Abstract:Objective To test our hypothesis that sensitivity to avian influenza A(H5N1)virus varies among mouse strain backgrounds, we compared the pathogenicity of H5N1 viral infection in 5 mouse strains. Methods Onehundred-fifty mice from 2 inbred strains(BALB/c and C57BL/6), and 3 outbred stocks(ICR, NIH Swiss, and KM Swiss)were used. Thirty mice of each strain were subjected to an infected group(20 mice), in which mice were inoculated with 0. 1 mL(104.875 TCID50)of A/Goose/Guangdong/NH/2003(H5N1)virus intra-nasally; ten control mice received noninfectious allantoic fluid. Clinical signs were assessed daily for 14 days post-infection. Necropsy was performed on mice that died during the experiment and those euthanized at end of study. Tissue samples were collected for viral isolation and pathological analysis. Results H5N1 virus infection can cause respiratory illness in all 5 strains with severe or minor acute respiratory distress symptoms, but with different mortality rates: 70% in BALB/c; 50% in ICR; 40% in NIH Swiss; 25% in C57BL/6; and 10% in KM Swiss mice. Necrotizing interstitial pneumonia was found in all cases of death. The virus was isolated from the lungs of all infected dead mice. Conclusion A/Goose/Guangdong/NH/2003 (H5N1)virus can infect all mouse strains used in this study, and can cause clinical symptoms and pathological changes similar to those found in humans infected with HSN1 viruses. However, the pathogenicity of H5N1 viral infection varies significantly between the different mouse strains. Thus, in future study of H5N1 virus infections the mouse strain most relevant to their particular research purpose should be selected as animal model.

Abstract:目的 探讨单纯烟雾暴露所致肺气肿小鼠模型建立及病理学、气道炎症及肺功能评价,并进行支气管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage,BAL)技术的改进.方法 20只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照及烟雾暴露组,烟雾暴露90 d并观察30 d后行小鼠肺功能检查、应用改进方法留取BALF行细胞计数及行肺组织病理切片观察,并与正常对照组进行比较.结果 烟雾暴露组小鼠气道阻力(Raw)较正常对照组增高,动态肺顺应性(Cdyn)降低;BALF中细胞总数高于正常对照组,巨噬细胞数(AM)、中性粒细胞数(N)、中性粒细胞所占比例(N%)也高于对照组,差异均有统计学意义;病理学观察示烟雾暴露组肺泡腔扩大、部分肺泡间隔断裂、肺泡腔融合、肺气肿形成,气道上皮排列紊乱、部分气道上皮增生、周围炎症细胞浸润并伴有平滑肌增生;形态学计量分析示烟雾暴露组平均内衬间隔(MLI)及肺泡破坏指数(DI)较正常对照组增加.应用改进技术行BAL成功率100%,回收率高达90%.结论 单纯烟雾暴露可以成功建立小鼠肺气肿模型且稳定可靠,与人类慢性阻塞性肺病相似性好,经BAL技术改进后该模型可行性高.

Abstract:目的 探讨自制冷冻载体冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎的可行性.方法 首先,比较了两种流行的商业化载体:开放式拉长麦管(open pulled straw,OPS)和冷冻帽(cryotop)开展小鼠原核胚玻璃化冷冻保存效果.其次,以cryotop为对照,利用自制简易载体(cryotip)开展小鼠原核期胚胎的玻璃化冷冻保存.之后,利用ANOVA对各组胚胎在复苏后的体外培养卵裂率、囊胚率进行统计分析.结果 OPS和cryotop两组之间,胚胎在玻璃化冷冻/复苏后发育的2-细胞率、4-细胞率和囊胚率差异均无显著性(P＞0.05),但cryotop冷冻效果更接近对照组;cryotip玻璃化冷冻载体与cryotop相比,胚胎复苏后各组差异均无显著性(P＞0.05),数值上除了2-细胞发育率外,cryotip其他几项结果都稍微高于cryotop组.结论 OPS,cryotop,cryotip冷冻保存昆明小鼠体内原核期胚胎均是可行的;cryotop在冷冻效果上要优于OPS,笔者自制的cryotip因其成本低,制作简单,操作安全可靠,在实验中替代昂贵的商业化载体OPS和cryotop是可行的.

