,癌结节数目均值分别为:84±8、70±6、88±12,三组之间没有明显差异,阴性对照组未形成转移灶.M21肺转移灶细胞与亲代细胞相比,增殖增快,MMP-2活性增高,整合素αv和β3 mRNA表达水平明显增高.结论 M21细胞1×106经尾静脉接种裸鼠50 d内即可100%成瘤.M21肺转移灶细胞具有更快的增殖能力,整合素αvβ3和MMP-2表达水平明显增高.本实验建立了稳定的肺转移模型,为黑色素瘤和整合素αvβ3的研究提供重要的动物模型.

Abstract:目的 对小鼠酪氨酸羟化酶 (tyrosine hydroxylase,TH) 启动子进行序列分析,研究启动子不同区域对下游基因表达调控能力.方法 高保真PCR分别扩增出450、1500、2000、2400、3400 bp TH启动子片段置换pcDNA3中CMV启动子,并在多克隆位点插入EGFP报告基因,重组后质粒分别瞬时转染MN-9D细胞 (TH+) 和ECV细胞 (TH-),流式细胞仪观察EGFP基因在细胞内表达情况.结果 转染后MN-9D细胞中EGFP阳性率分别为8.01%、7.97%、7.85%、7.72%、7.74%,差异无显著性.转染ECV细胞 (TH-)中,EGFP阳性率分别为6.51%、6.35%、6.71%、0.89%、1.02%.3400bp、2400 bp启动子片段在TH-细胞中调控能力受到明显抑制.结论 上述启动子片段均有调控基因表达能力,初步证明TH启动子中特异性调控区域在2400～2000 bp范围内.

Abstract:目的 研究高氟与低碘对子代大鼠大脑组织病理学及脑细胞DNA损伤的影响.方法 断乳Wistar大鼠(雌∶雄 = 3∶1)32只,随机分为四组:对照组,饲喂大鼠标准饲料,去离子水;高氟组,饲喂大鼠标准饲料,饮100 mg/L氟化钠(NaF)去离子水;低碘组,饲喂低碘饲料(定做),去离子水;高氟低碘组,饲喂低碘饲料,饮100 mg/L氟化钠(NaF)去离子水.雌雄大鼠自然交配,待子代大鼠出生后,观察其在10、20天时脑皮质、海马组织病理学变化,及30、60和90天时脑DNA的损伤. 结果与对照组相比,高氟组和低碘组大鼠大脑皮质及海马内有较多神经元核固缩、核溶解及细胞轮廓不清晰.高氟低碘组,有大量神经元出现核固缩、核溶解、锥体突明显拉长等现象,并且在大鼠发育期内尤其明显.随着日龄的增加,各实验组子代大鼠脑细胞DNA损伤程度显著增加,以高氟低碘组90日龄大鼠DNA损伤最严重.结论 高氟与低碘影响了大鼠大脑皮质及海马组织形态结构与引起了脑细胞的DNA损伤.

Abstract:目的 通过高脂喂养兔制造动脉粥样硬化动物模型,研究G-CSF对不同动脉段内皮形态和功能变化的影响及相互关系.方法 30只新西兰成年雄兔随机分4组,分为对照组6只,高脂喂养组、普通及高脂喂养+G-CSF组各8只,分别测定血脂及血清NO浓度,各取胸主动脉、颈总动脉、股动脉,采用病理分析及扫描电镜观察内皮形态的不同变化,同时用RT-PCR方法测定eNOS、ET-1基因的表达了解不同动脉段的内皮功能变化.结果 高脂喂养后兔血脂、NO浓度明显升高,病理发现动脉内膜增厚,以大动脉最著,小动脉最次,扫描电镜下内皮细胞的凋亡、变形亦然.ET-1基因表达相对定量次序为胸主动脉>颈总动脉>股动脉,eNOS基因反之.应用G-CSF后大动脉内皮功能及形态受到明显影响,但小型动脉变化不大.结论 高脂喂养兔能成功制造动脉粥样硬化模型,成模后动脉内皮功能显著受损,其中以大型动脉显著,同时内皮形态出现相应变化.应用G-CSF对全身动脉系统有影响,且动脉越小,影响越小,说明粥样硬化动脉内皮形态与功能改变之间存在必然联系,对G-CSF的反应也不同.

