2024, 34(12):41-49.DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2024.12.005
摘要: 目的 miR-207在许多疾病中存在差异性表达,探究miR-207过表达对调控结核分枝杆菌(H37Ra)在巨噬细胞内存活的机制研究,为结核病的靶向治疗提供理论基础。 方法 将实验分为4组:空白组(Ana-1细胞)、对照组(感染H37Ra的细胞)、mi组(感染H37Ra并转染miRNA-207 mimics)和mi-NC组(感染H37Ra并转染mimics NC)。使用H37Ra感染Ana-1细胞建立结核感染模型,使用脂质体转染法将miRNA-207 mimics和mimics NC转入Ana-1细胞。结核菌落形成单位计数评估miR-207对胞内分枝杆菌负荷的影响以及对胞外残留分枝杆菌的清除作用。采用流式细胞术检测细胞总凋亡率。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-207、细胞凋亡基因、焦亡基因、炎症基因及自噬基因相对表达量。Western blot检测细胞凋亡蛋白、焦亡蛋白、自噬蛋白的相对表达量。采用荧光显微镜及多功能酶标仪检测细胞内ROS的荧光强度,以及检测细胞内LDH的含量。 结果 显微镜下观察成功建立感染模型,qPCR检测发现对照组miR-207表达量低于空白组(P<0.01),表明miR-207在空白组和对照组中差异性表达,mi组miR-207表达量显著高于mi-NC组(P<0.0001),表明成功建立转染模型。菌落形成单位计数发现mi组的菌落数高于mi-NC组和对照组(P<0.001)。流式细胞术检测发现mi组总凋亡高于mi-NC组和对照组(P<0.05)。qPCR及Western blot检测发现对照组凋亡基因和凋亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0.05), mi组高于mi-NC组(P<0.05)。对照组炎症基因相对表达量高于空白组(P<0.001),mi组高于mi-NC组(P< 0.05),对照组焦亡基因和焦亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0.01),mi组高于mi-NC组(P<0.05)。自噬正调节基因LC3和Beclin1在对照组的相对表达量高于空白组(P<0.0001),mi组低于mi-NC组(P<0.05)。负调节自噬基因相对表达量与自噬正调节基因趋势相反。自噬相关蛋白相对表达量与自噬基因趋势一致。ROS荧光强度检测发现对照组的荧光强度高于空白组(P<0.05),mi组高于mi-NC组(P<0.001)。LDH检测发现对照组细胞内LDH含量高于空白组(P<0.01),mi组与mi-NC组含量无统计学意义(P>0.05)。 结论 miR-207过表达促进细胞凋亡、细胞焦亡及炎症、抑制自噬,有利于H37Ra的存活,为结核病的治疗提供新的方向。
2024, 34(7):175-180.DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2024.07.020
摘要:铁死亡是一种新发现的程序性细胞死亡方式,主要以细胞内铁依赖的脂质过氧化累积为主要特征。 目前对铁死亡的研究主要集中在癌症领域,但越来越多的证据表明铁死亡与感染性疾病的发生有关,在新型冠状病毒肺炎、结核病及隐球菌性脑膜炎等疾病中均发现铁死亡参与。 本文就铁死亡在感染性疾病中的作用作一综述,以期为铁死亡相关感染性疾病的防治提供新思路。