2024, 34(6):1-10.DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2024.06.001
摘要: 目的 分析小鼠海马组织中 ICAM5 对小鼠饮酒偏好、运动能力等行为的影响,并分析其可能的作用机制。 方法 选取 8 周龄 C57BL/ 6J 雄性小鼠,随机将小鼠分为饮水组和饮酒组,建立双瓶饮酒模型。 检测ICAM5 在小鼠内侧前额叶皮层、海马及杏仁核脑区的表达改变。 构建 ICAM5 过表达腺相关病毒,通过脑立体定位方法注射至海马脑区。 通过免疫荧光技术和 Western blot 检测海马组织 ICAM5 的蛋白表达水平。 通过旷场实验、条件位置偏爱实验和翻正反射实验,观察小鼠对酒精的偏好性以及 ICAM5 对小鼠行为的影响。 通过 Western blot检测分析树突棘 F-actin / G-actin 比值,高尔基染色方法检测树突棘形态。 结果 在双瓶饮酒模型中,与饮水组相比,饮酒组小鼠海马脑区 ICAM5 的表达显著下降(P<0. 001)。 结果显示,通过荧光显微镜观察到 ICAM5 在小鼠海马脑区特异性表达。 在旷场实验中,AAV-ICAM5 组小鼠较对照组小鼠在旷场中心位置停留时间(P<0. 01)和运动距离明显增加(P<0. 001)。 在 CPP 实验中,测试期 AAV-ICAM5 小鼠在伴药箱的停留时间较对照组小鼠明显降低(P<0. 001)。 在 LORR 实验中,过表达 ICAM5 可以明显降低小鼠镇静潜伏期(P<0. 01),但同时显著缩短镇静作用的持续时间( P<0. 001)。 与 AAV-mCherry +Water 组相比,饮酒后小鼠海马 F-actin / G-actin 比值显著升高( P<0. 01),而 ICAM5 过表达后这一比值显著降低(P<0. 001)。 与 AAV-mCherry+Water 组相比,饮酒后小鼠海马 CA1区树突棘密度增加(P<0. 001),但是 AAV-ICAM5+Alcohol 组树突棘密度显著降低(P<0. 01)。 结论 海马 ICAM5可能通过调节细胞骨架蛋白的表达,形成树突棘结构可塑性改变,最终引起小鼠饮酒和运动行为的改变。
2024, 34(10):64-71.DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2024.10.008
摘要: 目的 探索新鲜和固定骨骼肌组织的最优冰冻切片方法,为骨骼肌疾病的快速诊断及骨骼肌疾病发病机制的研究奠定实验基础。 方法 提取C57BL/6J小鼠胫骨前肌,新鲜组织经液氮直接速冻、包埋剂联合液氮速冻、异戊烷联合液氮速冻前处理;固定组织经直接包埋、包埋剂联合液氮速冻进行前处理,制作冰冻切片后HE染色,并计算冰晶和肌纤维横截面积以评估不同前处理方式的切片效果。 结果 新鲜组织经液氮直接速冻和异戊烷联合液氮速冻处理后均可见肌纤维束形态消失,大量的冰晶空泡;包埋剂联合液氮漂浮速冻,可见肌纤维束完整致密、无冰晶,为适合新鲜组织的前处理方法。固定组织包埋剂联合液氮速冻处理后肌纤维束完整、无冰晶。 结论 新鲜和固定组织经包埋剂联合液氮速冻处理后肌纤维束完整、无冰晶,便于免疫组化、免疫荧光等实验的进一步进行,有利于准确快速地诊断骨骼肌疾病及探索骨骼肌疾病的发病机制。
2024, 34(2):101-107.DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2024. 02. 012
摘要: 目的 建立封闭群实验用鹌鹑微卫星 DNA 遗传检测方法。 方法 通过文献检索,筛选鹌鹑微卫星位点,利用种间转移法,在鹌鹑近缘物种—鸡和鸭筛选适合鹌鹑的微卫星 DNA 位点。 提取鹌鹑肝组织 DNA 作为模板,并通过 PCR 扩增以及琼脂糖凝胶电泳技术,对相应的位点进行筛选。 最后根据所选微卫星位点扩增情况、等位基因数目和多态性等,筛选出适用于鹌鹑遗传质量检测的微卫星位点组合并建立检测方法。 结果 初步确定适用于封闭群实验用鹌鹑遗传检测的 23 个微卫星位点组合。 结论 初步建立了实验用鹌鹑的遗传质量检测方法。
2024, 34(9):127-136.DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2024.09.015
