• 2022年第32卷第7期文章目次
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    • 槲皮素通过 Pink1 / Parkin 信号通路减轻阿霉素心肌损伤的作用机制研究

      2022, 32(7):1-9. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 001

      摘要 (1720) HTML (0) PDF 6.67 M (1283) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 阿霉素(doxorubicin, Dox)的临床应用受到其剂量依赖的心脏毒性的限制,本研究拟探究槲皮素(Quercetin, Que)在 Dox 诱导的细胞毒性中的作用机制。 方法 将小鼠随机分为 Con 组、Que 处理组、Dox 组、 Dox-Que 组,将分离的乳鼠心肌原代细胞(neonatal mouse cardiomyocytes, nmCMs)随机分为 Dox-Vehicle 组、Dox-Que 组、Dox-Que-SB 组、Dox-SB 组及 Dox-3 MA 组。 细胞活力以 CCK-8 试剂盒检测、同时检测 ATP 生成及 ROS 生成,此外以 Western blot方法检测线粒体自噬标志蛋白的表达情况。 结果 在体研究证实,Que 可通过抑制线粒体自噬并降低心肌纤维化抵抗 Dox 诱导的心肌毒性。 体外研究表明,Dox 处理可显著降低 nmCMs 细胞活性,ATP 含量及增加 ROS 生成,同时线粒体自噬被显著激活(P<0. 05),Que 预处理可通过抑制线粒体自噬的激活而缓解 Dox 诱导的心肌细胞损伤,并降低 ROS 生成及增加线粒体 ATP 含量。 我们进一步的研究证实 Que 对线粒体自噬的抑制作用是 Pink1 / Parkin 分子通路介导的,而 SB 处理可通过激活线粒体自噬而部分抵消 Que 对 Dox 诱导的心肌毒性的保护作用。 结论 Que 通过抑制 Pink1 / Parkin 介导的线粒体自噬的激活,促进 ATP 生成及降低 ROS 活性,缓解 Dox 引起的心肌毒性。

    • 基于数据挖掘的慢性阻塞性肺疾病模型应用分析

      2022, 32(7):10-17. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 002

      摘要 (1640) HTML (0) PDF 2.11 M (944) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 探索慢性阻塞性肺疾病(COPD)动物模型的造模要素,为本模型的建立和评价的规范化和标准化提供方法学参考和建议。 方法 以慢性阻塞性肺疾病合并动物模型为主题词在中国知网、万方数据库中进行搜索近十年相关文献(2011 年 1 月~ 2021 年 7 月),整理归纳模型中涉及的动物种别、造模方法与周期、检测指标、给药时间、阳性对照药及证候造模情况等内容,建立数据库进行统计分析。 结果 共纳入 176 篇文献,COPD 模型中应用最多的是 SD 大鼠(83 次,47. 16%)、Wistar 大鼠(59 次,33. 52%)和 C57 小鼠(14 次,7. 95%),倾向于雄性(140 次,79. 55%);造模方式多选用烟雾暴露联合脂多糖(91 次,52%)或单纯烟雾暴露(34 次,19. 43%),造模周期多为 3 个月内(147 次,83. 52%);检测最多的指标为肺组织病理(137 次,24. 82%)、肺功能(79 次,14. 31%)、一般状况(63 次,11. 41%)、肺泡灌洗液(56 次,10. 14%)等;在含有阳性对照药的 46 项研究中,应用最多的是氨茶碱(7 次),其次为地塞米松和固本咳喘片(各 4 次);18 项涉及证候造模的研究中频次最高的是肺气虚证(8 次)。 结论 现有 COPD 模型多采用烟雾暴露联合脂多糖滴注或单纯烟雾暴露方法造模,选用 SD/ Wistar 大鼠或 C57 小鼠作为实验动物,周期在 3 个月内,能够有效提升 COPD 造模的成功率,模型评价指标建议综合肺组织病理、肺功能、一般状况和肺泡灌洗液等结果。 但目前仍缺乏对不同造模方式的比较以及造模所用具体参数的确立,有待进一步探究。

