摘要: 目的 构建一种可高效支持人胚胎干细胞生长的人源饲养层细胞系。 方法 首先通过在 TW2R 细胞系稳定表达人 E-钙黏素(E-cadherin)基因构建永生化人源饲养层细胞系 TWE3R,并比较人胚胎干细胞在 TWE3R 及其亲本细胞上的克隆形成数。 将 H9 人胚胎干细胞在 TWE3R 细胞上经过 10 代连续传代培养后,进行人胚胎干细胞特异性标志物分析、拟胚体形成分析和畸胎瘤形成检测等实验。 结果 本研究成功构建了永生化的人源饲养层细胞系 TWE3R,TWE3R 细胞可比其亲本细胞更高效地支持人胚胎干细胞生长,并且 TWE3R 饲养层细胞还具有支持低密度接种条件下(每平方厘米 5 个)人胚胎干细胞生长的特性。 此外,H9 人胚胎干细胞在 TWE3R 细胞上长期传代培养后,仍可保持所有人胚胎干细胞的未分化特性、正常细胞核型以及在体内外均可分化形成所有 3 个胚层衍生物的潜能。 结论 本研究所建立的永生化人源饲养层细胞系 TWE3R 具有高效支持胚胎干细胞生长的特性。

摘要: 目的 研究在 2 型糖尿病( T2DM) 局灶性脑缺血模型大鼠脑损伤中成纤维细胞生长因子 21 (FGF21) / β-klotho / 成纤维细胞生长因子 1 型受体(FGFR1)通路的作用。 方法 SD 大鼠采用高脂饲养结合腹腔链脲佐菌素(STZ)注射建立 T2DM 大鼠模型,采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,实验分为正常对照组(Control 组)、单纯脑缺血组( MCAO 组)、T2DM 脑缺血组( T2DM +MCAO 组)、T2DM 脑缺血 FGFR1 抑制剂 PD173074 干预组(PD173074 组)及 T2DM 脑缺血 FGFR1 激动剂 PF05231023 干预组(PF05231023 组),每组 12 只, PD173074 组、PF05231023 组分别于 MCAO 术前 30 min 尾静脉注射 PD173074 5 mg / kg、PF05231023 5 mg / kg。 MCAO 24 h 后进行神经功能缺损评分,随后处死大鼠取脑组织标本。采用原位末端标记法(TUNEL)检测脑组织神经细胞凋亡,实时荧光定量 PCR(RT-qPCR) 检测脑组织 FGF21、β-klotho、FGFR1 mRNA 表达,免疫印迹( Western blot)检测脑组织 FGF21、β-klotho、FGFR1 蛋白及血小板内皮细胞粘附分子(CD31)、内皮素-1(ET-1)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。 结果 与 Control 组比较,MCAO 组和 T2DM+MCAO 组大鼠神经功能缺损评分、神经细胞凋亡率、FGF21、β-klotho、FGFR1 mRNA 及蛋白水平、CD31、ET-1、VEGF 蛋白水平显著增加(P<0. 05);与 T2DM+ MCAO 组比较,PD173074 组大鼠神经功能缺损评分、神经细胞凋亡率、CD31、ET-1、VEGF 蛋白水平显著增加, FGF21、β-klotho、FGFR1 mRNA 及蛋白水平显著降低(P<0. 05),PF05231023 组大鼠神经功能缺损评分、神经细胞凋亡率、CD31、ET-1、VEGF 蛋白水平显著降低(P<0. 05),FGF21、β-klotho、FGFR1 mRNA 及蛋白水平显著增加(P< 0. 05)。 结论 FGF21 / β-klotho / FGFR1 通路激活可能在 T2DM 局灶性脑缺血模型大鼠中发挥重要保护作用。

摘要: 目的 探讨BALB/ c突变卷毛鼠与正常BALB/ c小鼠构建经肝门静脉注射肿瘤模型间的差异,同时建立基于 Image J 软件的肿瘤图像定量分析方法。 方法 将 H₂₂细胞分别经两组小鼠的肝门静脉注入肝,21 d 后摘取肝。选择最大肝叶弥散病灶,首先拍照获得垂直视角肿瘤外观图进行比较,然后利用 Image J 软件对肝肿瘤进行图像定量分析比较。 结果 两组小鼠的肝均形成了多发性弥散性肿瘤。外观显示:卷毛鼠组肿瘤的多发和弥散程度显著高于正常小鼠组,且肿瘤与周边的正常肝组织浸润关系更加密切。 Image J 软件分析结果显示两组小鼠肝比例之间不具有显著性差异,但卷毛鼠的肿瘤比例和肿瘤占肝的比例均显著大于正常小鼠(P<0. 01)。 结论 成功模拟了进展期肝肿瘤动物模型。 BALB/ c突变卷毛鼠在经门静脉注射肿瘤细胞成模能力显著优于正常BALB/ c小鼠, 同时建立了基于图像分析软件 Image J 的图像定量分析方法。

