摘要: 目的 本文利用Trim44 条件敲除大鼠,分析Trim44 基因敲除后大鼠行为学异常和脑组织的病理改变,探究Trim44 基因在神经系统中的作用机制。 方法 采用蛋白印迹法,免疫组化法检测TRIM44 在脑组织的表达,利用TUNEL 染色观察Trim44 敲除大鼠神经元的凋亡,Y 迷宫、水迷宫和食物迷宫等行为学测试观察敲除大鼠的行为学改变,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白的表达异常。 结果 TRIM44 在脑皮质中表达,敲除大鼠大脑组织中Trim44 敲除效率可达67%;Trim44 敲除导致老年大鼠学习记忆能力下降,神经元凋亡,活性形式的caspase 3、caspase 9 蛋白表达增加。 结论 Trim44 敲除促进神经元凋亡,损害大鼠学习记忆能力。提示了Trim44 在神经系统的重要作用,敲除模型也可以用于深入的机制探索。

摘要: 目的 探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A, HSYA)对大鼠H9C2 心肌细胞缺氧缺糖/ 复氧复糖损伤(oxygen-glucose deprivation/ reperfusion injury,OGD/ R)后氧化应激及细胞凋亡的影响,并探索其可能的作用通路。 方法 大鼠H9C2 心肌细胞稳定传代培养至第三代后,随机分为空白组,缺氧/ 复氧模型组,给药组分为HSYA 低、高剂量组(HSYA40、HSYA80,40、80 μmol/ L),每组设10 个复孔。各组细胞在经药物干预6 h 后,采用CCK-8 法检测细胞活性;生化仪检测培养基中天门冬氨酸转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)的含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率;通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bcl-2),Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)并计算Bcl-2/ Bax 表达,同时检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达并进行半定量分析。 结果 与正常组相比,缺氧缺糖/ 复氧复糖组细胞活性明显低于正常组,培养基中AST、CK、LDH 活性明显升高,SOD,CAT 活性明显降低,MDA 含量升高,细胞凋亡率显著升高,细胞Bcl2 和Bax mRNA 表达明显升高,Bcl2/ Bax 表达显著降低,Caspase-3 蛋白表达水平显著升高。与OGD/ R 组相比,羟基红花色素A 给药组细胞活性明显升高;培养基中AST、CK 和LDH 活性明显降低,SOD、CAT 活性明显升高,MDA 含量降低;细胞凋亡率显著降低;细胞中抑凋亡相关基因Bcl-2 表达上调,而凋亡相关基因Bax 表达明显下调,Bcl2/ Bax 表达显著升高,Caspase-3 蛋白表达水平显著降低。 结论 羟基红花色素A 能够通过抑制H9C2 心肌细胞的氧化应激损伤和凋亡从而对缺氧缺糖/ 复氧复糖损伤的H9C2 心肌细胞起到一定保护作用;其作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑制凋亡基因Bcl-2 表达、下调促凋亡基因Bax 表达,提高Bcl-2/ Bax 表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3 表达有关。

摘要: 目的 观察黄杨宁对心房颤动犬体内氧化应激水平的影响。 方法 15 只比格犬随机分为5 组:空白对照组、模型组、假手术组、黄杨宁组(0. 24 mg/ kg)、普罗布考组(7. 58 mg/ kg)。造模经股静脉穿刺置入双极电极于犬右心耳,尾端连接高频起搏器,给予高频刺激构建犬房颤模型。模型成功标准:起搏1 周后,心电图证实有房颤发生或程控过程中诱发房颤发作,则认为模型成功。术后1 d 开始灌胃,术后1 周开始心房起搏,4 周后取材。马松染色观察心肌纤维变化;ELISA 检测血管紧张素Ⅱ(AngII)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)血清含量;化学发光法检测活性氧(ROS)的含量、比色法测定总抗氧化能力(TAC);RT-PCR、Western blot 测定NADPH氧化酶(Nox)亚单位基因p22、p47 表达水平。 结果 与空白组对比,模型组的血清AngII、NADPH 明显上升(P< 0. 05)、ROS/ TAC 水平明显升高(P< 0. 05);p22、p47 基因表达明显升高;p22、p47 蛋白表达升高。黄杨宁及普罗布考干预后,血清NADPH 水平无明显升高;ROS/ TAC 水平均低于模型组,有显著性差异(P< 0. 05);Rac-1、p22、p47 基因表达低于模型组,统计学有显著性意义(P< 0. 05);P22、P47 蛋白表达均低于模型组,有显著的统计学意义(P< 0. 05)。 结论 黄杨宁可减轻房颤犬的氧化应激水平,其作用机制可能与AngII-NOx-ROS 信号通路有关。