    • 连翘提取物通过调节巨噬细胞凋亡和极化抑制 LPS 诱导的炎症作用

      2022, 32(7):18-26. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 003

      摘要 (1394) HTML (0) PDF 12.31 M (2261) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 研究连翘提取物(FSE)对脂多糖(LPS)诱导炎症的抑制作用,以及 LPS 诱导的 RAW264. 7 细胞极化模型建立。 方法 MTT 法检测 FSE 和 LPS 对 RAW264. 7 细胞的毒性作用;倒置显微镜检测不同浓度的 FSE 对 LPS 刺激后的细胞形态变化,酶标仪检测细胞上清液的一氧化氮(NO)生成量;荧光显微镜检测细胞内活性氧 (ROS)和细胞凋亡的荧光强度;Real-time PCR 法检测巨噬细胞中 iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、Arginase-1 和 CD206 mRNA 的表达水平。 结果 MTT结果发现 FSE 在 50 μg / mL 浓度时无细胞毒性,LPS 作用 36 h 时,不同浓度 FSE 对 LPS 刺激的细胞形态变化和 NO 生成有抑制作用,同时 FSE 可以抑制 LPS 刺激后活性氧(ROS)的减少和细胞的凋亡,Real-time PCR结果显示,用不同浓度(100、250、500、750 ng / mL) LPS 处理细胞 24 h,或者用 500 ng / mL 浓度的 LPS 处理细胞不同时间后,RAW264. 7 细胞 M1 型标记基因(TNF-α、IL-1β、iNOS、IL-6)mRNA 的表达水平明显升高,RAW264. 7 细胞 M2 型标记基因(IL-10、Arginase-1、CD206)mRNA 的表达水平明显降低;FSE 可降低 LPS 诱导的 M1 型标记基因 mRNA 的表达水平,升高 M2 型标记基因 mRNA 的表达水平。 结论 FSE 可通过抑制 RAW264. 7 细胞凋亡和促进 RAW264. 7 细胞的极化来抑制 LPS 诱导的炎症反应。

    • 真武汤对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及 PI3K-AKT 通路的影响

      2022, 32(7):27-33,57. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 004

      摘要 (1904) HTML (0) PDF 13.36 M (32263) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 观察真武汤对冠脉结扎心衰大鼠模型的治疗作用及对心衰大鼠心肌病理形态学及心肌细胞凋亡的影响,探讨其对凋亡相关蛋白及 PI3K-AKT 信号通路的影响。 方法 术后 4 周采用随机数字表法将存活的大鼠分为 6 组,每组 7 只:(1)假手术组:术后 4 周给予生理盐水灌胃 28 d;(2)模型组:造模 4 周后予生理盐水灌胃 28 d;(3)阳性对照组:造模 4 周后予氯沙坦钾 5 mg / kg 灌胃 28 d;(4)真武汤低剂量组:造模 4 周后予真武汤生药量 6 g / kg 灌胃 28 d;(5)真武汤中剂量组:造模 4 周后予真武汤生药量 12 g / kg 灌胃 28 d;(6)真武汤高剂量组:造模 4 周后予真武汤生药量 18 g / kg 灌胃 28 d。 观察各组大鼠造模前后心电图、彩超变化、心肌细胞凋亡、心肌形态学变化、心肌组织 PI3K、AKT1、p-AKT1 蛋白水平变化、免疫组化 Bax、Bcl-2、Caspase3、8、9 变化及腹主动脉血 BNP 变化。 结果 (1)心电图显示经过冠脉结扎心衰模型制备大鼠心电图 ST 段抬高,提示造模成功;(2)心衰大鼠左心质量指数、BNP 水平显著升高,彩超提示 LVEF、LVFS 均明显下降,其余各组左心质量指数、BNP 水平、LVEF、LVFS 均有改善(P<0. 01);(3)HE 染色提示模型组心肌纤维排列紊乱、断裂,同时并伴随着心肌细胞肿胀、肥大,有炎性细胞浸润,其余各组存在不同程度的缓解。 TUNEL 染色提示模型组凋亡现象严重,经真武汤及阳性药干预后凋亡现象减轻;(4)免疫组化结果提示与模型组相比,各给药组大鼠 Bcl-2 升高,Bax、Caspase3、8、9 下降,其中真武汤中剂量组各蛋白表达与假手术无明显差异;(5)与假手术组相比,模型组 PI3K、p-AKT1、AKT1 表达均升高,真武汤可抑制 PI3K、p-AKT1、AKT1 蛋白量的表达(P<0. 05)。 结论 真武汤可能通过调控 PI3K-AKT 通路减轻 HF 大鼠心肌细胞凋亡及心肌病理改变,增强 HF 大鼠心肌收缩力,进而延缓大鼠心衰进程。