摘要: 目的 探讨雄激素对睾丸切除(GDX)老年大鼠胃粘膜线粒体功能的影响及机制。 方法 36 只 SD 雄性大鼠随机分为 3 组:假手术组(Sham,n= 12)、模型组(GDX,n= 12)和补充雄激素的模型大鼠( n= 12)。 造模大鼠行 GDX,造模后雄激素组灌胃睾丸酮(13. 6 mg / (kg·d),溶于芝麻油中)。 假手术组和模型组大鼠使用芝麻油进行相同的治疗。治疗结束后收集胃组织标本,分别采用试剂盒检测胃粘膜线粒体中 Mn-SOD、GSH-Px、GSH、 GSSG、GSH/ GSSG 和 ROS 水平,罗丹明 123 荧光法检测线粒体膜电位,流式细胞仪检测细胞凋亡。体外试验以人永生胃粘膜细胞 GES-1 为研究对象,应用 H₂O₂ 诱导细胞损伤,考察雄激素和 ALDH2 抑制剂 Disulfiram 对细胞活力和凋亡影响。 结果 与 Sham 组相比,GDX 组 ROS、GSSG 水平、胃粘膜细胞凋亡和裂解的 Caspase-3、细胞质 Cyt c 蛋白表达显著增加(P<0. 05),而 Mn-SOD、GSH-Px、GSH、GSH/ GSSG 水平、线粒体膜电位、ATP 水平和线粒体 Cyt c 蛋白、ALDH2 蛋白表达显著降低(P<0. 05)。在雄激素治疗后,GDX 老年大鼠上述变化显著逆转(P<0. 05)。 体外实验中,雄激素处理显著逆转了 H₂O₂ 对 GES-1 细胞的损伤作用(P<0. 05);然而,当联合加入 Disulfiram 时,雄激素的治疗活性明显降低(P<0. 05)。 结论 雄激素缺乏导致老年大鼠胃粘膜细胞线粒体功能障碍和线粒体 ROS 积累增加,诱导胃黏膜细胞凋亡,这种损害作用至少部分与 ALDH2 的抗氧化功能抑制有关。

摘要: 目的 探讨 miR-27a 调控 PI3K/ AKT/ mTOR 通路介导的自噬对肺炎链球菌(SP)诱导人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)损伤的影响。 方法 用 1× 10⁸ CFU/ mL SP 诱导 HPAEpiC,在诱导前 48 h 使用 Lipofectamine 3000 转染试剂盒分别转染细胞 miR-27a-NC(miR-27a-NC 组)、miR-27a-inhibitor(miR-27a-inhibitor 组)、pcDNA-NC( pcDNA- NC 组)、pcDNA-PI3K ( pcDNA-PI3K 组), 共转染细胞 miR-27a-NC 和 Si-NC ( miR-27a-NC + Si-NC 组)、 miR-27a- inhibitor 和 Si-NC(miR-27a-inhibitor+Si-NC 组)、miR-27a-NC 和 Si-PI3K(miR-27a-NC+Si-PI3K 组)、miR-27a-inhibitor 和 Si-PI3K(miR-27a-inhibitor+Si-PI3K 组)。另取非诱导细胞为对照组,诱导且未转染细胞为诱导组。 qRT-PCR 检测正常 HPAEpiC 和 SP 诱导的 HPAEpiC 中 miR-27a 表达水平;生物信息学预测和双荧光素酶验证 miR-27a 和 PI3K 靶向关系;CCK-8 法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA 法检测细胞上清液中 IL-6 和 IL-10 含 量;Western blot 检测细胞中 PI3K、Beclin1 蛋白表达水平、LC3-II/ I 比值以及 AKT、mTOR 蛋白磷酸化水平。 结果 与对照组相比,诱导组细胞 miR-27a 表达水平、细胞凋亡率、IL-6 含量、Beclin1 蛋白表达水平和 LC3-II/ I 比值升高 (P<0. 05),PI3K 蛋白表达水平、细胞增殖率、IL-10 含量、AKT、mTOR 蛋白磷酸化水平降低(P<0. 05)。与 miR-27a- NC 组相比,miR-27a-inhibitor 组细胞 miR-27a 表达水平、细胞凋亡率、IL-6 含量、Beclin1 蛋白表达水平和 LC3-II/ I 比值降低(P<0. 05),细胞增殖率、IL-10 含量、AKT、mTOR 蛋白磷酸化水平升高(P<0. 05)。 与 pcDNA-NC 组相比, pcDNA-PI3K 组细胞凋亡率、IL-6 含量、Beclin1 蛋白表达水平和 LC3-II/ I 比值降低(P<0. 05),PI3K 蛋白表达水平、细胞增殖率、IL-10 含量、AKT、mTOR 蛋白磷酸化水平升高(P<0. 05)。 结论 在 SP 诱导 HPAEpiC 损伤过程中, miR-27a 能够靶向抑制 PI3K/ AKT/ mTOR 信号通路,促进自噬,而抑制 miR-27a 可激活 PI3K/ AKT/ mTOR 信号通路, 抑制自噬,缓解 SP 所致 HPAEpiC 损伤。

