郑志红,杨葳,周生来,王维,董婉维,李兆阳,孙强,张梅英,李华,王禄增
R-33
辽宁省科技厅资助项目
ZHENG Zhi-hong,YANG Wei,ZHOU Sheng-lai,WANG Wei,DONG Wan-wei,LI Zhao-yang,SUN Qiang,ZHANG Mei-ying,LI Ha,WANG Lu-zeng
目的建立KLK1转基因大鼠模型。方法腹腔注射PMSG-HCG(150-150IU/kg)超排不同周龄(4-8周)SD大鼠比较超排效果的差异,以可用于注射胚胎数作为评判标准确定最佳超排周龄。构建pBC-klk1转基因构件,经酶切、纯化后通过显微注射方法导入SD大鼠受精卵原核并移植到同期受孕的SD受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型,通过RT-PCR和免疫组化方法检测klk1基因表达。结果4-8周SD大鼠超排后分别获得受精卵14±14.8、30±15.2、13.3±13.7、13±14.7、8±5.7,5周龄大鼠超排效果最好,与其他周龄大鼠相比有显差异,P〈0.05;显微注射1538枚卵,移植685(44.53%)枚卵于31只受体输卵管中,12(12/31,38.7%)只怀孕,共产仔62只,经PCR检测获得6只阳性鼠,Southern检测3只阳性。对Southern检测阳性转基因大鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明klk1基因在肾脏、胰腺和乳腺内表达。结论成功建立klk1基因表达的转基因大鼠模型,该模型是高血压病研究的理想动物模型。
郑志红,杨葳,周生来,王维,董婉维,李兆阳,孙强,张梅英,李华,王禄增.激肽释放酶转基因大鼠模型的建立[J].中国比较医学杂志,2007,(8):463~466.