摘要:目的 建立一种快速获得Vav1 基因敲除稳定细胞系的方法?方法 构建针对小鼠Vav1 基因的特异性打靶载体,利用脂质体转染法转染B16 小鼠黑色素瘤细胞,使用流式细胞仪对GFP 阳性单细胞进行分选,对得到的GFP 阳性单克隆细胞使用直接裂解法获取基因组DNA,将其用于荧光PCR,产物通过毛细管电泳和分析后即可快速获知其基因型?结果 使用以上方法在短时间内得到了大量GFP 阳性单克隆细胞,从中随机挑选16 个,通过荧光PCR 检测其基因型,结果表明敲除效率为87. 5%;通过测序对部分荧光PCR 结果进行验证,发现其基因型结果完全正确?结论 将CRISPR/ Cas9 基因编辑系统?流式细胞仪单克隆分选?荧光PCR 和大批量DNA 样本处理技术结合,可以短时间内在B16 小鼠黑色素瘤细胞中获得大量Vav1 基因敲除稳定单克隆细胞?