摘要: 目的 探究 FIRS 早产儿 MMP-9、TIMP-1 表达紊乱与支气管肺发育不良的关系和初步机制。 方法 本研究设计临床和动物实验两部分。临床部分:纳入 2018 年 5 月~2019 年 12 月早产儿 118 例,分为对照组及研究组,留取各组患儿出生后脐血及产妇胎盘组织。 以观察炎症指标 IL-6、MMP-9、TIMP-1、MMP-9/ TIMP-1(M/ T)比值及病理组织炎症浸润情况,并分析炎症指标之间的关系。动物实验:制备孕鼠,分别通过不同干预方式,将胎鼠及新生鼠分为 3 组,FIRS 组(LPS 脂多糖干预)、RA 组(维甲酸干预)、NS 组(生理盐水干预),均留取肺组织。观察小鼠肺组织炎症指标及胎盘病理组织炎症浸润情况。 结果 临床部分:不同胎龄 FIRS 组早产儿脐血中 IL-6、MMP- 9、TIMP-1 及 M/ T 比值表达水平较对照组显著增加(P<0. 01);FIRS 组 BPD 发生率高于同胎龄对照组。动物实验部分:不同日龄 FIRS 组胎鼠 IL-6、MMP-9、TIMP-1 及 M/ T 比值均明显高于同日龄对照组(P<0. 01)。 RA 干预后: 同时期炎症指标高于同日龄对照组(P<0. 01),但低于同日龄 FIRS 组(P<0. 01)。 结论 FIRS 可能通过调节 MMP- 9、TIMP-1 水平及 M/ T 比值,介导 BPD 发生,应用 MMP-9 抑制剂可在肺损伤过程中发挥保护作用,为临床治疗提供了潜在的药物治疗靶点。

摘要: 目的 探讨基于 Toll 样受体 4(TLR4)通路依托咪酯(Eto)对感染性休克大鼠急性肺损伤的保护作用。 方法 75 只大鼠随机分为假手术组、模型组、模型-脂多糖(LPS)组、模型-Eto 组、模型-Eto-LPS 组,各 15 只。除假手术组外,其余各组采用盲肠结扎穿孔法复制感染性休克大鼠模型,假手术组仅作剖腹手术。术前 30 min,模 型-LPS 组腹腔注射 LPS 15 mg / kg,模型-Eto 组腹腔注射依托咪酯 60 mg / kg,模型-Eto-LPS 组同时腹腔注射依托咪酯 60 mg / kg+LPS 15 mg / kg,模型组和假手术组腹腔注射生理盐水。检测术后 5 h 血清内毒素(ET)水平、BALF 中 IL-1β、IL-6、TNF-α,观察肺组织病理学改变,检测肺组织中 TLR4、髓样分化因子(MyD88)、核因子-κB p65(NF-κB p65)mRNA 和蛋白表达量。 结果 与假手术组比较,模型组、模型-LPS 组、模型-Eto 组、模型-Eto-LPS 组 ET 含量及 BALF 中 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平均较高,其中模型-Eto 组<模型-Eto-LPS 组<模型组<模型-LPS 组(P<0. 05)。 HE 染色显示,模型组和模型-LPS 组肺泡明显充血,肺泡壁、肺间质增厚,大量炎性细胞浸润,且模型-LPS 组病变更为严重;模型-Eto 组和模型-Eto-LPS 组病变均减轻,偶有肺泡毛细血管充血和炎性细胞浸润,且模型-Eto 组减轻更为明显。与假手术组比较,模型组、模型-LPS 组、模型-Eto 组、模型-Eto-LPS 组肺组织中 TLR4、MyD88、NF-κB p65 mRNA 和蛋白相对表达量均较高,其中模型-Eto 组<模型-Eto-LPS 组<模型组<模型-LPS 组(P<0. 05)。 结论 Eto 对感染性休克大鼠急性肺损伤具有保护作用,可能通过抑制 TLR4 通路发挥调控作用。

