两种HSV-1及猴B病毒相关抗体测定方法的比较
中图分类号:

R446.6

基金项目:

中央级公益性科研院所级本科研业务费;项目号:DWS200708,科技部基础专项重点项目;项目号:2002DEA20023,科技部条件基础平台专项重点项目;项目号:2003DIA7J033?


Comparison of Two Method about Antibody against Herpesvirus Saimiri from Rhesus Macaques
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    摘要:

    目的以人单纯疱疹病毒(HSV-1)做为抗原,利用空斑法和IFA法比较猴BV和人HSV-1阳性血清两种不同血清的中和能力的差异,建立一种实用、准确、可靠的病毒毒力的检测方法。方法首先,将HSV-1病毒悬液作连续的10倍稀释,取1 mL接种于已经长成单层的Vero-E6细胞上,用1%甲基纤维素覆盖,待其出现蚀斑后计数,算出病毒悬液中每毫升所含蚀斑单位,即滴定出HSV-1的TC ID50。同时,用免疫荧光方法(IFA)对猴和人疱疹阳性血清进行滴定,得到其血清的效价。其次,用滴定出的病毒液分别与两种阳性血清体外中和后,接种到单层的Vero-E6细胞上,用1%甲基纤维素覆盖,待其出现蚀斑后计数。最后,计算出其蚀斑减少率。结果用1%甲基纤维素作覆盖层的蚀斑数量平均为10-5PFU,能形成115-116个/mL蚀斑,形状呈黍米大小的规则圆形,其蚀斑边缘清晰。IFA滴定的人HSV-1阳性血清与猴BV阳性血清的中和抗体均为1∶80。人HSV-1和猴BV两种阳性血清的空斑减少率均为100%。结论确定了利用1%甲基纤维素做为覆盖层可得到清晰可靠的蚀斑,由此方法检测到用人HSV-1可以代替猴B病毒,筛查猴B病毒抗体。且为将来进行药物筛选和中和实验中利用病毒空斑法建立方便、可靠的方法。

    Abstract:

    Objective To compare the serological detection sensitivity of sera against HSV-1 and BV from humans and rhesus monkeys with PR(plaque reduction)and IFA(immunofluorescence assay).Methods The PR assay described in this study was modified from the traditional viral plaque reduction assay by using with 1 mL of DMEM medium containing 1%(weight/volume) of methylcellulose(4000 cP;Sigma,MC),and an improved crystal staining method to achieve better plague formation in HSV-1 infected Vero E6 cells.The neutralizing an...

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

乔红伟,佟巍,蒋虹,丛喆,王卫,魏强.两种HSV-1及猴B病毒相关抗体测定方法的比较[J].中国比较医学杂志,2010,(3):57~60,87.

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