摘要: 目的 为了解虾源达卡气单胞菌的毒力、耐药基因分布和全基因组信息,并初步评估达卡气单胞菌的致病性。 方法 对虾源分离株进行分子鉴定和多位点序列分型;利用β-溶血和胞外蛋白酶实验、秀丽隐杆线虫液体毒性实验、细胞毒实验、小鼠实验及毒力基因检测研究其致病性;通过药敏实验及耐药基因检测分析其耐药特征;利用eggnog、Prophage Hunter 工具对全基因组序列进行分析。 结果 菌株18FX22 鉴定为达卡气单胞菌。该菌的致病性主要表现:有β-溶血能力和胞外蛋白酶活性;对秀丽隐杆线虫、小鼠成纤维细胞和小鼠均有致病性。经检测,该菌携带7 种毒力基因和12 种耐药基因,发现其对阿莫西林/ 克拉维酸、头孢唑林和多粘菌素3 种药物有耐药性。全基因组测序结果发现:18FX22 的全基因组大小为4 811 079 bp,GC 含量为61. 33%。COG 注释发现18FX22 共有3850 个基因,具有20 类功能。前噬菌体预测结果发现18FX22 的基因组中含有2 个前噬菌体序列。全球达卡气单胞菌的聚类结果显示该菌与GCA016729585 的进化关系更近。 结论 本研究从商品虾分离出达卡气单胞菌,发现该菌株的毒性较强,指示应加强海鲜食品安全的管控,并为达卡气单胞菌的防治提供参考。

摘要: 目的 考察两种大鼠高脂血症模型体重、摄食量、血脂变化趋势及肝组织病理变化,比较不同性别高脂血症模型的差异。 方法 大鼠采用两种高脂饲料喂养7~8 周,建立混合型高脂血症模型和高胆固醇血症模型。造模期间记录动物体重、摄食量和一般状态,分别于第0、1 ~ 2、7 ~ 8 周检测分析血清中总胆固醇(totalcholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C),高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)含量变化;造模后取动物的肝进行组织病理学观察。 结果 两模型高脂饲料喂养组比较,混合型高脂血症体重显著高于空白对照组,摄食量显著降低,总食物利用度升高,而高胆固醇血症摄食量升高,体重及总食物利用率与空白对照组无显著差异;造模结束时混合型高脂血症TC、TG 水平升高,高胆固醇血症TC 升高,TG 不变,混合型高脂血症肝脂肪变性程度更强。同模型下雄性总体血脂变化、肝脂肪变性程度均重于雌性。 结论 两模型高脂饲料喂养组在体重、摄食量、血脂水平及肝病理观察均有差异,同模型雄性程度强于雌性。

摘要: 目的 通过快速革兰氏染色法分别对SD 雌性大鼠、C57BL/6J 雌性小鼠进行阴道涂片染色,镜下观察细胞形态,为快速鉴别动情周期寻求简单易行的染色方法。 方法 12 只SD 雌性大鼠和12 只C57BL/6J 雌性小鼠,56~62 日龄,每天9:00 采用阴道拭子法获得阴道涂片,干燥后进行快速革兰氏染色法,连续观察12 d,于光镜下观察细胞形态,判断其动情周期阶段。 结果　快速革兰氏染色法用时较短,操作简单,观察视野色彩鲜明,背景干净,绘制完整的大、小鼠动情周期变化图。 结论 快速革兰氏染色法可简单、直观的判断大、小鼠动情周期,并优化染色步骤,对染色中出现的异常情况进行逐一分析,将每张涂片染色时间缩短至1 min 以内,对实验新手易于掌握,可推广应用。

