树鼩腺病毒TaqMan 实时荧光定量PCR 检测方法的建立及初步应用
作者:
  • 宋庆凯

    宋庆凯

    中国医学科学院/ 北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队,昆明 650118
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  • 李晓飞

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    中国医学科学院/ 北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队,昆明 650118
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  • 苗雨润

    苗雨润

    中国医学科学院/ 北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队,昆明 650118
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  • 张志成

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    中国医学科学院/ 北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队,昆明 650118
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  • 王璇

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    中国医学科学院/ 北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队,昆明 650118
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  • 袁圆

    袁圆

    中国医学科学院/ 北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队,昆明 650118
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  • 代解杰

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    中国医学科学院/ 北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队,昆明 650118
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  • 孙晓梅

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    中国医学科学院/ 北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队,昆明 650118
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作者单位:

(中国医学科学院/ 北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心,云南省重大传染病疫苗研发重点实验室,中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队,昆明 650118)

中图分类号:

R-33

基金项目:

国家科技支撑计划(编号:2014BAI01B00);云南省联合支持国家计划项目(编号:2015GA009);云南省科技人才和平台计划项目(编号:2017HC019)


Establishment and application of a TaqMan real-time fluorescence quantitative PCR for detection of tree shrew adenovirus (TAV)
Author:
  • SONG Qingkai

    SONG Qingkai

    Center of Tree Shrew Germplasm Resources, Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College; Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research and Development on Severe Infectious Diseases; Yunnan Innovation Team of Standardization and Application Research in Tree Shrew, Kunming 650118, China
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  • LI Xiaofei

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    Center of Tree Shrew Germplasm Resources, Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College; Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research and Development on Severe Infectious Diseases; Yunnan Innovation Team of Standardization and Application Research in Tree Shrew, Kunming 650118, China
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  • MIAO Yurun

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    Center of Tree Shrew Germplasm Resources, Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College; Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research and Development on Severe Infectious Diseases; Yunnan Innovation Team of Standardization and Application Research in Tree Shrew, Kunming 650118, China
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  • ZHANG Zhicheng

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  • WANG Xuan

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  • YUAN Yuan

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  • DAI Jiejie

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  • SUN Xiaomei

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Affiliation:

(Center of Tree Shrew Germplasm Resources, Institute of Medical Biology, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College; Yunnan Key Laboratory of Vaccine Research and Development on Severe Infectious Diseases; Yunnan Innovation Team of Standardization and Application Research in Tree Shrew, Kunming 650118, China)

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    摘要:

    目的 通过建立树鼩腺病毒(tree shrew adenovirus,TAV)TaqMan 实时荧光定量PCR 检测方法,快速准确地检测树鼩腺病毒?方法 根据TAV 全基因组3,端保守序列设计合成特异性引物;用含目的基因片段的重组质粒作为标准品进行标准曲线绘制,建立TAV TaqMan 实时荧光定量PCR 检测方法?结果 建立的TAV 实时荧光定量PCR 检测方法特异性好,与树鼩源及其他物种常见病毒无交叉反应;方法的最低检测限度为每微升3.7 拷贝,灵敏性强;相关检测系数R2 为0.998,扩增效率为95.7%;扩增结果具有良好的线性关系,且重复性检测效果好?结论 成功建立了TAV TaqMan 实时荧光定量PCR 检测方法,灵敏度高,重复性好,可用于TAV 感染的早期快速检测?

    Abstract:

    Objective To establish a quick and accurate method for detection of tree shrew adenovirus (TAV) using TaqMan real-time fluorescence quantitative PCR. Methods Based on the published TAV genome sequence, a 3, conserved sequence was used to design specific probe primers. A standard curve was prepared using a recombinant plasmid containing the target gene fragment. A real-time fluorescence quantitative PCR method was established for detecting TAV based on TaqMan probe. Results The detection method was specific and was not cross-reactive with other common pathogens. The detection limit of the method was 3.7 copies/ μL, showing a high sensitivity. The correlation coefficient was 0.998, and the efficiency was 95.7%. The amplification result showed a fine linear relationship, and the repeatability test effect was good. Conclusions The TAV real-time quantitative PCR detection method based on TaqMan probe has been successfully established. It has high sensitivity and reproducibility and can be applied to early detection of TAV infection.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

宋庆凯,李晓飞,苗雨润,张志成,王璇,袁圆,代解杰,孙晓梅.树鼩腺病毒TaqMan 实时荧光定量PCR 检测方法的建立及初步应用[J].中国比较医学杂志,2018,28(3):72~77.

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  • 收稿日期:2017-08-25
  • 在线发布日期: 2018-04-11
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