Abstract:目的 探讨C57BL/6与ICR小鼠在博来霉素(BLM)致肺纤维化过程中的种属差异.方法 8周龄雌性C57BL/6小鼠19只,ICR小鼠16只,分别经尾静脉一次性注射BLM 150 mg/kg,观察每组小鼠体重、生存率及肺组织病理改变.结果 ①C57BL/6与ICR小鼠最低体重分别发生在静脉注射处置后的7 d和5 d,最低体重分别为注射前的65.46%和73.21%,两组间无显著的统计学差异.②C57BL/6与ICR小鼠的生存率分别为36.84%和56.25%,两组间存在显著的统计学差异.③C57BL/6小鼠BLM注射后28 d,在胸膜下及血管周围形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,而ICR小鼠肺组织未见明显纤维化形成.C57BL/6小鼠肺纤维化病理评分明显高于ICR小鼠(P＜0.001).结论 BLM诱导的肺纤维化作用在C57BI/6与ICR小鼠间存在着明显的种属差异.C57BL/6小鼠较ICR小鼠更适于复制博来霉素诱导的肺纤维化动物模型.

Abstract:目的 建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系,为全面研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定基础和提供细胞实验材料.方法 运用脂质体介导的基因转染法将pSV3 neo质粒导入第3代东方田鼠胚胎成纤维细胞,经G418筛选抗性克隆并扩大培养,建立永生化细胞系;用PCR检测细胞株中SV40T基因的整合,RT-PCR鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达;绘制东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞生长曲线.结果 阳性细胞克隆已扩大培养并稳定传代50代,经鉴定SV40T抗原已整合到东方田鼠胚胎成纤维细胞中且稳定表达.结论 成功建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系.

Abstract:目的 观察D-半乳糖(D-gal)致亚急性衰老大鼠在尿液排泄方面的特点并探讨其多尿症状机制.方法 在初筛合格的SD大鼠颈背部皮下注射浓度为5%的D-gal生理盐水溶液125 mg/(kg·d)连续8周.观察动物在造模期间和停止造模后两周内24 h总尿量及水负荷后排尿情况的变化;通过测定模型动物尿中K+、Na+、CL-浓度,血中ALD、ADH、ANP浓度及肾脏病理形态学观察,探讨模型动物24 h总尿量增加的机制.结果 与正常对照组相比较,模型组动物24 h总尿量明显增加;水负荷后6 h内排尿潜伏期明显缩短,排尿次数明显增多,但总尿量没有明显差异;模型动物尿中Na+、CL-浓度明显升高,K+浓度明显降低;血浆ALD、ADH含量显著降低,ANP含量显著增加,肾脏出现一系列硬化特征.结论 D-gal致亚急性衰老大鼠出现的总尿量增加和排尿次数增多的情况可能与其ADH、ALD、ANP合成与分泌异常及肾脏病理形态学改变有关.

Abstract:目的 应用心内电生理技术研究心房快速起搏(RAP)对兔心房单向动作电位(MAP)的影响.方法 成年新西兰兔20只随机分为二组:假手术组、模型组各10只.经颈内静脉将电极置入右心房.以600次/分行RAP,同时分析在0、4、8、12和24 h的单向动作电位时程(MAPD).结果 假手术组在实验的时间段内右房游离壁MAP复极90%时程(MAPD90)无明显差别.RAP 8 h,起搏组右房游离壁MAPD90较P0有明显缩短,从起搏前(112.50±9.57)ms至起搏8 h分别缩短到(51.25±4.79)ms,分别缩短了61.25 ms.结论 房颤(AF)时心房MAPD90缩短.MAP技术可安全地用于研究AF时的电重构(ER),能提供准确的电生理改变的信息.