摘要: 目的 探究 miR-214 对结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞中免疫调控的作用机制。 方法 培养肺泡 Ⅱ型细胞系 A549,分别使用结核分枝杆菌疫苗株 BCG 和结核分枝杆菌标准株 H37Rv 感染 A549 细胞。 对 A549 细胞进行分组,并进行 H37Rv 感染。 qRT-PCR 检测各组细胞中 miR-214 和 FGF9 的表达情况,Western blot 检测各组细胞中 FGF9 蛋白的表达。 ELISA 检测细胞中免疫相关因子 SP-A、SP-D、TLR2 和 TLR4,炎症因子 IL-10、TNF-α、 TNF-γ、IL-1β 和 IL-8 的含量。 Western blot 检测 PI3K/ AKT 信号通路成员 PI3K、AKT、p-AKT 的表达。 结果 和 BCG 相比,H37Rv 感染后的 A549 细胞中 miR-214 表达升高,FGF9 表达降低。 和 NC mimic+oe-NC 组相比,miR-214 mimic+oe-NC 组细胞 SP-A、SP-D、IL-10 含量显著降低,TLR2、TLR4、TNF-α、TNF-γ、IL-1β、IL-8 含量显著升高,PI3K、 AKT/ p-AKT 表达显著升高。 NC mimic+oe-FGF9 组 SP-A、SP-D、IL-10 含量显著升高,TLR2、TLR4、TNF-α、TNF-γ、IL- 1β、IL-8 含量显著降低,PI3K、AKT/ p-AKT 表达显著升高降低。 和 miR-214 mimic+oe-NC 组相比,miR-214 mimic+ oe-FGF9 组 SP-A、SP-D、IL-10 含量显著升高,TLR2、TLR4、TNF-α、TNF-γ、IL-1β、IL-8 含量显著降低,PI3K、AKT/ p- AKT 表达显著降低。 结论 miR-214 通过抑制 FGF9 的表达,进而激活 PI3K/ AKT 信号通路,导致结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞过度免疫反应,从而导致炎症发展。

摘要: 目的 探讨枸杞多糖与 UCA1 siRNA 单独或联合应用对 MPP⁺诱导的 SH-SY5Y 细胞增殖、凋亡的影响及机制。 方法 使用 MPP⁺(终浓度为 0. 25、0. 5、1、2 mmol / L 的 MPP⁺ 处理细胞 24 h)、枸杞多糖(50、100、200、400 μg / mL 的枸杞多糖预处理细胞 1 h 后加 MPP⁺继续处理 24 h)处理 SH-SY5Y 细胞,选择最佳 MPP⁺(1 mmol / L) 及枸杞多糖作用浓度(400 μg / mL)开展后续实验。实验分为对照组(细胞不经特殊处理)、MPP⁺组(1 mmol / L 的 MPP⁺处理细胞 24 h)、枸杞多糖组(LBP 组)(400 μg / mL 的枸杞多糖预处理细胞 1 h 后加 1 mmol / L 的 MPP⁺继续处理 24 h)、si-UCA1 组(1 mmol / L 的 MPP⁺处理细胞后转染 UCA1 siRNA)、枸杞多糖+si-UCA1 组。 MTT 法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率、ROS 及膜电位水平。 结果 与对照组比较,MPP⁺组细胞存活率、膜电位显著降低,细胞凋亡率、ROS 水平显著升高(P<0. 05)。 与 MPP⁺组比较,LBP 组和 si-UCA1 组细胞存活率、膜电位显著升高,细胞凋亡率、ROS 水平显著降低(P<0. 05)。 与 LBP 组或 si-UCA1 组比较,LBP+si-UCA1 组细胞存活率、膜电位显著升高,细胞凋亡率、ROS 水平显著降低(P<0. 05)。 结论 枸杞多糖及抑制 UCA1 均可促进 MPP⁺诱导的 SH- SY5Y 细胞增殖,抑制凋亡,两者联合对细胞增殖、凋亡影响更显著,机制可能与抑制线粒体凋亡途径有关。

