摘要:目的 探讨C57BL/6J（B6）小鼠冷冻复苏胚胎移植后所得小鼠及其子代的平均体增长和血液生化等部分生物学特性数据的变化。方法 实验分为3组。实验组I：冻融胚移植组，B6小鼠体外受精后的2-cell胚胎采用EFS法冷冻，复苏后移植到受体（ICR小鼠）输卵管内所产的小鼠（雄鼠30只，雌鼠20只）；实验组II：冻融胚胎移植所产的小鼠成熟后经自然交配得到的子一代（雄鼠26只，雌鼠17只）；对照组：正常饲养和自然交配所得的子代（雌雄小鼠各20只）。3组小鼠饲养至16周龄，每周定时测定体质量，至16周龄时采血，测定各组小鼠血清生化值，并进行分析比较。结果 实验组I雌雄小鼠初生重和1～16周的平均体重均显著高于对照组（P<0.01），实验组II雌鼠体重从12周开始均显著高于对照组（P<0.01），而雄鼠只有部分周龄与对照组有差异，其余周龄则差异无显著性；实验组I和实验组II小鼠的血清生化值与对照组相比除AST、TP和Ca等项目无变化外，其余项目均发生了显著或极显著的上调或下调。结论 冷冻对胚胎移植所得小鼠及其自然繁殖子一代的平均体增长和血清生化值有一定影响。

摘要:目的 建立实验动物冷冻资源（胚胎、精子等）常见病原菌的微量、快速监测方法。方法 以实验动物三个常见病原菌（金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和乙型溶血性链球菌）为研究对象，分别提取三个阳性菌株的DNA，通过引物设计和相应PCR条件的优化，建立三种阳性菌株的PCR检测方法。然后提取冷冻资源（胚胎、精子等）中的DNA，按照三个阳性菌的PCR条件进行检测，并将一部分样品DNA用荧光定量PCR方法进行检测。结果 ①成功建立三个阳性菌株的PCR检测方法。三种病原菌的最低检测浓度，金黄色葡萄球菌为4.19×10-5 ng/μL，肺炎克雷伯氏菌为1.98×10-5 ng/μL，乙型溶血性链球菌为1.07×10-3 ng/μL.②通过普通PCR和荧光定量PCR方法均未检测出样品中三种阳性菌的存在。结论 建立了小鼠冷冻胚胎、精子常见病原菌微量、快速检测方法。

摘要:目的 比较卵子冷冻复苏后、以及复苏卵子经过激光打孔后，与新鲜精子、冷冻复苏精子体外受精，受精率的变化。方法 （1）通过免疫荧光染色技术，判断卵子冷冻前后透明带糖蛋白-2、微丝以及细胞核的变化；（2）冷冻C57BL/6J小鼠卵子，复苏后一部分打孔，一部分不打孔，与9个品系的新鲜精子和冷冻精子体外受精，比较各种组合受精率的变化。结果 （1）新鲜卵子组透明带糖蛋白-2、微丝及细胞核结构清晰，而冷冻组以及冷冻剂处理组，微丝结构略有变化，透明带糖蛋白-2受到不同程度的损伤，而细胞核在冷冻前后无明显变化；（2）9个品系的新鲜精子与C57BL/6J复苏卵子受精率为17.6%～42.9%，平均为29.6%；新鲜精子与复苏打孔卵子受精率为29.1%～72.3%，平均为49.7%，差异显著（P<0.05）；9个品系复苏精子与复苏卵子体外受精率为5.4%～23%，平均为15.5%；复苏精子与复苏打孔卵子受精率为16.7%～48.6%，平均为28.8%,差异显著（P<0.05）。结论 （1）冷冻对卵子的透明带糖蛋白-2有较大的损伤，对微丝有一定的影响，但是对染色体没有影响；（2）冷冻卵子复苏后，体外受精率下降明显，但是复苏卵子经过激光打孔后，可以显著提高体外受精率。

摘要:目的 探讨三种不同冷冻保护剂对新生C57BL/6J小鼠睾丸冷冻的效果。方法5日龄C57BL/6J雄鼠睾丸组织，分别用3种不同冷冻保护剂（二甲基亚砜、丙二醇、EFS）进行玻璃化冷冻。复苏冷冻后的睾丸组织，每组一部分进行组织学分析，另一部分进行组织移植，移植后检测关键基因表达水平以及卵胞质内单精注射，并设相应对照组。结果3个实验组睾丸组织形态改变与对照组相比均具有显著性差异（P＜0.01），其中EFS组分值最低即改变最小；原位移植8周后组织块生长发育，存活率分别为DMSO组16.7%、PROH组13.3%、EFS组23.3%，存在成熟精子；睾丸组织特异性基因pgk-2和TESK1正常表达；卵胞质内单精注射表明移植后睾丸内精子均具有受精能力，胚胎移植后可得到正常子代小鼠（DMSO：PROH：EFS=5：2：8）。结论3种冷冻保护剂均能良好保存睾丸组织结构和功能。其中，EFS方法保存的睾丸组织形态改变最小、功能完善更适于睾丸组织的冷冻。

摘要:目的 建立SD大鼠胞质内单精注射操作程序.方法 和结果实验1:用直径为7～10 μm和2～4 μm的注射针以及相应的注射方法进行大鼠ICSI,ICSI后卵母细胞存活率(30.5% vs.61.3%)和卵裂率(12.5% vs.51.1%)均差异显著(P<0.05);实验2:分别在hCG后14 h、16 h和18 h取卵进行ICSI,三组存活率(77.4%、74.1% vs.69.6%)差异不显著(P>0.05);14 h和16 h组的卵裂率(60.8%、56.0% vs.31.3%)与18 h组差异显著(P<0.05);实验3:用不同的显微操作液H-mR1CM和H-mKRB进行大鼠ICSI,结果卵存活率相近(79.2% vs.75.9%),卵裂率(70.5% vs.74.7%)差异不显著(P>0.05),但8-细胞发育率(43.5% vs.61.9%)差异显著(P<0.05),囊胚发育率差异极显著(P<0.01).结论 大鼠ICSI时在注射hCG后14～16 h取卵最佳,采用2～4 μm直径的注射针、H-mKRB作为操作液更有利于卵的发育.