    • PD98059 抑制哮喘中 TGF-β1 诱导的人支气管上皮细胞上皮间质转化进程

      2022, 32(7):34-40. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 005

      摘要 (1526) HTML (0) PDF 5.92 M (1369) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 探究 PD98059 对转化生长因子 β1(TGF-β1)诱导人支气管上皮细胞 BEAS-2B 上皮间质转化 (EMT)进程的影响及可能的分子机制。 方法 本研究采用人支气管上皮细胞(BEAS-2B),使用 TGF-β1 诱导 BEAS-2B 上皮间质转化模型,使用 ERK1 / 2 抑制剂 PD98059 探究抑制 ERK/ MAPK 信号转导是否影响 EMT 进程。 通过免疫荧光检测 BEAS-2B 气道重塑模型 α-SMA 蛋白的表达及定位;CCK-8 法检测各组细胞存活率;Edu 实验检测各组细胞增殖能力水平;transwell 实验检测各组细胞迁移能力水平;Western blot 检测各组 EMT 标志蛋白表达及 ERK/ MAPK 通路的激活情况。 结果 与正常组相比, 模型组 α-SMA 表达增加,α-SMA 在 BEAS-2B 细胞胞质上表达。 PD98059 在 40 μmol / L 浓度与 5 ng / mL TGF-β1 共处理抑制 BEAS-2B 细胞生长(P<0.05)。 与三组 Edu 阳性率无显著差异(P>0.05)。 与正常组相比,模型组迁移细胞数增加(P< 0.05),上皮间质化标志蛋白表达增加(P< 0.05),p-ERK 蛋白表达增加(P<0. 05),PD98059 可以明显减少迁移细胞数(P<0.05),抑制上皮间质化标志蛋白的表达(P<0. 05)及 ERK 通路的激活(P<0.05)。 结论 TGF-β1 可能通过 ERK/ MAPK 通路促进人支气管上皮细胞上皮间质转化进程,PD98059 可以通过抑制 ERK/ MAPK 通路的激活抑制支气管上皮细胞 EMT 进程。

    • 不同运动方式对大鼠骨骼肌 MSTN 和 IGF1 的影响比较

      2022, 32(7):41-48. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 006

      摘要 (1218) HTML (0) PDF 6.05 M (1151) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 探究不同运动方式对大鼠骨骼肌生长因子 MSTN 和 IGF1 的影响,为选择合适的运动方式以改善骨骼肌功能提供理论依据。 方法 SD 大鼠 40 只,随机分为 4 组,每组 10 只,分别为安静对照组、持续游泳运动组、高强度间歇游泳运动组和负重爬梯运动组。 各运动组进行为期 8 周的运动训练后,与安静对照组一起麻醉处死,收集样本。记录各组大鼠的体重、腓肠肌质量,HE 染色观察腓肠肌的横截面积变化,ELISA方法检测大鼠血清 MSTN、IGF1 和胰岛素(insulin)的水平,Western blot 方法检测大鼠腓肠肌 MSTN、IGF1、p70S6K 的表达。 结果 3 个运动组的大鼠体重均显著低于安静对照组(P<0.01),持续游泳运动组腓肠肌质量显著低于安静对照组(P< 0.05),其他两组大鼠腓肠肌质量没有显著变化(P>0.05);3 个运动组腓肠肌横截面积显著低于安静对照组(P< 0. 05),爬梯运动组和高强度间歇游泳运动组腓肠肌横截面积显著高于持续游泳运动组(P<0.05)。 ELISA结果显示,3 个运动组血清 IGF1 水平均显著低于安静对照组(P<0.01),而 MSTN 和 insulin 水平均没有显著变化。 爬梯运动组腓肠肌 MSTN 蛋白表达显著低于安静对照组(P<0.01),而 IGF1 和 P70S6K 的蛋白表达显著高于安静对照组 (P<0. 01),持续游泳运动组腓肠肌 p70S6K 的蛋白表达也显著高于安静对照组(P<0. 05)。 结论 3 种运动方式相比,爬梯运动和高强度间歇游泳运动虽然都上调腓肠肌质量指数,但对骨骼肌 MSTN 和 IGF1 的影响不同。爬梯运动下调 MSTN 的表达,上调 IGF1 和 p70S6K 的表达,而高强度间歇游泳运动对骨骼肌 MSTN、IGF1 和 p70S6K 的影响不显著。 爬梯运动可能通过降低 MSTN 并增加 IGF1 和 P70S6K 的蛋白表达增加腓肠肌横截面积。

