重组表达小鼠 MIP-1α 和 B7-1 基因的慢病毒载体的构建及鉴定
作者:
作者单位:

中国人民解放军南京军区福州总医院病理科,福州 350025

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通讯作者:

中图分类号:

R-332

基金项目:


Constructing and Identification of Lentivirus-mediated Mouse MIP-1α and B7-1 Gene Vectors
Author:
Affiliation:

Department of Pathology,Fuzhou General Hospital of Nanjing Command PLA,Fuzhou 350025,China

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    摘要:

    目的 构建重组表达小鼠 MIP-1α 和 B7-1 基因的慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定基础。 方法 设计引物扩增获得目的基因小鼠 MIP-1α 和 B7-1 基因的全长编码序列 cDNA,将目的基因与经酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,其产物转化感受态细胞,对长出的阳性克隆进行 PCR 鉴定和直接测序序列分析。MIP-1α 和 B7-1 目的基因质粒转染 293T 细 胞,观 察 绿 色 荧 光 蛋 白( GFP) 表 达,采 用 Western Blot 法检测其蛋白表达,实时荧光定量 PCR,检测慢病毒浓缩液的滴度。 结果 成功构建了重组表达小鼠 MIP-1α 和 B7-1 基 因 的 慢 病毒载体,实时荧光定量 PCR 证实 MIP-1αB7-1 基因重组慢病毒载体的滴度均达 2. 00E + 8 TU /mL。 结论 本 研 究成功构建并包装出高滴度的小鼠 MIP-1α 和 B7-1 基因重组慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定了基础。

    Abstract:

    Objective Methods Mouse MIP-1α and B7-1 genes were synthesizeed and amplification by PCR.Target genes were directly connected with Lentivirus vector,the production of which were transformed into Bacterium coli DH5α cells,and the positive colones were identified by PCR and direct sequencing analysis. Then the plasmids of MIP-1α and B7-1 genes infected 293T cells,respectively,green fluorescence protein ( GFP ) in 293T cells was observed by fluorescence microscope; Western Blot was used to test protein expression of MIP-1α and B7-1 genes and Real-time PCR was used to detect the titer of lentivirus. Results Lentivirus-mediated mouse MIP-1α and B7-1 gene vectors were successfully constructed and the titer of which was 2. 00E + 8 TU /ml tested by real-time PCR. Conclusions Lentivirusmediated mouse MIP-1α and B7-1 gene vectors were successfully constructed and lay a foundation for gene therapy with lymphoma in the future.

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    引证文献
引用本文

刘 伟,余英豪.重组表达小鼠 MIP-1α 和 B7-1 基因的慢病毒载体的构建及鉴定[J].中国比较医学杂志,2012,22(01):54~61.

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  • 收稿日期:2011-10-27
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  • 在线发布日期: 2025-07-09
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