摘要: 目的　本研究旨在观察阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)动物模型APP/PS1雌性小鼠卵巢切除(ovariectomized,ovx)术后海马组织中Aβ沉积和雌激素受体水平在不同月龄的变化规律。 方法　将3月龄APP/PS1雌性小鼠分3组,每组20只,10只采用经腹手术切除双侧卵巢作为模型(ovx)组,10只摘除相应部位的等体积脂肪作为对照(sham)组。分别饲养3个月、4个月、5个月作为6月龄组、7月龄组、8月龄组,通过Morris水迷宫评价不同月龄APP/PS1小鼠认知功能,透射电镜观察两组小鼠海马CA1区细胞内细胞器形态变化,免疫荧光染色检测两组小鼠海马CA1区Aβ沉积,ELISA检测两组小鼠血清雌激素、ROS、SOD、MDA水平和含量,Western blot测定ERα和ERβ表达水平。 结果　随着月龄的不断增加,水迷宫测试中ovx组小鼠逃避潜伏期逐渐延长,海马CA1区Aβ沉积增加、海马神经元线粒体肿胀增加,胞浆内见大量脂褐素及淀粉样沉积;血清雌二醇水平、SOD活力下降,ROS水平、MDA含量增加,海马组织ERα和ERβ表达降低。 结论　小鼠卵巢切除术后可能会加剧海马Aβ沉积,其认知功能降低呈现年龄依赖性。

摘要: 目的　观察冰水泳浴对痛风大鼠模型病理变化的影响并探究其中P2X7R的调控机制。 方法　雄性SD大鼠分为正常(NORM)组和实验组,实验组包括痛风对照(GC)组、冰水泳浴(IWS)组和亮蓝G(BBG,P2X7R拮抗剂)组。实验组大鼠通过尿酸酶抑制法联合Coderre法塑造高尿酸血症合并痛风性关节炎模型。冰水泳浴组大鼠在Coderre法造模后的0 h和12 h,分别于深约0.5 m的冰水混合物中进行5 min的耐力游泳,BBG组则在造模后立即腹腔注射BBG溶液1次。公式计算踝关节肿胀指数;尿酸酶法检测大鼠血清尿酸水平;ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量;HE染色观察踝关节和滑膜组织的病理变化;Western blot和免疫组化分别检测滑膜组织中P2X7R和NLRP3蛋白表达。 结果　与正常组相比,实验组大鼠血清尿酸水平及踝关节肿胀指数均显著升高(P<0.05或P<0.01),且滑膜组织均存在不同程度的炎性浸润。与痛风对照组相比,冰水泳浴组踝关节肿胀指数在12 h显著升高(P<0.05),血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量(P<0.01)及滑膜组织中P2X7R、NLRP3蛋白量均有显著表达(P<0.05);病理结果显示软骨表面破损,滑膜组织出现严重增生与糜烂,并伴有大量炎性细胞聚集。BBG组大鼠滑膜组织的P2X7R、NLRP3蛋白表达与病理损伤较痛风对照组无显著变化(P>0.05),而血清IL-1β、IL-6和TNF-α的表达均有显著改善(P<0.01)。 结论　冰水泳浴模拟的寒冷刺激和剧烈运动可加重痛风性关节炎的病理损伤,其机制可能与关节局部P2X7R的高表达有关。

摘要: 目的　探讨厚朴三物汤对C57BL/6J小鼠皮下瘤的影响和机制。 方法　将小鼠结直肠癌MC-38细胞通过皮下注射入C57BL/6J小鼠体内建立结直肠癌皮下瘤模型,将造模成功的小鼠随机分组为模型对照组、厚朴三物汤低剂量组、厚朴三物汤中剂量组、厚朴三物汤高剂量组、5-氟尿嘧啶组(5-FU组)、联合组(5-氟尿嘧啶+厚朴三物汤中剂量组),每组小鼠各6只。分别给予生理盐水和厚朴三物汤灌胃或生理盐水和5-FU腹腔注射,每天1次,连续24 d。干预期间定期检测小鼠精神状态、饮食等一般情况、定期检测小鼠肿瘤体积的变化。取材后,对各组皮下瘤进行称重并采用HE染色观察小鼠皮下瘤病理组织变化;采用透射电子显微镜、Western blot、NTA对结直肠癌组织来源的外泌体进行鉴定;采用RT-qPCR和Western blot检测肿瘤组织中Rab27a和外泌体标志物CD63、TSG101、ALIX的mRNA和蛋白表达水平。 结果　厚朴三物汤可以抑制小鼠肿瘤的生长,厚朴三物汤各剂量组、联合组的肿瘤生长缓慢,均受到不同程度的抑制,其中中药各剂量组以中剂量灌胃抗癌效果最佳,且与5-FU联用(联合组)呈协同作用;厚朴三物汤可以促使肿瘤发生坏死,表现出与5-FU组相同的抗癌作用,剂量越高,坏死程度越严重,并且厚朴三物汤与5-FU联用(联合组)呈协同作用;厚朴三物汤可以抑制小鼠Rab27a和外泌体中特异性标志物CD63、ALIX和TSG101的蛋白表达量和mRNA的相对表达量。 结论　厚朴三物汤的抗结直肠癌机制可能与Rab27a调控的外泌体分泌减少有关。