    • 全塑型塑胶跑道面层材料对大鼠静式吸入毒性研究

      2022, 32(7):49-57. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 007

      摘要 (1282) HTML (0) PDF 3.82 M (924) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 研究全塑型塑胶跑道面层材料对大鼠静式吸入毒性。 方法 将检疫合格的雌、雄性 SD 大鼠随机分为 4 组,分别为 30 d 正常对照组、30 d 染毒组、90 d 正常对照组和 90 d 染毒组,每组 16 只,雌雄各半,每天吸入 1 h,分别染毒 30 d 和 90 d。 实验结束后,对各组大鼠进行剖检,检测凝血、血常规、血生化指标,计算脏器系数, 并对各脏器进行组织病理学检查。 结果 与同期正常对照组比较,30 d 染毒组雄鼠凝血酶时间( TT) 缩短(P< 0. 05),90 d 染毒组雌鼠活化部分凝血活酶时间(APTT) 延长(P< 0. 01)。 30 d 染毒组雌鼠血清 Ca、P 降低(P< 0.05,P<0.01),雄鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)升高;90 d 染毒组雌鼠血清 BUN、P 升高(P<0.05,P<0.01)及 Na、Cl 降低(P<0.01),雄鼠血清 BUN、总蛋白(TP)升高(P<0.05)。 30、90 d 染毒组雄鼠肾上腺系数均增大(P< 0. 01)。 30 d 染毒组大鼠肝汇管区轻度肝细胞脂肪变性 3 例,肺细小支气管上皮脱落 3 例,肾囊肿 1 例,睾丸个别曲细精管萎缩 1 例。 90 d 染毒组大鼠肝汇管区轻度肝细胞脂肪变性 6 例,肺细小支气管上皮脱落 2 例,肾上腺束状 带细胞灶性肥大 1 例,睾丸个别曲细精管萎缩 2 例,肾个别肾小球毛细血管扩张 2 例、肾囊肿 1 例、透明管型 4 例、 矿化 1 例、肾盂积水 1 例。 结论 在本实验条件下,30 d 吸入暴露全塑型塑胶跑道面层材料对 SD 大鼠肝、肺、睾丸、肾影响较轻,90 d 吸入暴露对大鼠肾损伤加重。

    • miR-30b 在高磷诱导的血管平滑肌细胞凋亡中的作用

      2022, 32(7):58-65. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 008

      摘要 (1255) HTML (0) PDF 9.76 M (1182) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 观察微小 RNA30b(microRNA 30b,miR-30b)在高磷诱导的血管平滑肌细胞( vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡中的作用及机制。 方法 体外培养大鼠胸主动脉 VSMCs,分为正常组和高磷组(给予 10 mmol / L β-甘油磷酸盐刺激)。 采用实时荧光定量 PCR 检测各组 VSMCs miR-30b 表达、Western blot 法测定促凋亡基因 BAX、抑凋亡基因 Bcl-2 的表达情况,采用 MTT 法检测各组细胞的增殖情况、采用流式细胞法检测各组细胞的凋亡情况。 为进一步验证 miR-30b 对 VSMCs 凋亡的影响,给与转染 miR-30b 的抑制物 inhibitor-30b 和类似物 mimic-30b,观察 VSMCs 增殖和凋亡情况以及 BAX、Bcl-2 表达情况。 结果 (1)高磷对 VSMCs 凋亡的影响:流式结果显示,高磷组 VSMCs 凋亡细胞显著增多(P<0.05);MTT结果显示,高磷组细胞增殖减少(P<0. 05);高磷组 BAX 表达升高、Bcl-2 表达降低(P<0.05);高磷组 miR-30b 的表达显著下降(P<0. 05)。 (2)miR-30b 对 VSMCs 凋亡的影响:转染 inhibitor-30b 后 VSMCs 凋亡细胞显著增多(P<0. 05);转染 inhibitor-30b 后 MTT 显示细胞增殖减少(P<0.05);转染 inhibitor-30b 后,BAX 表达升高、Bcl-2 表达降低(P<0.05);转染 mimic-30b 后 VSMCs 凋亡细胞显著减少 (P<0.05);转染 mimic-30b 后,BAX 表达降低、Bcl-2 表达升高(P<0.05)。 结论 高磷可以诱导细胞凋亡,其可能机制之一是高磷通过抑制 miRNA-30b 表达,进而促进凋亡基因 BAX 表达,降低抑凋亡基因 Bcl-2 表达,导致 VSMCs 发生凋亡。

