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刘维静,聂 宇,廉 虹,王玉瑶.小鼠出生后早期心脏成纤维细胞数量及性状变化研究[J].中国比较医学杂志,2021,31(5):28~35.
小鼠出生后早期心脏成纤维细胞数量及性状变化研究
Changes of number and characteristics of heart fibroblasts in early postnatal mice
投稿时间:2020-12-10  
DOI:10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2021. 05. 005
中文关键词:  小鼠  心脏成纤维细胞  流式细胞分析术  成纤维细胞性状
英文关键词:mice  cardiac fibroblasts  flow cytometry  fibroblasts characters
基金项目:
作者单位E-mail
刘维静 山西医科大学 基础医学院 生物化学与分子生物学教研室,太原 030001 liuwjsx001@ 163.com 
聂 宇 中国医学科学院 北京协和医学院 国家心血管病中心 阜外医院 心血管疾病国家重点实验室,北京 100037  
廉 虹 中国医学科学院 北京协和医学院 国家心血管病中心 阜外医院 心血管疾病国家重点实验室,北京 100037 lian_hong1982@ 163.com 
王玉瑶 山西医科大学 基础医学院 生物化学与分子生物学教研室,太原 030001 wyybio@ 163.com 
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全文下载次数: 56
中文摘要:
       目的 心脏成纤维细胞占心脏细胞数量的 50%以上,在心脏生理病理过程中发挥重要作用。 小鼠出生后 7 d 是心脏失去再生能力的时间转折点,本研究着眼于研究心脏成纤维细胞在小鼠出生后早期数量及性状的变化情况,为心肌再生机制研究提供基础性实验数据。 方法 出生 1 d 和 7 d 的 C57 小鼠进行心尖切除手术 (Apex resection,AR),体视镜拍照及 HE 染色观察心尖处切口,21 d 后观察再生情况;分离出生后 1 d 和 7 d 的 C57 小鼠心脏组织,称取心脏湿重比较重量差异,病理切片进行 HE 染色观察两个时间点的心脏病理结构,免疫荧光染色观察 1 d 和 7 d 心脏组织中成纤维细胞数量变化;为了更加准确定量心脏成纤维细胞的数量变化,我们利用成纤维细胞表面标志物胸腺细胞分化抗原 1(Thymocyte differentiation antigen 1, Thy1)通过流式分选技术对心脏组织细 胞悬液进行心肌成纤维细胞的分选,比较 1 d 和 7 d 小鼠心脏组织中心肌成纤维细胞比例;为了验证心脏成纤维细胞性状是否发生变化,我们分离 1 d 和 7 d 小鼠心脏成纤维细胞,分析成纤维细胞的特异性标志物 Thy1、成纤维细胞特异性蛋白( Fibroblast-specific protein 1, Fsp-1)、骨膜蛋白( Periostin)、血小板衍生生长因子受体 α( platelet- derived growth factor receptor α,Pdgfrα)、Ⅰ型胶原 α1(Collagen alpha-1,Col1a1)、转录因子 21(Transcription factor 21, Tcf21)在 mRNA 水平的表达变化情况。 结果 出生 1 d 的小鼠心尖切除手术后 21 d 可以完全再生(再生率为 86. 67%),而 7 d 小鼠手术后不能完全再生(再生率为 0);小鼠出生后 7 d 心脏组织平均比 1 d 心脏湿重重 13. 13 mg(3. 11 倍)(1 d: (6. 22±0. 19),7 d: (19. 35±0. 56),P<0. 0001;n= 6)。 心脏成纤维细胞免疫荧光染色证明,7 d 心脏成纤维细胞数量明显高于 1 d 心脏;流式细胞分选证明小鼠出生后 7 d 心脏组织中心肌成纤维细胞占总细胞比例比出生后 1 d 时高 2. 9%(1. 38 倍)(1 d: (7. 7±0. 74),7 d: (10. 6±0. 95),P= 0. 029;n= 3);在成纤维细胞转录水平,成纤维细胞标志蛋白 Thy1、Fsp-1、Periostin 在小鼠出生后 7 d 表达高于出生后 1 d 的成纤维细胞(Thy1: 1 d: (1. 01±0. 12),7 d: (2. 71±0. 27),P= 0. 0288;Fsp-1: 1 d: (1. 04±0. 27),7 d: (5. 28±0. 10),P= 0. 0046;Periostin: 1 d:(0. 91±0. 01),7 d:(1. 13±0. 05),P= 0. 0119;n= 3),而 PdgfrαCol1a1Tcf21 三种成纤维细胞标志蛋白表达则低 于出生后 1 d 的小鼠心脏中的成纤维细胞(Pdgfrα: 1 dL: (1. 09±0. 04),7 d: (0. 62±0. 01),P= 0. 0068;Col1a1: 1 d: (1. 00±0. 09),7 d: (0. 57±0. 02),P= 0. 0433;Tcf21: 1 d: (1. 00±0. 03),7 d: (0. 54±0. 02),P= 0. 0054;n= 3), 证明出生后 1 d 到 7 d 的过程中心脏成纤维细胞性状发生了变化。 结论 小鼠出生后早期(1 d 和 7 d)心脏成纤维细胞的比例和性状均发生了明显变化,为研究哺乳动物心肌再生能力的丢失的机制研究提供一定的线索。
英文摘要:
