摘要: 目的　探讨DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)调控LSM4蛋白(Sm-like protein-4, LSM4)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用及机制研究。 方法　将ApoE-/-小鼠(12只)均分为2组,给予普通饲料喂养设为饮食对照组(ND组,n=6),给予高蛋氨酸饲料喂养设为高蛋氨酸组(HMD组,n=6);NCTC1469小鼠正常肝细胞分为正常对照组(Control组,0 μmol/L Hcy)、Hcy干预组(Hcy组,100 μmol/L Hcy)、转染干扰片段对照组(si-NC组,0 μmol/L Hcy)、转染LSM4干扰片段组(si-LSM4组,0 μmol/L Hcy)、转染DNMT1干扰片段组(si-DNMT1组,0 μmol/L Hcy)、Hcy干预下对照干扰组(Hcy+si-NC组,100 μmol/L Hcy)、Hcy干预下LSM4干扰组(Hcy+si-LSM4组,100 μmol/L Hcy)和Hcy干预下DNMT1干扰组(Hcy+si-DNMT1组,100 μmol/L Hcy);NCBI数据库分析LSM4在多种组织中表达;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测小鼠组织(HMD组和ND组)和肝细胞(Control组和Hcy组)LSM4蛋白表达差异;Western blot检测凋亡指标Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)和B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达变化;流式细胞术检测Control组、Hcy组、Hcy+si-NC组和Hcy+si-LSM4组细胞凋亡率变化;MethPrimer在线软件分析LSM4启动子区CpG岛;qRT-PCR和Western blot检测Hcy+si-DNMT1组中LSM4蛋白表达。 结果　与ND组、Control组相比,HMD组、Hcy组LSM4蛋白表达显著增高(P<0.05);与Control组比较,Hcy组中Bax蛋白表达显著上调(P<0.05),而Bcl-2表达明显降低(P<0.05);与Hcy+si-NC组比较,Hcy+si-LSM4组中Bax蛋白表达量显著减少(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量明显增多(P<0.05);与Control组相比,Hcy组细胞凋亡率显著升高(P<0.05);相较Hcy+si-NC组,Hcy+si-LSM4组细胞凋亡率下降(P<0.05);MethPrimer在线软件分析显示LSM4启动子区GC含量丰富且存在1个CpG岛;与Hcy+si-NC组相比,Hcy+si-DNMT1组LSM4蛋白表达增高(P< 0.05)。 结论　DNMT1通过调控LSM4低甲基化使其表达升高,从而促进Hcy诱导的小鼠肝细胞凋亡。

摘要:糖尿病及肥胖症等代谢性疾病已成为影响人类健康的主要疾病,属于多基因所致的代谢综合征,遗传模式复杂多样,至今仍所知甚少.理想的实验动物模型是我们深入了解代谢病病因、遗传及环境因素的必要工具,并且可以用来研究验证新的治疗药物.近年来,已经获得了大量的遗传工程动物模型,包括转基因、基因敲除模型等遗传工程动物,对于代谢性疾病的研究意义重大.本文主要介绍近年来应用较多的糖尿病及肥胖相关的遗传工程小鼠模型遗传特征及应用.