    • miR-219a-5p 在胃癌中的甲基化调控及生物学功能研究

      2022, 32(7):66-73. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 009

      摘要 (1158) HTML (0) PDF 8.06 M (1081) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 检测 miR-219a-5p 在胃癌及其癌旁组织中的表达并分析其启动子区域甲基化水平,探讨其对胃癌细胞系生物学功能的影响。 方法 利用实时荧光定量 PCR (Real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR) 和甲基化特异性 PCR (methylation specific PCR,MSP)方法检测胃癌及其癌旁组织中 miR-219a-5p 的表达及甲基化水平,通过细胞增殖实验和流式细胞仪检测过表达 miR-219a-5p 后对胃癌细胞增殖和凋亡的影响;体外细胞迁移和侵袭实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力。 结果 miR-219a-5p 的表达水平在胃癌患者的癌组织中呈现普遍下调,miR-219a-5p 在癌组织中的相对表达量(0. 769±0. 95)明显低于癌旁组织表达(2. 114±5. 10),差异具有统计学意义(P<0.05);且 miR-219a-5p 表达下调组的 DNA 甲基化水平比表达上调组明显升高;过表达 miR-219a- 5p 的胃癌细胞系 MGC-803 细胞增殖能力和迁移侵袭能力明显受到抑制(P<0.05),过表达组凋亡比例明显增高(P<0.05),凋亡相关蛋白 caspase-3 的表达水平明显升高(P<0.05)。 结论 miR-219a-5p 在胃癌组织中受甲基化调控普遍低表达,且其具有抑制细胞增殖和迁移的能力,促进细胞凋亡等类似抑癌基因的作用,有望成为胃癌新的诊疗靶点。

    • 大豆皂苷 Bb 预处理对脑缺血再灌模型大鼠的神经保护作用

      2022, 32(7):74-80. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 010

      摘要 (1328) HTML (0) PDF 7.27 M (1213) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 探讨大豆皂苷 Bb(soyasaponin Bb,SSBb)预处理对脑缺血/ 再灌注( ischemia / reperfusion,I/ R) 大鼠的神经保护作用。 方法 将 SD 大鼠分为假手术组、模型组和低、高剂量 SSBb 预处理组,每组 15 只大鼠。 通过线栓法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠模型,并于闭塞后 2 h 实现再灌注,用来模拟脑 I/ R。 低、高剂量 SSBb 预处理组在 MCAO 术前 1 h 分别灌胃 20 和 50 mg / kg SSBb。 再灌注 24 h 后,用改良 神经损伤严重缺损评分表(modified neurological severity score,mNSS)评估神经功能缺陷,用 2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenytetrazolium chloride,TTC) 检测脑梗死体积,用微管相关蛋白-2( microtubule-associated protein-2, MAP-2)染色法评估神经元损伤,用干/ 湿称重法检测脑含水量,用免疫荧光法检测缺血半暗带中肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α) 表达水平,用 Western blot 检测突触后致密蛋白-95( postsynaptic density-95,PSD- 95)、突触素 I(synapsin I)和突触结合蛋白(synaptotagmin)的表达水平。 结果 与模型组比较,低和高剂量 SSBb 预处理均能显著改善 MCAO 模型大鼠的神经功能缺陷、减轻脑水肿和脑梗死,并降低缺血半暗带中 TNF-α 的表达水平和 PSD-95、synapsin I 和 synaptotagmin 的表达水平(均 P<0. 01 和 P<0. 001);其中高剂量组作用最为显著(P< 0. 001)。 结论 SSBb 预处理在脑 I/ R 损伤大鼠中发挥的神经保护作用。

    • 白黎芦醇对小鼠卵巢早衰的干预作用及可能机制

      2022, 32(7):81-86,93. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 011

      摘要 (1017) HTML (0) PDF 6.82 M (1414) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 观察白藜芦醇对卵巢早衰小鼠的干预作用,并阐述其可能机制。 方法 40 只两月龄雌性小鼠随机分为 4 组,分别为对照组(Control)、模型组(Model group)、20 mg / kg RES 组(20 mg / kg RES group)和 40 mg / kg RES 组(40 mg / kg RES group),每组 10 只。 测量小鼠体重、卵巢重量和卵巢/ 小鼠相对重量比;采用 HE 染色观察小鼠卵巢组织中卵泡数量变化;RT-qPCR 法检测卵巢组织中 CyclinD1、Wnt1 和 β-catenin mRNA 表达;免疫组化染色观察卵巢组织中 β-caterin 蛋白表达;Western blot 法检测卵巢组织中 Mvh、Oct4、SOD2、Nrf2、Bax 和 Bcl-2 蛋白表达。 结果 20 mg / kg RES 组和 40 mg / kg RES 组小鼠体重、卵巢重量和卵巢/ 小鼠重量比均高于模型组;与模型组比较,20 mg / kg RES 组和 40 mg / kg RES 组小鼠原始卵泡数量增加、闭锁卵泡数量下降(P<0. 05),而卵巢组织中 CyclinD1、Wnt1 和 β-catenin mRNA 表达增加(P<0. 05);与模型组比较,20 mg / kg RES 组和 40 mg / kg RES 组小鼠卵巢组织中 β-caterin 阳性蛋白表达升高,且呈浓度依赖性;与模型组比较,20 mg / kg RES 组和 40 mg / kg RES 组小鼠卵巢组织中 Mvh、Oct4、SOD2、Nrf2 和 Bcl-2 蛋白表达升高,Bax 表达下降(P<0. 01)。 结论 白藜芦醇对卵巢早衰小鼠具有保护作用,其机制可能与抑制卵巢细胞凋亡,激活 Wnt / β- catenin 通路促进卵巢功能恢复有关。

