目的利用不同剂量的冷冻保护剂,对ICR和Km小鼠不同发育期的胚胎进行冷冻和解冻实验。探讨Nakagata小鼠胚胎玻璃化冷冻管方法,使用不同剂量的冷冻保护剂等因素对冷冻效果的影响。方法2细胞期胚胎在KSOM微滴培养液内分别培养到2细胞4、细胞和8细胞期胚胎,分别加入50μL,100μL,200μL的DAP213冷冻保护剂,利用Nakagata方法冷冻,解冻以及观测解冻后培养至囊胚期胚胎的冷冻效果。结果冷冻保护剂DAP213剂量和ICR,KM小鼠胚胎不同细胞发育期对冷冻效果具有显著的交互影响(P<0.01)。相对而言,冷冻保护剂剂量对结果的影响(P>0.05)低于胚胎细胞发育期对冷冻效果的影响(P<0.01)。结论冷冻保护剂的剂量和胚胎细胞发育期均会影响冷冻实验的结果。胚胎的细胞发育期对冷冻效果的影响更大。对2细胞期,4细胞期和8细胞期的胚胎进行冷冻。8细胞期胚胎的冷冻效果最好,4细胞期胚胎冷冻效果最差。利用Nakagata冷冻管方法建立小鼠胚胎冷冻库,100μL冷冻保护剂效果较好。不同小鼠的品系也可影响冷冻结果。