Abstract:目的 调查比较HIV-1在海南省及云南西双版纳州的流行情况及分子流行病学分析高危因素传播的情况以及传播链的鉴定.方法 我们与海南省CDC及西双版纳州CDC合作在其境内开展了HIV血清学调查,筛查了海南省(1991～2006)及西双版纳州(1996～2005)高危人群志愿者血清样本.在本次两地调查中,我们通过系统进化分析方法,对已诊断的HIV感染者进行分子流行病学的追踪,来分析其中的主要流行亚群以及结合个案追踪进行传播链的鉴定.结果 我们共筛查了海南省499 725人,共检出HIV阳性感染者523例(0.1%),以注射器吸毒感染为主要传播途径(经共用注射器吸毒感染占69.2%、经性接触传播占19.3%、供血和使用血液/血液制品感染占3.3%、母婴传播占0.8%、不详占7.7%).然而, 在西双版纳州筛查中发现了较海南省高20倍的检出率: 在25 390受检人中,共检出HIV阳性感染者501例(2%)并以异性性传播为主(经异性性接触传播占77.3%、经共用注射器吸毒感染占21.1%、经同性性接触传播占0.4%、母婴传播占1.2%).在海南省抽样的83人中,以CRF01-_AE重组亚型(70人, 84.3%)为主要病毒亚型, 其他病毒亚型包括B'亚型(8人)、C亚型(2人)、CRF08-BC重组亚型(1人)、B亚型(1人)和1个未报道过的CRF01-AE/B'重组亚型.同样, 在版纳抽样的44人中,也以CRF01-AE重组亚型(27人, 61.3%)为主要病毒亚型, 其他病毒亚型包括CRF08-BC重组亚型(15人)、G亚型(1人)、和1个未报道过的B/C重组亚型.在海南省抽样中有66人 (79.5%)分布于4个大小不同的传播群,传播群1(59人)较大(奠基效应),属于CRF01-AE重组亚型,传播群2、3、4 则较小,分别为3、2、2人,分别属于CRF01-AE重组亚型、C亚型和B'亚型.相反, 在版纳抽样中有18人 (40.9%)分布于8个较小的传播群(每群平均含2.25感染个体).在海南省抽样中怀疑的6对异性性接触的传播链中,经系统进化分析方法确认了其中的4对,2对被拒绝.在版纳抽样中怀疑的8对异性性接触的传播链中,经系统进化分析方法确认了其中的5对,2对被拒绝,1对无法分析,此外还新发现了3对异性性接触传播群.结论 HIV-1感染者的分子流行病学的追踪和分析对于追溯艾滋病流行的源头和地区性预防策略的制定有着重大的意义.

Abstract:目的 设计并构建靶向小鼠CYP2E1基因的miRNA干扰质粒,为探索CYP2E1基因功能奠定基础.方法 应用invitrogen设计软件设计两条干扰小鼠CYP2E1基因的靶向miRNA序列,合成相应的回文DNA序列,退火后分别连接到pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体上,构建两套miRNA真核表达载体CYP2E1-miR1和CYP2E1-miR2,并使用该载体特有的串联方法将两载体上的miRNA前体寡核苷酸序列进行串联成为CYP2E1-miR1-miR2;将上述重组载体分别与构建的pcDNA3.1(+)-CYP2E1表达质粒共转染入293T细胞,RT-PCR法鉴定其干扰效果.结果 经酶切及测序鉴定,针对鼠CYP2E1基因的miRNA干扰质粒构建成功,并能够有效抑制共转染入293T细胞的pcDNA3.1(+)-CYP2E1质粒的表达,且串联质粒CYP2E1-miR1-miR2优于单独的干扰质粒CYP2E1-miR1及CYP2E1-miR2.结论 小鼠CYP2E1基因的靶向miRNA表达载体构建成功.