    • 高原寒冷环境大鼠急性肺水肿模型的建立

      2022, 32(7):87-93. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 012

      摘要 (1347) HTML (0) PDF 3.75 M (1254) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 建立高原低压缺氧、寒冷环境大鼠急性肺水肿模型,同时探讨寒冷因素对高原急性肺水肿形成的影响。 方法 雄性健康 SD 大鼠 100 只,随机分为 2 组( n= 50) :高原常温组( HN 组) 和高原寒冷组( HC 组) 。 每组再按 5 个时间点分成 5 个亚组( n= 10) :0、24、48、72、120 h。 将这两组大鼠放置人工实验舱内模拟海拔 7000 m 的低压缺氧环境,并设置常温和寒冷两种环境温度,在相应时间点麻醉大鼠,取肺泡灌洗液(BALF)以及肺组织。 检测 BALF 蛋白质浓度及肺组织 W / D 值;将肺组织制片,HE 染色,观察病理变化。 结果 HN 组及 HC 组大鼠肺组织 W / D 值随暴露时间呈升高趋势,HN 组的大鼠肺组织 W / D 值在 72 h 时达到最高,HC 组的大鼠肺组织 W / D 值在 48 h 时达到最高,在 48、72 和 120 h,HC 组的肺组织 W / D 值均高于 HN 组,差异均具有统计学意义(P<0. 05) 。 BALF 蛋白质浓度和肺组织病理的变化趋势与肺组织 W / D 值的变化相同,HN 组的 BALF 蛋白质浓度和肺损伤评分均在 72 h 时达到最高,其值依次为( 0. 2802±0. 0243) 、( 1. 7778±0. 4410) mg / mL,HC 组的 BALF 蛋白质浓度和肺损伤评分在 48 h 时达到最高,其值分别为( 0. 3352± 0. 0204) 、( 2. 8889± 1. 0541) mg / mL,在 48、72 和 120 h,HC 组的 BALF 蛋白质浓度和肺损伤评分均高于 HN 组,差异均具有统计学意义( P< 0. 05) 。 结论 在人工实验舱模拟海拔 7000 m 高原低压缺氧环境中,在寒冷条件(白天温度 15℃ ,夜间温度 5℃ )下暴露 48 h 可成功构建 SD 大鼠急性高原肺水肿模型,而常温环境需要 72 h 才可成模,研究提示寒冷因素能促进急性高原肺水肿的发生发展。

    • 槲皮素治疗大鼠肺纤维化的作用及相关机制研究

      2022, 32(7):94-100,117. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 013

      摘要 (1408) HTML (0) PDF 6.01 M (1673) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 探讨槲皮素对肺纤维化大鼠肺组织细胞间质转化、炎症及对 NOX4-P62 信号途径的影响,为进一步阐明槲皮素对肺纤维化的作用机制提供实验依据。 方法 将实验大鼠分为对照组、博来霉素组(BLM 组) 和博来霉素+槲皮素组(BLM+QUE 组),分别于造模后第 7、14、28 天观察各组肺组织外观,利用苏木素-伊红染色法(HE 染色)评价肺纤维化情况,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组肺组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶 4(NOX4)、自噬蛋白 P62、核因子 κB(NF-κB)的蛋白表达情况,反转录-聚合酶链反应( qRT-PCR)检测人肺腺癌细胞株 A549 细胞血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和钙粘附蛋白 E(E-cadherin)的 mRNA 表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA 法)检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。 结果 BLM 组随时间增加大鼠肺纤维化呈进行性加重,BLM+QUE 组在第 7 天时症状较 BLM 组轻,在第 28 天时症状明显减轻。 BLM 组的 TGF-β1、IL-1β、TNF-α、NOX4、P62、NF-κB 蛋白表达,较对照组明显上升,差异具有统计学意义(P<0. 05),BLM+QUE 组在第 7 天时较 BLM 组低,但无显著差异(P>0. 05),但在第 14、28 天时较 BLM 组明显下降,差异显著(P<0. 05)。 与对照组比较,加入 TGF-β1 的 A549 细胞 E-cadherin、α-SMA mRNA 的表达分别明显降低和升高(P<0. 05);给予槲皮素后,E-cadherin、α-SMA mRNA 的表达较 TGF-β1 组分别明显升高和降低(P<0. 05)。 结论 槲皮素能够抑制 TGF-β1 对人肺腺癌细胞株 A549 细胞诱导的间质转化的转变,减轻肺纤维化大鼠的炎症反 应,缓解博来霉素所致的大鼠肺纤维化,自噬活性在博来霉素诱导大鼠发生肺纤维化的过程中受到抑制;槲皮素可能通过抑制 NOX4-P62 信号途径,激活自噬,减轻大鼠肺纤维化。