       Objective Cardiac fibroblasts account for more than 50% of heart cells and play an important role in the physiological and pathological processes of the heart. Seven days of age is an important turning point in mice when the heart loses its ability to regenerate. This study analyzed the changes in the number and characteristics of cardiac fibroblasts in the early postnatal period of mice, and provides basic experimental data for the study of the myocardial regeneration mechanism. Methods Apical resection (AR) was performed on 1-day-old and 7-day-old C57 mice. The apex incision was photographed with a stereoscope and stained with hematoxylin and eosin (HE), and regeneration was observed at 21 days post resection. Heart tissues of C57 mice at postnatal day 1 (P1) and P7 were isolated and weighed to compare the wet weight. Cardiac pathological structures at the two time points were observed by HE staining in pathological sections, and fibroblasts were observed by immunofluorescence staining. To accurately quantify the number of cardiac fibroblasts, we used fibroblast surface marker thymocyte differentiation antigen 1 (Thy1) to sort cardiac tissue cell suspensions by flow sorting technology. To investigate changes in cardiac fibroblast characteristics, we isolated mouse cardiac fibroblasts on P1 and P7 and analyzed the mRNA expression of fibroblast marker proteins Thy1, fibroblast-specific protein 1 (Fsp-1), Periostin, platelet-derived growth factor receptor α ( Pdgfrα), collagen alpha-1 ( Col1a1), and transcription factor 21 ( Tcf21). Results Heart tissue of 1-day-old mice could regenerate (regeneration rate was 86. 67%) 21 days after apical resection, whereas that of 7-day-old mice could not regenerate ( regeneration rate was 0). The average wet weight of heart tissue in mice at P7 was 13. 13 mg (3. 11 times) heavier than that at P1 (P1: 6. 22 ± 0. 19, P7: 19. 35 ± 0. 56, P< 0. 0001; n= 6). Immunofluorescence staining indicated that the number of cardiac fibroblasts at P7 was significantly higher than that at P1. Flow cytometry showed that the proportion of cardiac fibroblasts to total cells in heart tissue at P7 was 2. 9% (1. 38 times) higher than that at P1 ( P1: 7. 7 ± 0. 74, P7: 10. 6 ± 0. 95, P= 0. 029; n= 3). At the level of fibroblast transcription, Thy1, Fsp-1, and Periostin expression was higher at P7 than at P1 (Thy1: P1: 1. 01 ± 0. 12, P7: 2. 71 ± 0. 27, P= 0. 0288; Fsp-1: P1: 1. 04 ± 0. 27, P7: 5. 28 ± 0. 10, P= 0. 0046; Periodin: P1: 0. 91 ± 0. 01, P7: 1. 13 ± 0. 05, P= 0. 0119; n= 3), and Pdgfrα, Col1a1, and Tcf21 expression was lower at P7 than at P1 (Pdgfrα: P1: 1. 09 ± 0. 04, P7: 0. 62 ± 0. 01, P= 0. 0068; Col1a1: P1: 1. 00 ± 0. 09, P7: 0. 57 ± 0. 02, P= 0. 0433; Tcf21: P1: 1. 00 ± 0. 03, P7: 0. 54 ± 0. 02, P= 0. 0054; n= 3), which indicated that cardiac fibroblast traits changed during the period from 1 to 7 days after birth. Conclusions The proportion and characteristics of cardiac fibroblasts in mice changed significantly during the early postnatal period (1 to 7 days), which provides some clues to the mechanism of the loss of mammalian myocardial regeneration.
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