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盛静宇,朱海根,王 丽.miR-433-3p 通过调控 MAPK8 蛋白在 H2O2 诱导的心肌细胞损伤中发挥保护作用[J].中国比较医学杂志,2021,31(8):63~70.
miR-433-3p 通过调控 MAPK8 蛋白在 H2O2 诱导的心肌细胞损伤中发挥保护作用
miRNA-433-3p protects against H2O2 -induced injury to cardiac myocytes by targeting MAPK8
投稿时间:2020-10-16  
DOI:10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2021. 08. 009
中文关键词:  miR-433-3p  H9c2 心肌细胞  MAPK8
英文关键词:miR-433-3p  H9c2 cardiomyocytes  MAPK8
基金项目:
作者单位E-mail
盛静宇 1.江苏大学附属武进医院 徐州医科大学武进临床学院心电学科,江苏 常州 213000
2.江苏大学附属武进医院 徐州医科大学武进临床学院全科医学科,江苏 常州 213000 
shengjingyu@ 163.com 
朱海根 江苏大学附属武进医院 徐州医科大学武进临床学院全科医学科,江苏 常州 213000 zhg801@ 163.com 
王 丽 常州德安医院院感科,江苏 常州 213000  
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中文摘要:
       目的 探究 miR-433-3p 在过氧化氢(H2O2 )诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)损伤中的作用及具体机制的研究。 方法 构建氧化应激损伤模型,以 H9c2 心肌细胞为研究对象,通过转染 miR-433-3p 模拟物(miR-433-3p mimics)、miRNA 阴性对照(miR-NC)、阴性对照(pcDNA-NC)和 MAPK8 过表达质粒(pcDNA-MAPK8)至 H2O2 诱导的 H9c2 细胞中,将细胞分为对照组(Control),H2O2 模型组(H2O2 ),H2O2 + miRNA 阴性对照组(H2O2 + miR-NC), H2O2+ miR-433-3p 模拟物组(H2O2+ miR-433-3p mimics),H2O2+ miR-433-3p 模拟物 + pcDNA 阴性对照组(H2O2 + miR-433-3p mimics + pcDNA-NC)和 H2O2 + miR-433-3p 模拟物 + MAPK8 过表达组( H2O2 + miR-433-3p mimics + pcDNA-MAPK8)。 采用 qRT-PCR 法检测 miR-433-3p 和 MAPK8 在 H9c2 细胞中的 mRNA 表达水平。 MTT 法和 ELISA 试剂盒分别检测细胞活性和乳酸脱氢酶(LDH) 释放量。 Western blot 法检测 Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、MAPK8 和 GAPDH 的蛋白表达水平。双荧光素酶报告实验检测 miR-433-3p 与 MAPK8 之间的靶向关系。 结果 与对照组相比,miR-433-3p 在 H2O2 诱导的心肌细胞 H9c2 中低表达。 相比较 H2O2 + miR-NC 组,miR- 433-3p 过表达可以显著降低 LDH 释放量并增强细胞活力。 此外,相比较 H2O2 + miR-NC 组,miR-433-3p 过表达可以显著降低促凋亡蛋白 Bax 和 Cleaved Caspase-3 的表达水平,而促进抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达水平。双荧光素酶报告实验显示 miR-433-3p 可以靶向结合 MAPK8 并负调控 MAPK8 的表达。过表达 MAPK8 可逆转 miR-433-3p 过表达对 H2O2 诱导的 H9c2 细胞活性损伤和细胞凋亡的抑制作用。 结论 miR-433-3p 通过负靶向调控 MAPK8 在 H2O2 诱导的心肌细胞损伤中发挥保护作用。
英文摘要:
       Objective To explore the role and underlying mechanisms of miR-433-3p in hydrogen peroxide (H2O2 )-induced injury to H9c2 cardiomyocytes. Methods An oxidative stress injury model of H9c2 cardiomyocytes was established. H9c2 cardiomyocytes were transfected with miR-433-3p mimics, miRNA mimic negative control (miR-NC), pcDNA-NC, and a MAPK8 overexpression plasmid (pcDNA-MAPK8) and treated with H2O2 . H9c2 cells were divided into Control, H2O2 , H2O2+ miR-NC, H2O2+ miR-433-3p mimic, H2O2+ miR-433-3p mimic + pcDNA-NC, and H2O2+ miR- 433-3p mimic + pcDNA-MAPK8 groups. The mRNA expressions of miR-433-3p and MAPK8 in H9c2 cells were detected by qRT-PCR assay. Cell viability and the amount of lactate dehydrogenase (LDH) released were detected by MTT assay and ELISA kits, respectively. Cell apoptotic-related protein expressions of Bax, Bcl-2, caspase-3, and cleaved caspase-3 were measured by Western blot analysis. The luciferase reporter assay was performed for testing the targeting relationship between miR-433-3p and MAPK8. Results Compared with the control group, the expression of miR-433-3p was lower in H2O2 -induced H9c2 cardiomyocytes. Compared with the H2O2 + miR-NC group, miR-433-3p overexpression significantly reduced the amount of LDH released and enhanced cell viability. In addition, compared with the H2O2 + miR-NC group, miR-433-3p overexpression significantly decreased the expressions of the pro-apoptotic proteins Bax and cleaved caspase-3, but increased the expression of the anti-apoptotic protein Bcl-2. The luciferase reporter assay showed that miR-433-3p directly targeted MAPK8 and negatively regulated the expression of MAPK8. Overexpression of MAPK8 reversed the inhibitory effects of miR-433-3p overexpression in H2O2 -induced H9c2 cell injury and apoptosis. Conclusions miR-433- 3p has a protective role in cardiomyocyte injury induced by H2O2 through the negative regulation of MAPK8.
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