摘要:目的 建立小鼠胚胎与配子冷冻库,以安全、有效地保存小鼠资源.方法 选择不同遗传背景(近交系、远交群、免疫缺陷、疾病模型和基因改变等)的实验小鼠,系统进行了超数排卵、体外受精(IVF)率、胚胎与精子的冷冻复苏效果、卵巢冷冻与移植、辅助体外受精等比较研究.结果 ①小鼠年龄和遗传背景的不同,其超数排卵的结果也不同(P<0.01).三个日龄段中,28日龄最好,其次为112日龄,56日龄最差;不同遗传背景小鼠的超数排卵结果显示,封闭群和大部分近交系小鼠优于转基因小鼠(P<0.05),自发性疾病小鼠和基因剔除小鼠的结果最差;②不同品系小鼠的新鲜精子和冻融精子的体外受精率差异有显著性(P<0.05),特别是C57BL/6J 小鼠冻融精子的IVF率(10.3±4.2%)与新鲜精子(89.8±4.8%)相比,差异极显著(P<0.01);③不同品系小鼠的胚胎复苏率,除MRL/mp小鼠的复苏率略低外,其他小鼠品系均有较高的冷冻胚胎复苏率(58.2%～83.9%),表明,不同遗传背景小鼠之间差异有显著性(P<0.05),但均可以达到有效保存小鼠资源的目的.④小鼠的遗传背景、年龄等对小鼠精子的冷冻效果都有影响,采用改良的FERTIUP冷冻保护剂和细胞质内单精注射(ICSI)技术可有效提高以C57BL/6J为背景的基因改变小鼠的精子冷冻复苏率.⑤卵巢冷冻保存可以改善雌性小鼠的繁殖困难或不孕.结论 小鼠资源的安全保存,除了长期连续繁殖保种外,最好的或最保险的方法是低温保存.通过将胚胎、配子、卵巢等长期保存在液氮(-196℃)中避免遗传性状的改变,并在将来复苏后获得正常的小鼠后代,以用于生物学和医学等研究.

摘要:目的比较不同冷冻保护剂和冷冻程序对兔精子冷冻保护的影响,以期提高兔精子冷冻保存的效果和效率。方法用三步降温法（程序Ⅰ）和两步降温法（程序Ⅱ）两种冷冻程序与终浓度分别为2%,3%,4%,5%的甘油和乙酰胺两种冷冻保护剂配合进行精液冷冻保存,统计精子复苏率。结果使用程序Ⅱ添加3%乙酰胺的冷冻保护剂实验组的精子复苏率较高,同其它组比较差异有显著性意义（P〈0.05）;程序Ⅱ比程序Ⅰ节省约70%的时间,同种浓度冷冻保护剂的不同冷冻程序组之间精子复苏率差异无显著性意义（P〉0.05）。结论程序Ⅱ与3%乙酰胺配合可以取得良好的冷冻保存效果;用程序Ⅱ进行兔精液冷冻保存可以大幅缩短操作时间。

摘要:目的采用体外受精的技术,对L858R、TL清洁级小鼠,以及来源于野外的中华小家鼠,和感染肺炎克来伯氏菌的Balb/c-nu裸鼠进行生物净化。方法对于需要净化的小鼠的雄鼠,采集附睾的精子,放入HTF溶液中获能,然后加入经过超排的卵团,体外受精。20-22 h后,挑选形态正常的二细胞胚胎,在净化实验室,移植给假孕的SPF级ICR母鼠,待产仔。仔鼠断奶后,随机选择仔鼠及带奶母鼠送检。结果体外受精的胚胎,经过移植后,均顺利产仔;仔鼠及母鼠的微生物级别,均达到SPF级。结论对于微生物级别较低的实验小鼠,采用在洁净实验室内做体外受精、胚胎移植的方法,可以提高实验小鼠的微生物级别。

摘要:目的探讨不同取卵时间对兔ICSI胚胎体外发育的影响。方法采用Piezo操作系统对实验兔进行辅助体外受精。结果hCG注射后14、16、18h取卵，ICSI后的受精率分别为82.2％、75.9％和0.0％，对受精卵进行体外发育培养，桑椹胚的发育率分别为72.9％、70.0％、0.0％，囊胚的发育率分别为62.2％、53.3％、0.0％。14h和16h之间受精率、桑椹胚率、囊胚率差异不显著（P〉0.05），但是14h采卵比16h要好；18h和14h、16h之间差异显著（P〈0.05）。结论不同取卵时间影响实验兔的ICSI体外受精率及胚胎的体外发育率，hCG注射后14h取卵最有利于兔ICSI胚胎的发育。

摘要:目的研究小鼠卵巢移植后,移植卵巢的功能。方法取出生10 d的仔鼠卵巢,移植到同品系或者遗传背景相同的品系的1月龄其它母鼠体内,观察移植受体是否有正常的繁殖功能,并且用PCR法,对移植受体鼠产生的后代进行检测。结果移植卵巢在受体内不但可以恢复正常功能,产生正常的仔鼠,而且仔鼠经过检测,来源于移植卵巢所产生的卵子。结论卵巢移植完全可行,移植卵巢功能完全可以恢复。