    • 基于 CRISPR/ Cas9 技术构建 Plcz1 基因敲除小鼠模型

      2022, 32(7):101-108. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 014

      摘要 (1182) HTML (0) PDF 2.92 M (992) 评论 (0) 收藏

      摘要: 目的 利用 CRISPR/ Cas9 系统构建精子特异性磷脂酶 C zeta-1(phospholipase C zeta1,Plcz1)基因敲除(Plcz1- / - )小鼠模型,探讨 Plcz1 基因在雄性小鼠生育过程中的作用。 方法 选择小鼠 Plcz1 基因第 6、7 外显子作为靶位点,前后两个位点设计 2 对 sgRNA 序列,再将 2 对 sgRNA 以 Golden Gate方法插入 pX330A 质粒中,构建 pX330-sgRNA 重组质粒。 经扩增、纯化后,将重组质粒显微注射进小鼠受精卵原核中,进行胚胎移植至代孕母鼠, F0 代小鼠出生后,提取其尾 DNA 进行 PCR 鉴定和 DNA 测序分析。 通过 F0 代与野生型小鼠交配得到 F1 代小鼠, F1 代交配繁殖至 F2 代获得 Plcz1 基因缺失的小鼠纯合品系,Plcz1- / -与野生型小鼠交配,分析 Plcz1- / -雄鼠的生育能力。 结果 成功构建 pX330-sgRNA 重组质粒,通过繁育和测序筛选获得 3 只 Plcz1- / - 雄鼠( Plcz1m3 、Plcz1m4 、 Plcz1m5 ),对 3 只小鼠进行目的基因测序发现:(1)Plcz1m3 :Plcz1 基因第 6、7 外显子区域缺失 3078 bp;(2)Plcz1m4 :第 7 外显子区域缺失 7 bp,该小鼠在饲养过程中死亡;(3)Plcz1m5 :Plcz1 基因第 6 外显子区域缺失 1 bp。 结论 利用 CRISPR/ Cas9,成功获得 Plcz1- / -雄性小鼠,Plcz1- / -雄性小鼠可育,但与野生型小鼠相比,其生育能力明显下降。

    • 阳和汤治疗恶性肿瘤的研究进展

      2022, 32(7):109-117. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 015

      摘要 (1357) HTML (0) PDF 922.61 K (1234) 评论 (0) 收藏

      摘要:阳和汤出自清代《外科全生集》,功在温阳补血,散寒通滞。 中医认为阳虚寒痰凝聚是恶性肿瘤发病的重要机制,阳和汤作为温阳散寒通滞的代表方之一,临床上治疗恶性肿瘤应用广泛,尤其在诸多“阳虚型”癌症患者中疗效显著,基于此,文章对 2001 ~ 2021 年 CNKI、万方数据、维普、SinoMed 中国生物医学文献系统、PubMed、 Medline、Embase 数据库以“阳和汤、温阳法、恶性肿瘤(癌症)、网络药理学”为主题进行检索,共检索文献 225 篇,整理、归纳相关文献 94 篇,主要从中医的理论渊源、临床观察、药理研究等方面对阳和汤的作用机制进行概述,同时结合网络药理学进一步探析其应用于恶性肿瘤的可行性,以期为恶性肿瘤的临床治疗提供科学依据。

    • 基于中西医临床病症特点的慢性咽炎动物模型分析

      2022, 32(7):118-123. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 016

      摘要 (1240) HTML (0) PDF 825.37 K (833) 评论 (0) 收藏

      摘要:慢性咽炎是一种临床常见的咽部黏膜、黏膜下及淋巴组织的弥漫性炎症,发病率逐年增高,病程逐渐加长,且慢性咽炎的治疗没有特效药,长此以往导致患者产生了精神压力。 本研究基于慢性咽炎的中、西医临床病症特点,总结现有的慢性咽炎动物实验模型。本文对慢性咽炎病因病机、诊断标准与其动物实验模型的吻合度进行分析,并对现有的模型建立评价体系,分析不同动物模型的优缺点。尽可能完善现有的动物模型,为建立完善的动物模型提供思路,以期促进慢性咽炎的现代研究。