摘要:脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury, CIRI)指脑血管缺血后血液再次恢复供应,导致脑组织进一步的损伤和功能障碍。目前,现代医学在CIRI的防治中取得了一定的进展,但仍然面临一些挑战和局限性。因此,寻找有效的干预措施来防治CIRI具有重要的临床价值。腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及其下游蛋白是治疗CIRI的重要靶点,在细胞能量稳态调节中起着关键作用。中药具有多靶点、多途径和多效应的特点,可以激活AMPK信号通路级联反应,通过调节细胞自噬、氧化应激、炎症反应、细胞凋亡等来治疗CIRI,并取得一定成果。故文章总结了AMPK相关信号通路的结构与机制,详述其与CIRI的关系,并对中医药调控AMPK信号通路防治CIRI的研究现状进行系统性总结,以期为CIRI的中医防治及新药研发提供新的思路。
2023, 33(1):9-15.DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 01. 002
摘要: 目的 基于 Nogo-A/ RhoA/ ROCK 信号通路探讨雷公藤甲素减轻氧糖剥夺/ 复糖复氧(OGD/ R)诱导的 SH-SY5Y 细胞损伤的机制。 方法 CCK8 法检测不同浓度雷公藤甲素对正常 SH-SY5Y 细胞活性的影响以筛选最佳的药物作用浓度;然后将 SH-SY5Y 细胞分为 4 组:正常对照组、模型组、雷公藤甲素(1 nmol / L)干预组、Rho 激酶抑制剂法舒地尔(15 μg / mL)干预组。 CCK8 法检测 SH-SY5Y 细胞活性;JC-1 试剂盒评估线粒体膜电位;免疫荧 光染色检测 NogoA、ROCK2 和 GAP43 的表达;Western blot 法检测 GAP43、PSD95、NogoA、NgR、RhoA 和 ROCK2 的表达。 结果 CCK8 结果显示,雷公藤甲素的最适作用浓度为 1 nmol / L。 与正常对照组比较,模型组细胞活性降低(P<0. 001);线粒体膜电位下调(P<0. 001);GAP43 和 PSD95 表达降低(P<0. 001);同时 NogoA、NgR、RhoA 和 ROCK2 表达增加(P<0. 001);雷公藤甲素干预和法舒地尔干预均可以改善 OGD/ R 诱导的细胞损伤,使细胞活性增加(P< 0. 001),线粒体膜电位上升(P< 0. 001);上调 GAP43 和 PSD95 表达( P< 0. 05);同时下调 NogoA、NgR、RhoA 和 ROCK2 的表达(P<0. 001)。 结论 雷公藤甲素可以通过抑制 NogoA/ RhoA/ ROCK 信号通路减轻 OGD/ R 诱导的 SH-SY5Y 细胞损伤。
2023, 33(8):38-46.DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 08. 006
摘要: 目的 探究METTL3(methyltransferase like 3,METTL3)介导的m6A(N6 甲基腺苷)修饰对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264. 7)焦亡的影响。 方法 ox-LDL(50 μg/ mL)诱导RAW264. 7 细胞24 h 后,对METTL3 进行敲低或过表达,检测培养细胞RNA m6A甲基化水平,荧光定量PCR 和Western blot 法检测METTL3 和细胞焦亡相关基因NLRP3、NF-κB p65、GSDMD-N、Caspase-1 mRNA 和蛋白表达水平,乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测细胞死亡率,酶联免疫吸附法检测炎症细胞因子IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α 和IL-10 的含量。 结果 ox-LDL 能够促进RAW264. 7 巨噬细胞METTL3 的表达和RNA m6A 甲基化水平,同时也能促进炎症因子IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α 的分泌(P<0. 05),降低IL-10(P<0. 05)的表达。在ox-LDL 诱导基础上,METTL3 过表达后,RNA m6A 甲基化水平升高,NLRP3、NF-κB p65、GSDMD-N、Caspase-1 表达显著增加,促炎细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18 水平升高,抗炎细胞因子IL-10 水平降低,LDH 释放增加,METTL3 敲低后结果相反。 结论 METTL3 介导的m6A 修饰能够显著促进ox-LDL 诱导的巨噬细胞焦亡和炎症反应。
