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周唯君,彭 涛,周栋珍,杨懿琛,周艳华,李 化,何志旭,舒莉萍.rpl15 在斑马鱼胚胎中的表达形式探究[J].中国比较医学杂志,2021,31(8):9~15.
rpl15 在斑马鱼胚胎中的表达形式探究
Expression of rpl15 in zebrafish embryos
投稿时间:2020-11-23  
DOI:10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2021. 08. 002
中文关键词:  斑马鱼  rpl15 基因  原位杂交  基因表达  反义 mRNA  胚胎发育
英文关键词:zebrafish  rpl15 gene  in situ hybridization  gene expression  antisense RNA  embryonic development
基金项目:
作者单位E-mail
周唯君 1.贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室,贵州省再生医学重点实验室,基础医学院 免疫学教研室,贵阳 550004
2.中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室,贵阳 550004 
632314630@ qq.com 
彭 涛 1.贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室,贵州省再生医学重点实验室,基础医学院 免疫学教研室,贵阳 550004
2.中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室,贵阳 550004 
 
周栋珍 2.中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室,贵阳 550004
4.贵州大学,贵阳 550025 
 
杨懿琛 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室,贵阳 550004  
周艳华 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室,贵阳 550004  
李 化 1.贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室,贵州省再生医学重点实验室,基础医学院 免疫学教研室,贵阳 550004
2.中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室,贵阳 550004 
 
何志旭 2.中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室,贵阳 550004
3.遵义医科大学附属医院 儿科学教研室,贵州 遵义 563003 
hzx@ gmc.edu.cn 
舒莉萍 1.贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室,贵州省再生医学重点实验室,基础医学院 免疫学教研室,贵阳 550004
2.中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室,贵阳 550004 
gyslp456@ 163.com 
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中文摘要:
       目的 探究 rpl15 基因在野生型斑马鱼胚胎中的表达形式。 方法 利用 NCBI 和 Ensemble 数据库进行 rpl15 基因的共线性分析和 Rpl15 蛋白质序列相似性分析,使用 MEGA X 软件绘制进化树;构建 pCS2+ -rpl15 重组质粒,再利用 T3 聚合酶制备地高辛标记的 rpl15 反义 RNA 探针,用全胚胎原位杂交检测 rpl15 基因的 mRNA 水平的表达;通过 Western blot 检测 24、48 和 72 hpf 斑马鱼胚胎中 rpl15 蛋白的表达。 结果 在进化过程中,rpl15 基因相对保守。构建了 pCS2+ -rpl15 重组质粒,原位杂交结果显示在 24 hpf,rpl15 基因在斑马鱼的几乎所有细胞中广泛表达;到 48 hpf,rpl15 在中枢神经系统的表达最强并且在胰腺的表达也开始显现;72 hpf 仍然可见 rpl15 在后脑中的表达以及胰腺、肝和肠道中的表达。 Western blot结果显示 24、48 和 72 hpf 斑马鱼胚胎中 Rpl15 蛋白的相对表达量随时间增加而增多。 结论 系统观察了斑马鱼发育过程中 rpl15 的表达部位及表达水平的变化,为斑马鱼 rpl15 缺失模型的建立提供了实验基础。
英文摘要:
       Objective To investigate the expression of rpl15 in zebrafish. Methods The NCBI and Ensemble databases were used to analyze the co-collinearity of the rpl15 gene and the sequence similarity of rpl15 protein. MEGA X software was used to align rpl15 in different organizations. The mRNA expression of rpl15 was detected in whole embryos by in situ hybridization with an rpl15 antisense RNA probe, and the expression of rpl15 protein in 24, 48, and 72 hpf zebrafish embryos was detected by western blotting. Results The rpl15 gene is relatively conserved during evolution. A pCS2+ -rpl15 recombinant plasmid was constructed, and in situ hybridization result showed that at 24 hpf, rpl15 was widely expressed in most cells of zebrafish. At 48 hpf, rpl15 expression was highest in the central nervous system and it was also present in the pancreas. At 72 hpf, rpl15 expression was still present in the posterior brain, as well as the pancreas, liver, and intestine. The relative protein expressions of rpl15 in 24, 48, and 72 hpf zebrafish embryos increased with increasing time. Conclusions Changes in the expression sites and expression levels of rpl15 in zebrafish during development were systematically observed, which provide the experimental basis for establishing a model of rpl15 deletion in zebrafish.
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