Abstract:目的 研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)条件培养液对小鼠MII卵母细胞的孤雌激活作用及胚胎发育能力.方法 分离、培养小鼠MSC,获取MSC条件培养液(conditioned medium of MSC,CM).通过促排技术获取小鼠MII卵母细胞,分别采用CM、7%乙醇、IVF方法激活,体视显微镜下观察原核形成及囊胚形成率.在CM激活后不同时间点,利用α/β-tubulin抗体标记纺锤体,激光共聚焦显微镜下观察有/无细胞松弛素B(CB)存在时纺锤体的运动变化.结果 CM可以激活小鼠MII卵母细胞,最佳刺激时间为40 min,激活率达到95.4%,囊胚形成率为62%,与7%乙醇组比较无显著差异,但明显低于IVF组(95.4%vs.100%;62%vs.88%,P＜0.01).CB可以抑制纺锤体的旋转,阻止第二极体的排出,促进二倍体孤雌胚形成,提高囊胚形成率(62%vs.9%,P＜0.01).结论 CM能有效激活小鼠MⅡ卵母细胞并促进孤雌发育.

Abstract:目的 建立CAR杆菌的PCR监测方法,筛查国内部分实验动物样本中CAR杆菌携带状况.方法 利用CAR杆菌的特有16SrRNA基因序列片段267bp设计引物,通过从日本实验动物中央研究所获取的CAR标准株DNA,建立实验动物CAR杆菌16SrRNA基因PCR监测方法.结果 利用建立的CAR杆菌16SrRNA基因PCR监测方法对国内455份实验动物样本进行筛查,未检出CAR杆菌感染.结论 建立了敏感性好,特异性高的实验动物CAR杆菌PCR监测方法,未见动物携带CAR杆菌.

Abstract:目的 常规实验操作对Wistar大鼠的影响.方法 采用Wistar大鼠,分别进行腹腔注射、肌内注射、灌胃、尾静脉切割采血、剪尾采血和固定操作,连续处理7 d后,测定各组大鼠神经内分泌、免疫、血液系统主要指标及肝脏hsp72 mRNA表达量,并与对照组比较,分析这些操作的影响.结果 与对照组相比,腹腔注射组、肌内注射组和灌胃组的皮质酮(CORT)、γ-干扰素(IFN-γ)、γ-干扰素/白介素-4(IFN-γ/IL-4)比值极显著升高,白细胞总数(WBC)、中性粒细胞比例(WLCR)、C-反应蛋白(CRP)、β-内啡肽(β-EP)及白介素-2(IL-2)有不同程度的显著降低.与对照组相比,尾静脉切割采血组的CORT、IFN-γ、IFN-γ/IL-4比值极显著升高,WBC、β-EP有不同程度的显著降低;剪尾采血组的CORT、IFN-γ、IFN-γ/IL-4比值有不同程度的显著升高,β-EP、IL-2、CRP极显著降低;固定组的CORT、IFN-γ/IL-4比值、IL-2、CRP极显著升高,WBC、β-EP、IL-4有不同程度的显著降低.与对照组相比,所有实验操作均使热休克蛋白(HSP)hsp72 mRNA表达极显著升高.此外,与对照组相比,肌内注射组的红细胞数(RBC)和血红蛋白含量(HGB)显著升高,尾静脉切割和剪尾采血组的HGB和红细胞压积(HCT)极显著降低,固定组的RBC、HGB和HCT均极显著升高.结论 本研究中涉及的常规实验操作均引起了大鼠极显著的应激反应,并造成了大鼠神经内分泌系统的紊乱及免疫功能的抑制,从而对动物造成了恶性应激.同时这些操作可能会对涉及的神经内分泌及血液学指标的相关研究产生背景性干扰.