摘要: 目的　比较不同剂量博来霉素(bleomycin, BLM)气管内滴注诱导的大鼠肺纤维化(pulmonary disease, PF)模型的成功率及稳定性。 方法　150只SD大鼠随机分为空白组、BLM低剂量组(BL-L组,3 mg/kg)和BLM高剂量组(BL-H组,5 mg/kg),造模后观察大鼠一般状态、死亡情况、体重变化,第28、42、56、84天检测大鼠深吸气量(inspiratory capacity, IC)、肺活量(vital capacity, VC)、肺准静态顺应性(chord compliance, Cchord)和肺动态顺应性(dynamic compliance, Cdyn),记录肺系数,HE、MASSON染色观察肺组织病理变化,检测肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline, HYP)含量,免疫组化检测肺组织胶原蛋白III(collagen type III, COL III)表达。 结果　BL-L组与BL-H组的死亡率分别为20%和28%。BL-L组体重在第0~56天低于空白组(P<0.01),第56天以后体重恢复。第0~56天BL-H组体重显著低于空白组和BL-L组(P<0.01)。与空白组比较,第28天,BL-L组肺功能IC、VC、Cchord、Cdyn显著降低(P<0.01,P<0.05),BL-H组IC和Cdyn显著下降(P<0.05),第42天,BL-L组IC、VC、Cchord显著下降(P<0.01,P<0.05),BL-H组IC、VC、Cchord、Cdyn显著下降(P<0.01,P<0.05),且IC、VC、Cchord与BL-L组相比显著降低(P<0.01),第56天,BL-H组Cchord显著低于空白组和BL-L组(P<0.01)。第28天,BL-L组和BL-H组肺系数显著高于空白组(P<0.01),第42~56天,BL-H组肺系数显著高于BL-L组和空白组(P<0.01)。BL-L组在第28~56天可观察到炎性浸润、纤维化条索和COL III表达,第84天纤维化病变几乎消失,BL-H组在28~84天均可观察到显著纤维化病变,COL III表达程度显著高于空白组(P<0.01)。第28~42天,BL-L组HYP含量显著高于空白组(P<0.05,P<0.01),后逐渐下降,第28~84天,BL-H组HYP含量显著高于空白组(P<0.01)。 结论　3 mg/kg与5 mg/kg的BLM均可成功制备PF大鼠模型,BL-L组在第28天形成肺纤维化,持续至第42天;BLH组在第28天形成更严重的肺纤维化,持续至第56天,第84天仍有半数存在中重度纤维化。

摘要: 目的　探讨茯苓杏仁甘草汤(Fuling Xingren Gancao granule,FXG)对小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)巨噬细胞极化的调控作用。 方法　ApoE^-/-小鼠构建AS模型,RAW264.7巨噬细胞构建极化模型。油红O和苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察主动脉斑块总面积和主动脉管腔狭窄程度。荧光定量PCR和Western blot体内外检测M1型极化因子诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,CCL2)和M2型极化因子精氨酸酶-1(arginase-1,Arg1)、类几丁质酶样蛋白(chitinase-like protein 3,YM1)、甘露糖受体(CD206)的表达水平及信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription,STAT3)磷酸化水平。 结果　FXG明显减少ApoE^-/-小鼠主动脉斑块总面积、降低M1型巨噬细胞极化因子iNOS、CCL2表达水平,升高M2型巨噬细胞极化因子Arg-1、YM1表达水平(P<0.05)。模型组小鼠和M1型巨噬细胞STAT3磷酸化水平降低,在FXG干预后其磷酸化水平上调(P<0.05)。P-STAT3抑制剂Stattic部分消除了FXG对iNOS和Arg-1的调控作用(P<0.05)。 结论　FXG具有抑制AS进展的作用,其作用与靶向STAT3调控巨噬细胞极化有关。

