• 首页
  • 期刊介绍
  • 编委会
  • 投稿指南
  • 期刊订阅
  • 广告合作
  • 留言板
  • 联系我们
  • English
张 雨.利用 CRISPR/ Cas9 技术构建 Bpi 基因敲除小鼠[J].中国比较医学杂志,2020,30(6):39~46.
利用 CRISPR/ Cas9 技术构建 Bpi 基因敲除小鼠
Construction of Bpi gene-knockout mice using CRISPR / Cas9
投稿时间:2019-11-28  
DOI:10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2020. 06. 006
中文关键词:  Bpi   基因敲除小鼠  CRISPR/ Cas9 技术  基因型鉴定
英文关键词:Bpi   knockout mice  CRISPR/ Cas9 technology  genotyping
基金项目:
作者单位E-mail
张 雨 1.济南大学/ 山东省医学科学院 医学与生命科学学院,济南 250200
2.山东省实验动物中心,山东第一医科大学 (山东省医学科学院),济南 250002 
yu15611408036@ 163.com 
摘要点击次数: 120
全文下载次数: 34
中文摘要:
      目的 利用 CRISPR/ Cas9 基因编辑技术高效构建 Bpi 基因敲除的小鼠模型,并继续繁殖、鉴定及建立稳定遗传的 Bpi 基因敲除小鼠品系。 方法 针对 C57BL/ 6 小鼠 Bpi 基因的第 2~3 外显子两端设计敲除靶点,筛选高活性 gRNA(guide RNA)靶点,体外转录得到 sgRNA(small guide RNA)并与 Cas9 mRNA 一起显微注射到 C57BL/ 6 小鼠的受精卵内,经胚胎移植至代孕母鼠体内,获得 F0 代小鼠后,通过基因型鉴定和 DNA 测序获得基因突变的阳性子 代鼠。 结果 筛选到高活性 gRNA 靶点并成功获得体外转录产物 sgRNA;与 Cas9 mRNA 一起通过显微注射的方式获 得了 64 枚状态良好的受精卵并成功移植到 2 只代孕母鼠体内;获得了 22 只 F0 代小鼠,经 PCR 鉴定和 DNA 测序后选择一只单链缺失 708 bp 碱基的阳性小鼠进行扩繁,并在 F1、F2 代检测到该突变,且 F2 代成功繁育出纯合子小鼠。 结论 成功构建 Bpi 基因敲除小鼠模型,为进一步研究 Bpi 基因及其表达产物的生物学功能奠定了基础。
英文摘要:
      Objective To use CRISPR/ Cas9 gene editing technology to efficiently construct Bpi gene-knockout mouse models and continue to breed, identify and establish stable genetic Bpi gene-knockout mouse strains. Methods Knockout targets were designed at the two ends of exons 2-3 of the Bpi gene in C57BL/ 6 mice, and high activity guide RNA ( gRNA) targets were selected. The small guide RNA(sgRNA)was transcribed in vitro and microinjected into fertilized eggs of C57BL/ 6 mice together with Cas9 mRNA. F0 mice were obtained after embryo transfer into the surrogate mice. Positive mice with gene mutation was confirmed via genotype identification and DNA sequencing. Results Microinjection with Cas9 mRNA yielded highly active sgRNA and 64 fertilized eggs in good condition, which were successfully transplanted into 2 surrogate mice, yielding 22 F0 mice. After PCR identification and DNA sequencing, a mouse that was positive for a 708 bp single- strand deletion was selected to be propagated. The deletion was detected in the F1 and F2 generations, and homozygous mice were obtained in the F2 generation. Conclusions Bpi-knockout mouse models were successfully constructed, laying a foundation for further study of the biological functions of the Bpi gene and its expression products.
查看全文  查看/发表评论  下载PDF阅读器
关闭
您是第 3562312 位访问者
版权所有:中国实验动物学会 主管单位:中国科学技术协会 主办单位:中国实验动物学会 中国医学科学院医学实验动物研究所
地  址: 北京市朝阳区潘家园南里5号 邮编:100021 电话:010-67779337 E-mail:bjb@cnilas.org
本系统由北京勤云科技发展有限公司设计
微信关注二维码