Abstract:目的 建立兔实验性动脉粥样硬化和心肌梗死双模型,比较血管新生在动脉粥样硬化和缺血心肌中发生机制的差异.方法 选择20只雄性新西兰兔,随机分为两组,A组10只为普通饮食对照组,B组10只为高脂饮食组,共喂养9周.第3周末心导管封堵冠状动脉血管致急性心肌梗死.测定不同时期血脂水平.实验终点,苏丹Ⅲ染色测定主动脉斑块阳性面积;免疫组化染色测定不同心肌区域和主动脉血管壁CD34阳性反应强度,测定不同心肌区域新生血管密度;Western blot检测hypoxia-inducible factor 1α(HIF-1α)在动脉粥样硬化和缺血心肌中的表达.结果 高脂组血脂水平进行性增高.高脂组主动脉斑块阳性面积高于对照组,差异有显著性.在心肌正常区、梗死区和梗死边缘区:CD34阳性反应强度和新生血管密度各组间差异有显著性,HIF-1α的表达各组间差异有显著性;均为梗死边缘区最高,梗死区次之,正常区最低.在高脂组和对照组主动脉:CD34阳性反应强度两组间差异有显著性,HIF-1α的表达两组间差异有显著性;高脂组强于对照组.结论 成功建立兔实验性动脉粥样硬化和心肌梗死双模型,提示动脉粥样硬化和缺血心肌中均有血管新生的参与.

Abstract:目的 检测大鼠β防御素(rat β-defensin,rBD)在分泌性中耳炎大鼠咽鼓管鼓室的表达,探讨β防御素在分泌性中耳炎发病机制中的作用.方法 排除中耳感染的清洁级SD大鼠48只,随机分为4组,前3组36只行颈部切口经右侧听泡注入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)溶液(1 mg/mL)30 μL制作分泌性中耳炎动物模型,造模后分别于第1、3、7天断头取咽鼓管鼓室黏膜;对照组12只右侧听泡注入生理盐水30μL,左侧听泡作为正常组,3 d后断头取咽鼓管鼓室黏膜.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测咽鼓管鼓室rBD-1 mRNA和rBD-2 mRNA的表达.结果 正常大鼠咽鼓管鼓室存在rBD-1和rBD-2的表达,且rBD-1的表达较rBD-2强,差异有统计学意义;造模后第1、3、7天,rBD-1表达变化不明显;rBD-2则在造模后第1、3天明显增加,差异有统计学意义,第7天渐回复到正常水平.结论 在大鼠,rBD-1可能参与正常咽鼓管鼓室的防御功能,造模后rBD-2的表达增加可能与病原体入侵后的清除相关.

Abstract:目的 比较不同血瘀造模对B16荷瘤鼠肝转移模型的影响.方法 取60只6周龄雌性C57BL/6J小鼠,随机分为正常对照组、单纯荷瘤组、BS1(利血平法)组、BS2(游泳复合高分子右旋糖酐法)组、BS3(寒凝复合肾上腺素法)组和BS4(地塞米松复合肾上腺素法)组,首先根据中医理论用不同造模方法形成血瘀模型,然后经脾接种B16黑色素瘤建立肝转移模型.用激光多普勒观察小鼠耳廓微循环变化,并在接种后第15天小鼠眼眶取血,检测红细胞免疫功能和血清唾液酸酶(SA)含量的变化,并麻醉处死动物,观察肝转移情况.结果 ①单纯荷瘤组和各血瘀荷瘤组小鼠的耳廓微循环血流均明显减少(P＜0.01),以BS2组降低显著.②单纯荷瘤组和各血瘀荷瘤组小鼠的红细胞免疫功能亦明显降低(P＜0.01),血清SA含量显著升高(P＜0.05,P＜0.01),以BS2和BS3组变化明显.③肝转移发生率:单纯荷瘤组、BS2组和BS3组均为100%,BS1组为80%,BS4组为60%,肝转移抑制率:BS2组、BS3组、BS1组和BS4组分别为-71.76%、3.90%、16.42%、100.6%.④荷瘤鼠肝转移的肝重与其耳廓微循环血流、红细胞免疫功能和唾液酸酶含量具有显著的相关性(P＜0.05,p＜0.01).结论 不同血瘀造模对B16荷瘤鼠肝转移模型肝转移发生程度具有明显的影响,应注意血瘀模型的选择,且其与红细胞免疫功能低下有关.