摘要: 目的 研究肾周白色脂肪组织作为内分泌器官是否以外泌体囊泡作为运载体调控大鼠动脉血压。 方法 采用成年自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)和正常血压的Wistar-Kyoto(WKY)大鼠。将WKY 大鼠和SHR 的肾周白色脂肪置于无血清(无外泌体)培养基中培养,使用外泌体分离提取试剂盒(exoEasyMaxi Kit)分离分泌囊泡。经纳米粒径测定、透射电镜和表面标志物鉴定符合外泌体囊泡(Exosomes, Exo)特征后用于后续实验。SHR 或WKY 大鼠各随机分为两组,分别尾静脉注射SHR 大鼠外泌体(Exo-SHR)或WKY 大鼠外泌体(Exo-WKY),每周1 次,连续6 周。在清醒状态下使用无创尾动脉加压系统测量动脉血压,每周1 次。注射后第6 周末进行急性实验。采用颈动脉插管法进行动脉血压直接测定,采用HE 染色和Masson 染色观察心血管病理重构。外周交感神经张力(peripheral sympathetic tone,PST)高低以静脉注射盐酸六烃季铵引起的降压反应与Exo-WKY 处理的WKY 大鼠的降压反应的比值大小表示。另外,PKH67 绿色荧光染料标记外泌体后尾静脉注射进行体内示踪,与原代培养的神经元孵育进行体外示踪。 结果 肾周白色脂肪组织分泌的外泌体囊泡经透射电镜观察到典型外泌体半托杯状囊泡结构,纳米粒径检测平均直径集中在100 nm 左右,且具有表面特异标志物肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene,TSG101) 和白细胞分化9(cluster of differentiation 9,CD9) 表达。SHR 组收缩压(Systolic blood pressure, SBP)在注射Exo-WKY 后的第2 周开始下降,并在整个干预过程中保持低于注射前的水平(P< 0. 05)。应用Exo-WKY 可减少SHR 心肌细胞横截面积、主动脉中膜厚度及降低PST(P< 0. 05)。而WKY 大鼠应用Exo-SHR 后,SBP、心肌细胞横截面积、主动脉中膜厚度及PST 均未见明显变化(P> 0. 05)。在体示踪发现PKH67 标记外泌体囊泡经尾静脉注射24 h 后,在下丘脑室旁核(paraventricular nucleus, PVH)、孤束核(nucleustracts solitary, NTS)、延髓头端腹外侧部(rostral ventrolateral medulla, RVLM)可见绿色荧光。体外示踪发现培养神经元也可见绿色荧光。 结论 这些结果表明,肾周白色脂肪组织源外泌体可作为运载体发挥远距离调控动脉血压的作用。Exo-SHR 缺乏抑制血压升高的内容物,补充Exo-WKY 可降低动脉血压和交感紧张,并改善心血管重构。

摘要: 目的 探究姜黄素(curcumin,CUR)对对乙酰氨基酚(acetaminophen, APAP)诱导的大鼠急性肾损伤的保护作用及机制。 方法 48 只雄性SD 大鼠随机均分为正常组、模型组、阳性药NAC 组、CUR 低(50 mg/ kg)、中(100 mg/ kg)、高(200 mg/ kg)剂量组。NAC 及CUR 灌胃给药10 d 后,一次性灌胃给予2 g/ kg APAP 建立急性肾损伤模型,造模24 h 后,取血并分离大鼠,计算肾指数;检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平;HE 染色评价大鼠肾病理变化;检测大鼠肾组织谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)水平;Western blot 检测大鼠肾组织Trx-1、TXNIP、NLRP3 炎症小体等蛋白的表达水平。 结果 与正常组相比,模型组大鼠肾指数显著增加(P< 0. 01),血清Cr、BUN 水平显著升高(P< 0. 01),病理切片显示大鼠肾组织出现明显的损伤,大鼠肾组织中GSH、T-SOD、CAT 的活性显著降低(P< 0. 01),MDA 的含量显著升高(P< 0. 01),大鼠肾组织中Trx-1 的表达明显下调(P< 0. 05),TXNIP、NLRP3、ASC、Cleaved caspase-1、mature IL-1β 蛋白的表达明显上调(P< 0. 01)。与模型组相比,CUR 中、高剂量组肾指数显著降低(P< 0. 01),病理损伤改善,血清Cr、BUN 水平显著降低(P< 0. 01),肾组织中GSH、T-SOD、CAT 活性显著升高,MDA 含量显著降低(P< 0. 05 或P< 0. 01),Trx-1 的表达明显上调(P< 0. 05 或P< 0. 01)、TXNIP、NLRP3、ASC、Cleaved caspase-1、mature IL-1β 蛋白表达明显下调(P< 0. 01)。 结论 姜黄素预防性给药通过调控Trx-1/ TXNIP/ NLRP3 通路减轻APAP 诱导的大鼠急性肾损伤。