Abstract:目的 研究NGI对转基因阿尔茨海默病小鼠的治疗作用.方法 构建包含小鼠OMgp细胞外8 LRP 重复序列,人Tenascin-R的EGF-L结构域,以及人Nogo-A的氨基端和66个氨基酸细胞外域的重组质粒,肌肉注射AD小鼠,空载体组和空白对照组为对照组.水迷宫检测小鼠行为学差别,免疫组化检测其病理差别.结果 4.5月龄AD小鼠经过水迷宫隐蔽平台实验,2 d 后疫苗组小鼠潜伏期比对照组缩短30% (P＜0.05).探索实验显示3月龄疫苗组比空载体组和空白对照组小鼠穿越目标象限的次数分别增加48%和44%(P＜0.05).结论 NGI重组DNA疫苗能够提高转基因AD小鼠的学习与记忆能力.

Abstract:目的 通过对猕猴静脉注射自体RAK细胞,观察猕猴是否出现血管内细胞栓塞等现象,为评价在人体上回输RAK细胞安全性剂量提供依据.方法 随机选择健康雄性猕猴5只,进行自体RAK细胞静脉回输,观察动物在回输过程中及回输结束后14 d内动物的生理生化指标是否出现异常,是否出现血管栓塞现象.结果 自体RAK细胞回输后至观察期14 d结束,5只动物均存活,且精神状态良好,各动物的生理生化指标正常,无行为和体征异常出现.结论 猕猴静脉注射自体RAK细胞达到拟用临床剂量上限时不会引起毒性反应,不会引起血管内栓塞现象.

Abstract:目的 探讨SARS-CoV Spike蛋白来源的B细胞表位多肽及其产生的单克隆抗体在SARS-CoV感染Vero-E6细胞系及h-ACE2ICR转基因小鼠过程中的作用,为SARS-CoV疫苗的筛选奠定初步工作基础.方法 将Vero-E6细胞接种于96孔板上,首先应用两种B细胞表位多肽制备而成的单克隆抗体S471-5034A-10及S604-62511B1进行中和实验,随后在相同的实验中加入相关(S471-503,S604-625)或无关多肽干扰抗体的中和作用,当病毒对照空中70%细胞出现细胞病变时,对活细胞进行中性红染色并计算中和指数以分析抗体的中和水平.应用鉴定有中和保护作用的抗体来源的多肽进行h-ACE2ICR转基因小鼠病毒感染后的治疗实验,进一步确定多肽在SARS-CoV体内感染过程中的保护性作用.结果 两种B细胞表位多肽来源的单克隆抗体均可以在一定程度上中和SARS-CoV对Vero-E6细胞的感染,而且这种中和作用可以被加入的其来源多肽所阻滞,这种阻滞作用的强弱与加入多肽的剂量具有相关性.多肽小鼠体内感染治疗实验表明随着体内注射多肽剂量的增加,受感染小鼠肺组织表现出的急性间质性肺炎程度随之减轻,肺组织内检测的病毒载量也有所下降.结论 目前尚无安全有效的治疗SARS的药物,而疫苗是有效抵抗各种感染的工具之一,表位疫苗是新近发展起来的疫苗形式,安全性好,诱导的免疫针对性强.我们的研究表明,S471-5034A-10及S604-62511B1两种单克隆抗体可以中和SARS-CoV对Vero-E6细胞的感染,同时Spike蛋白来源的S471-503多肽在小鼠的感染治疗实验中也表现出保护性作用,可以作为防治SARS-CoV感染的表位疫苗研制候选肽段.

Abstract:目的 通过构建MKP1转基因小鼠模型,研究MKP1基因对造血干细胞自我更新能力的影响.方法 运用显微注射法建立MKP1转基因小鼠;PCR和RT-PCR检测MKP1基因在转基因小鼠的表达水平;流式细胞术测定小鼠骨髓干细胞和外周血单个核细胞的比例;通过竞争性骨髓移植实验检测MKP1转基因小鼠骨髓干细胞的功能.结果 建立了MKP1转基因小鼠;MKP1转基因小鼠骨髓干细胞数量减少;竞争性骨髓移植实验显示MKP1转基因骨髓干细胞来源的外周血细胞总数、B细胞、粒细胞显著减少(P＜0.001),提示MKP1转基因小鼠骨髓干细胞的功能下降.结论 在MKP1转基因小鼠模型中,MKP1基因的过表达影响了小鼠的骨髓干细胞的功能.