Abstract:目的 利用Wistar大鼠烟雾吸入模型,观察被动吸烟对Wistar大鼠卵巢结构的影响,检测生殖激素水平,分析生殖内分泌的变化,为提倡生育期妇女避免被动吸烟提供新的理论依据.方法 建立大鼠烟雾吸入模型.32只健康雌性Wistar大鼠,鼠龄(60±5)d,每只体重200～250 g,随机分为空白对照组和实验组,每组16只.实验组吸烟3个月,对照组正常饲养.3个月后处死两组大鼠.酶联免疫吸附试验方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测雌鼠血清中雌激素(estrogen,E2)、孕激素(progesterone,P4)的水平;常规石蜡切片,免疫组织化学SP法检测各组雌鼠卵巢雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)的表达情况.所得数据采用SPSS软件作统计学处理分析,比较各组间差异程度.结果 ①酶联免疫吸附试验结果:吸烟3个月大鼠血清E2水平比空白对照组显著降低,其浓度值比较差异有显著性;吸烟3个月大鼠血清P4水平比空白对照组显著降低,其浓度值比较差异有显著性.②免疫组织化学结果:ER主要表达在大鼠卵巢组织的各级生长卵泡的颗粒细胞的细胞核内,呈棕黄色颗粒状分布,卵泡膜细胞和间质细胞也有少量表达.吸烟3个月的大鼠卵巢组织中ER的表达显著低于空白对照组.PR主要表达在大鼠卵巢组织卵泡的颗粒细胞的细胞质和细胞核中,呈棕黄色颗粒状分布,吸烟3个月的大鼠卵巢组织中PR的表达显著低于空白对照组.结论 ①成功的建立了大鼠被动吸烟模型.②被动吸烟可使大鼠血清中E2及P4水平明显降低,使大鼠卵巢中ER及PR的表达减少,提示被动吸烟可破坏卵巢的功能,引起生殖内分泌失调.

Abstract:目的 研究实验性酸吸入与大鼠肺间质纤维化的相关性及其可能的作用机制,并与传统的博来霉素致纤维化作一比较.方法 健康雄性SD大鼠120只,随机分为正常对照组、博来霉素组、高浓度盐酸组、中浓度盐酸组和低浓度盐酸组,每组24只.博来霉素组气管内一次性注入博来霉素诱导纤维化,盐酸组每周气管内滴注不同浓度盐酸1次,正常对照组每周气管内滴注生理盐水1次.各组分别于造模后第7、14、28及42天随机处死6只,取肺组织行HE、Masson染色评价肺组织病理变化,用RT-PCR方法测定肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)的mRNA表达,用免疫组化的方法半定量测定Ⅰ型胶原蛋白、结缔组织生长因子(CTGF)的表达.结果 盐酸组肺泡炎程度始终显著高于对照组,在开始2周内达到一个高峰,随后仍旧维持一个相对较高状态,28 d达到或者超过博来霉素组水平.盐酸组纤维化程度随时间逐渐增强,显著高于对照组,但始终未超过博来霉素组.盐酸组肺组织TGF-β1mRNA在28 d时达到博来霉素组水平,至42 d时全面超过博来霉素组水平.博来霉素组大鼠各时间点肺组织Ⅰ型胶原表达均显著高于正常阴性对照组及3个盐酸组.高、中浓度盐酸组CTGF表达从14 d起高于正常阴性对照组,且随滴注次数及时间增加而增强.结论 本实验从一个角度反映了经常性胃食管酸反流引起的酸吸入与肺纤维化的相关性,为揭示胃食管反流病(GERD)与特发性肺纤维化(IPF)的关系提供了初步的实验室证据.