摘要: 目的　探讨机械应力激活Piezo1,经ERK1/2信号通路对KOA滑膜纤维化的影响。 方法　将25只SD大鼠分为空白组、运动组、运动+GsMTx4组、运动+PD98059组、运动+GsMTx4+PD98059组,共5组,每组各5只。造模完成后提取大鼠血清及滑膜组织进行天狼猩红染色、Masson染色评估胶原沉积,Western blot、RT-qPCR检测Piezo1、ERK1/2、p-ERK1/2、α-SMA、TGF-β、Collagen I及TIMP-1等相关蛋白及mRNA的表达,ELISA检测IL-1β、IL6、TNF-α含量。细胞实验中将滑膜细胞分为空白组、拉力组、拉力+GsMTx4组、拉力+PD98059组、拉力+GsMTx4+PD98059组,共5组。对造模完成后的细胞使用Western blot、RT-qPCR等技术进行上述指标的检测。 结果　机械应力会增加大鼠滑膜组织胶原沉积,并提高通路相关指标及纤维化特异性指标Piezo1、p-ERK/ERK、α-SMA、TGFβ、Collagen I、TIMP-1的蛋白及mRNA表达(P<0.05),使用抑制剂均可见明显下调(P<0.05),但ERK抑制剂(PD98059)对Piezo1表达无显著影响。运动组大鼠较空白组血清炎症因子含量显著提高(P<0.05),使用抑制剂后改善明显(P<0.05)。细胞实验中Western blot及RT-qPCR结果趋势同动物实验。 结论　Piezo1离子通道可以感受机械应力,激活ERK1/2通路介导膝关节滑膜纤维化。

摘要: 目的　研究和厚朴酚(HKL)对脂多糖(LPS)引发的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)中肺微血管内皮细胞的作用及其潜在机制。 方法　小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs),于六孔板中以DMEM+10%FBS培养,分为对照(Con)组1、和厚朴酚(HKL)组1、脂多糖处理(LPS)组1、脂多糖+和厚朴酚治疗(LPS+HKL)组1,分别采用Lipid Peroxidation检测试剂盒与H2DCF-DA测定细胞裂解物中丙二醛(MDA)水平与活性氧水平;采用TUNEL/DAPI双染检测细胞凋亡;采用VE-cadherin/DAPI、Claudin-5/DAPI双染检测细胞连接;采用Western blot检测细胞中caspase-3、cleaved caspase-3、Sirt3、SOD2、乙酰化SOD2(Ac-SOD2);32只小鼠随机分为对照(Con)组2、和厚朴酚(HKL)组2、脂多糖处理(LPS)组2、脂多糖+和厚朴酚治疗(LPS+HKL)组2,采用HE染色观察肺组织病理改变。 结果　HKL预处理能明显减轻LPS诱导的ROS与MDA水平升高(P<0.05),同时降低LPS引起的SOD2乙酰化升高与Sirt3下调(P<0.05);TUNEL与caspase分析显示HKL能够保护LPS诱导的PMVECs细胞凋亡;VE-cadherin荧光染色显示HKL的预处理能够阻止LPS对细胞粘附连接的破坏;Claudin-5荧光染色显示HKL的预处理能够阻止LPS对细胞紧密连接的破坏;动物实验中,HE染色显示HKL显著抑制LPS组小鼠肺组织中典型的ARDS病理改变。 结论　HKL能够显著抑制LPS所致的肺微血管内皮细胞氧化应激与细胞凋亡以及细胞间隙破坏,从而减轻ARDS症状。

摘要: 目的　探索新鲜和固定骨骼肌组织的最优冰冻切片方法,为骨骼肌疾病的快速诊断及骨骼肌疾病发病机制的研究奠定实验基础。 方法　提取C57BL/6J小鼠胫骨前肌,新鲜组织经液氮直接速冻、包埋剂联合液氮速冻、异戊烷联合液氮速冻前处理;固定组织经直接包埋、包埋剂联合液氮速冻进行前处理,制作冰冻切片后HE染色,并计算冰晶和肌纤维横截面积以评估不同前处理方式的切片效果。 结果　新鲜组织经液氮直接速冻和异戊烷联合液氮速冻处理后均可见肌纤维束形态消失,大量的冰晶空泡;包埋剂联合液氮漂浮速冻,可见肌纤维束完整致密、无冰晶,为适合新鲜组织的前处理方法。固定组织包埋剂联合液氮速冻处理后肌纤维束完整、无冰晶。 结论 新鲜和固定组织经包埋剂联合液氮速冻处理后肌纤维束完整、无冰晶,便于免疫组化、免疫荧光等实验的进一步进行,有利于准确快速地诊断骨骼肌疾病及探索骨骼肌疾病的发病机制。