Abstract:目的 模拟临床给药途径,Beagle犬腰椎穿刺置管多次鞘内注射巴氯芬注射液,观察其局部刺激性,同时进行犬行为学观察,为巴氯芬注射液安全性评价提供依据.方法 12只Beagle犬分为假手术组,生理盐水对照组,巴氯芬给药组.行腰椎穿刺置管,使用单通道微量注射泵泵入给药,给药剂量为1000μg/d,生理盐水对照组给予生理盐水0.5 mL,连续给药7 d,恢复期7 d.每日进行行为学观察,给药结束及恢复期结束时每组麻醉2只动物,取给药部位脊髓进行组织病理学检查.结果 给药及恢复期期间动物行为未见异常,给药结束时各组均有部分动物观察到置管处表皮感染现象,进行局部消毒处理后在恢复期第3天恢复正常.组织病理学检查发现给药及恢复期结束时各组动物脊髓均可见血管周围炎细胞浸润或脊髓内钙盐沉积,各组无差别.给药结束时巴氯芬组1例动物脊膜处有肉芽组织形成,判定与置管操作有关.结论 巴氯芬注射液Beagle犬腰椎穿刺置管连续7 d鞘内注射,给药剂量为1000 μg/d对脊髓无局部刺激性作用,动物行为也未见异常.

Abstract:目的 建立以高脂纯化饲料诱导的、遗传背景和环境因素共同起作用的C57BL/6J小鼠代谢综合征(MS)模型,为研究营养因素与代谢综合征的关系提供周期较短、稳定性好、可重复性、与人类发病可比性高的动物模型.方法 雄性3周龄C57BL/6J小鼠30只适应性喂养10 d后随机分为2组,其中一组(10只)给予普通生长饲料(对照组),另一组(20只)给予高脂纯化饲料(模型组).喂养期间对空腹血糖(FBG)、体重进行连续监测,同时监测体重指数(BMI)、血清胰岛素(FINS)、血清甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C),实验期10周.实验结束时取内脏脂肪和肝脏称重,取肝胰做病理分析.结果 分组喂养1周时,模型组小鼠体重出现显著性升高(P＜0.001),并表现为中心型肥胖.4周时FBG显著性升高(P＜0.05),5周时FINS开始升高但无显著性差异.8周时血清TC、HDL-C显著性升高(P＜0.001),10周时TG、TC、HDL-C、LDL-C均升高(P＜0.01).HE染色显示肝脏中度脂肪变,胰岛细胞无明显改变.结论 单纯施以高脂饲料10周即可建立MS小鼠模型.并且该模型造模方法简单易行、周期较短、稳定性好、可重复性高,与人类MS自然发病过程类似,是MS较理想的动物模型.

Abstract:目的 研究抗炎多肽AF-2(antiflammin-2)对内毒素(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用.方法 Balb/c雄性小鼠37只,随机分为3组,对照组(n = 10)、急性肺损伤(ALI)模型组(n=14)和AF-2治疗组(n=13),模型组和治疗组腹腔注射大肠杆菌内毒素复制小鼠肺损伤模型,治疗组同时注射抗炎多肽AF-2,对照组和模型组注射等量的生理盐水.在0 h、6 h和12 h记录动物的呼吸频率,12 h处死动物,肺组织切片观察肺病理变化,ELISA法检测血清细胞因子.结果 6 h和12 h AF-2治疗组动物呼吸频率均低于模型组.肺组织病理显示AF-2对LPS诱导的小鼠ALI肺组织的渗出、炎细胞浸润有一定的抑制作用.AF-2治疗组与ALI模型组比较血清IL-6水平明显下降.结论 AF-2对内毒素诱导的小鼠急性肺损伤有一定的保护作用.