摘要: 目的 探索和厚朴酚对 D-半乳糖致腰间盘退变大鼠血清炎症因子含量变化,细胞外基质标记物表达水平及凋亡通路相关蛋白表达水平的影响。 方法 45 只 SD 大鼠随机分为对照组( Control)、D-半乳糖(D- galactose,D-gal)模型组(Model)、和厚朴酚低剂量组(2 mg / kg)、和厚朴酚中剂量组(4 mg / kg)、和厚朴酚高剂量组 (8 mg / kg),每组 9 只。模型组和和厚朴酚给药组采用皮下注射 D-gal方法建立大鼠椎间盘退变模型,对照组皮下注射等体积生理盐水。 造模成功后,给药组大鼠分别灌胃和厚朴酚 2、4、8 mg / kg,其余各组大鼠灌胃生理盐水,连续给药 4 周后处死大鼠。 HE 和番红 O 染色观察比较各组腰椎间盘形态组织学;qRT-PCR 检测大鼠椎间盘组织细胞外基质标记物的 mRNA 水平;ELISA 检测大鼠血清中白细胞介素 IL-1β、IL-6、IL-10 和肿瘤坏死因子 α(TNF-α)含量的变化;TUNEL 染色观察大鼠椎间盘的组织凋亡情况;Western blot 检测 B 细胞淋巴瘤-2(Bcl-2) / Bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、c-Myc 的蛋白表达。 结果 模型组和和厚朴酚低、中剂量组椎间盘组织形态学评分较对照组显著升高(P<0. 05)。 和厚朴酚中、高剂量组椎间盘组织形态学评分较模型组显著降低 (P<0. 05)。 模型组和和厚朴酚低剂量组软骨受损严重,和厚朴酚中、高剂量组软骨受损较轻。和厚朴酚能显著升高 SRY 相关 HMG 盒 9(SOX-9)、II 型胶原(Collagen II)和蛋白聚糖(Aggrecan)的表达水平(P<0. 05)。模型组和和厚朴酚低、中、高剂量组 IL-1β、IL-6、IL-10 和 TNF-α 的含量较对照组均显著升高(P<0. 05)。与模型组比较,和厚朴酚中、高剂量组 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 含量均显著降低(P<0. 05);IL-10 的含量显著升高(P<0. 05)。 与对照组相比, 模型组和和厚朴酚低、中剂量组凋亡细胞数显著升高(P<0. 05),Bcl-2/ Bax 比值显著降低(P<0. 05),Caspase-9、 Caspase-3、c-Myc 的蛋白水平均显著升高(P<0. 05)。 与模型组相比,和厚朴酚中、高剂量组凋亡细胞数显著降低(P<0. 05),Bcl-2/ Bax 比值显著升高(P<0. 05),Caspase-9、Caspase-3、c-Myc 的蛋白水平均显著降低(P<0. 05)。 结论 和厚朴酚对 D-半乳糖致腰椎间盘退变有明显疗效。

摘要: 目的 探讨长期高蛋白饮食对卵巢切除(ovariectomy, OVX)小鼠肝、脂肪组织的影响及胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)的作用。 方法 32 只 8 周龄 C57BL/ 6 雌性小鼠随机分为对照(Control)组、模型(OVX)组、高蛋白(OVX+HP)组、低蛋白(OVX+LP)组,每组 8 只,模型组、高蛋白组、低蛋白组小鼠行卵巢切除后分别给予标准饮食、高蛋白饮食、低蛋白饮食;对照组进行相同手术保留卵巢,给以标准饮食。每周称量小鼠体重,于 24 周末处死后,取肝、结肠、腹膜后脂肪组织,并称重脂肪组织;HE 染色观察肝、腹膜后脂肪的病理改变; 酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中 GLP-1 的含量;实时定量 PCR 检测肝固醇调节元件结合蛋白-1c( sterol regulatory element binding protein-1c, SREBP-1c)以及结肠组织中 GLP-1 mRNA 的表达,免疫组织化学染色法检测肝 SREBP-1c 蛋白的表达。 结果 24 周末,与对照组相比,模型组体重增加( P< 0. 05)、腹膜后脂肪组织增多( P< 0. 05);HE 染色模型组肝细胞内可见大量脂滴、腹膜后脂肪组织细胞体积增大;结肠组织中 GLP-1 mRNA 表达降低 (P<0. 05),血浆中 GLP-1 含量减少(P<0. 05),肝组织中 SREBP-1c 的 mRNA 表达升高(P<0. 05),SREBP-1c 蛋白表达增多;高蛋白组与模型组相比,体重降低(P<0. 01),腹膜后脂肪显著减少(P<0. 001),病理切片肝细胞内可见少量脂滴、腹膜后脂肪细胞体积缩小;结肠组织 GLP-1 mRNA 表达升高(P< 0. 01),血浆中 GLP-1 含量增多(P< 0. 001),肝 SREBP-1c 的 mRNA 表达降低(P<0. 001),SREBP-1c 蛋白表达减少;低蛋白组与模型组在体重、腹膜后脂肪以及 GLP-1、SREBP-1c 的 mRNA 表达方面差异无统计学意义。 结论 长期高蛋白饮食可以改善 OVX 小鼠体重增加和肝脂肪变性,这可能与高蛋白饮食促进肠道分泌 GLP-1、下调肝 SREBP-1c 的 mRNA 及蛋白表达,发挥类似雌激素的作用有关。