Abstract:目的 对现有大鼠体外循环模型予以改进,降低模型复制难度,并使之更适合用于研究体外循环对肺功能的影响.方法 成年雄性SD大鼠16只,体重300～350 g,各8只分别用于建模和供血.经右颈静脉、左股静脉引流,右股动脉人工灌注建立体外循环,血气分析监测内环境变化.实验过程中,保留大鼠自主呼吸,不进行机械通气.结果 成功建成8只大鼠体外循环模型并按计划顺利脱离人工循环.体外循环期间转流量为70～80 mL/(kg·min),血流动力学监测和血气分析结果基本正常.结论 进一步简化了建立大鼠体外循环模型的操作,最显著的改进之处在于避免了机械通气对大鼠肺功能潜在的不良效应,从而更加适合用于研究体外循环对肺功能的影响.

Abstract:目的 研究小鼠腹腔注射紫杉醇对体外骨髓细胞诱导分化巨噬细胞的影响.方法 小鼠连续5 d腹腔注射紫杉醇,无菌制备骨髓细胞,用含巨噬细胞集落刺激因子 (M-CSF) 的RPMI1640培养液培养骨髓细胞,通过流式细胞仪对其诱导分化的巨噬细胞表面分子、吞噬功能进行分析.结果 紫杉醇明显降低小鼠骨髓细胞数量,但骨髓细胞体外诱导分化成巨噬细胞的数量明显增加;F4/80+巨噬细胞中CD80、CD14表面分子表达升高,而I-Ad表达降低;紫杉醇处理组诱导分化的巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力提高.结论 结果提示紫杉醇可能具有调节巨噬细胞表面分子的表达和吞噬功能.

Abstract:目的 比较观察汉防己甲素滴眼液与0.5%噻吗心安滴眼液对高眼压模型大鼠及正常大鼠降眼压的作用.方法 正常SD大鼠共分4组: 不同浓度的汉防己甲素滴眼液组(0.1%、0.2%、0.3%)及阳性对照组0.5%噻吗心安,药物滴右眼各一滴,阴性对照组生理盐水滴左眼、测量滴药前24 h和滴药后1、3、6、24、48、72 h的眼压.应用倍频532激光对SD大鼠右眼上巩膜静脉以及小梁网所在区域实施光凝术建立高眼压大鼠模型.高眼压模型鼠共分5组: 不同浓度的汉防己甲素滴眼液0.05%、0.1%、0.2%、0.3% 及阳性对照组0.5%噻吗心安,右眼即模型眼滴用药物,左眼作为空白对照.测量术前后的眼压.结果 汉防己甲素滴眼液对大鼠正常眼压无降压作用(P>0.05).对高眼压大鼠用药后24 h、72 h、1周后,0.3%汉防己甲素滴眼液组降低眼压的幅度与0.5%噻吗心安滴眼液降低眼压的幅度相似 (P>0.05);0.05%、0.1%、0.2%汉防己甲素滴眼液组也有明显的降压作用,但与0.5%噻吗心安滴眼液相比,降压幅度低于后者 (P<0.05).结论 0.05%、0.1%、0.2%、0.3%汉防己甲素滴眼液均有降低大鼠高眼压的作用,其中0.3%浓度的汉防己甲素滴眼液降眼压效果与0.5%的噻吗心安类似.汉防已甲素滴眼液作为一种治疗青光眼的药物有着良好应用前景.

Abstract:目的 观察兔机械性角膜上皮损伤后伤口愈合的形态学动态变化.方法 选取新西兰大白兔12只,随机分为A、B两组,均建立机械性角膜上皮损伤模型(刮除直径为8 mm的角膜中央上皮),术后给予盐酸林可霉素滴眼液滴眼,3次/日,1滴/次.A组在建模后第0、1、4、7天共4个时间点采用前节裂隙灯照相系统进行眼表照相,并计算损伤面积.B组在建模后第1、4、7天,按随机数字表法取2只兔的实验眼角膜,行透射电镜及病理检查. 结果前节裂隙灯照相系统记录了不同观察时间点损伤范围(伤口愈合面积)的动态变化.造模后第1天, 角膜上皮全层缺如,损伤边缘处上皮细胞胞膜向损伤区内伸出褶皱的伪足;造模后第4天,上皮自周边向缺损区域爬行生长,覆盖整个角膜,可见2～3层细胞,主要为基底细胞和多角细胞,细胞连接松驰;造模后第7天,再生上皮分化较完全,约 5～6层细胞,极向齐,连接较紧密,可见均匀分布的半桥粒结构. 结论兔机械性角膜上皮损伤后伤口愈合的动态形态学变化包括上皮细胞向心性移行、增殖,以及随后的分化,连接.

