C57BL /6J 小鼠脂肪组织总 RNA 提取及周脂素基因的克隆
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山西医科大学实验动物中心,太原 030001

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Extraction of Total RNA from C57BL /6J Mouse Adipose Tissue and Cloning of Perilipin Gene
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Laboratory Animal Center,Shanxi Mendical University,Taiyuan 030001,China

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    摘要:

    目的 用改进后的方法提取高质量的 RNA,以 此 为 模 板,应 用 T-A 克 隆 法 克 隆 C57BL /6J 小 鼠 周 脂素基因编码区,对其进行测序验证,并与 GenBank 比对。方 法 在试剂说明书基础上,改进提取脂肪组织 RNA 的方法,从 C57BL /6J 附睾脂肪组织提取高质量的总 RNA,用 RT-PCR 扩增出周脂素编码区基因,并将目的基因编码区克隆入 pMD18-T 载体中,转化 E. coli JM109 后,筛选阳性克隆,通过限制性内切酶酶切鉴定后,对其进行测序验证,并与 GenBank 比对。结果 用改进后的方法成功提取出了高质量的总 RNA,并且成功提取构建的重组载体中含有周脂素基因的全长序列,与 GenBank 公布的序列一致。结论 改进的后的脂肪组织 RNA 提取方法是可行的,并获得周脂素基因的 cDNA,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

    Abstract:

    Objective Using an improved method to extract high quality total RNA from mouse epididymal adipose tissue,to clone and analyze the full-length cDNA encoding perilipin. Methods According to the specification of reagent,the extraction procedure of total RNA from adipose tissue was modified to extract high quality total RNA from C57BL /6J mouse epididymal adipose tissue. The cDNA encoding perilipin was amplified by RT-PCR using the total RNA . The PCR product was cloned into pMD18-T easy vector and then transformed into E. coli JM109. The recombinant plasmid was identified with restriction enzyme digestion analysis and nucleotide sequencing. Results Using the improved method we successfully extracted high quality total RNA. The recombinant pMD18-T easy vector had a complete open reading frame of perilipin and shared 100% homology with the sequence of mRNA for perilipin reported in GenBank. Conclusions The improved extraction method of total RNA from fat tissue is feasible. The cDNA of perilipin is successfully cloned,which will be helpful for the further research on its biological function.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

卫兵艳,刘田福,郭永昌,张引红. C57BL /6J 小鼠脂肪组织总 RNA 提取及周脂素基因的克隆[J].中国比较医学杂志,2011,21(8):35~39.

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  • 收稿日期:2011-02-20
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  • 在线发布日期: 2025-12-05
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