摘要: 目的 通过 SYRCLE 动物实验风险评估工具、ARRIVE 2019 指南和 GSPC 清单评价电针干预脊髓损伤后神经源性膀胱的动物实验的报告质量,寻找提高电针干预脊髓损伤后神经源性膀胱动物实验报告质量的方法。 方法 计算机检索 CNKI、WANFANG、VIP、SinoMed、PubMed、Web of science 和 Cochrane library 等数据库, 寻找电针干预治疗神经源性膀胱的动物实验,按照 SYRCLE 动物实验风险评估工具、ARRIVE 2019 指南和 GSPC 清单的各个条目提取数据,通过 Excel 2019 进行统计分析,STATA 软件进行系统评价分析。 结果 最终纳入了 26 项研究,SYRCLE 动物实验风险评估工具中所有研究的总评分普遍偏低,均在 10 ~ 14 分,偏倚风险偏高,仅有 18 项研究使用了“随机数字表法” ,有 21 项研究在实验过程中有动物数量的缺失但均未采取措施或描述对实验结果的影响。 ARRIVE 2019 指南中必备条目的低风险率为 43. 14%,而推荐条目的低风险率仅有 23. 56%,GSPC 清单的低风险率为 20. 45%。 主要情况有 21 项研究报道了剔除动物,大多是因死亡、其他并发症或者造模失败; 18 项研究采用随机数字表法,8 项研究仅提及随机而未指明方法;8 项研究详细描述了动物品种、年龄、性别和重量等;2 项研究既提供了动物许可证号又表明通过伦理审查;3 项研究描述了实验过程中为减少疼痛和折磨而采取的措施;6 项研究讨论了研究的局限性。 9 项研究讲述了当前 SCI 后 NGB 的研究进展并提供相关参考文献,指出当前治疗中存在的不足并确立明确的研究目标;2 项研究对实验工作人员描述了具体结局指标及测量方法; 26 项研究均对主要发现进行了讨论并对结果带给临床意义和整个科学的意义进行阐述。对研究结果进行系统 评价发现电针较模型组可以提高膀胱最大容量和膀胱顺应性,降低膀胱漏尿点压力。 结论 当前公开发表的有关电针干预脊髓损伤后神经源性膀胱的动物实验报告质量普遍偏低,对多个条目的描述不完整,导致读者无法客观、准确得评估该动物实验可能产生的偏倚风险的高低,甚至会影响读者对动物研究是否可以进一步向临床研究的转化的判断。建议采取针对性的措施进一步推广和使用 SYRCLE 动物实验偏倚风险评价工具及实验研究报告规范(ARRIVE2019 指南和 GSPC 清单) ,能够进一步改进动物实验的设计、实施和报告,提高动物实验研究的可重复性和实验结果的再现性。

摘要: 目的 探讨 OSTN 的反义 RNA 1(OSTN-AS1)对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。 方法 收集 25 例前列腺癌患者的癌组织和对应癌旁组织 RT-qPCR 检测组织中 OSTN-AS1 和 miR-330 的表达。 体外培养前列腺癌 PC-3M 细胞,分别转染 OSTN-AS1 小干扰 RNA、miR-330 抑制剂或共转染 OSTN-AS1 小干扰 RNA 与 miR-330 抑制剂。流式细胞仪检测细胞周期,克隆形成实验检测细胞克隆形成数,Transwell 检测细胞迁移和侵 袭,RT-qPCR 检测 miR-330 和 MMP-2 的 mRNA 表达。双荧光素酶报告基因实验验证 OSTN-AS1 与 miR-330 及 miR- 330 与 MMP-2 调控关系。将转染后的 PC-3M 细胞接种至裸鼠皮下,饲养 4 周后,剥离肿瘤并称重。 结果 前列腺00癌组织中 OSTN-AS1 表达升高(P<0. 05),而 miR-330 表达降低(P<0. 05)。下调 OSTN-AS1 可阻滞体外 PC-3M 细 胞的细胞周期进程,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,同时抑制体内肿瘤生长。下调 miR-330 促进体外 PC-3M 细胞的细胞周期进程及增殖、迁移和侵袭能力,同时促进体内肿瘤生长。 OSTN-AS1 负调控 miR-330 表达,miR-330 负调控 MMP-2 表达。下调 OSTN-AS1 对体外 PC-3M 细胞的细胞周期、增殖、迁移和侵袭的抑制作用及体内肿瘤生长抑制作用可被下调 miR-330 逆转。 结论 OSTN-AS1 可能通过调控 miR-330 / MMP-2 轴促进前列腺癌发展进程,其可能成为前列腺癌治疗的分子靶点。