摘要: 目的　优化金黄仓鼠胚胎移植技术,探索金黄仓鼠真孕受体最佳移植胚胎数目及发育时期。 方法 建立真孕白化金黄仓鼠种群作为胚胎移植受体,比较胚胎发育期、受体减胚及二次移植受体对产仔率、供胚得仔率及后代存活率的影响,确定真孕受体最佳胚胎移植枚数及移植方法。 结果相对于野生型金黄仓鼠作为移植受体,真孕白化受体可快速判定子代来源,并适用于多种以胚胎移植为基础的生殖类实验方案,采用受精卵或二细胞胚胎对移植效果无显著影响(P>0.05);减胚组能显著提高供胚得仔率(22%,P<0.05),二次移植受体的未孕率显著提高(42%,P<0.01);移植6~10枚胚胎的供胚得仔率最高(27%,P<0.01),存活率正常(89%)。 结论　6~10枚供体胚胎有助于提高供胚得仔率和存活率,基于白化真孕受体的胚胎移植方法,为金黄仓鼠的应用与开发提供了技术支撑。

摘要: 目的　探究国内实验动物福利伦理的研究现状、研究脉络、演进历程和未来研究方向。 方法　以2001年~2023年间CNKI数据库中期刊收录的实验动物福利与伦理相关的文献为数据源,运用文献研读的定性描述和CiteSpace可视化文献计量分析相结合的方法,梳理和归纳实验动物福利伦理领域已查询到文章的概况、热点主题和研究方向。 结果　研究表明国内实验动物福利伦理研究热度总体呈上升趋势。研究热点主题包括实验动物福利伦理的基本理论、实验动物福利伦理立法、实验动物福利伦理技术标准、实验动物福利伦理审查、实验动物福利伦理教学研究等方面,并且针对新兴交叉学科引发的伦理问题,在研究内容上不断创新。 结论　从实验动物福利伦理法律制度、伦理审查机制、教育与培训、创新研究等层面提出了相关建议,以期为实验动物福利伦理工作提供参考借鉴。

摘要: 目的　实验动物设施的能源消耗在科研机构能耗中占据相当大的比例,且其能耗特点与普通建筑物存在显著不同,因而需要专门的监测与管理。 方法　面向实验动物设施设计了一套能耗监测系统,选取华中科技大学SPF级实验动物设施进行了部署。 结果　该系统上线运行后,实现了设施用电量数据的实时采集和记录,并提出了3种应用场景下的管理节能措施。 结论　面向实验动物设施的能耗监测系统具备可靠、高效、易用的特点,对实验动物设施能源管理工作具有指导意义与推广价值。

摘要:本文介绍了湖北省实验动物许可证日常管理服务以及事中、事后监管事项等内容。阐述了湖北省实验动物许可证管理现状、取得成效、遇到问题及对策建议。重点分析了湖北省实验动物立法情况、许可证发放及分布情况、设施规模、从业人员组成等。近年来,湖北省实验动物许可证发放数量逐年增加,持证单位的动物生产及使用数量持续上升。相关行业产业在蓬勃发展的同时,也存在一些监管上的不足之处,本文从生物安全角度出发,结合我省许可证管理服务工作中遇到的问题,提出相关安全监管对策建议,从而更好地推动湖北省实验动物行业发展。

摘要:D-半乳糖(D-galactose,D-gal)作为正常的生理物质,过量摄入能在体内外引发类似自然脑衰老的过程,故在国内外被广泛用来诱导脑老化模型。D-半乳糖诱发的脑衰模型耗时短、成本低、效果明显,但其诱导机制复杂多样,各机制间的关系尚不明确,导致目前该模型的实际运用存在局限性。本文就D-半乳糖的体内代谢和诱导脑老化的各种机制,以及机制间的联系作一综述,旨在为该模型的运用发展和脑衰老的深入研究提供参考。

摘要:内侧前额叶皮质参与了各种高级脑功能,包括注意力、意识转换和信息整合,被认为既是自下而上逐层传递信息模式的终点,又是从上至下整合信息传递的起点,可能是全身麻醉药发挥意识调控作用的核心区域。内侧前额叶皮质在垂直方向上可以分为6层,层与层之间在结构上具有丰富的环路连接,每一层都有着独特的功能。在本综述中,首先描述了内侧前额叶皮质的分层结构,其次,讨论了内侧前额叶皮质各层结构在全身麻醉中的作用。为此,本文回顾了啮齿类动物、灵长类动物和人类的内侧前额叶皮质分层与麻醉的相关研究,以期望为深入了解内侧前额叶皮质在全身麻醉中的作用机制提供一定的参考。