摘要: 目的 获得树鼩眼球组织形态学结构特征,并比较树鼩、恒河猴和人类眼球组织解剖学的异同点,为利用树鼩建立眼部相关疾病模型提供必要的组织学基础数据。 方法 制作树鼩和恒河猴眼球常规石蜡切片,HE 染色后进行分析比较。 结果 树鼩眼球主要由晶状体和眼球壁组成。眼球壁分3 层,由外向内依次为纤维膜、血管膜和视网膜三层。纤维膜前方1/6 为角膜,后5/6 为巩膜,两者交界处有一移行区域为角巩膜缘;血管膜是眼球壁的中间层,由疏松结缔组织、丰富的血管和色素细胞组成,自前向后分为虹膜、睫状体和脉络膜;视网膜是眼球壁的最内层,呈典型10 层结构。树鼩眼球组织学结构组成与恒河猴眼球及人类眼球组成一致,组织各层占比大致相同,不同之处是树鼩巩膜上皮含有黑色素细胞,视网膜各层组织占比与人类不同。 结论 树鼩眼球组织结构与非人灵长类或人类类似,组织形态大致相同,具备用于建立人类眼科相关疾病动物模型的潜力,以阐明相应眼科疾病致病机制。

摘要: 目的 整合心脏病动物模型与心脏病患者基因表达谱,系统表征基因表达差异,筛选差异基因,分析基因表达异同,为动物实验与比较医学研究提供依据。 方法 从公共数据库下载心脏病动物模型与患者的基因芯片、转录组数据。按照物种、病种、病程等对数据进行整理、标准化处理、批次校正,转换为数据库可用格式,搭建在线数据库。 结果 心脏病动物模型比较转录组学数据库实现基因、功能通路全局检索查询,分析基因在不同物种(人与小鼠)、不同病种、不同组织、不同病程的表达。交互式展示样品表达谱,可视化基因表达量,进行比较分析。在线差异基因挖掘,功能通路富集鉴定,探索差异、易感基因参与调控的生物过程,解释易感机制,提供在线数据分析。 结论 本文建立了心脏病动物模型比较转录组学数据库,为心脏病基因水平研究提供数据资源与在线分析工具。

摘要:对实验动物实施仁慈终点,是动物实验伦理的基本要求,除了被广为接受的麻醉法安乐死,非麻醉手段的使用也极为普遍。本文以动物实验伦理的“3R”原则和实验动物福利的“五项自由”为准则,系统探讨了断颈、颈椎脱臼两大非麻醉安乐死方法的伦理正当性,分析了空气栓塞法、液氮冰冻法、放血法、窒息法等作为安乐死方法存在的伦理问题及改进对策,并探讨了多种安乐死方法综合应用的可行性,为处于使用非麻醉安乐死方法伦理困境中的实验者提供借鉴和思路。

摘要:铁死亡(Ferroptosis)是一种铁依赖的新型细胞程序性死亡方式,其特征是活性氧(reactive oxygen species, ROS)和脂质过氧化的过量蓄积。铁死亡在免疫调节方面作用的研究越来越多,而免疫细胞是机体免疫系统最重要的一环,本文阐述铁死亡与免疫细胞关系的研究进展,首先阐明铁死亡核心靶点谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4, Gpx4)在各种免疫细胞增殖和免疫反应中的作用,其次总结细胞发生铁死亡能释放包括损伤相关分子模式(damage associated molecular patterns, DAMPs)等多种分子,这些分子能影响免疫细胞的分化与功能,进而影响疾病的发生和进展。同时,免疫细胞分泌免疫因子或其代谢物也能影响细胞铁死亡的发生。最后,我们对未来的研究进行了简要的总结和展望,这将有助于指导疾病治疗方向。