Abstract:目的 探讨干预脂毒性改善糖尿病大鼠胰岛分泌功能及氧化应激损害的机制.方法 将大鼠分为4组①正常组(NC),全程普通饲料喂养;②高脂组(HF),全程高脂饲料喂养.糖尿病组,高脂饲料喂养8周后腹腔注射低剂量STZ (30 mg/kg),48 h后行OGTT试验判断成模情况后分组.③糖尿病对照组(DM),不给予药物干预;④血脂干预组(SIM),灌胃辛伐他汀5mg/(kg·d)4周干预脂毒性.通过免疫组化染色观察胰岛B、A细胞形态学特点,RT-PCR测定胰腺内胰岛素原mRNA表达水平,DHE荧光染色检测胰岛中活性氧化产物ROS水平.结果 与糖尿病对照组相比,干预脂毒性4周后血清胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平分别下降了22.9% (P<0.01) 和57.0% (P<0.05).OGTT血糖水平均显著下降 (P<0.01).胰岛中B细胞相对量是对照组的2.6倍(P<0.01),B细胞胞质内胰岛素水平增加了26.5% (P<0.05),胰岛素原mRNA表达升高18.3% (P<0.01);A细胞相对量减少了50% (P<0.01).血清丙二醛(MDA)水平和胰腺中ROS表达显著下降.结论 辛伐他汀干预脂毒性4周可以显著改善糖尿病大鼠胰岛分泌功能和氧化应激损害.

Abstract:目的 研究促性腺激素释放激素-A (GnRH-A) 免疫去势时血清睾酮含量和血液细胞成分的变化特点及其相互关系,从而探讨GnRH-A免疫去势的效果和作用机理.方法 将GnRH-A与BSA连接为复合物,加入弗氏不完全佐剂制成抗原乳剂; 30只兔均分为实验1组(EG-1)、实验2组(EG-2)和对照组(CG),EG-1和 EG-2注射1.0 mL (100 μg/mL) GnRH-A抗原,EG-2组3周后再加强注射一次;用间接ELISA法测定睾酮含量,用CD-1200全自动血液分析仪测定15项参数值;统计分析血清睾酮含量和血液细胞之间的相关关系和回归方程.结果 EG-2的血清睾酮含量显著低于EG-1和对照组(P<0.05),EG-1在前4周明显下降,低于对照组(P<0.05),此后持续上升并明显高于实验前值,至第16周时与对照组相近;而对照组血清睾酮含量呈不断增高,到第13周明显高于第1周(P <0.05).EG-2的WBC、LYM、MID和GRN在第4～7周明显高于正常值(P <0.05),而RBC、HGB和HCT则低于正常值(P <0.05);到13周后,EG-2 和EG-1的15项血液细胞逐渐恢复正常水平,与对照组差异无显著性(P＞0.05).血清睾酮含量和血液细胞的相关系数和回归方程无明显的规律性和特征性.结论 GnRH-A主动免疫对家兔的血清睾酮和血液细胞WBC、LYM、MID、GRN、WBC、LYM、MID和GRN等具有明显的影响,但作用持续时间仅4～7周.

Abstract:目的 研究鱼藤酮致帕金森病(PD)大鼠中脑黑质凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的改变.方法 Wistar大鼠每日颈背部皮下注射鱼藤酮2 mg(kg·d) (3～6周)造模,依据所建立的评分体系记录动物行为变化,在行为学有记分并停止给鱼藤酮4、10 d时,中脑黑质病理切片免疫组化染色比较黑质区域Bcl-2、Bax的表达. 结果在有行为学记分4 d时,记4分和8分的大鼠中脑黑质Bcl-2表达均显著减少;所有PD大鼠中脑黑质Bax表达均显著增加;Bcl-2/Bax比率均显著减少;有记分4 d时,行为学记分与Bcl-2/Bax比值成负相关性. 结论细胞凋亡参与了鱼藤酮帕金森模型大鼠黑质多巴胺神经细胞的损伤.