Abstract:目的 研究锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型大鼠致癇后NFDA2性发作的行为学特点及海马结构病理改变的动态变化.方法 将所有Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,实验组大鼠腹腔依次注射氯化锂、匹罗卡品诱发癫癇持续状态(SE)后,观察其自发性癫癇发作(SRS),分别于SE后1周至10周5个不同时间点取材,Nissl染色和Timm染色分别观察海马神经元损伤及苔藓纤维出芽 (MFS)的变化.结果 注射匹罗卡品后84%的大鼠可诱发出SE,经过10～20 d的缄默期后,可观察到Ⅰ～Ⅲ级的反复SRS,病理学检查可见海马神经元的损伤及齿状回内分子层MFS.结论 锂-匹罗卡品颞叶癫癇模型与人类颞叶癫癇有类似发作特点及病理改变,是一种理想的颞叶癫癇动物模型.

Abstract:目的 筛选寻找锥虫早老素蛋白相互作用蛋白,以了解锥虫早老素蛋白功能.方法 体外表达锥虫早老素蛋白片段,装入pGBKT7诱饵质粒,与随机肽库系统共转化酵母,筛选阳性克隆并测序,通过与基因库锥虫功能序列比较,推导可能的相互作用蛋白.结果 获得108个阳性克隆,对其中50个进行了序列测定和比较,获得最有可能的4个候选基因,分别为:丝/苏氨酸性磷酸酶2b催化亚基A2;钙激活蛋白,含锚蛋白重复序列蛋白以及一个具有与APP跨膜区结合位点特征序列的功能未知蛋白.结论 成功利用随机肽库酵母双杂交系统筛选锥虫早老素蛋白相互作用基因,其相互作用仍有待进一步确认.

Abstract:目的 制备兔抗7种中国家庭中常见宠物的二级抗体,并进行辣根过氧化酶标记,为宠物血清学检测系统的建立提供工具.方法 利用饱和硫酸铵沉淀法粗纯抗体后,再利用protein A 或protein G 亲和层析的方法进一步纯化宠物的IgG,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗宠物的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗宠物的二级抗体进行HRP标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blotting考察标记抗体的特异性.结果 纯化了狗、家猫、豚鼠、金仓鼠、松鼠、花鼠和龙猫7种宠物的血清IgG,免疫双扩散法测定兔抗这7种宠物的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗7种宠物的二级抗体进行了HRP标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶(2000～15000)左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性.结论 成功制备了HRP标记的兔抗7种中国家庭中常见宠物的二级抗体,为宠物血清学检测体系的建立提供了工具.

Abstract:目的 制备兔抗9种重要经济动物的二级抗体,并进行辣根过氧化酶标记,为经济动物血清学检测系统的建立提供工具.方法 利用饱和硫酸铵沉淀粗纯抗体后,再利用protein A或protein G 亲和层析的方法进一步纯化动物血清IgG,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法纯化兔抗经济动物的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的二级抗体进行HRP标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blotting考察标记抗体的特异性.结果 纯化了家猪,绵羊、山羊、牛、马、驴、狐狸、貉和黑貂9种重要经济动物的血清IgG,免疫双扩散法测定兔抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗家猪,绵羊、山羊、牛、马、驴、狐狸、貉和黑貂9种重要经济动物二级抗体进行了HRP标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶(2000～15000)左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性.结论 成功制备了HRP标记的兔抗9种重要经济动物的二级抗体,为经济动物血清学检测体系的建立提供了工具.

Abstract:目的 通过对Fmr1基因敲除小鼠雌雄两性和FVB小鼠的脏器重量和脏器系数进行比较分析,了解其脏器重量的差异,探讨Fmr1基因对动物生长发育等方面的影响.方法 分别测定Fmr1基因敲除小鼠雌雄两性和FVB小鼠内脏器官的绝对重量和脏器系数,并进行统计学处理和分析.结果 相同年龄的Fmr1基因敲除小鼠雄性的体重、心、肺、肝和肾的绝对重量均极显著的大于雌性(P＜0.01).雌雄间脏器系数除肾脏(P＜0.05)和脑(P＜0.01)外,其余无显著差异.与FVB小鼠比较,Fmr1基因敲除小鼠心脏较轻(P＜0.01),肾脏(P＜0.01)、体重和脑较重(P＜0.05).脏器系数肾脏较大(P＜0.01),心脏(P＜0.01)、脑和脾(P＜0.05)较小.结论 Fmr1基因可影响动物的某些脏器重量和脏器系数.