Abstract:目的 应用细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)尾静脉注射建立大鼠实验性流产动物模型,研究黄芪多糖(astragalus polysacharin,APS)对实验性流产大鼠保胎的作用.方法 采用怀孕第7天Sprague-Dawley (SD)大鼠尾静脉注射LPS每只1.0μg,建立实验性大鼠流产模型,以正常怀孕大鼠尾静脉注射磷酸缓冲液(PBS)每只1.0 mL作为对照组,随机将模型组大鼠分为流产模型组、APS组.APS组于怀孕4～9 d口服APS 2 mL(150mg)/d,对照组与和流产模型组分别于4～9 d口服生理盐水2 mL/d.于实验第10天麻醉处死各组大鼠,计数妊娠成功比例和流产比例.结果 LPS诱导大鼠流产模型组流产比例高达8/11,而对照组和APS组流产比例分别为1/12和1/6,与流产模型组比较差异极显著(P＜0.01).结论 LPS可以诱导建立大鼠流产模型,中药成分APS对实验性大鼠流产具有一定的保护作用.

Abstract:目的 研究犬传染性肝炎核酸疫苗pVAX1-CpG-Loop的安全性.方法 BALB/c小鼠随机分为4组,高剂量组(肌内注射每只200 μg)、低剂量组(肌内注射每只100 μg)、联合免疫组(肌内注射每只100μg,皮下注射50μg,滴鼻每只50μg)和PBS组,每两周免疫1次,共免疫3次.末次免疫后4周、6个月检测血常规和血液生化及对F1代的影响,用PCR和RT-PCR的方法检测DNA疫苗的生物学分布和存留时间,末次免疫后4周和6个月取脏器观察病理损伤.结果 各剂量组的主要血液学检测指标、对F1代的影响差异无显著性.末次免疫后4周各剂量组AST明显高于对照组.DNA疫苗在注射部位可存留8周,其中高剂量组和低剂量组在肝、脾、肾和注射部位有分布,联合免疫组在肺组织也有分布.末次免疫后4周小鼠肝肾有淋巴细胞浸润,6个月后慢性炎症明显好转.结论 由犬传染性肝炎病毒DNA疫苗引起的肝肾损伤是一过性的,并且pVAX1-CpG-Loop没有整合到宿主基因组,也没有传递给F1代.

Abstract:目的 研究肾上腺切除导致下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能缺陷对Wistar大鼠诱发的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的敏感性的影响.方法 Wistar大鼠单、双侧肾上腺切除后,用GPSCH-CFA诱导各组大鼠产生EAE,并观察临床评分、MBP抗体、皮质醇、Th1细胞因子和脑组织Bc1-2/Bax蛋白表达的变化,并与Lewis大鼠的EAE模型进行比较.结果 GPSCH-CFA诱导后,双侧切除肾上腺的Wistar大鼠平均神经症状评分最高为4.60分,发病率为100%,血清中皮质醇水平明显降低和MBP抗体水平明显升高,IFN-γ、TNF-α和IL-2水平均明显升高,大脑皮层和下丘脑中Bcl-2蛋白表达均明显降低和Bax蛋白表达均明显升高.结论 双侧肾上腺切除导致HPA功能缺陷能显著增加Wistar大鼠诱发EAE的敏感性.

Abstract:从实验鱼类、暴露系统、暴露方式、评价指标四个方面对国内外环境雌激素的实验室暴露研究方法进行了介绍,为环境雌激素的暴露机制、毒性机理及雌激素效应的研究提供了理论依据和实验指导.

Abstract:利用实验动物或细胞模型完全模拟人类的中风十分困难,动物模型与临床的拟合具有重要意义.本文对目前缺血性中风动物模型研究中的实验动物选择、模型评价标准及造模方法,以及主要局灶缺血模型的优缺点进行述评,为缺血性中风的基础和应用研究选择合适的实验动物模型提供参考.