摘要:帕金森病是一种与大脑铜代谢异常有关的神经退行性疾病,铜代谢异常导致α-突触核蛋白-铜络合物的错误折叠和聚集是帕金森病的重要病理标志。铜代谢是指有铜离子参与的细胞代谢过程,与帕金森病中α-突触核蛋白聚集、多巴胺代谢、线粒体功能障碍、氧化应激、铁死亡等发病机制密切相关。在本综述中,我们通过研究铜代谢异常在帕金森病中发挥病理作用的机制,描述铜发挥其毒性的分子代谢机制,以期为进一步完善作用机制和药物的开发提供依据和帮助。

摘要:分析现有的肝性脑病动物模型方法与临床吻合度,以期为建立更符合中西医临床病症特点的动物模型提供思路。在中国知网、万方数据库,以“肝性脑病”“肝昏迷”“动物”“动物模型”为关键词,在Pubmed数据库,以“hepatic encephalopathy”“hepatic coma”“animal model”“animal”为关键词进行检索,整理有具体动物模型制备方法的有效文献,根据不同造模因素和方式进行整理、分类,概括造模方法、特点,依据肝性脑病中西医临床病症特点对动物模型的临床吻合情况进行赋值、分析。有效文献128篇,共11种动物模型,包含15种不同的造模方法,西医吻合度最高的是CCl₄油溶液腹腔注射+灌胃+氯化铵腹腔注射模型(吻合度92%),中医吻合度最高的是CCL₄油溶液腹腔注射+乙醇水溶液自饮模型(吻合度65%),但缺乏中西医吻合度均较高的肝性脑病动物模型。目前缺乏中西医病症特点结合的肝性脑病动物模型,结合中西医病症特点进行改进和完善,有望为肝性脑病的机制研究和临床诊治提供思路。

摘要:缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)是一种由于脑血管阻塞或狭窄导致脑部供血不足,从而引起脑组织受损的神经系统疾病。近年来,越来越多的证据表明,Wnt/β-catenin信号通路在IS发生和发展的病理生理反应中发挥了重要作用。程序性细胞死亡包括细胞凋亡、坏死性凋亡、细胞焦亡、细胞自噬、泛凋亡和铁死亡等多种形式。在本综述中,我们将阐明这些不同细胞死亡方式的特征及其相互之间的串扰关系,并系统性地概述Wnt/βcatenin信号通路干预不同细胞死亡方式在IS中的作用,旨在为今后的临床和基础研究提供参考。

摘要:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种自身免疫性疾病,常以对称性小关节疼痛为早期临床表现,迁延难愈逐渐加重,常常累及多个关节最终造成关节炎畸形,使患者失去劳动能力。分子信号通路一直以来都是研究RA防治的关注焦点,研究发现RA病程发生发展与Janus激酶-信号转导与转录激活因子(JAK-STAT)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路、核因子κB(NF-κB)信号通路、NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路、Toll样受体(TLRs)信号通路、Wnt信号通路、Notch信号通路、缺氧诱导因子1-α与血管内皮生长因子(HIF-1α/VEGF)信号通路、程序性死亡因子1与配体1(PD-1/PD-L1)信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路均有密切联系。近些年来中医外治法基于以上信号通路治疗RA的研究逐渐增多,逐步深入。本文通过查阅相关资料与报道,阐述以上通路与RA发病、防治的关系,并总结中医外治法调控以上信号通路防治类风湿性关节的研究成果,以期为临床选用中医外治法为治疗选择提供科学依据。

摘要:多发性硬化症是一种以神经炎症和神经变性为特征的慢性中枢神经系统自身免疫性疾病,发病机制复杂,由多种中枢神经系统和外周来源的细胞参与其中。最近,单细胞测序技术逐渐应用于神经系统疾病中,对于理解细胞间异质性、疾病发展机制和治疗策略有重要意义。本文对单细胞测序技术在多发性硬化疾病中应用进展进行综述。

摘要:自闭症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)是一种高度异质性的神经发育障碍,具有复杂的潜在遗传结构。然而,目前ASD正在研究的临床前试验主要通过啮齿类动物模型进行,以测试非药物干预及药物干预对ASD核心及相关症状的影响。本文从认知神经机制角度阐述影响社会互动行为的脑区;梳理社会互动的行为学测试实验;对ASD的核心和相关症状的有效非药物干预和药物干预进行综述,为下一步促进啮齿类动物模型临床前试验的发展提供参考方向。