Abstract:目的 寻找理想的妊娠期高血压疾病动物模型.方法 60只雌性Wistar大鼠分为六组,分别为正常妊娠组(A组)、左旋亚硝酸精氨酸甲酯 (L-NAME) 腹腔注射组 (B组)、生理盐水注射组 (C组)、假手术组 (D组)、双侧子宫动脉结扎术组 (E组) 以及L-NAME腹腔注射联合腹主动脉缩窄术组 (F组),对大鼠血压、尿蛋白值以及胎鼠、胎盘、胎鼠头的重量进行监测并观察肾脏、胎盘的病理改变.结果 F组孕鼠于孕13 d即出现了蛋白尿、血压升高,较B组及E组出现时间早 (P＜0.05),其胎鼠体重、胎头重量下降较各组更明显 (P＜0.05),肾小球小动脉管壁增厚、管腔狭窄;胎盘出现血管间膜增厚、纤维蛋白沉积等妊娠高血压疾病的典型病理改变.结论 L-NAME腹腔注射联合腹主动脉缩窄术是更为理想的建立妊娠高血压疾病动物模型的方法.

Abstract:目的 分析恒河猴和食蟹猴群体间的遗传多样性,确立一种对恒河猴和食蟹猴种群个体的遗传鉴别方法.方法 利用聚合酶链反应 (PCR) 扩增技术采用15个多态性微卫星DNA位点对50只恒河猴和50只食蟹猴个体进行了DNA多态性的分析,对比两群体间等位基因数目差异.结果 筛选的15个具有显著多态性的微卫星DNA位点对恒河猴和食蟹猴种群可以进行DNA多态性分析,其等位基因数目均在7个以上,且两群体间有11个位点的等位基因数存在一定的差异.结论 利用这些多态性微卫星DNA位点建立一种有效鉴别恒河猴和食蟹猴种群遗传背景的方法具有一定的可行性.

Abstract:目的 用nested-PCR检测恒河猴泡沫病毒SFV的前病毒形式.方法 从SFV-1的pol区域选择两对引物分别对原代猴肾细胞 (rhesus monkey kidney,RMK) 及猴外周血淋巴细胞 (peripheral blood lymphocytes,PBLs) 进行体外扩增,扩增产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳,证实其特异性.阳性对照使用具有典型泡沫样病变的RMK 377细胞株的前病毒DNA, 阳性对照的PCR扩增产物经测序证实,阴性对照为恒河猴的SRV-1 cDNA.结果 nested-PCR能快速灵敏的直接从猴外周血淋巴细胞检出SFV的前病毒形式,与RMK细胞培养结果基本相一致.结论 本实验所建立的检测SFV的nested-PCR法能快速准确的检测猴群中的SFV的带毒情况,对于提高实验猴的质量具有重要意义.

Abstract:目的 通过大鼠心肌缺血再灌注损伤的动物模型,分析CD4+T细胞在心肌组织损伤中的作用.方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支45 min,随后恢复再灌的方法,制作缺血再灌损伤的动物模型, 随机分为再灌注0、2、6、9、12 h 组及相应的对照组.II导联心电图及TTC确定模型,组织病理学观察心肌细胞的损伤情况,免疫荧光染色计数浸润的炎性细胞,半定量PCR进一步验证各型T细胞的表达.结果 心肌的梗死面积与心肌缺血再灌时间成正相关,至观察结束未出现峰值;组织中浸润的中型粒细胞和T细胞分别在2 h和12 h有峰值出现,但CD4+T/CD3+T的比率几乎保持不变;观察所见CD4+T细胞是组织中存在最多的T细胞. 结论大鼠缺血再灌注损伤中,心肌组织中浸润的CD4+T细胞作为主要的效应细胞,参与了持续稳定的心肌损伤过程.

Abstract:动物模型法对于人类疾病病因学及病理生理学的研究有着独特的作用.将动物模型法引入对胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)的探索,不仅可以让我们观察FGR患者及胎儿在不同孕期各自的表现,还可以让我们对发病胎儿在出生后不同年龄阶段的自然表现进行继续研究.人们在FGR动物模型的建立和利用方面已经积累了大量的宝贵经验,这为进一步阐明FGR的病因学及发病机制创造了条件.

Abstract:RNA干扰 (RNA interference, RNAi) 被发现十年来在生物研究领域已经得到了长足的发展,并且已经初步显示出了巨大的潜力.本文综述了介导SiRNA方法的研究及其在基础研究、疾病模型建立和药物研究中的最新应用进展.

Abstract:为研究子宫内膜异位症的病因、发病机制、治疗和预防对策,需要构建实验动物模型.本文通过分析各种模型的优点和缺点,为选择性应用动物模型提供指导,从而更利于对该病的研究.