摘要:兔是生物医学研究中的经典动物模型,由于缺乏多能干细胞(pluripotent stem cells,PSCs)和兔体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)技术的低效,使得兔模型的发展受到阻滞。近年来随着ZFNs、TALENs和CRISPR/ Cas9 等基因编辑技术的出现,基因修饰兔的研究取得快速发展,其在生物、医学领域所扮演的角色也越来越重要。本文归纳了兔与人类疾病模型的发展历程以及在相关疾病领域的研究,并对未来动物模型应具备的特点进行展望,旨在推动人类疾病模型兔的发展。

摘要:肝性脑病(hepatic encephalopathy, HE)发病机制复杂。近年来越来越多的研究发现HE 的发生发展伴随着星形胶质细胞的形态及功能改变,而且作用于星形胶质细胞的药物可有效缓解HE,因此星形胶质细胞可能是HE 的一个潜在治疗靶点。本文主要对星形胶质细胞参与肝性脑病发病机制的研究进展加以简要综述,为治疗HE 提供新思路。

摘要:缺血性脑卒中是指各种脑血管病变所致脑部血液供应障碍,导致局部脑组织缺血、缺氧性坏死,而迅速出现相应神经功能缺损的一类临床综合征,对病人本身、其家庭和社会造成很大的负担。星形胶质细胞外囊泡中包含有细胞生长因子、蛋白质、miRNAs 等多种成分,通过与内皮细胞受体结合、转移至神经元及被神经元摄取等方式参与脑细胞间通讯,促进脑缺血后神经发生、血管新生,对脑缺血后损伤的神经元有着保护作用,成为中枢神经系统疾病潜在的治疗和预防靶点。本文对星形胶质细胞外囊泡的内容物以及其对缺血性脑卒中的保护作用进行综述,以期为临床研究新的治疗策略提供理论依据。

摘要:经典的观点认为星形胶质细胞是神经元的支持细胞,在大脑信息处理中没有直接作用。而越来越多的证据表明神经元-与星形胶质细胞之间相互作用功能障碍可能与各种神经和神经退行性疾病的病理学有关,近年来也逐渐成为抑郁症发病机制研究的热点。本文总结了星形胶质细胞-神经元相互作用参与抑郁症脑氧化防御、突触可塑性、脑能量代谢、神经炎症、谷氨酸循环等过程障碍的重要证据,这些证据表明星形胶质细胞-神经元之间的相互作用障碍是抑郁症发病的重要机制之一。本文还对星形胶质细胞-神经元参与抑郁症发病的新观点,以及研究中存在的问题进行了讨论,以便为后续研究提供思路和借鉴。

摘要:免疫治疗是继手术、放疗、化疗后的一种新的抗肿瘤治疗方式,其中以免疫检查点抑制剂的治疗效果最为突出,但单一的免疫检查点抑制剂治疗对肿瘤患者的治疗作用非常有限。中医药治疗肿瘤具有独特优势,其辅助免疫治疗可以弥补单独免疫治疗的不足,使更多的患者受益。本文从肿瘤的免疫治疗出发,综述了目前癌症免疫治疗与中医药治疗相结合的策略,分析了联合治疗抗肿瘤免疫的机制,同时对其临床应用的前景进行了总结,以期为肿瘤的联合免疫治疗提供有效策略。

摘要:为了促进健康老龄化进程,预防与衰老相关的健康问题,正确理解衰老机制以及开发有效的抗衰老干预措施。系统注射D-半乳糖(D-galactose)已被用于人工诱导体外和体内衰老,以及抗衰老治疗干预研究。本文从氧化应激、线粒体功能障碍、免疫衰老以及对各器官的影响四个方面综述了D-半乳糖诱导衰老的特征性变化,从多角度为抗衰老提供理论依据。