2023, 33(5):69-76.DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 05. 009
摘要: 目的 构建炭疽Pasteur II 株芽孢气溶胶感染小鼠模型并评价构建效果。 方法 选取补体成分C5缺乏的B10. D2-Hc0H2d H2-T18c / oSnJ 小鼠,以气溶胶肺递送途径感染炭疽Pasteur II 株芽孢(减毒株),研究感染后的疾病进展、细菌载量、组织病理学改变、细胞因子和急性反应蛋白水平。 结果 小鼠半数致死剂量为5×103 CFU。炭疽芽孢肺部感染小鼠12 h 后就出现多器官转移并引发菌血症;组织病理改变及炎症反应与其他物种(包括兔、非人灵长类及人类)相似;血清和肺泡灌洗液中的C 反应蛋白和血清淀粉样蛋白P 水平表明小鼠感染后可激发急性炎症反应。 结论 该模型可作为替代性的小动物模型,用于进一步阐明炭疽芽孢杆菌的发病机制和宿主对炭疽芽孢易感性的差异,为炭疽疫苗和治疗药物提供新方法。
2023, 33(10):106-113.DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 10. 014
摘要:高原是一个低压、低氧、高寒的特殊环境,高原环境将降低能量物质代谢与线粒功能,从而影响高原作业,近年来,线粒体损伤引起了广泛关注,线粒体作为细胞的能量工厂,与机体运动紧密相关。以高原线粒体损伤为研究核心,通过网络数据库检索总结高原对于基础能量物质的代谢影响以及对线粒体生化供能反应关键酶活性和线粒体结构功能的改变,发现蛋白质、糖类与脂质代谢在高原受到负面影响,导致高原作业时易疲劳、高血脂症与机体修复受阻;丙酮酸代谢、三羧酸循环、β-氧化和氧化磷酸化相关酶活性被抑制,线粒体形态与数目改变,导致线粒体功能受损,影响运动供能。未来高原细胞损伤机制的探明将大力推动高原损伤防治药物的研究。
2023, 33(6):128-140.DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2023. 06. 018
摘要:脑部疾病在临床上较为常见,危害着人类的生命健康。血脑屏障的存在能够防止血液中的有害物质进入大脑,维持大脑的稳态环境,但同时也阻止药物进入大脑发挥药效。纳米技术具有组织靶向的优点,中药活性物质治疗脑部疾病具有良好的效果,纳米技术与中药活性物质结合治疗脑部疾病可增强靶向性。
2022, 32(6):31-40.DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 06. 005
摘要: 目的 观察弗氏完全佐剂(complete Freund’ s adjuvant,CFA)肌肉注射后 1 ~ 15 d 的炎性反应,明确免疫应答反应的发生,通过分析转录组学的差异,为肌肉炎性反应及其诱发的痛觉敏化研究提供重要的参考。 方法 90 只 Wistar 大鼠随机分为正常组和 CFA 注射后第 1 天( MD1)、第 3 天( MD3)、第 5 天( MD5)、第 7 天 (MD7)、第 9 天(MD9)、第 11 天(MD11)、第 13 天(MD13)和第 15 天(MD15)模型组。 在模型组大鼠左侧股二头肌肌腹注入 200 μL 的 CFA,观察各组大鼠左侧足底的机械痛阈值和热痛阈值变化;采用电化学发光法检测各组大鼠肌肉组织和外周血中炎性因子的含量;使用 HE 染色对正常组、MD3 和 MD13 组大鼠注射侧局部肌肉组织进行形态学观察;采用基因组学的方法,分析这两组大鼠差异基因的表达。 结果 (1)股二头肌肌肉注射 CFA 可诱发同侧足底持续的机械痛敏和热痛敏。 (2)CFA 肌肉注射后 24 h 后,外周血和局部组织中 IL-6、IL-1β 和 TNF-α 的含量明显升高,局部组织中促炎因子含量在注射后第 13 天再次明显升高。 (3)在 CFA 注射后第 3 天局部组织以中性粒细胞浸润为主,在 CFA 注射后第 13 天则以单核细胞浸润为主。 (4)与 MD3 组相比,MD13 组大鼠局部组织中与免疫反应相关的差异表达基因上调,其中涉及到 Th 细胞的分化、细胞因子受体相互作用等与适应性免疫相关的生物学通路。 (5)CFA 注射后局部组织中痛敏相关基因的表达水平升高,包括 Ccl3、Cxcl1、Cxcl2、Cxcl9、Cxcl10 等基因。 结论 CFA 的注射可有效刺激固有免疫和适应性免疫的发生,诱导炎性痛敏,其中不同趋化因子家族基因在不同的免疫应答中发挥了重要的作用。