摘要: 目的 探讨长链非编码 RNA HOXA-AS3( lncRNA HOXA-AS3)对小细胞肺癌耐药性细胞 DMS114 / DDP 的影响及其对微小 RNA-340-5p(miR-340-5p)的调控作用。 方法 采用 qRT-PCR 法检测肺癌组织及癌旁组织 中 HOXA-AS3、miR-340-5p 的表达量;体外培养小细胞肺癌细胞 DMS114,采用顺铂浓度递增法建立耐药细胞 DMS114 / DDP,分别将 si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3 与 anti-miR-NC、si-HOXA-AS3 与 anti-miR-340-5p 转染至 DMS114 / DDP 细胞;采用 qRT-PCR 法检测细胞中 HOXA-AS3、miR-340-5p 的表达量;采用 CCK-8 法检测细胞存活率及计算顺铂 IC₅₀值;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测 HOXA-AS3、miR-340-5p 的靶向关系。 结果 肺癌组织中 HOXA-AS3 的表达水平升高(P<0. 05),miR-340-5p 的表达水平降低(P<0. 05);不同浓度的顺铂处理后 DMS114 细胞、DMS114 / DDP 细胞存活率逐渐降低(P<0. 05),且 DMS114 / DDP 细胞 IC₅₀值高于 DMS114 细胞(P<0. 05);与 DMS114 细胞比较,DMS114 / DDP 细胞中 HOXA-AS3 的表达水平升高(P<0. 05);转染 si-HOXA- AS3 可明显降低细胞活力(P<0. 05),提高凋亡率(P< 0. 05);双荧光素酶报告实验证实 HOXA-AS3 可靶向结合 miR-340-5p;共转染 si-HOXA-AS3 与 anti-miR-340-5p 可明显提高细胞活力(P<0. 05),降低凋亡率(P<0. 05)。 结论 干扰HOXA-AS3 表达可抑制细胞增殖及促进细胞凋亡进而增强 DMS114 / DDP 细胞顺铂敏感性,其作用机制可能与上调 miR-340-5p 的表达有关。

摘要: 目的 探讨长链非编码 RNA 前列腺癌相关转录物 1(PCAT1)调控舌鳞状细胞癌(TSCC)增殖、迁移侵袭和谷氨酰胺分解的调控机制。 方法 实时荧光定量聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 TSCC 癌组织、癌旁组织、 TSCC 细胞和常口腔角质细胞中 PCAT1、miR-329-3p 的表达情况。 脂质体转染法将 pcDNA 组( 转染 pcDNA)、 pcDNA-PCAT1 组( 转染 pcDNA-PCAT1)、miR-NC 组( 转染 miR-NC)、miR-329-3p 组( 转染 miR-329-3p mimics)、 pcDNA-PCAT1+miR-NC 组( 共转染 pcDNA-PCAT1 和 miR-NC)、 pcDNA-PCAT1 + miR-329-3p 组( 共转染 pcDNA- PCAT1 和 miR-329-3p mimics)转染至 UM1 细胞;细胞计数试剂盒(CCK-8)、迁移实验(Transwell)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞增殖、迁移侵袭和谷氨酰胺分解产物谷氨酸盐、α-酮戊二酸(α-KG)水平。双荧光素酶试验检测细胞中 PCAT1 与 miR-329-3p 之间的结合力。 结果 与癌旁组织组相比,癌组织组 PCAT1 表达明显上调,miR- 329-3p 表达明显下调;与 NHOK 组相比,UM1、CAL-27、SCC25 细胞中 PCAT1 表达均上调,miR-329-3p 表达均下调 (P<0. 05);与 pcDNA 组相比,pcDNA-PCAT1 组 PCAT1 表达明显上升,细胞增殖率、细胞侵袭数和细胞侵袭数均发生上调,谷氨酸盐水平和 α-KG 水平也发生明显升高(P<0. 05);PCAT1 可靶向调控 miR-329-3p;与 miR-NC 组相 比,miR-329-3p 组 TSCC 细胞 miR-329-3p 表达显著升高,细胞增殖率、细胞迁移数和细胞侵袭数均显著降低,谷氨酸盐水平和 α-KG 水平均明显降低(P< 0.05);与 pcDNA-PCAT1+miR-NC 组相比,pcDNA-PCAT1+miR-329-3p 组 PCAT1 表达显著降低,细胞增殖率、迁移细胞数和侵袭细胞数均明显降低,谷氨酸盐水平和 α-KG 水平也显著下调 (P<0. 05)。 结论 PCAT1 促进 TSCC 细胞增殖、迁移侵袭和谷氨酰胺分解,其机制与靶向 miR-329-3p 有关。