Abstract:Levin提出饮食诱导肥胖(DIO)与饮食诱导肥胖抵抗(DIO-R)的概念后,其发生机制受到了广泛关注.现代研究认为脂肪组织除了能调节能量代谢外,还可以分泌多种细胞因子,如瘦素、脂联素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和抵抗素等.在已发现的脂肪细胞因子中,瘦素、TNF-α和脂联素等与肥胖的发生密切关联.DIO大鼠血清瘦素水平比DIO-R大鼠高,DIO大鼠瘦素敏感性降低,发生了瘦素抵抗.DIO小鼠血浆脂联素水平比DIO-R小鼠低.DIO组TNF-α水平明显高于DIO-R组.

Abstract:PET和CT影像技术是肿瘤、痴呆症、心脑血管病等的重要临床诊断技术,近年发展的小动物PET/CT成为对人类疾病动物模型,尤其是小动物模型进行比较医学研究的最新工具,能够活体无创的、动态的、定量的从分子水平观察动物的生理生化变化,进行代谢显像、受体显像、基因表达显像等.已经广泛应用于对神经退行性疾病的研究中.本文介绍了近年来一些小动物PET/CT在退行性疾病的研究中的最新应用.

Abstract:糖尿病及肥胖症等代谢性疾病已成为影响人类健康的主要疾病,属于多基因所致的代谢综合征,遗传模式复杂多样,至今仍所知甚少.理想的实验动物模型是我们深入了解代谢病病因、遗传及环境因素的必要工具,并且可以用来研究验证新的治疗药物.近年来,已经获得了大量的遗传工程动物模型,包括转基因、基因敲除模型等遗传工程动物,对于代谢性疾病的研究意义重大.本文主要介绍近年来应用较多的糖尿病及肥胖相关的遗传工程小鼠模型遗传特征及应用.

Abstract:非人灵长类动物在亲缘关系上和人最接近,与人类的遗传物质有75%～98.5%的同源性,在组织结构、免疫、生理和代谢等方面与人类高度近似,是极其珍贵的实验动物,其应用价值远超过其他种属的实验动物.本文就非人灵长类和人类之间的进化关系和目前的使用情况,及其在毒理学、传染病、神经科学、生殖生物学、胎儿发育和衰老等医学科学实验中的应用等方面的内容做了简要的介绍.

Abstract:本文从动物实验室的运行特点和管理人员的工作任务出发,对动物实验室的量化管理进行了探索.主要论述了在工作过程中运用量化管理法进行饲养管理和条件保障工作,从而有效地调动职工工作的积极性和主动性,促进动物实验室服务质量的提高.

Abstract:弓形虫感染对人类生活和畜牧业发展构成严重威胁.弓形虫感染实验动物模型是进行弓形虫学相关研究的基础条件之一.在实际研究工作中,根据不同的实验目的 、选取不同的实验动物和以不同的实验方法所建立的实验动物模型,呈现出复杂和多变的特点.这一方面可以满足不同实验的需要,但同时也在实验结果的评价上导致一定程度的不足.根据弓形虫感染实验动物模型的不同特点,针对特定的实验目的 ,选择适合方法建立适合的实验动物模型,是进行相关弓形虫学研究的有效基础和前提.

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Abstract:由中国人民解放军医学科学技术委员会实验动物学专业委员会主办，广州雷蒙特科学实验室设备有限公司承办的全军实验动物专业委员会工作会议于2009年4月25日在广州番禺召开。会议由全军实验动物委员会主任委员，军事医学科学院实验动物中心主任曾林主持，共有24人参加了会议。会议的主要有三项议题：一是总结交流经验，汇报工作进展，研讨科研协作；二是制订工作计划，研讨2009年全军实验动物培训内容和安排；三是商定2010年全军实验动物学术研讨会的举办地点和承办单位。此外，会议还组织参观了广州雷蒙特科学实验室设备有限公司，了解了实验设备方面的最新进展。

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