    • PTEN 基因在周围神经损伤修复中的作用机制研究进展

      2022, 32(7):124-130,136. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 017

      摘要 (1372) HTML (0) PDF 961.04 K (941) 评论 (0) 收藏

      摘要:周围神经损伤是影响人类健康的重大疾病之一,由于该病损伤修复机制阐述不明,使其治疗效果不佳,也因此成为临床领域骨科医生的治疗难点。 近年来,第 10 号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因 (phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10, PTEN)在周围神经损伤修复中研究较多,本文就 PTEN 基因通过调控周围神经损伤后的突触再生、炎性及免疫反应、神经元凋亡、神经营养相关因子等过程以及核因子- κB(NF-κB)、磷脂酰肌醇激酶/ 蛋白激酶 B/ 雷帕霉素靶蛋白(PI3K/ AKT/ mTOR)、非受体酪氨酸激酶/ 信号传导及转录激活蛋白(Jak / stat)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路的作用影响周围神经损伤后的修复进程作一综述,为相关研究提供便利。

    • 长链非编码 RNA 在胰腺癌吉西他滨耐药研究中的作用

      2022, 32(7):131-136. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 018

      摘要 (1048) HTML (0) PDF 863.95 K (867) 评论 (0) 收藏

      摘要:获得性耐药是引起胰腺癌高致死率的主要原因,其中吉西他滨耐药在临床中最为常见。 探究胰腺癌吉西他滨耐药的具体分子机制,有助于临床合理使用吉西他滨,提高患者的生活质量和生存率。长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)被报道在胰腺癌吉西他滨耐药中发挥着重要作用,并具有肿瘤耐药后特异性表达的特点,可能成为恢复胰腺癌吉西他滨敏感性的理想靶点。 本文通过总结各种 lncRNA 在胰腺癌吉西他滨耐药中的具体作用机制,以期探索基于 lncRNA 筛选胰腺癌吉西他滨耐药可能的治疗靶点。

    • 初级纤毛相关信号通路在小鼠腭发育中的机制研究进展

      2022, 32(7):137-141. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 019

      摘要 (1025) HTML (0) PDF 815.21 K (807) 评论 (0) 收藏

      摘要:初级纤毛是以微管为基础的细胞器,可感知细胞外机械和化学信号变化,并通过介导多种分子信号通路将信息传导至细胞内,在发育、细胞迁移和细胞分化过程中,扮演着重要角色。近年来有研究发现,小鼠胚胎腭突上皮和间充质细胞上存在初级纤毛,并且,初级纤毛自身及其传递的信号因子与腭发育密切相关。因此本文将近年来针对初级纤毛及相关信号通路导致腭发育异常机制的研究进展作一综述,以期为唇腭裂这一领域的研究者提供新的思考。

    • ALPPS 动物模型构建及相关研究的新进展

      2022, 32(7):142-148. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 020

      摘要 (1052) HTML (0) PDF 4.50 M (1800) 评论 (0) 收藏

      摘要:联合肝分隔和门静脉结扎的二步肝切除术(associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy, ALPPS)能够促进预留肝快速增生,但其具体机制尚不明确。 建立不同肝病背景下的、稳定可复制的 ALPPS 动物模型是对其进行深入研究的必备条件。 本文拟对近年来关于 ALPPS 动物模型的研究进展进行简要综述。

    • 缺血-再灌注氧化损伤机制及其对不同器官功能的影响

      2022, 32(7):149-154. DOI: 10. 3969 / j.issn.1671-7856. 2022. 07. 021

      摘要 (1440) HTML (0) PDF 843.10 K (1118) 评论 (0) 收藏

      摘要:缺血是由于机体组织器官梗死或者血液供应障碍等原因造成的一种局限性缺血性坏死或软化,常发生在肝、肾、脑等器官。在恢复血流供应的初期,往往会引起“缺血-再灌注损伤( ischemia reperfusion injury, IRI)”。氧化应激是诱发缺血-再灌注损伤的重要原因之一,相关研究证实缺血-再灌注氧化损伤会导致活性氧 (reactive oxygen species,ROS)产生,而 ROS 可相应引起器官损伤及功能障碍本综述主要从氧化应激角度对近些年来有关缺血-再灌注氧化损伤的研究进展进行总结,分析这种损伤对各组织器官的影响,旨在进一步揭示缺血- 再灌注氧化损伤机制,为相应疾病的预防和治疗提供思路。

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