摘要: 目的 探讨普鲁卡因通过细胞外信号调节激酶(ERK) / 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) / 黏着斑激酶 (FAK)通路抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭过程。 方法 体外培养人骨肉瘤 Saos-2 细胞,分为对照组(不含药物)、普鲁卡因组( 2 μmol / L 普鲁卡因)、Y15 组( 10 μmol / L Y15) 和普鲁卡因+Y15 组( 2 μmol / L 普鲁卡因+ 10 μmol / L Y15)。 CCK-8 法检测各组 Saos-2 细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组 Saos-2 细胞凋亡情况;Transwell 法检测各组 Saos-2 细胞迁移、侵袭情况;蛋白印迹(Western blot)法检测各组 Saos-2 细胞中 ERK/ MAPK/ FAK 通路相关蛋白表达情况。 结果 与对照组相比,普鲁卡因组、Y15 组、普鲁卡因+Y15 组 Saos-2 细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数、p-ERK/ ERK、p-p38 MAPK/ p38 MAPK、p-FAK/ FAK 蛋白水平显著降低(P<0. 05),细胞凋亡率显著升高 (P<0. 05);与 Y15 组细胞相比,普鲁卡因组 Saos-2 细胞存活率、细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数、p-ERK/ ERK、p-p38 MAPK/ p38 MAPK、p-FAK/ FAK 蛋白表达水平的变化无统计学意义(P>0. 05)。 结论 普鲁卡因可以抑制骨肉瘤 Saos-2 细胞的增殖、迁移及侵袭过程,可能是通过抑制 ERK/ MAPK/ FAK 通路激活发挥作用。

摘要:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是最常见的神经退行性疾病之一,它主要的病理学标志包括神经纤维缠结(neurofibrillary tangles)和老年斑(senile plaque)形成,其发病机制极为复杂。 Akt 作为胰岛素信号通路的主要因子在调节细胞生长、能量利用、线粒体功能、自噬、氧化应激、突触可塑性及认知功能等方面发挥重要作用。研究显示 AD 患者脑中 Akt 存在不同的翻译后修饰的变化,提示 Akt 的不同翻译后修饰可能与 AD 的发病过 程密切相关。本文从 Akt 切入,阐述其在 AD 发病机制中的可能作用,以期为 AD 的预防与治疗提供新线索。

摘要:现代社会生活状态的改变,以抑郁、焦虑症等为代表的精神疾病的患者数量逐年增多,现有治疗措施治愈率偏低的状况亟待改进。明确这些疾病的病理机制对疾病的防治具有重大意义。精神疾病类模型包括诱导模型和遗传模型两类,遗传模型具有表型稳定、病理进程明确和可干预的窗口期长等优点。本文总结近年来常见的精神类疾病的大、小鼠遗传模型,主要介绍这些模型的行为表型,为基于动物行为的实验性精神科学研究提供参考。

摘要:肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS)是一种常见的功能性胃肠病。目前对其发病机制的认识有限,尚缺乏特异性的诊断手段,缺乏有效的药物治疗方法。 MicroRNA(miRNA)是一类长度约 20~22 个核苷酸组成的非编码 RNA,通过转录后抑制或降解 mRNA,介导基因沉默。研究已发现,在 IBS 患者结肠组织、外周血中存在多种表达差异的 miRNA,同时 miRNA 对 IBS 的肠道菌群、肠道粘膜屏障、肠道低度炎症等方面有着不同程度的影响。对 miRNA 分子调控网络的研究在探索 IBS 复杂的发病机制中具有重要价值。 本文回顾近年来与 IBS 相关的 miRNA 的文献资料,综述 miRNA 参与 IBS 发病的机制,以及探索分析利用 miRNA 诊断和治疗 IBS 的潜在价值。

摘要:糖尿病血管病变是糖尿病较严重的慢性并发症之一。 在高糖状态下,血管正常功能受到损害的同时常常会引起一系列血管并发症,如:糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病、下肢动脉硬化闭塞、主动脉瘤等。而近来的研究表明,自噬作为一种细胞内蛋白质降解途径和一种机体防御机制,在糖尿病血管病变中发挥着重要作用。 此文章综述了自噬相关分子、糖尿病自噬调控途径以及自噬在糖尿病相关血管病变中的不同作用,并对自噬参与糖尿病血管病变的机制进行了深入探讨,提出了靶向自噬的机制研究可能会开辟一个新的治疗糖尿病血管病变途径的学说。

摘要:肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)是评估肾功能的关键临床指标,也是急慢性肾病定义和分期的基础。 在临床实践中,GFR 评估主要基于血清肌酐值、尿素氮的经验转换,但敏感度较低,不足以诊断亚临床或临界状态的肾功能衰竭,也不能评估单侧肾功能,而临床迫切需要一种既可快速准确评估 GFR,又能提供详细肾解剖结构的无创检查方法,以避免早期肾损伤的漏诊。近年研究表明,计算机断层扫描尿路造影、结合深度学习法自动分割技术的定量单光子发射计算机断层显像-电子计算机 X 射线断层扫描及磁共振尿路成像等技术对快速、客观全面评估 GFR 有很大价值,未来可能成为临床 GFR 评估的主要影像学手段。本文综述近年来影像法评估 GFR 的改良进展并分析新技术的优点及不足。